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ACTIVIDAD INHIBITORIA DE LA STEVIA REBAUDIANA SOBRE EL

LACTOBACILLUS ACIDOPHILLUS Y EL STREPTOCOCCUS MUTANS
INHIBITORY ACTIVITY OF STEVIA REBAUDIANA UPON LACTOBACILLUS
ACID....

Conference Paper · March 2011

DOI: 10.13140/2.1.2219.2641

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9 authors, including:

Nathaly Chavarria
Universidad Cooperativa de Colombia
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 REVISTA NACIONAL DE ODONTOLOGÍA VOLUMEN 6, NÚMERO 10 ENERO-JUNIO 2010

Recibido: 26 de marzo del 2010 Aprobado: 23 de abril del 2010

ACTIVIDAD INHIBITORIA DE LA STEVIA REBAUDIANA SOBRE EL LACTOBACILLUS

ACIDOPHILLUS Y EL STREPTOCOCCUS MUTANS

INHIBITORY ACTIVITY OF STEVIA REBAUDIANA UPON LACTOBACILLUS ACIDOPHILUS AND THE STREPTOCOCCUS MUTANS

Gabriel Ricardo Vitery Sapuyes,1 Sandra Escribano Vargas,2 Fredy Omar Gamboa Jaimes,3 Nathaly Chavarria Bolaños,4
Ruth Ángela Gómez Scarpetta5

RESUMEN

Introducción: diferentes estudios han evidenciado cómo principales bacterias cariogénicas al Lactobacillus acidophillus y al Streptococcus
mutans. Dentro de las medidas preventivas para esta patología se ha propuesto el remplazo de los azúcares energéticos dentro de la
dieta por carbohidratos no energéticos, dentro de los cuales se puede encontrar la Stevia Rebaudiana Bertoni. Materiales y métodos:
se realizó una investigación de carácter experimental, en donde a través de un estudio in vitro se comparó el efecto, en diferentes
concentraciones, de extractos de la Stevia Rebaudiana, obtenidos con solventes como agua, metanol, etanol, acetato de etilo y hexano,
sobre el crecimiento de cepas de S. mutans y L. acidophilus referenciadas por la American Type Culture Colección (ATCC), utilizando
la técnica de difusión en Agar Mueller Hinton, como controles positivos Clorhexidina, Vancomicina y Penicilina, y como controles
negativos cada uno de los solventes. Resultados: el análisis estadístico mostró que los resultados de los extractos de Stevia Rebaudiana
con metanol y etanol comparados con los de la Vancomicina son estadísticamente iguales, con un valor de p igual al 20% para el
extracto con metanol y el 79% para el extracto con etanol, lo que indica que sus efectos son similares a los del control positivo. En el
caso de los resultados con los extractos de Stevia con hexanol y acetato de etilo muestran evidencias significativas, comparados con
los resultados obtenidos con la Vancomicina, con valores de p inferiores al 5%, lo que indica que la Vancomicina mostró mejores
resultados en la inhibición del crecimiento que estos dos extractos. Conclusión: se demuestra la actividad antibacteriana de la Stevia
Rebaudiana contra del S. mutans y el L. acidophilus y el posible potencial anticariogénico de este endulzante natural.

Palabras clave: Stevia Rebaudiana, Lactobacillus acidophillus, Streptococcus mutans.

ABSTRACT

Introduction: several different studies have proven Lactobacillus acidophillus and Streptococcus mutans to be a main carcinogenic bacteria.
A preventive proposed measure for this pathology is replacing energy sugars for carbohydrates, within which Stevia Rebaudiana Berton
is found. Material and methods: it was performed as an experimental investigation, where through a study in vitro it was compared
an effect in different concentrations of extract of Stevia Rebaudiana, obtain with solvents as water, methanol, ethanol, ethyl acetate,
and hexane, above of growing strains of S. mutans and L. acidophilus reference by ATCC (American Type Culture Collection), using
the technique of diffusion in agar Mueller Hinton, as a positive control, Chlorhexidine, Vancomycin, Penicillin and as negative control
each one of the solvents. Results: the statistical analysis showed that the extracts of Stevia Rebaudiana with methanol and ethanol
compared with the Vancomycin are the statistical equivalent with value P equal to 20% for the extract with Methanol, and 79% for
the extract with Ethanol, which indicated similarities with the positive control. The results with the extract of Stevia with hexane
and ethyl acetate, showed significant evidence, compare with the results obtain with Vancomycin, with value P inferior to 5%, this
indicate that Vancomicina showed better results than the other two extracts. Conclusion: it demonstrates the antibacterial activity
of Stevia Rebaudiana against S. mutans and L. acidophilus and the potential anticariogenic of this natural sweetener.

