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“BIOTECNOLOGIAS REPRODUCTIVAS DE ALPACAS HUACAYA COLOR EN PUNA SECA ALTO

ANDINO TACNA”.

BIOTECNOLOGÍAS REPRODUCTIVAS EN CS

La crianza de los camélidos domésticos, alpacas y llamas, es una de las actividades de mayor
importancia e impacto en el desarrollo socio económico de la población alto andina de nuestro
país, no solo por su capacidad de adaptación a las difíciles condiciones medioambientales,
alturas sobre los 4,000 metros snm, sino por su utilización como una fuente alimenticia de
proteína de origen animal y medio de transporte y en el caso de la alpaca, como un recurso
para la producción de fibra de buena calidad. El Perú tiene más de 3 millones de alpacas (87 %
de la población mundial) y la segunda población mundial en llamas con más de 1 millón de
animales; sin embargo, Las deficiencias en los esquemas de crianza tradicional, como la crianza
conjunta de alpacas y llamas, con los consiguientes cruzamientos no programados, han
contribuido a disminuir la calidad genética de los animales, originando una pérdida en la
cantidad y calidad de fibra, reportándose que el 45 % de la producción de fibra tiene una finura
de 26.0 micras y el 46 % una de 33.0 micras y solo un 8 % presenta una fibra del 22.0 micras
(Freyre G. 2006). La aplicación de biotecnologías reproductivas como la Inseminación Artificial
(IA) ha contribuido al progreso genético obtenido en especies domesticas como los bovinos de
leche, contribuyendo a obtener los actuales niveles de producción láctea. En camélidos, la
posibilidad de mejora genética de los rebaños de productores mediante la prueba de progenie,
con la formación de núcleos de reproductores, requiere años de trabajo y esta limitada, entre
otros factores, por el largo intervalo generacional y la capacidad fisiológica de una hembra que
solo puede tener hasta 4 crías, durante toda su vida reproductiva (Novoa C. 1999). Los
esfuerzos para el desarrollo y aplicación de biotecnologías reproductivas no siempre han sido
desarrollados en forma programada y continua, sino como esfuerzos individuales y aislados e
incluso algunos investigadores consideran que no es posible desarrollar y aplicar estas
tecnologías por los pobres resultados obtenidos. Sin embargo, el desarrollo de estas
biotecnologías ha requerido la mejora del conocimiento sobre la fisiología reproductiva de esta
especie., contando con la ayuda de técnicas como la ultrasonografía. El objetivo del presente
trabajo es realizar una breve revisión del estado actual del conocimiento, sustentado en
estudios realizados en nuestro país, especialmente en Inseminación Artificial, Transferencia de
Embriones y Fertilización In Vitro; con el propósito de disponer de alternativas tecnológicas
que puedan servir como herramientas para la mejora genética de los camélidos domésticos,
alpacas y llamas; así como la posibilidad de su potencial uso en los camélidos no domésticos.

INSEMINACIÓN ARTIFICIAL La IA con semen congelado es una de las más importantes


tecnologías reproductivas en la producción de animales domésticos y combinada con una
prueba de progenie, ha contribuido sustancialmente en el mejoramiento genético de bovinos
lecheros, especialmente cuando fue posible disponer de semen congelado de toros de alta
calidad genética En camélidos, si bien existen reportes sobre el desarrollo de la IA y aun
cuando puede ser considerada una alternativa tecnológica, aun no se han superado las
limitantes existentes, como el desarrollo de protocolos de criopreservación, limitando por
ahora al desarrollo de la Inseminación Artificial con el uso de semen fresco (Huanca y Adams
2007), con las consiguientes dificultades para permitir una amplia difusión de reproductores
genéticamente superiores. Existen diferencias fisiológicas entre los camélidos y otras especies
domésticas, siendo una primera diferencia el hecho que las hembras camélidas

como la dificultad para la colección de semen debido a las características de cópula de la


hembra (posición y duración); así como el manejo del semen debido a su naturaleza viscosa;
han sido los principales obstáculos para el desarrollo masivo de la IA, a los que hay que agregar
la baja concentración de espermatozoides y el alto porcentaje de anormales (Fernández-Baca
1993). Los reportes sobre métodos de colección de semen son diversos, desde el uso de sacos
vaginales (Mogrovejo et al 1952), esponjas vaginales (San Martín 1961) y electroeyaculación
(Fernández-Baca y Calderón 1965; Calderón W. 1968); con las consiguientes dificultades para
los machos durante la copula y la calidad del semen. Posteriormente se reporta el uso de una
vagina artificial adaptada de ovinos (Sumar J y Leyva V.1981), que si bien mejora la técnica de
colección, aún presenta dificultades para mantener una temperatura adecuada durante el
largo de la cópula. El uso de una frazadilla eléctrica cubriendo la vagina Artificial, permite
algunas mejoras en la técnica de colección, facilitando el mantenimiento de la temperatura
(Gauly and Leindiger , 1996). Igualmente, el uso de un maniquí (Sumar y Leyva 1981) o la
colección con hembra receptiva (Gauly and Leindiger 1996; Huanca y Gauly 2001) se presentan
como alternativas para la colección de una muestra de semen fisiológicamente normal; sin
embargo, se requiere un entrenamiento de los animales y no siempre todos los machos llegan
a aceptar el maniquí; mientras que el uso de hembra receptiva genera incomodidades en el
operador. Otras alternativas de colección incluyen la colección de semen mediante una fístula
uretral (Pérez G. 2006) y una más reciente ha sido reportada por Giulano et al (2007) mediante
la colección de semen con uso de electroeyaculación pero con una previa anestesia del animal,
con resultados interesantes y sin contaminación del semen con orina. Los estudios sobre
conservación de semen no son totalmente satisfactorios, particularidades como la alta
viscosidad del semen de alpacas y llamas (Lichtenwalner et al 1996; Bravo et al 1997) se
constituyen en factores que dificultan el desarrollo de las técnicas de conservación.,
dificultando la determinación de la concentración, morfología y motilidad espermática,
además del alto porcentaje de espermatozoides anormales (Fernández- Baca 1993) y una
motilidad oscilatoria (Sumar y García 1986, Garnica et al 1993). Intentos para reducir la alta
viscosidad ha sido reportada, mediante con el uso de enzimas como la colagenasa,
hyaluronidasa y tripsina (Bravo W. et 2000) o mediante una acción mecánica (Valdivia M.

