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150 0. Th. Schmidt, L. Wurtele und A. Harrius Bd.

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Uber natiirliche Gerbstoffe, XXXIII1)

Pedunculagin, eine 2.3 ;4.6-Di-[(-)-hexahydroxy-diphenoyl]-


glucose aus Knoppern
von Otto Th. Schmidt *). Lothar Wiirtele 2 ) und Albrecht Harrkus3)

Am dem Organisch-Chemischen Institut der Universitat Heidelberg


Eingegangen am 28. Mai 1965

Die Gerbstoffe der Knoppern gehoren zu den Ellagen-Gerbstoffen: Die Hydrolyse des Ge-
samt-Gerbextrakts ergibt Ellagsaure, Gallussaure und Glucose. Als dominierender Bestand-
teil des Gerbstoff-Gemischs wird eine amorphe, aber einheitliche Verbindung isoliert (Pedun-
culagin). Die Konstitutionsaufklarung fuhrt zur Formel 1. Im Pedunculagin sind 2 Moll.
(-)-Hexahydroxy-diphensaure ,,beidarmig" mit den Hydroxylgruppen an den C-Atomen 2
und 3 sowie 4 und 6 von Glucose verestert. - Eine vergleichende Untersuchung der Anilin-
phthalat-Reaktion zum Nachweis freier reduzierender Zuckergruppen zeigt, dalj diese Reak-
tion bei Glucosen, die in 2-Stellung galloyliert oder hexahydroxy-diphenoyliert sind, stark
behindert ist.

Hervorgerufen durch den Stich der sogenannten Knoppernwespe (Cynips calicis)


in die jungen Fruchtbecher vor allem der Stieleiche (Quercus pedunculata), aber auch
der Traubeneiche (Quercus sessiliflora), bilden sich pathologische Auswuchse von
2 -3 cm Durchmesser, deren hockeriges, runzliges und knorpeliges Aussehen ihnen
den Namen ,,Knoppern " eingetragen hat. Diese Auswuchse umschlierjen im Laufe
ihres Wachstums die Eichel mehr oder weniger vollstandig und enthalten in ihren
groDen, unregelniarjigen Parenchymzellen reichlich Gerbstoff, etwa 3 ma1 so vie1 wie
z. B. die Eichenrinde.
Liiwed), der als erster Untersuchungen uber die chemische Natur der ,,Gerbsaure der Knop-
pern" veroffentlicht hat, kam zu der Annahme, diese sei identisch mit der ,,Gallapfelgerb-
saure". 44 Jahre spater berichtete Nierensteins), dei Knoppern-Gerbstoff liefere bei der Hydro-
lyse mit 1 n H2S04 in der Hitze 72-85 % Ellagsaure, 6-7 % Glucose, aber keine Gallussaure.
Aus methyliertem Gerbstoff isolierte er ein Spaltprodukt vom Schmp. 1 lo", vermutlich
Hexamethoxy-diphensaiuredimethylesterfj), den er aber nicht als solchen erkannte.

*) Herrn Professor Dr. phil. Dres h. c. Karl Freudenberg verehrungsvoll zum 80. Geburtstag
gewidmet.
1) XXXII. Mitteilung: 0. Th. Schmidt und H. Schmadel, Liebigs Ann. Chem. 649, 157 (1961).
2) L. Wiirtele, Dissertation Univ. Heidelberg 1957.
3) A. Harre'us, Dissertation Univ. Heidelberg 1963.
4) J . Liiwe, Z . analyt. Chem. 14, 46 (1875).
5) M . Nierenstein, J. chem. SOC.[London] 115, 1174 (1919).
6) J . Herzig und J. Polak, Mh. Chem. 29, 263 (1908).
1965 Uber natiirliche Gerbstoffe, XXXIII 151

