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Phaffia Rhodozyma
Producción de Astaxantina
Broggi Guadalupe
Contenido
INTRODUCCIÓN ..................................................................................................................................2
PHAFFIA RHODOZYMA .......................................................................................................................3
Antecedentes históricos de la levadura Ph. rhodozyma. ................................................................4
LA ASTAXANTINA................................................................................................................................5
Aplicaciones de la astaxantina .......................................................................................................7
Función biológica de los carotenoides .........................................................................................10
TECNOLOGÍA DE EXTRACCIÓN DEL PIGMENTO ASTAXANTINA A PARTIR DE PH. RHODOZYMA ......11
La obtención de astaxantina a partir de ph. Rhodozyma presenta algunos inconvenientes, entre
los que destacan los siguientes: ...................................................................................................12
TÉCNICA DE CULTIVO Y BIOPROCESOS .............................................................................................13
Regulación por la luz ....................................................................................................................13
Efecto de la temperatura .............................................................................................................14
Efecto de la fuente de carbono ....................................................................................................14
Efecto de la fuente de nitrógeno ..................................................................................................14
Regulación por fosfato .................................................................................................................15
Efecto de la aireación ...................................................................................................................15
TÉCNICAS PARA LIBERAR EL PIGMENTO DE LA LEVADURA ..............................................................18
Conclusiones ....................................................................................................................................20
PRODUCCIÓN DE ASTAXANTINA POR PHAFFIA RHODOZYMA EN UN CULTIVO POR LOTE
ALIMENTADO UTILIZANDO UN MEDIO DE CULTIVO DE BAJO COSTO. .............................................21
TRABAJO ANEXADO..........................................................................................................................27
BIBLIOGRAFÍA ...................................................................................................................................28
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BIOTEGNOLOGÍA -2017
INTRODUCCIÓN
La fuente natural de astaxantina utilizada hasta hace algunos años era la harina de
caparazones de crustáceos, aunque este método pronto se abandonó después de
comprobar que la levadura Ph. Rhodozyma acumula de forma natural principalmente este
caroteno y además de forma libre, lo que facilita la preparación del pigmento, siendo éste
el microorganismo en el que de una manera global la producción es más rentable que en
ningún otro, debido a que crece rápido y a que puede cultivarse económicamente a altas
densidades celulares, además es relativamente fácil de modificar genéticamente.
Las levaduras son consideradas una fuente de proteína unicelular de gran aceptación en Ia
dieta de animales.
Los peces criados son generalmente pálidos y carecen de los colores en la piel y en la
carne que poseen sus congéneres criados en el entorno natural. Esto se debe a la carencia
de astaxantina en la dieta. La adición de astaxantina a la dieta de los peces es una manera
apropiada de solucionar el problema del color de los peces criados en entornos no
naturales.
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BIOTEGNOLOGÍA -2017
PHAFFIA RHODOZYMA
En condiciones normales de cultivo (pH 4,5 - 5,5; temperatura 22°C y aerobiosis) Phaffía
rhodozyma acumula una serie de precursores de la astaxantina.
Principales características:
f) Esta levadura puede crecer en fermentadores con una alta densidad celular (>50 g/L).
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BIOTEGNOLOGÍA -2017
El contenido en astaxantina de las cepas silvestres varía entre 200 y 400 µg de astaxantina
por gramo de peso seco. Estos niveles tienen que incrementarse entre 10 y 50 veces para
ser competitivos con la astaxantina procedente de síntesis química. Por lo tanto, la
biotecnología tiene un papel esencial para aumentar sus niveles y reducir el elevado coste
de producción.
La levadura Ph. rhodozyma fue aislada a principios de los años 70 a partir de exudados de
árboles en Japón y Alaska como una levadura de color anaranjado, que era capaz de
fermentar la glucosa siendo denominado el género como Phaffia en honor al Prof. Herman
Jen Phaff. En 1976 Andrewes y colaboradores sugieren una posible ruta biosintética para
la formación de astaxantina en Ph. rhodozyma. En 1977 Johnson y colaboradores estudian
la aplicación de esta levadura para la pigmentación de salmónidos y crustáceos. Los
mismos autores un año más tarde describen un método para la extracción de astaxantina
a partir de la levadura Ph. rhodozyma utilizando los enzimas líticos de B.circularas WL-12.
En 1979 se optimiza la producción de astaxantina a partir de la levadura, estudiando el pH
óptimo, los nutrientes, etc y por fin en 1980 se demuestra que esta levadura es una
excelente fuente de astaxantina para dietas de salmónidos, puesto que el pigmento es
rápidamente asimilado y depositado en la carne de la trucha arco iris, y para pigmentación
de yema de huevo. En 1984 se propone la auto lisis de la levadura en agua destilada o en
tampón citrato como un medio bastante bueno para facilitar la extracción del pigmento.