Keywords: Stevia Rebaudiana, Lactobacillus acidophillus, Streptococcus mutans.

1
Investigador principal. Odontólogo Universidad Cooperativa de Colombia, sede Villavicencio. Correo electrónico: gabrielricardovitery@hotmail.com
2
Odontóloga Universidad Cooperativa de Colombia, sede Villavicencio. Correo electrónico: snadraescribano@yahoo.com
3
Bacteriólogo M.Sc PH.D, Profesor Asociado Centro de Investigaciones Odontológicas (CIO) Pontificia Universidad Javeriana. Correo electrónico: gamboa@javeriana.edu.co
4
Odontopediatra, Profesora asociada Universidad Cooperativa de Colombia, sede Villavicencio. Correo electrónico: nathalychavarria@hotmail.com
5
Bacterióloga, Esp. Epidemiología, Directora Giomet, Universidad Cooperativa de Colombia, sede Villavicencio. Correo electrónico: ruangego@hotmail.com

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Introducción
La caries dental es considerada como una enfermedad
localizada que resulta de los procesos metabólicos de
la biomasa en contacto con la superficie dental, y la
dieta proporciona los requerimientos nutricionales y
por lo tanto energéticos a los microorganismos de la
microbiota bucal. La caries dental es una enfermedad
bacteriana endógena, que implica bacterias potencial-
mente patógenas que son residentes en la cavidad oral.
La enfermedad es resultante de unas condiciones en
las cuales la resistencia del hospedador está disminuida
por la proliferación de especies bacterianas que han
sido seleccionadas debido a cambios dietéticos que
incorporan un consumo frecuente de azúcar e hidratos
de carbono refinados.1
La complejidad de la comunidad bacteriana
encontrada en las superficies de los dientes hace difícil
implicar a grupos específicos de bacterias como causa
de la caries, sin embargo, los Lactobacillus Acidophillus
y el Sstreptococcus Mutans se encuentran en casi todas
las lesiones de caries, y su proporción en la placa y la
saliva está positivamente relacionada con la frecuencia
y la actividad de caries.2
Diferentes estudios demuestran la relación directa
de los microorganismos como el S. mutans y el L. acido-
phillus con la caries dental; por ejemplo Roeters, quien
realizó un estudio en 1995 con el fin de identificar el
S. Mutans y bacilos en el proceso y desarrollo de las
caries, trabajó con 252 niños con caries en premolares
activas, en los cuales se detectaron: S. Mutans en un
43% y L. Acidophilus en un 11,5%.3, 4
Por lo tanto, es muy importante evitar el consumo
del azúcar refinado, que es una sustancia química
pura, extraída de fuentes vegetales, que interfiere
como factor importante en la etiología de los ataques
cardiacos, la obesidad, la caries dental, la diabetes,
la cual a su vez tiene como complicaciones la insufi-
ciencia renal y la ceguera, sólo para citar unas cuantas;
pero tampoco significa que estamos condenados a
llevar una dieta insípida. Por eso, es útil sentirse a
gusto con algunos endulzantes artificiales (xilitol,
sorbitol, manitol, etcétera) y naturales como la Stevia
Rebaudiana Bertoni, que es un pequeño arbusto del
norte de Paraguay; mientras que los indios nativos
de la tribu guaraní habían usado las hojas de esta
58
Revista Nal de Odontologia.indd 58
planta como un endulzante natural desde tiempos
precolombinos, no fue sino hasta 1887 cuando un
científico naturalista sudamericano llamado Dr. Moisés
Santiago Bertoni, director del colegio de Agricultura
en Asunción, la descubrió.
Para 1913 la planta a la que Bertoni se había
referido como rara y poco conocida se había hecho
famosa. La dispersión del fenómeno de la Stevia es
enorme: inició cultivándose en Japón y hoy también
es cultivada y usada en muchos países fuera de
Sudamérica, incluyendo China, Alemania, Malasia,
Israel y Corea.
Se estima que hay más de 80 especies de Stevia