Los esfuerzos para el desarrollo y aplicación de biotecnologías reproductivas no siempre han


sido desarrollados en forma programada y continua, sino como esfuerzos individuales y
aislados e incluso algunos investigadores consideran que no es posible desarrollar y aplicar
estas tecnologías por los pobres resultados obtenidos. Sin embargo, el desarrollo de estas
biotecnologías ha requerido la mejora del conocimiento sobre la fisiología reproductiva de esta
especie., contando con la ayuda de técnicas como la ultrasonografía. El objetivo del presente
trabajo es realizar una breve revisión del estado actual del conocimiento, sustentado en
estudios realizados en nuestro país, especialmente en Inseminación Artificial, Transferencia de
Embriones y Fertilización In Vitro; con el propósito de disponer de alternativas tecnológicas
que puedan servir como herramientas para la mejora genética de los camélidos domésticos,
alpacas y llamas; así como la posibilidad de su potencial uso en los camélidos no domésticos.
INSEMINACIÓN ARTIFICIAL La IA con semen congelado es una de las más importantes
tecnologías reproductivas en la producción de animales domésticos y combinada con una
prueba de progenie, ha contribuido sustancialmente en el mejoramiento genético de bovinos
lecheros, especialmente cuando fue posible disponer de semen congelado de toros de alta
calidad genética En camélidos, si bien existen reportes sobre el desarrollo de la IA y aun
cuando puede ser considerada una alternativa tecnológica, aun no se han superado las
limitantes existentes, como el desarrollo de protocolos de criopreservación, limitando por
ahora al desarrollo de la Inseminación Artificial con el uso de semen fresco (Huanca y Adams
2007), con las consiguientes dificultades para permitir una amplia difusión de reproductores
genéticamente superiores. Existen diferencias fisiológicas entre los camélidos y otras especies
domésticas, siendo una primera diferencia el hecho que las hembras camélidas

1999). Los resultados observados son variables y si bien con el uso de la enzima se observa
motilidad espermática, esta característica no siempre se ha reflejado en mejoras en la tasa de
preñez. Igualmente existe poca información sobre el uso de dilutores, reportándose el uso de
Yema – citrato (Pacheco et al 1996), solución de Suero de Albúmina Bovina (BSA) y Glucosa
(Huanca y Gauly 2001), Tris – Glucosa - Yema Huevo (Raymundo et al 2000). El primer reporte
sobre IA en alpacas fue realizado por Fernández-Baca y Novoa (1968), utilizando semen sin
diluir de 2 vicuñas y 4 paco-vicuñas, obteniéndose una sola cría de 42 alpacas inseminadas.
Posteriormente se ha reportado la inseminación de 83 alpacas y 11 llamas con semen fresco
obtenido por electroeyaculación de una vicuña y 4 paco-vicuñas, con una tasa de 48 % en
hembras inducidas a ovulación con Gonadotropica Corionica Humana (hCG) y 11 % en hembras
inducidas a ovulación con machos vasectomizados (Leyva et al 1977). Igualmente se reporta
una tasa de preñez del 73 % a la IA con semen fresco y depositado en los cuernos uterinos, así
como un 67 % de preñez a la IA por laparoscopia (Bravo et al 1997), similar al reporte de
Pacheco (1996). Sin embargo, todas esas experiencias fueron realizadas en centros
experimentales, a diferencia de una experiencia a nivel de criadores particulares, donde se
reporta una tasa de preñez del 51 % de 207 alpacas inseminadas con semen fresco diluido con
una solución de BSA + Glucosa e induciendo la ovulación con un análogo de GnRH o LH, entre
24 a 26 horas antes de la Inseminación (Apaza et al 2001). Los reportes sobre semen
congelado son muy escasos; así tenemos que un estudio realizado con semen obtenido por
electroeyaculación y diluido con Tris – Yema huevo – Glicerol, solo se observo un 10 % de
motilidad pos descongelamiento (McEvoy et al 1992); así mismo, otro estudio con semen
tratado con colagenasa y posteriormente diluido con citrato de sodio – Yema huevo – Glicerol
(7 %) permite obtener una motilidad entre el 30 – 40 % (Bravo 1996). El uso de etilinglicol
como agente crioprotector ha sido reportado, permitiendo una tasa de motilidad pos
descongelamiento del 20 % (Santiani et al 2005). A pesar de estos resultados a la fecha no se
ha reportado estudios que nos permitan señalar la factibilidad de congelar semen de
camélidos. Posiblemente, como sucede con otras especies, no va a ser fácil congelar semen,
más aún si a las dificultades de contar con un dilutor apropiado, hay que considerar los altos
porcentajes de anormalidades presentes en los eyaculados. Los resultados obtenidos sugieren
que es posible la colección de semen con vagina artificial colocada en un maniquí y envuelta
con una frazadilla eléctrica,

