LABORATORIO 3: CROMATOGRAFÍA DE CAPA DELGADA (CCD)

SEPARACIÓN DE LOS PIGMENTOS DE UNA PLANTA

OBJETIVOS:

 Conocer la técnica de CCD, sus características y los factores que en ella

intervienen.

 Calcular los valores de Rf de las sustancias separadas.

 Deducir a través del Rf, la relación que existe entre la polaridad de las
sustancias que se analizan y la de la fase móvil empleada.

 Aplicar la técnica de CCD como criterio de pureza de las sustancias.

ANTECEDENTES:
La Cromatografía es tal vez la técnica más utilizada para separar los varios tipos de
compuestos, que integran las mezclas y se basa fundamentalmente en una
distribución entre dos fases. El método envuelve la remoción selectiva de los
componentes de una fase a medida que esta fase fluye a través de una segunda
fase estacionaria. La remoción de un componente por la fase estacionaria es un
equilibrio y las moléculas de ese componente vuelven a entrar a la fase móvil. La
separación se debe a que los distintos componentes de la mezcla son atraídos con
distinta fuerza por la fase estacionaria a medida que fluyen a través de ella. Aquel
componente que es atraído con mayor fuerza por la fase estacionaria va quedándose
atrás mientras que el componente atraído con menos fuerza va más adelante que los
demás a medida que van fluyendo a través de la fase estacionaria. Las distintas
velocidades de flujo de los componentes de la mezcla permite que ellos se vayan
separando en zonas o manchas a medida que la mezcla fluye a través de la fase
estacionaria (figura 1). La separación entre las zonas de los componentes es
proporcional a la distancia recorrida por la fase móvil sobre la fase estacionaria. Así
entre mayor sea la distancia recorrida mayor será la separación entre las zonas de
los componentes.
 B

A
B
ME ZCL A
A+B A

Tiempo 0 Tiempo 1 Tiempo 2

Tiempo aumenta

Figura 1

Hay cuatro clases importantes de cromatografía las cuales se basan en los principios
mencionados anteriormente. Estas son: cromatografía de columna, cromatografía de
capa delgada, cromatografía de papel y cromatografía de gases.

Los pigmentos naranjados y rojos en las plantas consisten de hidrocarburos llamados

Carotenoides. Los pigmentos verdes consisten principalmente de Clorofila A y
Clorofila B.

En este experimento se tratará de separar los pigmentos de una planta utilizando

cromatografía de capa delgada.

MATERIALES Y REACTIVOS:

1 probeta 1 vidrio de reloj Metanol

1 espátula 2 erlenmeyers de 50 mL Cloroformo
3 capilares 2 placas cromatográficas Éter de petróleo
1 vaso de 400 mL 1 embudo de separación
1 mortero 1 beacker de 100 mL
Papel Filtro
Cada grupo debe traer aproximadamente 10 g de hojas de espinaca, una regla y
un lápiz de grafito.

PARTE EXPERIMENTAL:

 Extracción de la espinaca:

En un mortero muela aproximadamente unos 25 gramos de espinaca con 10 ml de

metanol. Decante la solución de metanol haciendo presión sobre la espinaca
tratando de sacar la mayor parte del solvente. Vote la solución de metanol. Muela la
espinaca con una mezcla de 5 ml de metanol y 10 ml de éter de petróleo (punto de
ebullición de 30 a 60 ºC). Filtre la mezcla a través de un embudo tapado con un poco
de lana de vidrio en un embudo de separación. Vuelva a moler la espinaca con 5 ml
de metanol y 15 ml de éter de petróleo y vuelva a filtrar la mezcla en el embudo de
separación. Estas operaciones extraerán la mayor parte de los pigmentos orgánicos
en la fase de éter de petróleo. Saque la fase inferior de metanol y vótela.

 Aplicación de la muestra:

Como ejemplo de sustancias a separa por cromatografía se han tomado los

pigmentos presentes en las plantas. Estos pigmentos son los carotenos y la clorofila.

Introduzca la punta de un capilar en la solución de los pigmentos. Luego que la

solución haya ascendido en le capilar, retírelo. Toque momentáneamente y con
suavidad con la punta del capilar lleno un punto en la placa (aproximadamente en le
centro y a 2 cm del borde inferior). Se debe lograr una manchita circular de unos 3 a
5 mm de diámetro. Debe tenerse cuidado en no perforar la superficie de l absorbente
al hacer la aplicación así que el toque en el punto de la aplicación debe ser muy
suave. Si se estima que no quedó suficiente cantidad de los compuestos en la
mancha se puede hacer otra aplicación en el mismo punto. Se deja que el solvente
se evapore de la placa y ya entones queda ésta lista para hacer cromatografía.

 Cromatografía:

En un beacker se agrega cloroformo hasta una altura de unos 5 mm y se tapa con un

vidrio de reloj dejándolo en reposo unos 5 minutos para que su atmósfera se sature
con los vapores del solvente. Luego con cuidado se introduce la placa verticalmente
por su parte superior (mancha hacia abajo) en el recipiente volviendo a taparlo. El
solvente al entrar en contacto con la parte inferior de la placa empieza a ascender y
cuando llega la mancha empezará el proceso cromatográfico. Permita que el
solvente llegue hasta el nivel superior del adsorbente en la placa, entonces retire la
placa con cuidada. Cuantas manchas se ven en la placa? De que color son?
Cual es su posición ?.

 Revelado de la placa:

Para poder ver la posición de manchas incoloras en la placa se introduce ésta en un

recipiente cerrado con yodo (I2) en el fondo y se deja un rato. Una mancha café
aparecerá donde hay compuestos orgánicos en la placa producto de un complejo
formado entre el yodo gaseoso y el compuesto. Como las manchas no son muy
estables al sacar la placa del recipiente se deben demarcar con un lápiz.

CUESTIONARIO:

1. Analizar y explicar los resultados de sus cromatoplacas. Puede dibujar las

placas y las posiciones de las manchas de los compuestos antes y después de la
cromatografía.

2. En la cromatografía de capa delgada, Cuál es la fase estacionaria y cual es la

fase móvil?

3. Explique cómo y por qué se separan los componentes de la mezcla de

pigmentos. Cual de los pigmentos es atraído con más fuerza por la sílica? Por que?

4. Que solvente o mezcla de solventes recomendaría usted para hacer que el

desplazamiento de las manchas desde su posición original fuera menor que el
observado por usted en la práctica?

5. Usted tiene un compuesto impuro y quisiera saber cuantas sustancias están

contaminando su compuesto. Explique como lo haría utilizando cromatografía de
capa delgada.

6. Consulte qué so los reveladores en cromatografía de capa fina.