Seguridad y bioética

Normas de trabajo en un laboratorio

 Uso de bata obligatoria

 Lavarse bien las manos antes y después de entrar al laboratorio
 Zapatos cerrados
 Cabello recogido
 Uñas cortas y limpias
 Prohibido el uso de shorts, faldas y pantalón cortos.

Seguridad biológica

 Es obligatorio lavarse las manos después de trabajar en el laboratorio para evitar

contaminar con un residuo de material
 Todo material debe ser desinfectado después y antes de su uso

Riesgos del trabajo con cultivos celulares

 los cultivos de crecimiento in vitro pueden propagarse

 pueden favorecer el crecimiento de virus
 los cultivos de origen humano o chimpancé son más riesgosos por ser de sangre periférica
o tejido linfoide y nervioso
 se deben contener los patógenos

bioética

 control de calidad
 facilidad de comercialización de los tejidos
 se prohíbe la clonación humana, así como su importación y exportación de embriones
clonados y comercialización de embriones, ovocitos y esperma humano

antes de experimentar en humanos

 base de principios científicos aceptados

 exhaustiva investigación científica
 se debe evitar el máximo sufrimiento del animal
 debe garantizar una muerte sin sufrimiento

Regulaciones en México

 regula el procedimiento, almacenamiento y distribución de insumos para la salud

 supervisar y regular la distribución y asignación de los tejidos donados, manteniendo
registros del donante y receptor
biología del tejido celular

cultivo celular

 proceso mediante el cual las células del cuerpo son duplicadas

 ventajas y desventajas
 fácil manipulación de condiciones controladas
 alternativa al uso de animales
 permite trabajar con pequeña a gran medidas
 pueden mantenerse congeladas

en general las células pueden llegar a tolerar temperaturas de 4 c hasta los -198c

las tres principales proteínas son las CAMs, INTEGRINAS y PROTEOGLICANOS

la función mecánica mantiene a las células juntas en los cultivos e incrementando el número de
deseosomas

función de sellado sellan el espacio entre las células

son células madres totipotenciales

es necesario conocer las fases del ciclo celular

la iniciación del cultivo celular este incia con un cultivo primario de células que migraron a un tejido

Laboratorio de cultivo celular

Equipos

 Campana de flujo laminar: son cámaras de circulación forzada que proporciona un área
limpia de partículas
clase I: captura humos y vapores
clase II: emplea el ventilador para forzar el paso del aire a través del filtro HEPA
clase III: limita al máximo el riesgo del personal del laboratorio expuestos al a agentes
patógenos
 Incubadoras: cámaras de ambientes controlados con el propósito de conservar organismos
vivos, se controla con un sistema de resistencias eléctricas
Se clasifican en: tipo de ambiente, temperatura a la que operan, composición atmosférica y
agitacio
 Microscopios: instrumento óptico para observaciones en escala microscópicas
Estereoscópicos: son más convergentes
Compuestos: usa tres sistemas de lentes
Usos: obtener plasma de la sangre, concentrar células de líquidos y separación de fases
 Autoclaves: equipo de esterilización con vapor de agua.
Técnicas asépticas

Es un procedimiento en el cual reducimos y evitamos las contaminaciones ya que son controlados,

sirve para evitar la contaminación y asegurar que los agentes infecciosos o patógenos se propaguen

Las mayores causas son las cepas

Se debe llevar en condiciones asépticas y deben llevarse a cabo desinfecciones de los materiales

Las medidas para evitar todo esto son que debemos checar los cultivos, esterilizar toda el área y no
usar antibióticos en los cultivos no compartir las muestras ni equipos con otros compañeros para
evitar la migración de patógenos

Preparación y esterilización

 Preparación del medio de cultivo

 Esterilización de medios y reactivos

Manipulación estéril

 Limpiar superficie del material

 Tapar botellas y roscas

Métodos de esterilización

 Óxido de etileno (QUIMICO)

 Formaldehido (QUMICO)
 Calor (FISICO)
 Filtración (FISICO)