que crecen en forma silvestre en el continente ameri-
cano; de todas ellas, solamente la Stevia Rebaudiana
y otra especie ya extinta parecen poseer la dulzura
natural que las distingue. Se sabe que en los años
cincuenta algunos médicos paraguayos usaban la Stevia
Rebaudiana en bebidas con mate para el tratamiento
de la diabetes e, igualmente, gracias a un consumo
tradicional se le atribuyen grandes propiedades que
hoy son objeto de estudio.5-8
Un punto importante es que no hay reportes
en la literatura médica de algún efecto adverso por
usar la Stevia, pues se reconoce que tiene un amplio
margen de seguridad. En Japón se consumen hasta
100 toneladas métricas al año, donde tampoco se han
reportado reacciones adversas. En septiembre de 1995
la Agencia Americana de Drogas y Alimentos (FDA)
aprobó a la Stevia como un complemento dietético
después de realizarse un estudio en Brasil, donde se
mostró una disminución del 9,5% en las presiones
sanguíneas diastólica y sistólica. Las propiedades únicas
de la Stevia también la hacen ideal como componente
de enjuague bucal y pasta dental, puesto que algunos
estudios han indicado que realmente podría reducir las
caries al retrasar el crecimiento de la placa en la boca.
Debido a las grandes propiedades que se le atri-
buyen a este pequeño arbusto, se realizó este estudio
cuyo objetivo general fue observar cómo afecta la Stevia
Rebaudiana bertoni en diferentes concentraciones el
crecimiento in vitro del S. mutans y del L. acidophilllus
cultivados en agar Mueller Hinton, determinando el
posible potencial anticariogénico de este endulzante
natural
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Metodología
Se realizó una investigación de carácter experimental
en donde a través de un estudio in vitro se comparó
la influencia de la Stevia Rebaudiana a diferentes
concentraciones sobre el crecimiento de cepas de S.
mutans y L. acidophilus, referenciadas por la American
Type Culture Colección (ATCC) obtenidas a través del
Centro de Investigaciones Odontológicas (CIO) de la
Pontificia Universidad Javeriana, traídas del laborato-
rio de microbiología oral del doctor Liebana Ureña de
Granada España, las cuales permanecían liofilizadas a
menos 70 °C, se hicieron repiques cada 24 horas en
caldo Tripticasa de soya (STS) para mantenerlas vivas
durante 48 horas, posteriormente se prepara agar STS
(agar y caldo) para hacer siembras y mantenerlas por
un lapso más prolongado, usando la cantidad necesaria
de bacterias para cada uno de los ensayos.
La obtención de los extractos de Stevia se realizó
utilizando solventes como: agua, metanol, etanol,
acetato de etilo y hexano (en orden de mayor a menor
polaridad según escala elutrópica); este recurso sirvió
para probar la posible actividad inhibitoria de la Stevia
contra las cepas bacterianas, para lo cual se realizó el
siguiente procedimiento:
Para la obtención de extractos se utilizó la técnica
de maceración en frío, la cual consiste en mezclar las
hojas secas pulverizadas de Stevia con los diferentes
solventes en frascos taparrosca y dejarlos en agitación
mecánica durante 24 horas a 150 rpm. Luego se
filtraron con papel filtro de 125 mm para retirar los
residuos de hoja y, posteriormente, cada extracto se
filtró con filtros millipore de 0,45 micras referencia
HVLPO 1300 utilizando una cámara de vacío, lo cual
impide el paso de impurezas proporcionando una
garantía total que aseguró que se encontraran libres
de contaminación.
Posteriormente cada extracto fue colocado en
balones estériles para realizar el proceso de evapora-
ción de los respectivos solventes, para lo que se utilizó
un rotavaporador (referencia 111 marca Buchi Suiza)
a una temperatura de 40 °C constante para todos los
solventes, variando la presión para lograr el punto