TRANSFERENCIA DE EMBRIONES En camélidos, el primer reporte sobre transferencia de


embriones fue realizado por Sumar et al. (1974), posteriormente otros reportes confirman la
factibilidad de la aplicación de la técnica pero con una variabilidad en la respuesta ovárica a los
protocolos de superestimulacion, así como la respuesta en número y calidad de embriones
recuperados (Del Campo et al 1995). La ultrasonografía ha contribuido a mejorar el
conocimiento sobre la fisiología ovárica en especies domésticas ((Pierson and Ginther 1984) y
no domésticas; contribuyendo al conocimiento de la dinámica folicular ovárica en llamas
(Adams et al 1990) y alpacas (J. Vaughan 2001). La diferencia sustancial, como ocurre en las
especies de ovulación inducida, que si no ocurre copula, el folículo dominante ingresa a una
fase de regresión y se produce una nueva onda de crecimiento folicular (Sumar J. 2000). La
ovulación en alpacas y llamas puede ser inducida por la administración de hormonas exógenos
como la Gonadotropina Corionica Humana (hCG), Hormona Liberadora de las Gonadotropina
(GnRH) (Bourke et al 1995) o Hormona Luetinizante (LH) (Huanca et al 2001). La ovulación
ocurre alrededor de las 30 horas después de la aplicación de GnRH, LH o por estimulo de
monta (Ratto et al 2006, Huanca et al 2001). Una primera etapa en el desarrollo de protocolos
de Ovulación Múltiple y Transferencia de Embriones (MOET) involucra la superestimulación
ovárica, con el propósito de inducir el crecimiento, maduración y ovulación de un gran número
de folículos. Los protocolos de estimulación ovárica aplicados en camélidos incluyen el uso de
Hormona Folículo Estimulante (FSH) o Gonadotropina Corionica Equina (eCG), durante una
fase luteal inducida con la aplicación de Hormonas hipotalámicas (GnRH); fase luteal artificial
con la aplicación de progestágenos exógenos y durante una fase de receptividad sexual
(Bourke et. al 1992; Correa et al 1994). Las respuestas obtenidas son variables, alta incidencia
de folículos luteinizados, baja tasa de recuperación embrionaria (0 – 2.3 embriones/ donadora)
y de calidad variable (Del Campo M. et al 1995). Los estudios orientados a la inhibición del
desarrollo folicular con tratamientos con progesterona (Leyva y Garcia 1999), señalan que ante
la inserción de un progestageno intravaginal en llamas a cualquier momento del estadio
folicular inhibe el crecimiento folicular y si al final del tratamiento se aplica 500 UI de eCG, se
obtiene 5.2 ± 2.5 folículos y 2.1 ± 2.9 embriones recuperados (Chaves et al 2002). Similares
resultados han sido reportados por otros autores. En alpacas, se realizo un estudio con la
aplicación de un progestágeno intravaginal y la administración de 1000 UI de eCG,
obteniéndose una alta respuesta ovárica con el numero de Cuerpos lúteos (Velásquez y Novoa
1999). Estudios realizados por nuestro grupo de investigación sugieren que es factible obtener
una adecuada respuesta ovárica en alpacas y llamas, cuando los animales son sometidos
previamente a un protocolo de sincronización de onda folicular y el estimulo hormonal se
inicial durante la emergencia de las ondas de crecimiento folicular, sustentado en el reporte de
Ratto et al (2003). Referente a la hormona a utilizar, se ha reportado un estudio para evaluar la
respuesta de ambas hormonas, FSH y eCG, en llamas, habiéndose determinado que el número
de folículos  6 mm sometidas a un protocolo de estimulación ovárica fue de 17.9 ± 2.2 al
tratamiento con FSH y 17.7 ± 2.2 folículos con eCG (Ratto et al 2005). Estos resultados
permitieron obtener evidencia que existe una buena respuesta ovárica a la acción de ambas
hormonas, sin diferencias entre ambas. Alpacas y llamas sometidas a un protocolo hormonal
de estimulación ovárica con eCG, iniciando el tratamiento durante la emergencia de las ondas
de crecimiento folicular, permite obtener el desarrollo de 12.8 ± 1.4 folículos y 8.1 ± 1.0
cuerpos Lúteo en llamas y 7.5 ± 1.2 folículos y 5.9 ± 1.3 cuerpos lúteo en alpacas (Huanca et al
2006) La recuperación embrionaria puede ser realizada vía quirúrgica o no quirúrgica. El primer
reporte sobre colección de embriones fue realizado de oviductos de alpaca, previa laparotomía
(Novoa y Sumar, 1968) y la primera cría nacida por transferencia fue reportada por Sumar J.
(1974). Posteriormente se reporta la colección de embriones mediante una técnica no
quirúrgica a los 7 días en llamas y la transferencia en fresco con el nacimiento de una cría
(Wiepz and Chapman 1985) Otros estudios confirman que la recuperación de embriones en
estadio de blastocisto puede ser realizada a los 7 días pos servicio mediante técnicas no
quirúrgicas en llamas y alpacas. La técnica de recuperación no quirúrgica utilizada en
camélidos es similar a la reportada en vacunos, mediante la inclusión de una solución de
Dulbecco PBS y los embriones recuperados observados y evaluados en un estereoscopio
(Huanca et al 2004). Resultados sobre recuperación y transferencia de embriones en llamas
han sido descritos por Huanca 198 • Arch. Latinoam. Prod. Anim. Vol. 15 (Supl. 1) 2007 XX
Reunión ALPA, XXX Reunión APPA-Cusco-Perú et al (2006) señalando la recuperación de 4.8 ±
0.9 embriones, con una tasa de recuperación 66,1 % del número posible de embriones,
determinado en base al número de cuerpos lúteos. La tasa de preñez fue del 68.9 %. En
alpacas, se recuperaron 1.6 ± 0.3, respuesta diferente de la observada en llamas, con una tasa
de recuperación del 23.6 % de embriones posibles, con una tasa de preñez del 30.0 %.
Igualmente, se ha reportado la recuperación de 37 embriones de 47 hembras no estimuladas
(79 %), de las cuales resultaron en un 41 % de preñez al ser transferidas a receptoras (Taylor et