Um zwischen diesen widersprechenden Angaben zu entscheiden, haben wir zu-


nachst durch Perkolation rnit Aceton und Essigester-Extraktion des Perkolats den
Gesarntgerbstof dargestellt (Einzelheiten s. S. 155) und diesen rnit 1n H2SO4 bei 100"
hydrolysiert. Dabei erhielten wir 43 -44 % Ellagsaure, identifiziert als Hexamethoxy-
diphensaure (Schmp. 240")6), 12.5- 13.5 % Gallussaure, identifiziert als Trimethyl-
gallussauremethylester (Schmp. 80") und 8 -9 % Glucose. Es steht hiermit fest, dalj
der Knoppern-Gerbstoff zu den Ellagen-Gerbstoffen gehort.
Sodann haben wir versucht, den Gesamtgerbstoff in Jndividuen aufzutrennen,
deren Konstitution sich ermitteln liefie. Das Papierchromatogramm des Gesamt-
gerbstoffs ist verhaltnismaljig einfach. Es weist drei getrennte Flecke auf (REin 2-proz.
Essigsaure = 0.75, 0.50 und 0.40), ferner eine Laufspur vom Start bis RF = 0.35.
Die Substanz rnit RF = 0.50 dominiert stark. Ihre Isolierung und Reindarstellung
erreichten wir durch wiederholte Chromatographie an Cellulose-Saulen (Einzelheiten
s. S. 156). Die Kristallisation dieses Gerbstoffs, fur den wir den Namen ,,Pedunculagin"
vorschlagen, ist uns nicht gelungen, indessen ist seine Einheitlichkeit durch Chromato-
gramme in vier verschiedenen Laufmitteln gesichert.
Pedunculagin ist schwach sandfarben und hat die spezif. Drehung von [M]::~=
+106" (Methanol). Der pH-Wert einer waljrigen Losung betragt 4.7-4.9. Die FeC13-
Reaktion ist blau ;die Anilinphthalat-Reaktion auf freie reduzierende Zuckergruppen 7)
ist negativ ; die Reaktion auf gebundene Ellagsaure (Hexahydroxy-diphensaure)8) ist
positiv. Die Totalhydrolyse des Gerbstoffs mit 1n H2SO4 bei 100" fiihrt nach 24 Stun-
den zu 68.8% und nach 48 Stunden zu 71.6% Ellagsauue. Einer Mono-[hexahydroxy-
diphenoyll-glucose wiirden 62.7 %, einer Di-[hexahydroxy-diphenoyll-glucose77 %
Ellagsaure entsprechen. Gallussaure tritt nicht auf.
Mit AcetanhydridIPyridin wird Pedunculagin in sehr guter Ausbeute in ein farb-
loses Trideka-acetat (C60H50035) verwandelt, das zwar amorph ist, aber in dem engen
Bereich zwischen 231 und 236" schmilzt. Die Drehung betragt [a]$8 = -17.8" (Chlo-
roform). Wird dieses Acetat mit Schwefelsaure hydrolysiert, so erhalt man mit 44.1 %
Ellagsaure nahezu die fur eine Tridekaacetyl-di-[hexahydroxy-diphenoyll-glucose be-
berechnete Ausbeute (45.4 %).
Durch mehrfache Einwirkung von Diazomethan auf eine 5 % Wasser enthaltende,
acetonische Losung von Pedunculagin entsteht ein Produkt, dessen Methoxyl-Gehalt
(37.4 %) auf eine Dodekamethyl-Verbindung (39.1 % OCH3) hindeutet, doch liegt ein
Gemisch mehrerer Substanzen vor. Seine Auftrennung an einer Kieselsaure/Celite-
Saule fuhrte zur Isolierung der Hauptkomponente (35.4% des Gemischs) rnit 40.28 %
Methoxyl. Tridekamethyl-pedunculagin (C47H50022) erfordert 41.72 %. Dieser Wert
wird tatsachlich erreicht, wenn man die Hauptkomponente mit Methyljodid und
7) S. M . Partridge, Nature [London] 164, 443 (1949).