de ebullición de cada uno sin tener que someter los
extractos a temperaturas más elevadas evitando así
la desnaturalización de las sustancias; la ebullición
Revista Nacional de Odontología - Volumen 6, Número 10 - enero-junio 2010
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se hizo de manera tal que el volumen fue reducido al
mínimo para que el secado fuera más rápido y de esta
forma obtener los sólidos deseados. Una vez obtenidos
los sólidos se llevaron a beackers previamente pesados
y esterilizados para saber cuál sería el rendimiento
final de cada extracto.
Una vez obtenidas las diluciones a la concen-
tración deseada, se preparó el medio de cultivo
utilizando agar Mueller Hinton (OXOID CM 337). El
ensayo microbiológico se realizó con técnica de agar
difusión con bacterias y perforación en placa, para esto
se llenaron 100 tubos taparrosca con 20 mL de agar
cada uno y se esterilizaron en autoclave (matachana
21 L E-10349) a 121 °C durante 20 minutos a 15
atmosferas de presión; se preparó una suspensión en
caldo de la bacteria con agua destilada al 0,5 según
la escala de macfarland (1X10 UFC/mL) y, una vez
el agar toma la temperatura deseada (aún en estado
líquido) para ser mezclado con las bacterias, se coloca
100 uL de la suspensión con una pipeta calibrada en
30 tubos, se mezcló y se llevó a igual número de cajas
de petri. Cuando el agar gelificó, se procedió a hacer
los pozos con una pipeta de pasteur y se aplicó con
una pipeta calibrada 20 uL de las diluciones de cada
extracto en los pozos; el ensayo se realizó de forma
duplicada con cada uno de los extractos. El mismo
procedimiento se hizo tanto para S. mutans como para
L. acidophillus. Igualmente se montaron los siguientes
controles positivos: 20 uL de clorhexidina 0,2%, 20
uL de Vancomicina (5 sensidiscos de 30 ug en 500 uL
de agua); disco de 10 ug de penicilina y los controles
negativos: 20 uL de cada solvente: agua, metanol,
etanol, acetato de etilo y hexano.
Las cajas de petri se taparon y se dejaron reposar a
temperatura ambiente durante 30 minutos para lograr
una mejor difusión de la sustancia; luego se colocaron
en campanas de incubación con sobres de anaerobiosis
(ANAEROGEN N2 80%, H2 10% y CO2, 10% marca
Oxoid) a 37 °C y se hicieron observaciones 24, 48 y
72 horas después para determinar el efecto de estos
extractos en el crecimiento de las bacterias.
Resultados
La actividad inhibitoria de extractos con solventes
como agua, metanol, etanol, acetato de etilo y hexano
(en orden de mayor a menor polaridad según escala
59
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elutrópica) de hojas de Stevia Rebaudiana Bertoni • En el caso de los controles positivos en los que se
pulverizadas medida por el diámetro del halo de in- utilizó una dilución de 7 sensidiscos de Vancomi-
hibición en todas las concentraciones observadas 48 cina de 30 ug en un mL, generó un halo de 16,5
horas después, para lo cual se utilizó un dentímetro, mm de diámetro en promedio con el S. mutans y de
se muestran a continuación. 17 mm con el L. acidophilus; igualmente, el control
• Los solventes: agua, metanol, etanol, acetato de con la clorhexidina al 0,2% mostró un halo de 15
etilo y hexano utilizados como controles negativos mm de diámetro para las dos cepas bacterianas; en
no mostraron ninguna actividad inhibitoria en el caso de la penicilina (disco de 10 mg), generó
contra de las cepas estudiadas. un halo de inhibición de 21 mm en promedio con
• El extracto en agua requirió una concentración L. acidophilus, pero no hubo ninguna actividad en
mínima de 400 mg/mL para producir efecto inhi- contra del S. mutans (figura 2).
bitorio, generándose un halo de 9 mm en promedio
tanto para S. mutans como para L. acidophillus
(figura 1). 22

