Practica Nº04

NUMERACIÓN DE COLIFORMES, DETERMINACIÓN DEL NÚMERO MÁS

PROBABLE (NMP)

I. FUNDAMENTO TEÓRICO: COLIFORMES:

II. OBJETIVOS

 Determinar el NMP de coliformes totales en muestras de alimentos.

 Determinar la numeración de coliformes mediante el método de recuento en
placa.

III. EQUIPOS Y MATERIALES

1. Los requisitos necesarios para la preparación y dilución de la muestra de

alimentos.
2. Incubadora de 35ºC – 37ºC
3. Pipetas bacteriológicas de 1ml
4. Aguja de incubación con alambre de nicrón o platino iridio.
5. Caldo verde brillante bilis lactosa (CALDO BRILA) volúmenes de 1ml en tubos
de 150x15mm conteniendo tubos de fermentación invertidos (75x1mm).
6. Agar violeta cristal-rojo neutro- bilis (VRBA) o agar ENDO
7. Muestra leche fresca
8. Vaso precipitado
9. Tubos de ensayo
10. Estufa

IV. PROCEDIMIENTO

NUMERO MÁS PROBABLE DE COLIFORMES TOTALES

1. Preparar las muestras de alimento de acuerdo al procedimiento recomendado.

+
 Imagen1: Preparación de la muestra para la determinación de coliformes

EZQUEMATIZACIÓN DEL PROCEDIMIENTO

2. Incubar los tubos a 35ºC – 37ºC por 24- 48 horas

a) Calculados a partir de los datos de Man (1975)

b) En cada nivel de dilución, inocular 1ml en cada uno de tres tubos de medio.
Para calcular en NMP de las diluciones mayores que las que se señalan,
multiplicar el NMP por el factor de dilución apropiado de 10,100, 1000, etc. Por
ejemplo, si se han seleccionado tubos provenientes de las diluciones 10-2,10-3,
10-4, multiplicar por 10, si de las diluciones 10-3, 10-4, 10-5 multiplicar por 100.

Siembra en placas

1. En tres placas Petri y por duplicado se agregará el agar Endo,

2. Con una aguja de nicrón sembrar de los tubos escogidos en las placas con el agar

3. Luego de sembrar llevar a al a estufa y esperar por 48 horas

V. RESULTADOS

a) Descripción luego de la incubación

Figura 1: Esqueatización del procedimient

b) Número más probable de coliformes totales en los tubos

 c) Número más probable de coliformes totales en el agar

IMAGEN INTERPRETACIÓN

En el agar identificar las colonias o

puntos de color fuxia, lo que indicara
la presencia de coliformes totales.

VI. RESULTADOS

Según (INDECOPI, 2003) la numeración de coliformes ufc/ml en la leche es 1000

.

VII. CONCLUSIONES

 el consumo humano.

 Los coliformes totales son considerados como un indicador de calidad

higiénica de los alimentos y son particularmente indicadores de
contaminación post proceso térmico, pues estos microorganismos se eliminan
fácilmente por tratamiento térmico.
  Si los organismos coliformes fermentan la lactosa en este medio produciendo
un color rojo (por ejemplo, Escherichia coli) mientas que los no fermentadores
de lactosa producen colonias claras y sin color, por ejemplo, Salmonella sp.

VIII. CUESTIONARIO

de colformes totales. Asi como también considerando los criterios

microbiológicos pueden ser útiles en la evaluación de: la inocuidad y la duración
de los alimentos almacenados.

XI. BIBLIOGRAFÍA

INDECOPI. (2003). LECHE Y PRODUCTOS LACTEOS. Leche. Cruda.Requisitos.

Obtenido de NORMA TECNIC PERUANA: http://infolactea.com/wp-
content/uploads/2015/03/723.pdf

Bourgeois C.M. Microbiología Alimentaria. Editorial Continental S.A.1995.

Determinación de la calidad microbiológica y sanitaria de alimentos preparados

vendidos en la vía pública de la ciudad de Bogotá D.C.