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En 1989 se obtienen por mutación las primeras nuevas estirpes de Ph. rhodozyma
hiperproductoras del pigmento astaxantina. En 1988 la empresa danesa Danisco-
Bioteknology patenta la obtención de astaxantina a partir de esta levadura para su
utilización en la alimentación de peces y otros animales. La empresa Gist Brocades
(Holanda) ha comercializado esta levadura como fuente de pigmento para salmónidos con
el nombre de "Natupink".
LA ASTAXANTINA
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Por lo tanto, claramente existe necesidad de astaxantina obtenida a partir de Phaffia que
tenga un bajo contenido de HDCO.
Aplicaciones de la astaxantina
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De forma natural la astaxantina es producida por unos pocos organismos, de los que solamente el
alga verde Haematococcus pluvialis y el hongo levaduriforme Xanthophyllomyces dendrorhous
(con 30 y 4 mg de astaxantina por gramo de peso seco respectivamente) pueden competir con la
astaxantina sintética.
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Además de la llamativa coloración que producen y que es familiar a todo el mundo, tiene
un papel esencial en organismos fotosintéticos aerobios. Sin carotenoides, la fotosíntesis y
toda la vida en una atmósfera con oxígeno sería imposible. Asimismo, se han visto que
están implicados en la prevención o protección contra desordenes de la salud como el
cáncer y enfermedades cardiacas.
Una de las funciones más importantes de los carotenoides es proteger los tejidos celulares
contra radicales libres oxigenados que se producen durante la respiración normal o
mediante la interacción del oxígeno con la luz visible o UV, y moléculas fotosensibles
como protoporfirina IX, hemo, bacterioclorofila o clorofila.
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Para la extracción del pigmento es necesario romper la pared de la levadura. Para ello se
pueden utilizar distintos métodos:
ii) Ruptura celular química por hidrólisis ácida o alcalina. Este método aunque
efectivo queda totalmente descartado y no se puede utilizar debido a que los
carotenoides son sensibles tanto a ácidos como a bases.
El uso de todos estos métodos se traduce en una pérdida de pigmento en cierta medida, a
lo que hay que añadir que son difíciles de aplicar a gran escala, en parte debido a la
sensibilidad de astaxantina a la oxidación.
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Una medida útil para reducir los costos de producción es el uso de corrientes de residuos
industriales reproducibles como de los procesos de fabricación del azúcar o de la molienda
húmeda de maíz. Por otro lado, los medios de bajo costo pueden contener inhibidores
desconocidos de la carotenogénesis, inadecuados para un proceso de producción. En la
mayoría de los casos, el medio tiene que ser complementado con componentes
nutricionales esenciales y también puede incluir inductores o precursores de la
carotenogénesis
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Efecto de la temperatura
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Efecto de la aireación
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respectiva cepa y equipo utilizados parece razonable. Además de los cambios de agitación
y caudal de aire, el oxígeno transfererido hacia las células se puede mejorar añadiendo
disolventes orgánicos biocompatibles con alta solubilidad en oxígeno como vectores de
oxígeno al medio.
Durante esta fase, la formación de astaxantina es más lenta que la tasa de crecimiento de
las células. Al cambiar a una relación C / N elevada a medida que las células se aproximan
a la fase estacionaria de crecimiento, la formación de astaxantina finalmente excede la
tasa de crecimiento celular.
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carbono. Como alternativa al proceso alimentado por lote, pueden considerarse procesos
semicontinuos y continuos. La evaluación de los datos alimentación de pulsos y
alimentación exponencial parecen ser los métodos de alimentación que crean los mayores
rendimientos espacio-tiempo.
Un nutriente adecuado o fuente de los medios para Phaffia rhodozyma incluirían al menos
una fuente de nitrógeno, fosfato, minerales tales como hierro, cobre, zinc, magnesio,
manganeso, calcio, y otros elementos traza y vitaminas (tal como biotina, ácido
pantoténico y tiamina) según se requiera.
Después de que el caldo de fermentación que contiene las células Phaffia rhodozyma ha
alcanzado un contenido de densidad celular o astaxantina deseada, la masa de células
puede ser cosechado. Se prefiere que la cepa lleve a cabo en una fase estacionaria desde
el intervalo de 4 a 24 horas y más preferiblemente en el intervalo de 8 a 12 horas para
aumentar la producción de astaxantina.
Sin embargo, Phaffia rhodozyma no debe mantenerse durante largos períodos de tiempo
en una fase estacionaria porque las células formarán paredes celulares gruesas, que será
perjudicial para la rotura celular.
Después de romper las células y extraer el pigmento, se pueden secar. El secado puede
llevarse a cabo utilizando un secador de lecho fluidizado, el tambor secador, o secador por
pulverización. El secado por pulverización se prefiere actualmente debido al tiempo de
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Después del secado, el producto resultante será un material de levadura en polvo que
puede ser recuperado por cualquier medio adecuado tal como un ciclón, y aún más
manejado para su uso en la alimentación, almacenamiento o envío.