Tamaños halos de inhibición en mm

25

• Con el extracto metanólico, al igual que con el de 20 17 17

15 15
agua, requirió una concentración mínima de 400
15
mg/mL para producir efecto inhibitorio con halo de
11,5 y 12 mm de diámetro en promedio contra el S. 10

mutans y L. acidophilus respectivamente (figura 1). 5

0
• Con el extracto de acetato de etilo, la concen- 0
tración mínima que requirió fue de 200 mg/ Vancomicina Clorhexidina 0,2% Penicilina

mL y formó un halo de inhibición de 11,5 mm Streptococus mutans Lactobacillus acidophilus

en promedio con el S. mutans y de 10,5 mm en

promedio con el L. acidophillus (figura 1). Figura 2. Actividad inhibitoria de los controles positivos contra el Strep-
tococus mutans y Lactobacillus acidophilus observada a las 48 horas
• Con el extracto hexanólico se obtuvieron los
Fuente: los autores
mejores resultados, puesto que presentó halos de
inhibición más grandes y con concentraciones más • La prueba estadística de los resultados obtenidos
pequeñas. La mínima concentración que se utilizó con los extractos de Stevia en los diferentes
para producir efecto inhibitorio fue de 50 mg/mL, solventes comparados con el control positivo de
con un promedio de 14,5 mm de diámetro con el S. Vancomicina a las 48 horas, frente al crecimiento
mutans y 15,5 mm con el L. acidophillus (figura 1). del S. mutans y el L. acidophilus, evidencia que no
existen diferencias significativas entre el tamaño
Tamaños halos de inhibición en mm

17,3
16,1 16,5

promedio de los halos de inhibición presentados

18,0
16,0 14,2
12,7 13,3
14,0 12,2 11,8
12,0
10,0
9,0 9,3 9,8 10,5
por el extracto hexanólico y los de Vancomicina
8,0
6,0
con un valor de p igual al 75%, lo que indicaría
4,0
2,0 un resultado similar de este extracto con el del
control positivo; contrario a lo que sucede con
0,0
Agua 400 Metanol 400 Etanol 400 Acetato de Hexano 50 Vancomicina
mg/mL mg/mL mg/mL etilo 200 mg/mL (control positivo)
mg/mL los extractos preparados con metanol, etanol
Streptococus mutans Lactobacillus acidophilus y acetato de etilo, en los que los valores de p
son inferiores al 5%, evidenciando diferencias
Figura 1. Actividad mínima inhibitoria de los extractos de Stevia contra
el Streptococus mutans y Lactobacillus acidophilus observada a las
significativas que demuestran que los resultados
48 horas con la Vancomicina son mejores que los de estos
Fuente: los autores solventes (tabla 1).

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Tabla 1. Diferencias a 48 horas, entre cada extracto de Stevia y control de Clorhexidina, comparados con Vancomicina para
Streptococus mutans y Lactobacillus acidophilus

Promedio general tamaños Valor de significancia

Extracto Varianza DS IC: 95%
halos de inhibición p<0,05
Metanol 9,83 2,97 1,72 8,46-11,2 0,0004
Etanol 12,17 0,57 0,75 11,57-12,77 0,00003
Acetato de etilo 11,75 0,5 0,7 11,27-12,23 0,000002
Agua 9 0,4 0,63 8,5-9,5 0,0003
Hexano 16,1 2,77 1,6 15,08-17,12 0,75
Clorhexidina (control) 15 2 1,4 13,05-16,95 0,22
Vancomicina (control) 16,5 0,5 0,7 15,17-17,48 control positivo

Fuente: los autores

Los resultados obtenidos a las 72 horas no hexanólico en el que se observaron diámetros de

mostraron cambio alguno frente a los resultados
obtenidos con el S. Mutans 24 horas antes; sin
embargo, sí se presentó con los cultivos de L. acido-
philus, observándose un aumento considerable en el
tamaño de los halos de inhibición del crecimiento
con todos los extractos de Stevia Rebaudiana y con
los controles positivos, excepto con el extracto
halos similares a los medidos 24 horas antes; sin
embargo, todos los halos de inhibición, incluidos
los del extracto hexanólico, se mostraron mucho
más claros, lo que sugiere que hay una actividad
inhibitoria in vitro tardía, pero muy potente, de los
extractos de hoja de Stevia pulverizada contra el L.
acidophilus (tabla 2).