al 2001). La recuperación de las hembras donadoras fue evaluada, habiéndose observado una
recuperación del tracto reproductivo, determinado por ecografía, a las 3 semanas posteriores
al lavado uterino y una tasa de preñez luego de ser servidas, del 40 %, con un solo servicio
(Huanca et al 2006). Esta observación permite plantear la posibilidad de realizar tratamientos
de superestimualción y recuperación embrionaria al inicio de la época de empadre y luego de
un descanso, realizar el servicio de las donadoras y obtener tasas de preñez similares a las
observadas bajo condiciones de empadre continuo. Estos resultados sugieren la posibilidad de
obtener resultados satisfactorios con los protocolos de superestimulación ovárica en alpacas y
llamas, permitiendo obtener embriones de buena calidad y viabilidad y que al ser transferidos
permiten obtener tasas de preñez sobre el 50 %. Igualmente, la rápida recuperación de las
hembras donadoras, permite señalar que una vez realizado el protocolo de estimulación
hormonal, las hembras requieren un descanso aproximado de un mes, con tasas de preñez
muy similares a las obtenidas bajo condiciones de crianza de los productores. FERTILIZACION
IN VITRO La técnica de Fertilización In Vitro (FIV) se presenta como una de las tecnologías que
mayor desarrollo esta experimentando en los últimos tiempos. La colección de ovocitos del
folículo ovárico para la posterior maduración nuclear y citoplasmática, es la primera fase en el
desarrollo de esta técnica (Miragaya et al 2006). En camélidos existe escasa información
referida a la colección de ovocitos de ovarios de mataderos y madurados In Vitro. Un estudio
realizado con ovocitos obtenidos de ovarios de matadero y madurados a 38 °C y 5 %de CO2 ,
en los que se utilizaron medios de maduración de uso en bovinos, reporta una alta tasa de
ovocitos en MII (62 %) a las 32 horas de incubación (Del Campo et al 1992). La obtención de
ovocitos puede ser realizada de ovarios procedentes de mataderos o por aspiración
transvaginal. En el primer caso, los mataderos no siempre se encuentran cerca a los
laboratorio, por lo que en una primera fase se evaluaron las diferencias en la calidad de
ovocitos obtenidos de ovarios de alpacas y transportados desde el matadero, bajo dos
diferentes temperaturas (4° y 35 ° C), los resultados sugieren una mejor calidad de los ovocitos
procedentes de ovarios transportados a 35 °C , respecto a los 4°C, (Huanca et al 2007).En el
segundo caso, colección de ovocitos vía transvaginal, Brogliatti et al (2000) utilizando un
transductor transvaginal de 7.5 MHZ y aplicado vía transvaginal reporta la colección de 76
COCs de 134 folículos (57 %), mientras que la recuperación de ovocitos via transvaginal en
llamas, sometidas a estimulo hormonal permitió la recuperación de 10.7±2.1 y 11.2 ± 2.3 COCs
(71 y 74 % ) (Ratto et al 2005). En alpacas, un ensayo preliminar señala la factibilidad de
recuperar ovocitos vía transvaginal (Huanca et al 2006) y aún cuando se requieren mas
investigación, estos resultados sugieren que es posible recuperar ovocitos vía transvaginal sin
originar daños mayores en llamas y alpacas. Miragaya et al (2002) estudio la maduración In
Vitro de ovocitos, obtenidos por aspiración quirúrgica a las 22 horas después de la
administración de un análogo de GnRH, en llamas estimuladas con un progestageno y
estimuladas con 500 UI de eCG,obteniendo una maduración de 62 %, similar al reporte de Del
Campo et al (1992). Estudios sobre Fertilización In Vitro señalan una tasa de desarrollo al
estadio de pro núcleo del 29.2 y 57.1 % con dos diferentes dosis de heparina (2 y 5 ug/ml),
pero solo una tasa de desarrollo del 5.6 %, 6.0 % y 4.7 % para los estadios de morula,
blastocisto temprano y blastocisto expandido, luego de 9 días de cultivo (Del Campo et al
1994). Los resultados obtenidos señalan que el desarrollo de protocolos de FIV deberá ser una
de las prioridades de investigación, en forma sistemática y conjuntamente con la Transferencia
de embriones permitirán contribuir a diseñar alternativas tecnológicas para los programas de
mejoramiento genético en los camélidos domésticos y en base a los resultados obtenidos,
evaluar la posibilidad de su aplicación en camélidos no domésticos. CONCLUSIÓN Los
resultados obtenidos a la fecha señalan que el desarrollo de la IA esta limitada al uso de semen
fresco y se requiere estudios que permitan desarrollar protocolos orientados a obtener semen
congelado, con resultados expresados en tasa de preñez similares a los obtenidos con semen
fresco. En Transferencia de Embriones se han establecido protocolos de superovulación que
permiten obtener un número alrededor de 5 embriones viables/ donadora y con una tasa de
preñez mayor al 40 %. De otro lado, los estudios señalan que la recuperación de las hembras
Arch. Latinoam. Prod. Anim. Vol. 15 (Supl. 1) 2007•199 XX Reunión ALPA, XXX Reunión APPA-
Cusco-Perú donadoras se produce en un tiempo no mayor a los 40 días, permitiendo una tasa
de preñez, al ser expuestas al macho, similar a las reportadas en las condiciones de campo. Los
estudios iníciales sobre Fertilización In Vitro nos permiten sugerir lo promisorio de esta técnica
y que contribuirá, conjuntamente con la transferencia de embriones, al progreso genético de
los camélidos domésticos y como una primera fase para la aplicación de tecnologías
reproductivas en los camélidos no domésticos. Agradecimientos Los autores expresan su
agradecimiento por el financiamiento recibido del Concejo Nacional de Ciencia y Tecnología
(CONCYTEC), (Proyecto PROCOM 166 – 2006) y al Proyecto INCAGRO - Subproyecto FDSE
Biotecnologías reproductivas 05-0015 - INCAGRO FDSE – UNMSM. referencias Adams GP,
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Colección de semen mediante