A pesar de ello, estos métodos tradicionales tienen una serie de inconvenientes como son
la toxicidad de los solventes, su impacto en el medio ambiente, su costo, y el hecho de
que el aplicar calor para la evaporación de los solventes puede provocar una degradación
irreversible del producto. Aparte de esto, se han desarrollado procedimientos de
extracción mediante el uso de fluidos supercríticos como el dióxido de carbono, que
debido a sus propiedades muestran una mayor capacidad de difusión que los solventes
orgánicos convencionales, incrementando así el rendimiento de la extracción. Se
hanrealizado estudios para la extracción de carotenoides a partir de fuentes naturales
mediante esta técnica, así como para la extracción de astaxantina utilizando CO2
supercrítico, que muestra un rendimiento del 90% de astaxantina recuperada. Sin
embargo, la extracción se lleva a cabo a elevadas presiones y se requiere un equipo
costoso. Recientemente ha aumentado el interés por las extracciones y separaciones
basadas en surfactantes, debido a que tienen unos bajos requerimientos en energía, los
surfactantes pueden reciclarse y reutilizarse y son capaces de tratar fácilmente los
compuestos degradados.
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paso final de recuperación, puesto que altas concentraciones de alguno de ellos son
tóxicas. Sin embargo, el uso de surfactantes no-iónicos de grado alimenticio ofrecen la
ventaja de no tener que ser eliminados pudiendo aumentar la biodisponibilidad de la
astaxantina.
El rendimiento de espacio-tiempo más alto reportado hasta ahora de casi 5 mgl-1 h-1 y YP
/ X de más de 6,6 mgg-1 de peso seco de células a alcanzado en un volumen de reacción
de 14 l.
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Conclusiones
El alto costo de producción es todavía el factor limitante para el uso de P. rhodozyma para
la producción natural de astaxantina. Típicamente, el P. rhodozyma de tipo salvaje
sintetiza astaxantina en concentraciones de Aproximadamente 200 a 400 μg / l de peso
seco. Estas cantidades están por debajo del nivel que merece la producción industrial. Por
lo tanto, la concentración de astaxantina de los aislamientos naturales es una de las
medidas que hay que mejorar para desarrollar un proceso industrial con mayor eficiencia
de costos.
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La cepa mutante 25-2 de Phaffia rhodozyma fue crecida en medio de cultivo Yuca
utilizando un sistema de cultivo por lote alimentado. El control de la alimentación en el
medio de cultivo fue llevado a cabo en respuesta a los cambios de pH (de ácido a alcalino)
causado por la actividad metabólica de las levaduras. Este cambio fue entendido como
una señal de baja concentración de nutrientes del cultivo y, por lo tanto, como el
interruptor para activar el sistema de alimentación. La fuente de carbono y de nitrógeno
fueron mantenidas entre 15-25 g/l y 0.5-1.0 g/l respectivamente. El extracto de levadura
(1.6 g/l) fue suplementado en el medio de alimentación. El flujo de aire fue incrementado
0.2 l/min cada 12 horas hasta 2.6 l/min, a las 84 horas. Bajo estas condiciones, fue posible
observar un crecimiento lineal y una formación de pigmento durante casi todo el cultivo,
hasta que la concentración de oxígeno disuelto fue limitante (<20%). La adecuada
suplementación de nutrientes, principalmente extracto de levadura y oxígeno, incrementó
significativamente, la formación de astaxantina y biomasa. La máxima producción de
astaxantina lograda fue de 23810, mientras que la formación de biomasa fue de 39 g/l.
Los sistemas de producción por lotes tradicional tiene la desventaja de inducir el efecto
Crabtree, las altas concentraciones de glucosa en cultivos aeróbicos de Phaffia rhodozyma
inducen la desviación de la metabolismo hacia la síntesis de etanol y ácidos orgánicos
como productos de fermentación, disminuyendo el pigmento y rendimiento de biomasa.
Por lo tanto, una estrategia para resolver este problema está utilizando el cultivo
discontinuo alimentado.
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Materiales y métodos
Microorganismos y medios
Las condiciones de cultivo inóculo. Asas llenas de 25-2P. rhodozyma cepa mutante se
utilizaron para inocular 10 ml de caldo YM, se incubó a 20 ° C durante 24 h en un agitador
rotatorio a 300 rpm. El caldo de precultivo se inoculó en 500 ml matraz Erlenmeyer que
contiene 100 ml del medio YM y se incubaron durante 24 h en un agitador rotatorio a 300
rpm.
20 ° C de temperatura
6,0 pH
velocidad de agitación 900 rpm
1.5 l min -1 flujo de aire.
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Resultados
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BIBLIOGRAFÍA
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