Tabla 2. Diferencias entre extractos de Stevia y controles a las 48 y 72 horas, comparados con Vancomicina para Lactobacillus
acidophilus

Promedio general tamaño Promedio general tamaño Valor de signifi-

Varianza DS IC:
95%
Extracto halo de inhibición (48 halo de inhibición (72 cancia p<0,05
(72 horas) (72 horas) (72 horas)
horas) horas) (72 horas)
Metanol 12,67 31,33 1,06 1,03 30,51-32,15 0,2
Etanol 13,33 29,83 4,96 2,22 28,07-31,59 0,79
Acetato de etilo 10,5 17,62 1,12 1,06 16,92-18,38 0
Agua 9,33 32,16 0,16 0,4 31,84-32,48 0,00018
Hexano 14,2 16,35 0,55 0,74 15,9-16,8 0
Clorhexidina
15,25 29,25 0,125 0,35 28,77-29,73 0,03
0,2% (control)
Penicilina
21,25 30,5 0,5 0,7 29,53-31,47 0,73
(control)
Vancomicina
17,25 30,25 0,125 0,35 29,77-30,73 control positivo
(control)

Fuente: los autores

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En este caso el análisis estadístico nos muestra que
los resultados de los extractos de Stevia Rebaudiana
con metanol y etanol comparados con los de la
Vancomicina son estadísticamente iguales con un
valor de p igual al 20% para el extracto con metanol,
y de 79% para el extracto con etanol, lo que indica
que estuvieron dentro de la región de aceptación. En
el caso de los resultados con los extractos de Stevia con
hexano y acetato de etilo, los resultados estadísticos
evidencian que hay diferencias significativas compa-
rados con los resultados obtenidos con la Vancomicina
con valores de p inferiores al 5%, lo que indica que la
Vancomicina produjo mejores resultados comparados
con los de estos dos extractos. Sin duda el resultado
más interesante fue el obtenido con el extracto de
Stevia en agua, el cual fue significativamente diferente
en comparación con el resultado de la Vancomicina
con una p inferior a 0,005, pero en este caso sugiere
un resultado mejor con el agua.
Discusión
Fue probada la capacidad inhibitoria del extracto
de la Stevia Rebaudiana Bertoni en cinco solventes
diferentes como agua, metanol, etanol, acetato de
etilo y hexano in vitro sobre el Streptococus mutans y
el Lactobacillus acidophilus.
Basándose en el estudio de Manish B, Tadhani y
Rema Subhash en el que encontró actividad inhibi-
toria in vitro de extractos de hojas de Stevia Rebaudiana
con solventes como agua, metanol, acetato de etilo
y hexano contra cuatro bacterias gran positivas (B.
subtilis, S aureus, M. letus, B. megaterium), cuatro
gram negativas (S. marcensens, P. aeruginosa, E. coli,
P. valgaris) y hongos como R. oligosporus y A. niger;
en los que se observaron resultados interesantes espe-
cialmente con el extracto hexanólico, que presentó
actividad inhibitoria con halos desde los 9 mm contra
el B. subtilis, hasta 22 mm contra R. oligosporus.9
El presente trabajo nos permite comprobar la
actividad antibacteriana de la Stevia, contra el S.
Mutans y el L. Scidophilus; además da la posibilidad de
analizar los resultados obtenidos, que al compararlos
con el estudio de Manish,9 muestran similitud en el
sentido de que el extracto con el solvente más polar
62
Revista Nal de Odontologia.indd 62
de los utilizados, como lo es el hexano, es el que tiene
mayor actividad en contra de las bacterias estudiadas
al cabo de 48 horas, formándose halos de inhibición
en promedio de 14,5 mm con el S. mutans y de 15,5
mm contra el L. acidophilus a una concentración de
50 mg/ml soportado por la prueba estadística, pero
también demuestra que al igual que en el estudio sobre
el que se basa el presente, los extractos de Stevia con
los demás solventes también muestran actividad en
contra de las bacterias estudiadas, claro está que para
lograrlo fue necesario aumentar las concentraciones
cuatro veces más (200 mg/ml) en el caso del extracto
con el acetato de etilo y ocho veces más (400 mg/
ml) con los restantes, como son el extracto en agua,
metanol y etanol.
Sin embargo vale la pena anotar que hubo difi-
cultad en la obtención de concentraciones tan altas
(600 y 800 mg/ml), debido a que la sobresaturación
impedía obtener una dilución completa del soluto
(sólido en gramos del extracto) en el solvente (cada
uno de los solventes), lo que sugiere que los halos de
inhibición formados por las concentraciones entre los
400 y 800 mg/ml sean muy similares.
Ahora bien, en la observación realizada a las 72
horas, se obtiene un cambio significativo en compa-
ración con los tamaños de los halos de inhibición al
cabo de 48 horas en los cultivos con L. acidophilus,
presentándose halos de inhibición mucho más grandes
con todos los extractos de Stevia, excepto con el
extracto hexanólico, con el que se mantuvieron
resultados similares a los obtenidos 24 horas antes,
aunque los halos fueron más claros, al igual que con
el resto de los extractos. Esto sugiere que los extractos
de Stevia Rebaudiana tienen un efecto tardío en contra
del L. acidophilus (más no contra el S. mutans) y que
por lo tanto las concentraciones mínimas inhibitorias
de éstos deben ser reevaluadas.
Por otra parte, ensayos previos que se realizaron
en las tres primeras semanas, en los que se probaron
diferentes presentaciones de Stevia como Stevia líquida
al 25%, al 30%; Stevia Aldy, Steviosido en polvo
al 70%; utilizando la misma técnica de difusión en
agar, con perforación en placa y con incrementos de
concentraciones en cada ensayo, la Stevia no presentó
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actividad inhibitoria alguna en contra del S. mutans y