Factores que afectan la potencia del desinfectante

 Tiempo
 Concentración del agente
 pH
 temperatura
 presencia de materia orgánica
 características del microorganismo

recipientes del cultivo

adhesión y crecimiento

 células de invertebrados cultivados in vitro

 Monocapa sobre sustrato
 células dependientes de anclaje

materiales usados como sustratos

 vidrio
  plásticos sintéticos
 superficies planas
 eficiencia de crecimiento celular

factores a considerar

 masa requerida

medios y suplementos

 los primeros medios fueron de manera natural

 el primer medio de cultivo se descubrió en 1955

propiedades fisicoquímicas

 Ph de 7.4
 El CO2
 El Oxigeno
 Presión osmótica
 Viscosidad

Soluciones salinas balanceadas

Componen sales inorgánicas

Soluciones de medio completo

Indica que se han agregado mas elementos al medio

Medio y suero

Depende del tipo de celula a cultivar

Medio libre de suero

Se necesitan condiciones hormonales y nutricias

Desventajas

 Variabilidad fisiológica
 Consistencia y vida útil
 Contaminaciones
 Inhibidores de crecimiento
 Control de calidad
 Disponibilidad
 Costo

Ventajas

 Selectivo al tipo de célula

 Regulación de proliferación y regulación
Subcultivo libre de suero

 Contiene factores de adhesión

 Requiere inhibidores de proteasas
 se eliminan hormonas

sustituto de suero

 mayor consistencia
 adaptación a largo plazo
 se reemplaza el suero

subvultivo y líneas celulares

propagación

 el cultivo primario a ocupado todo el sustrato

 la línea celular ahora se puede propagar caracterizar y almacenar

terminología

 línea celular
 cepa celular
 cepa celular continua

edad del cultivo

el numero depende de la especie como su linaje pero es consistente para una línea celular

designación

 poner un código a estas mismas como NHB

 numerar las diferentes fuentes
 si fue clonada separarlas con un guion

rutina de mantenimiento

necesita un cambio de medio periódico para que se pierda nuestro cultivo

remplazo del medio

 concentración celular
 deterioro morfológico
 ph

subcultivo

 cuando el cultivo baja la densidad y creciendo lentamente se cultiva en uno fresco

 cuando se agota el medio la caída de ph puede cuasar contaminación de m.o.
 tiempo desde el ultimo subcultivo se debe llevar una bitácora
 requerimientos experimentales
estandarizaciones

 no variar el medio
 usar el mismo lote de suero
 usar siempre la misma marca
 checar siempre las líneas

no se debe dar el uso de antibióticos ya que contaminan celularmente

ingeniería de tejidos

Clonación y selección de caracterización

Clonación

Consiste en formar un grupo de células a partir de una sola.

Uso de aros de clonación

Grupo de células unicelulares expuestas a un agente para crear colonias aisladas provenientes de
una célula potencialmente diferenciada

Tipos de clonación

 clonación molecular
 clonación natural
 clonación terapéutica
 clonación reproductiva

caracterización

 demostrar ausencia de contaminación cruzada

 confirmación de la especie
 correlación con el tejido de origen
 determinar si la línea es celular
 identificar una línea celular

morfología celular

 es la forma más simple de identificar una célula

 usar microscopios con objetivos de 10X y 40X

marcadores antígenos

 se usa para caracterización de la línea celular

 anticuerpo secundario
 método indirecto y directo
Aplicaciones terapéuticas.

Células humana va de la mano con Ing. De tejidos

Realizar trasplante de piel, de órganos, de sangre, etc.

El sistema musculoso esqueleto se divide en tejidos y órganos

El tejido óseo articular tiene causas como daño del mismo tejido, osteonecrosis y tumores, para
producir se utiliza hidroxiapatita y tricalcio fosfato.

Inflamación y exceso de inmunidad

Respuesta inmunitaria

 inmunidad innata
 inmunidad adaptativa

Inflamación

Proceso fisiológico de un organismo por medio de un tejido vascularizado que responde a agentes
patógenos o infecciosos

 aguda
 crónica

Daño tisular.

Son las ceulas basales derivadas de las células troncales adultas

 proliferación
 diferenciación
 apoptosis

Agudo

 regeneración de células
 lesión del tejido
 procesos imflamatorios
 heridas superficiales

Corazón artificial.

Bombea sangre del corazon a todo el torrente sanguíneo

 corazon
 sangre
 vasos sanguíneos
Insuficiencia cardiaca.

Incapacidad de bombear sangre al torrente por eso se da el cambio de órganos.

Áreas de investigación.

 Terapia celular.
 Ing. De tejidos
 Inyección de células troncales.
 Terapia génica.
 Implantación de tejido cardiaco.

Uso de Ing. Tisular

 Estructura cardiacas y MEC