8) K . Paech und M . V. Tracey, Moderne Methoden der Pflanzenanalyse, Bd. 3, S. 526,
Springer-Verlag, Heidelberg 1955.
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Silberoxyd nachmethyliert. Das Ergebnis zeigt, daB im Pedunculagin nicht nur die
12 aromatischen Hydroxylgruppen der beiden gebundenen Hexahydroxy-diphen-
sauren, sondern auch teilweise eine Hydroxylgruppe am Zucker methyliert worden
sind. Hierfiir kommt vor allem die ,,glucosidische" Hydroxylgruppe am C-1 in Be-
tracht, die allein eine geniigende Aciditat aufweist, um mit Diazomethan zu reagierens).
Das Tridekamethyl-pedunculaginverbraucht bei der Hydrolyse genau 4 Aquivalente
NaOH, was rnit der Annahme, daB in dem Gerbstoff 2 Moll. Hexahydroxy-diphen-
saure ,,beidarmig", also durch 4 Ester-Bindungen rnit der Glucose verkniipft sind,
in bestem Einklang steht. Bei dieser Hydrolyse mit Natronlauge isolierten wir 88 %
der theoretisch zu erwartenden Menge an ( -) -Hexamethoxy-diphensaure vom Schmp.
und Misch-Schmp. 159-161" sowie der spezif. Drehung von [a]::8= -26.3' (Atha-
nol) 10). Hieraus geht auch hervor, daB die beiden Molekeln gebundener Hexahydroxy-
diphensaure die gleiche Konfiguration haben. Als zweites Spaltstiick isolierten wir
ein siruposes Gemisch von a- und P-Methyl-glucosid, dessen saure Hydrolyse zu 91 %
(polarimetrisch) der auf das Ausgangsmaterial berechneten Menge D-Glucose fuhrte.
Es ergibt sich also, daB Pedunculagin eine Di-[( -)-Hexahydroxy-diphenoyll-glucose
ist, deren 1-Stellung nicht verestert ist.
Um uber die Verteilung der 4 Estergruppen der beiden Hexahydroxy-diphensauren
auf die Zuckerhydroxyle und somit iiber die Konstitution des Pedunculagins AufschluB
zu gewinnen, mul3ten wir versuchen, durch partielle Hydrolyse 1 Mol. Hexahydroxy-
diphensaure abzuspalten und die Konstitution des verbliebenen ,,Zweierstiicks" auf-
zuklaren. Die partielle Hydrolyse gelang zufriedenstellend durch einen kontrollierten
Abbau des Gerbstoffs rnit Tannase. Die Reaktion 1aBt sich papierchromatographisch
gut verfolgen und wird abgebrochen, wenn alles Pedunculagin verschwunden ist. Zu
diesem Zeitpunkt ist ziemlich genau 1 Mol. Ellagsaure abgeschieden worden. Die
Isolierung und Reinigung des Zweierstucks verlangt drei verschiedene Saulentren-
nungen (Einzelheiten S. 159, 160) und fiihrt zu einer hell sandfarbenen Substanz der
Zusammensetzung C20H18014.2H20, die [a]:&= +55.6" (Methanol) aufweist. Die
Anilinphthalat-Reaktion7) ist ganz schwach positiv.
Da wir schon mehrfach, z. B. beim Pedunculagin selbst, der Frage gegenuber-
standen, inwieweit eine positive oder negative Reaktion n?itAnilinphthalat eine Aussage
uber die Konstitution der untersuchten Verbindungen gestattet, haben wir eine ver-
gleichende Untersuchung dieser Reaktion mit unserem Zweierstiick, ferner rnit
1-Galloyl-P-glucose (Glucogallin), 2-Galloyl-~-glucose 111, 2-Galloyl-a-glucose 11) und
6-Galloyl-a-glucose 12) bei verschiedenen Konzentrationen und verschiedenen Trock-
nungstemperaturen durchgefiihrt. Das Ergebnis zeigt Abbildung 1.