Tamaños halos de inhibición en mm

L. acidophilus presentándose la misma situación con 25 22

los endulzantes artificiales utilizados como controles 20 17 17

15 15 16

como xilitol, sacarina sódica al 10%.

14
15

Sin embargo, un estudio realizado por Hatsue 10

Kakuta, Yoshimichi Iwami, Hideaki Mayanagi y

5
Nobuhiro Takahashi, en el que se prueba la inhibi- 0

ción del crecimiento y la producción del ácido del 0

xilitol en presencia de varios azúcares de la dieta
contra el S. Mutans en condiciones estrictamente
anaeróbicas, utilizando espectrofotometría para medir
el crecimiento y un peachimetro (referencia pH-stat
aut-2115. Toa Electronics Ltd.) para medir el pH,
los resultados muestran una pequeña disminución
del crecimiento S. Mutans y una lectura de pH lige-
ramente más básico en los medios con los azúcares
dietarios con xilitol en comparación con cada endul-
zante (glucosa, galactosa, fructosa, maltosa, lactosa,
sucrosa) por separado.10
Es probable que utilizando esta técnica se pueda
observar el crecimiento y la producción de ácidos por
parte del S. mutans y el L. acidophilus, en presencia de
los glucósidos de la Stevia Rebaudiana en combinación
con los otros azúcares de la dieta.
Igualmente es importante anotar que la presente
es un área de investigación abierta para continuar
con futuros estudios sobre la Stevia, que lleven a
establecer o confirmar las propiedades anticariogé-
nicas y que contribuyan a buscar posibles soluciones
a enfermedades que, como la caries, afectan a un gran
porcentaje de la población mundial.
Debido a que no se encontraron estudios publi-
cados en la literatura sobre la actividad inhibitoria
de la Stevia Rebaudiana contra microorganismos
cariógenos como el S. mutans y L. acidophilus, no se
tuvo un referente comparativo para discutir frente al
presente estudio.
Conclusión
El extracto de Stevia que mostró mejores resultados
en la inhibición del crecimiento, comparado con los
controles positivos, tanto para S. mutans como para
L. acidophilus, fue el hexanólico (figura 3).
Vancomicina Clorhexidina 0,2% Penicilina Hexano 200mg/mL
Streptococus mutans Lactobacillus acidophilus
Figura 3. Controles positivos y extracto con mayor actividad contra
Streptococus mutans y Lactobacillus acidophilus
Fuente: los autores
Todos los extractos de Stevia con los diferentes
solventes, incluyendo los controles positivos,
mostraron un efecto de inhibición retardado (72 horas
después) en el crecimiento de Lactobacillus acidiphilus.
Se evidencia el efecto inhibitorio de la Stevia
Rebaudiana Bertoni en el crecimiento del Streptococo
mutans y el Lactobacillus acidophilus, considerados
importantes gérmenes cariogénicos, y por lo tanto se
podría deducir un posible poder anticariogénico de
este endulzante natural, al ser utilizado como reem-
plazo de azucares calóricos en la dieta o al utilizarlos
en dentífricos o enjuagues orales.
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