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Criopreservacion de semen de alpacas. Resumen. II congreso Mundial sobre camelidos, Cusco,
Peru 81abstract

- Colecta de semen e Inseminación artificial La inseminación artificial (IA) es una técnica


reproductiva utilizada principalmente para el mejoramiento genético de diversas especies
domésticas que no ha sido totalmente desarrollada en los CS. Poca información se encuentra
disponible sobre dicha técnica en CS. Entre los obstáculos para llevar a cabo un programa de IA
a gran escala se encuentran la metodología de colecta de semen y las características del mismo
(alta viscosidad, baja concentración espermática, baja motilidad) (Fowler, 1989; Fernández-
Baca, 1993; Del Campo et al., 1995). Diversos métodos se han utilizado para la colecta de
semen en los CS, tales como fundas vaginales (Mogrovejo, 1952), fístula uretral,
electroeyaculación (Fernández-Baca y Calderón, 1966) y vagina artificial con un maniquí
(Sumar y Leyva, 1981; Lichtenwalner et al., 1996b). Según algunos autores (Fernández-Baca y
Calderón, 1966; Garnica et al., 1993) la recolección de semen en los CS es complicada debido a
la forma en que se realiza la cópula y la duración de la misma. De todas las metodologías, la
vagina artificial es la más utilizada en el presente (Garnica et al., 1993). Urquieta et al (1997)
demostraron que la utlización de una bolsita de polietileno en el interior de la vagina artificial
mejoró la motilidad y la viabilidad espermática de llama comparada con el cono de latex y tubo
recolector de vidrio (Figura 4). Este hecho ya había sido observado en camellos (Sieme et al.,
1990) y bovinos (Smith and Merilan, 1991). Por lo tanto, en un estudio realizado con ese tipo
de vagina, Aller et al. (1997c) colectaron semen utilizando hembra receptiva como súcubo y de
un total de 23 machos no entrenados ni amansados para tal fin, solo obtuvieron semen de 11
(47,8%), lo que demostró que la alta líbido es un factor importante para vencer la inhibición
del comportamiento sexual asociado con la presencia del hombre (Foto 2). Es por ello, que la
utilización de hembras receptivas facilitó la tarea de colecta de semen, de acuerdo con lo
expresado por Watson (1978). 225 Fig. 4. Diagrama de la vagina artificial con bolsa de
polietileno en su interior. (1) tubo rígido de PVC (17 x 4,4 cm), (2) camisa de latex, (3) bolsa de
polietileno, (4) pico de cubierta de bicicleta, (5) tubo de latex (15 cm), (6) llave de plástico de 3
vías, (7) Jeringa de 60 ml. El efecto de la frecuencia de colecta y la época del año sobre las
características seminales fueron estudiadas por Ferré et al. (1996), quienes observaron que la
frecuencia de 3 veces/semana con respecto a 1 vez/semana aumentó el número total de
espermatozoides obtenidos en esa unidad de tiempo. Asimismo, en el verano los parámetros
cualitativos del semen fueron más altos que en la primavera. Además, Bravo et al (1997a)
establecieron el efecto de colectas repetidas sobre las características seminales y encontraron
que la concentración espermática y el porcentaje de espermatozoides normales varió entre la
primera, segunda y tercera colecta diaria. Cuando se determinó la tasa de fertilidad de machos
con apareamientos sucesivos, se observó que la misma fue mayor (76%) con cuatro
apareamientos diarios que con seis (59%) en un período de 9 días de servicio (Bravo et al.,
1997c) Los primeros intentos de IA fueron realizados en alpaca y resultaron en una tasa de
gestación de 2,4 % (Fernández-Baca y Novoa, 1968). En un segundo ensayo de IA
interespecífica, se obtuvo un 30,8% de natalidad en alpacas y llamas (Leyva et al. 1977).
Calderón et al. (1968) determinaron la fertilidad de los servicios por IA en alpacas, observando
el porcentaje de huevos fertilizados según diferentes intervalos entre la inducción de la
ovulación y la IA. Estos autores concluyeron que la mayor fertilización fue observada cuando la
IA se realizó entre las 24 y 40 hs. En recientes estudios de IA utilizando semen fresco puro o
diluído se obtuvo un 40,6% (De la Vega y Pérez, 1996) y 68% de gestación (Bravo et al., 1997b),
sin informar volumen ni concentración espermática. En este último trabajo, el diagnóstico
ecográfico fue realizado 15 días después de la IA y posiblemente este pocentaje haya
disminuído después de los 60 días, por la alta pérdida embrionaria que se observa en los CS
hasta los 30 días de gestación (Novoa, 1991). 226 El momento de IA en los CS es crítico, debido
a la variabilidad en el momento de la ovulación relativo a la naturaleza del estímulo ovulatorio
utilizado. En un ensayo en el altiplano argentino, cuando se comparó IA a las 24 y 40 hs
posGnRH, se obtuvo una tasa de gestación de 40% y 20% respectivamente (Aller et al., 1997b)
(Foto 3). En cambio, De la Vega y Pérez (1996) obtuvieron la mayor tasa de preñez en IA a las
30 hs pos inducción con macho vasectomizado. En conclusión, sería lógico pensar que el mayor
éxito se obtendría inseminando entre 24 y 36 hs pos inducción de la ovulación, debido a que la
misma ocurre aproximadamente al segundo día del estímulo ovulatorio (Adams, 1992). Esto
estaría indicando que, inseminaciones realizadas más allá de las 30-32 hs podrían llevar a una
asincronía entre el tiempo necesario para la capacitación espermática, la ovulación y la
fertilización propiamente dicha. El número mínimo de espermatozoides para IA fue estudiado