9) R . Kuhn und H. H. Baer, Chem. Ber. 86, 724 (1953).


10) 0. Th. Schmidt und K. Demmler, Liebigs Ann. Chem. 576, 85 (1952).
11) 0. Th. Schmidt und H. Reuss, Liebigs Ann. Chem. 649, 137 (1961).
12) 0. Th. Schmidt und A . Schach, Liebigs Ann. Chem. 571, 29 (1951).
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Abbildung 1. Anilinphthalat-Reaktion bei 105 und bei 120" von


I : 1-Galloyl-P-glucose (Glucogallin); 11: 2-Galloyl-P-glucose; IT1 : 2-Galloyl-a-glucose;
IV: Zweierstdck aus Pedunculagin ; V : 6-Galloyl-x-glucose.
Die Schraffierung gibt die Intensitat der Flecke wieder.
Wahrend z. B. 2-Methyl-glucose eindeutig schon bei niederen (normalen) Konzen-
trationen ebenso positiv reagiert wie Glucose oder 6-Galloyl-glucose, versagt die
Reaktion vollig bei 2-Galloyl-~-glucose(vgl. Zit. ll)), obgleich hier die 1 -Stellung der
Glucose rnit Sicherheit unbesetzt ist. Bei der a-Verbindung (111) ist eine hohe Konzen-
tration zur Reaktion erforderlich. Andererseits reagiert aber auch Glucogallin (I) bei
hoheren Konzentrationen positiv, obgleich die 1-Stellung besetzt ist. Allgemein ver-
starkt die Erhohung der Temperatur die Farbintensitat. Im Falle des Zweierstiicks
kann man schlieRen, daI3 die 1-Stellung unbesetzt ist, und aus dem sehr schwachen
Ausfallen der Reaktion vermuten, daR die 2-Stellung verestert ist.
Bei der Methylierung mit Diazomethan in wasserhaltigem Aceton 9) nimmt das
Zweierstuck etwas iiber 34% Methoxylauf (ber. 6OCH3 = 32.87, 70CH3 = 37.42%).
AuI3er den 6 aromatischen Hydroxylgruppen der Hexahydroxy-diphensaure ist wenig-
stens teilweise auch die glucosidische Hydroxylgruppe methyliert (glucosidiert) worden.
Durch Saulenchromatographie laot sich das Hexamethoxy-diphenoyl-methyl-glucosid
aus dem Gemisch herausarbeiten. Es laRt sich aber auch - und zwar vorteilhafter -
durch Glucosidierung des Gemischs mit Orthoameisensauremethylester13) in Me-
thanol unter Zusatz eines Tropfens Acetylchlorid darstellen. Die so erhaltene Hepta-
methyl-Verbindung fuhrt bei der Weitermethylierung mit Methyljodid und Silberoxyd
zu einer schon kristallisierten Verbindung vom Schmp. 216-217', [cc]$~ = -21.2'
(Aceton), die eine EnneamethyZ-[hexahydroxy-diphenoyZ]-gZucose (C29H36014) ist. Als
Nebenprodukt isolierten wir in sehr kleiner Menge eine ebenfalls schon kristallisierte
Verbindung vom Schmp. 255". Sie hat die Formel C29H34O15, enthalt nur 8 Methoxyl-
gruppen und liefert unter den Bedingungen der Acetyl-Bestimmung 1 Mol. Saure.
Moglicherweise handelt es sich um eine durch die Behandlung mit dem Orthoameisen-
ester entstandene Methoxymethylen-Verbindung 14-16).
13) K . Freudenberg und W. Jakob, Ber. dtsch. chem. Ges. 74, 162 (1941).
14) F. Eckstein und F. Cramer, Chem. Ber. 98, 995 (1965).
15) J . iernlicka, Chem. and Ind. 1964, 581.
16) C. B. Reese und J. E. Sulston, Proc. chem. SOC.[London] 1964, 214.
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Die Verbindung vom Schmp. 216 -217" wurde mit Natronlauge hydrolysiert. Dabei
entstand die erwartete Menge an (-)-Hexamethoxy-diphensaure und eine Glucosid-
Fraktion, aus welcher die Hauptkomponente, ein Dimethyl-methyl-glucosid,durch
Saulenchromatographie abgetrennt wurde. Das Glucosid kristallisierte spontan und
erwies sich nach Schmp. und Misch-Schmp. von 77" sowie der spezif. Drehung von
[K]:$, -28" (Chloroform) als identisch mit 4.6-DimethyZ-~-methyI-g[llcosidl7). Im
Gemisch rnit 3.4-Dimethyl-~-methyl-glucosid (Schmp. 80-83") 18) ergab sich eine
starke Schmelzpunktsdepression.
Damit ist die Konstitution des Pedunculugins im Sinne der Formel 1 aufgeklart.
Die Tridekamethyl-Verbindung 2 ergibt bei der alkalischen Hydrolyse 2 Moll.
(-)-Hexamethoxy-diphensaure und ein Gemisch von GC- und p-Methyl-glucosid.
Durch partiellen Abbau mit Tannase wird aus 1 die Hexahydroxy-diphensaure aus
der 4- und 6-Stellung der Glucose abgespalten. Das resultierende Zweierstuck ist die
2.3-[( -)-Hexahydroxy-diphenoyll-glucose (3). Aus 3 entsteht rnit Diazomethan teils
direkt, teils durch Nachbehandlung rnit Orthoameisensauremethylester das 2.3-[( ->-
Hexamethoxy-diphenoyll-methyl-glucosid (3a). Aus diesem wird mit Methyljodid
und Silberoxyd das 4.6-Dimethyl-2.3-[( -)-hexamethoxy-diphenoyl]-methyl-gluco~id
(3b) erhalten. Die P-Form von 3b kristallisiert und liefert bei der alkalischen Hydrolyse
das 4.6-Dimethyl-~-methyl-glucosid (4).
OR O R

1:R=H
2: R = CH3

OR OR
r
CH30CH
I
HCOH
HO& H
I
HCOCH,
H&O-
I
OR C HzOC H3
3: R = R'= H 3a: R = CH,; R ' = H 4
3b: R = R ' = CH,

17) J . C. Dennison und D . I. McGilvruy, J. chem. SOC.[London] 1951, 1616.


