PRÁCTICA Nº 10 EXTRACCIÓN DE ADN

I . O B J E T I V O

Realizar una identificacion de la presencia de ADN en vegetales.

II. FUNDAMENTO TEÓRICO

Constituyen un grupo de biomoléculas descubierto en 1869 (Friedrich Miescher),

denominadas asi porque en un inicio se les encontró en el nucleo celular. Su función
biológica no quedó plenamente demostrada hasta 1944 (75 años después de su
descubrimiento), año en que Avery, McLeod y McCarty por un lado y Hershey y Chase
por otro, demostraron que el DNA era la molécula portadora de la información genética.
Los AN son polímeros lineales en los que la unidad repetitiva, llamada nucleótido, está
constituída por:
• una pentosa (la ribosa o la desoxirribosa)
• una base nitrogenada (purina o pirimidina)
• ácido fosfórico
La unión de estas bases a una pentosa constituye un nucleósido. La unión de tipo éster
entre un nucleósido y el ácido fosfórico se llama nucleótido.
Existen 2 tipos de ácidos nucleicos (AN): el ácido desoxirribonucleico (DNA) y el
ácido ribonucleico (RNA), y están presentes en todas las células. El DNA y el RNA se
diferencian porque:
• el peso molecular del DNA es generalmente mayor que el del RNA
• el azúcar del RNA es ribosa, y el del DNA es desoxirribosa
• el RNA contiene la base nitrogenada uracilo, mientras que el DNA presenta timina
• la configuración espacial del DNA es la de una doble hebra helicoidal, mientras que
el RNA está formado, casi siempre, por una sola hebra lineal

LAS BASES NITROGENADAS

Las bases púricas tienen la estructura fundamental del heterociclo purina. Las bases
pirimidínicas derivan del anillo de pirimidina. Las bases púricas que se encuentran en
los AN (tanto DNA como RNA) son la adenina y la guanina. Las bases pirimidínicas
de los AN son uracilo y citosina en el RNA y timina y citosina en el DNA.
En ciertos casos aparecen otros tipos de bases nitrogenadas en los AN. En el RNA
transferente (RNAt) se encuentran a menudo bases como la N2-metilguanina, la N6-
metiladenina, la hipoxantina o el dihidroxiuracilo. En el DNA también se puede
encontrar 5-metilcitosina o 5-hidroximetilcitosina
Las bases nitrogenadas tienen poco interés bioquímico como sustancias libres, salvo en
las vías biosintéticas y degradativas de los AN. Una excepción importante es el ácido
úrico, un derivado púrico que constituye el producto final de la degradación de las
purinas. Normalmente se elimina por la orina, pero en circunstancias patológicas puede
cristalizar originando cálculos renales o la gota.

La extracción de ADN de una muestra celular se basa en el hecho de

q u e l o s i o n e s salinos son atraídos hacia las cargas negativas del ADN,
permitiendo su disolución y posterior extracción de la célula. Se empieza por lisar (romper)
las células mediante un detergente, vaciándose su contenido molecular en una
disolución tampón en la que se disuelve el ADN. En ese momento, el tampón contiene
ADN y todo un surtido de restos moleculares: ARN, carbohidratos, proteínas y otras sustancias
en menor proporción. Las proteínas asociadas al ADN, de gran longitud, se habrán
fraccionado en cadenas más pequeñas y separadas de él por acción del detergente. Sólo
queda, por tanto, extraer el ADN de esa mezcla de tampón y detergente, para lo cual
se utiliza alcohol

III. MATERIALES Y REACTIVOS

3.1 Muestra

• Hielo triturado
• Cebolla
• Espinaca

3.2 Material de vidrio

• Tubos de ensayo
• Gradilla
• Varillas de vidrio
• Batidor
• Colador o Centrífuga
• Vasos de precipitado de 150 – 250 ml
• Pipetas

3.3 Reactivos

• Agua (destilada o mineral)

• Sal de mesa
• Bicarbonato sódico
• Detergente líquido o champú
• Alcohol

IV. METODOLOGÍA
El alumno tendrá que aplicar el método experimental para el desarrollo de esta prácticaasí como
el método analítico para obtener los resultados citados.