por Bravo et al. (1996b). En ese estudio, los investigadores obtuvieron tasas de gestación de
54, 70 y 64% para 6, 8 y 10 millones de espermatozoides, respectivamente. Si el volumen y la
concentración espermática citados anteriormente fueran representativos de los eyaculados
después de un apareamiento natural, se observa claramente que los CS requerirían menor
cantidad de espermatozoides para la fertilización que otros rumiantes domésticos, de esta
manera, la deposición intracornual del semen durante la cópula sería una adaptación para
sortear la relativamente baja concentración espermática del semen. El nacimiento de una cría
viva por medio de inseminación artificial con semen de camello en hembra guanaco fue
obtenido recientemente en los Emiratos Arabes (Skidmore et al., 1999). 3.2. Criopreservación
de semen La importancia de preservar recursos genéticos para el nuevo milenio es
ampliamente reconocido y la conservación de semen podría tener una mayor contribución con
un gran potencial de aplicaciones en biología, biotecnología y conservación de especies, como
ser: 1) intercambio internacional (importación/exportación) de líneas genéticas, 2)
conservación de líneas genéticas con características superiores o transgénicas, 4) reserva
genética en respuesta a enfermedades, 5) conservación de especies y/o razas en peligro o en
vías de extinción. La criopreservación de semen de CS aún se encuentra en etapa
experimental, por lo tanto, antes que la técnica sea adoptada en forma masiva en llama y
alpaca, serán necesarias mayor cantidad de investigaciones. Pérez (1996) inseminó 18 alpacas
con semen congelado en un diluyente a base de PBS (Phosphate Buffer Solution)-yema de
huevo-suero fetal de llama-glicerol y obtuvo 6 hembras preñadas (33%). En experimentos
realizados en el CEA INTA Abra Pampa (provincia de Jujuy, Argentina) de 38 hembras
inseminadas con semen congelado se obtuvieron tres hembras gestantes (7,9%) (Aller et al.,
2001b). La particularidad de este ensayo es que no se utilizó ultrasonografía para detectar las
hembras que presentaban un folículo preovulatorio al momento de inducir la ovulación, es
decir, la totalidad de las hembras fueron inyectadas con GnRH e inseminadas 24 hs después.
Esto hace suponer que el porcentaje de gestación fue mayor si solo fueran consideradas las
227 hembras fisiológicamante aptas para ovular un ovocito capaz de ser fertilizado. El
diluyente utilizado para la congelación fue yema-citrato-glucosa-glicerol-DMSO y el número
total de espermatozoides fue de 25 millones/dosis con un 25% de motilidad individual
posdescongelación. En estudios in vitro, McEvoy et al. (1992) utilizaron el diluyente Triladyl
(Minitub, Alemania) y obtuvieron después de la congelación/descongelación un 5 a 10% de
sobrevivencia espermática. Últimamente, Valdivia et al (1999) obtuvieron semen fresco de
llama con motilidad progresiva de 60 a 90 % y se redujo a 15 a 20 % pos-descongelación. Otros
autores, utilizando dos diluyentes diferentes, uno con proteína animal y otro con proteína de
soja, obtuvieron un mayor porcentaje de mótiles posdescongelación (25 %) con el primer
diluyente (Burgel et al., 1999). 3.3. Transferencia de embriones Los procedimientos para la
colecta y la transferencia embrionaria (TE) no quirúrgica en llamas ha sido descrita en detalle
(Wiepz and Chapman, 1985; Bourke et al., 1992b). Brevemente, la ovulación en las donantes y
receptoras es sincronizada por una variedad de tratamientos, incluyendo apareamiento, GnRH,
hCG o LH. Para el tratamiento superovulatorio se utiliza eCG (1.000 a 1.500 UI), FSH o su
combinación (Correa et al., 1997). La mayor respuesta superovulatoria fue obtenida cuando el
apareamiento se produjo 36 hs después de finalizado el tratamiento superovulatorio, con
respecto a la cópula inmediata (Ratto et al., 1997). En el Campo Experimental de Altura del
INTA Abra Pampa (provincia de Jujuy, Argentina) se realizó tratamiento superovulatorio (Tabla
4) a 22 llamas y en 5 no se obtuvo respuesta ovárica; se realizaron 15 colectas y se recuperó un
total de 29 embriones (promedio = 1,9 ± 2,3 embriones/lavaje). En este protocolo se utilizó un
dispositivo intravaginal impregnado con 1,9 g de progesterona natural (CIDR-B) con el objetivo
de inducir una fase luteal artificial, asociado con benzoato de estradiol para producir la
regresión de todos los folículos y la emergencia de una nueva onda folicular. Los embriones
son colectados alrededor de los 7-9 días después del apareamiento (dos apareamientos
separados por 12-24 hs). Una sonda de Rusch (Nº 14 o 16) es colocada por vagina y cervix y
posicionada en el lumen del cuerno uterino. Después de insuflar el balón, se realiza el lavaje
uterino con 30 ml DPBS + 2% de suero fetal bovino y este procedimiento es repetido 6 a 7
veces (Foto 4). La solución es filtrada a través de filtro de 75 µ y luego se realiza la búsqueda y
clasificación de los embriones en lupa estereoscópica (10-40x). El tamaño de los embriones
varía según la edad de los mismos (600 µ a 5 mm)(Bourke et al., 1995a) y en general se
encuentran blastocistos protruídos y algunos blastocistos expandidos (Fotos 5 y 6). Los
estadios de mórula y mórula compacta fueron colectados del oviducto al cuarto y al séptimo
día después de la cópula, respectivamente; en cambio, los blastocistos fueron colectados al
décimo día después del servicio (Bravo et al., 1996a).