V. DESCRIPCIÓN DE LA PRÁCTICA

1. Preparar el tampón con los siguientes ingredientes y mantener en la nevera o en

un baño de hielo triturado: 120 ml de agua, si es posible destilada y si no mineral. No usar agua
del grifo. 1,5 g de sal de mesa, preferiblemente pura. 5 g de bicarbonato sódico. 5 ml de
detergente líquido o champú.2. Elegir la muestra que va a proporcionar el ADN entre los
vegetales que pueda haber (cebolla, ajo, tomates, etc.) y cortarla en cuadraditos.3. Triturar la
muestra con un poco de agua en la batidora o utilizar un mortero. Así se romperán
muchas células y otras quedarán expuestas a la acción del detergente.4. Mezclar en un
recipiente limpio 5 ml del triturado celular con 10 ml del tampón frío y agitar
vigorosamente durante al menos 2 minutos. Separar después los restos vegetales más grandes
del caldo molecular haciéndolo pasar por un colador lo más fino posible. Retirar 5 ml del
caldo molecular a un tubo de ensayo y añadir con pipeta 10 ml de alcohol enfriado a
0ºC. Se debe dejar escurrir lentamente el alcohol por la cara i n t e r n a d e l r e c i p i e n t e ,
t e n i e n d o é s t e i n c l i n a d o . E l a l c o h o l q u e d a r á f l o t a n d o s o b r e e l tampón.6. Se
introduce la punta de una varilla estrecha hasta justo debajo de la separación entre el alcohol y
el tampón. Remover la varilla hacia delante y hacia atrás y poco a poco se irán
enrollando los fragmentos de mayor tamaño de ADN. Pasado un minuto retirar la
varilla atravesando la capa de alcohol con lo cual el ADN quedará adherido a su extremo con el
aspecto de un copo de algodón mojado.

VI. RESULTADOS Y DISCUSIÓN

Describir lo encontrado en la experiencia realizada.
PREGUNTAS DE BIOQUIMICA- TALLER ESFINGOLIPIDOSIS

1. Describa la estructura básica de los esfingolipidos. ¿Qué caracteristicas importantes se

puede señalar con referencia a la ceramida?
2. ¿ Cuñaes son las características químicas de los gangliosidos de las series 1, 2 y 3?
3. ¿ Que son las esfingolipidosis?
4. ¿Qué organelas celulares y órganos son afectados en las esfingolipidosis?
5. Diagramar la via de degradación de los esfingolipidos, señalando las patologías
asociadas a la deficienca de enzimas de esta via.
6. Haga un listado de 8 esfingolipidosis y junto al nombre señale el lípido que se acumula,
el nombre de la enzima comprometida y los principales síntomas clínicos.
7. ¿Qué son las células de Gaucher?
8. Señale las características clínicas mas importantes del lípido acumulado en la
enfermedad de Gaucher.
9. Como el glucocerebrosido se acumula en varios tejidos, ¿Podria la medida de su
excreción urinaria ser útil en el diagnostico de la enfermedad de Gaucher? ¿Por qué?
10. ¿Qué comentario le merece el resultado del recuento plaquetario del paciente, antes y
después de la esplenectomía?¿Cual es el tamaño normal del bazo?¿Como estaba el de
la paciente?
11. ¿Cómo se explica la marcada esplenomegalia que tenia la paciente y como se explica
que la esplenectomía la mejoro notablemente?
12. ¿A quienes denominamos como heterocigotos para esta enfermedad?¿Cual es la
manera mas efectiva de hacer su detección?
13. ¿Qué tipos o variantes de la enfermedad de Gaucher, Ud conoce? Precise algunas
características importantes de cada tipo
14. ¿Qué tipo de terapia se esta utilizando en el tratamiento de las esfingolipidosis?