Las hipótesis específicas fueron:

a) Las características productivas de las alpacas Huacaya, en el año 2 008 muestran un


mejoramiento en sus valores con respecto al los años 2 004, 2 005, 2 006 y 2 007.

b) Las características reproductivas en el año 2 008 muestran un mejoramiento en sus valores


con respecto a los años 2 004, 2 005, 2 006, 2 007 y 2 007.

Los objetivos específicos fueron: -

Evaluar el comportamiento de las características reproductivas: tasa de natalidad, duración de


cópula, número de servicios por hembra , características físicas de semen

MATERIALES Y METODOS

2.1. LUGAR DE EJECUCIÓN.

El trabajo se realizó en el Instituto de Investigación y Extensión Agraria “Santa Ana” Huancayo,


Ubicado en el anexo de Hualahoyo, distrito del Tambo, Provincia de Huancayo, región Junín, a
partir de los cuadernos de campo, planillas y registros mensuales del rebaño, de los años 2
004, 2 005, 2 006, 2 007 y 2008: el rebaño de alpacas se encontraban en la comunidad de
Paccha, en el lugar denominado Suitucancha del distrito del Tambo, situado a 12 km de la
ciudad de Huancayo, región Junín, a una altitud de 4200 m.s.n.m. y con una temperatura
promedio de 5º C, el lugar tiene 2 épocas bien marcadas como son la época seca comprendida
entre los meses de mayo a setiembre y la época húmeda de octubre a abril, con una
precipitación pluvial de 700 – 800 mm/año.

2.2. DURACIÓN DE ESTUDIO. La duración del estudio fue desde enero del 2 009 hasta junio del
2 009; la recolección de datos fue desde enero del 2 009 hasta febrero del 2 009 y el trabajo de
gabinete fue desde marzo hasta junio del 2 009. 57

2.3. EQUIPOS Y MATERIALES. 2.3.1 MATERIALES Y EQUIPOS. a.- Materiales: Para recolección
de los datos:  cuaderno de campo del 2 004 al 2 008.  Registros de producción del 2 004 al 2
008.  Planillas de empadre, parición, esquila y movimiento de ganado del 2 004 al 2 008. Para
las labores en gabinete:  Discos compactos.  Hojas  lapiceros b.- Equipos  Computadora
 Impresora  Fotocopiadora 2.4 POBLACIÓN Y MUESTRA DEL ESTUDIO. 2.4.1 POBLACIÓN.
Toda lo población de alpacas existentes en el INIA “Santa Ana“ Huancayo, desde los años 2
004, 2 005, 2 006, 2 007 y 2 008. 58

2.5. METODOLOGÍA.

2.5.1. TIPO DE INVESTIGACIÓN. a) Tipo de estudio: Descriptivo y retrospectivo b) Tiempo de


ejecución: 6 meses c) Secuencia del estudio: Longitudinal

2.5.2. DISEÑO DE INVESTIGACIÓN. El diseño fue de tipo descriptivo, comparativo anualmente


durante los años 2 004, 2 005, 2 006, 2 007 y 2 008.

2.6. CARACTERISTICAS O VARIABLES. Las características reproductivas y productivas analizadas


fueron las más importantes que tienen injerencia dentro de la producción animal en alpacas.
2.6.1. CARACTERÍSTICAS REPRODUCTIVAS - Porcentaje de Natalidad Bruta - Numero de
Servicios Por Preñez. - Porcentaje de Natalidad Real 68 - Duración de copula.

2.6.2. CARACTERÍSTICAS PRODUCTIVAS - Porcentaje de mortalidad. - Peso vivo al nacimiento. -


Peso de vellón. - Finura. - Longitud de mecha. 2.7. TÉCNICAS E INSTRUMENTOS DE
RECOLECCION DE DATOS.

2.7.1. TÉCNICAS. La técnica usada fue la observación indirecta, a partir de registros y


determinaciones de valores comparables en la actualidad con verificación de datos

2.7.2. INSTRUMENTOS. - Hoja de cálculo Excel, para tabulaciones. - Programa SPSS 12.0 para
análisis de datos.

2.8. PROCEDIMIENTOS DE RECOLECCION DE DATOS. Para la obtención de datos se


consideraron los siguientes: - Recolección mediante formularios estructurados a partir de
registros previamente elaborados sobre las variables en estudio.

2.5. METODOLOGÍA.

2.5.1. TIPO DE INVESTIGACIÓN. a) Tipo de estudio: Descriptivo y retrospectivo b) Tiempo de


ejecución: 6 meses c) Secuencia del estudio: Longitudinal
2.5.2. DISEÑO DE INVESTIGACIÓN. El diseño fue de tipo descriptivo, comparativo anualmente
durante los años 2 004, 2 005, 2 006, 2 007 y 2 008.

2.6. CARACTERISTICAS O VARIABLES. Las características reproductivas y productivas analizadas


fueron las más importantes que tienen injerencia dentro de la producción animal en alpacas.
2.6.1. CARACTERÍSTICAS REPRODUCTIVAS - Porcentaje de Natalidad Bruta - Numero de
Servicios Por Preñez. - Porcentaje de Natalidad Real 68 - Duración de copula.

2.6.2. CARACTERÍSTICAS PRODUCTIVAS - Porcentaje de mortalidad. - Peso vivo al nacimiento. -


Peso de vellón. - Finura. - Longitud de mecha. 2.7. TÉCNICAS E INSTRUMENTOS DE
RECOLECCION DE DATOS.

2.7.1. TÉCNICAS. La técnica usada fue la observación indirecta, a partir de registros y


determinaciones de valores comparables en la actualidad con verificación de datos

2.7.2. INSTRUMENTOS. - Hoja de cálculo Excel, para tabulaciones. - Programa SPSS 12.0 para
análisis de datos.

2.8. PROCEDIMIENTOS DE RECOLECCION DE DATOS. Para la obtención de datos se


consideraron los siguientes: - Recolección mediante formularios estructurados a partir de
registros previamente elaborados sobre las variables en estudio. 69

5. MATERIALES UTILIZADOS. - Formatos de control, para el movimiento de ganado - Formato


de control de parición - Formato de control de mortalidad - Libretas de apunte - Lapiceros y
Lápices - Termómetro - Equipo de cirugía - Pintura para marcar ganado - Lápiz para marcar
ganado - Aretes de plástico numerados