18) D . J. Bell und G . D . Greville, J. chem. SOC.[London] 1950, 1902.
1965 Uber natiirliche Gerbstoffe, XXXIlI 155

Betrachtungen am Model1 (Stuart-Briegleb-Kalotten) zeigen, dal3 die Bindung der


beiden Molekule (-)-Hexahydroxy-diphensaure mit den Hydroxylgruppen an den
C-Atomen 2 und 3 sowie 4 und 6 der Glucose sowohl in der C1- wie auch in der
1C-Konstellation trotz der trans-Anordnung in 2- und 3-Stellung spannungsfrei
moglich ist.
Der Deutschen Forschungsgemeinschaft und dem Verband der Chemischen Industrie sind
wir fur die Gewahrung von Mitteln, der Badischen Anilin- & Soda-Fabrik fur die Uberlassung
von Chemikalien zu groRem Dank verpflichtet. L. Wiirtele dankt dem Verband der Chemischen
Industrie und der C. Freudenberg-Stiftung fur die Gewahrung von Studienbeihilfen.

Beschreibung der Versuche


Alle eigenen Schmelzpunkte sind korrigiert (Monoskop Bock).
1) Darstellung des Gesamtgerbstoffs (L. Wiirtele): Die Knoppern19) werden in einem kraf-
tigen, 45" warmen Luftstrom nachgetrocknet. AnschlieRend werden Eicheln, Fruchtbecher
und andere Verunreinigungen entfernt und die harten, sich fettig anfuhlenden Knoppern
auf 1-2 mm KorngroRe gemahlen und zur Sterilisation 1 Stde. bei 100" gehalten.
500 g so vorbereitetes Knoppernmehl werden mit einem Gemisch aus 600 ccm Aceton und
600 ccm Wasser angeteigt, in den Perkolator gefullt und nach 4-6 Stdn. rnit ca. 4 1 Aceton
perkoliert. Nach Eindampfen des Perkolats i. Vak. bleiben im Durchschnitt 250 g Ruckstand,
dessen Gerbstoff-Gehalt nach der Halbmikromethode 20) zu 68 -71 % bestimmt wurde.
Zur Vorreinigung werden 100 g Perkolat-Ruckstand in 700 ccm Wasser eingetragen, durch
langeres Ruhren teils gelost, teils suspendiert und im Schacherl-Apparat bei 40" (Bad)/100
Torr (Druckregler) 90 Stdn. lang rnit Benzol extrahiert, wobei 11- 12 g eines dunkelgrunen,
schmierigen Materials entfernt werden. AnschlieBend wird das Filtrat 19 Tage lang unter den
gleichen Bedingungen rnit Essigester extrahiert, wobei die Vorlagen nach 1-2 Tagen ge-
wechselt werden. Der im Essigester ziemlich schwer losliche Gerbstoff setzt sich als hellbraune
Kruste an den Wanden des Kolbens ab. Nach dieser Zeit werden durch Eindampfen insgesamt
13- 14 g Gesamtgerbstoff als goldgelbes, amorphes Pulver erhalten, das in Wasser, Aceton
und Methanol gut loslich ist. Der pH-Wert einer 1-proz. waBrigen Losung betragt 3.0. Nicht-
gerbstoffe20) wurden zu 2.5 % bestimmt.
2) Hydrolyse des Gesamtgerbstoffs (L. Wiirtele): 5 g Substanz wurden in 50 ccm 5-proz.
Schwefelsaure 72 Stdn. auf dem Dampfbad erhitzt und noch heiB von dem entstandenen
sandfarbenen Niederschlag (2.63 g) abgesaugt. Dieser wurde mit Diazomethan in die Tetra-
methyl-ellagsaure (2.12 g = 40.1 %, bez. auf den Gesamtgerbstoff) iibergefuhrt und zur
Identifizierung rnit DimethylsuZjat und Natronlauge mit 85-proz. Ausbeute in Hexamethoxy-
diphensaure'o) umgewandelt; Schmp. 240" (Mischprobe).
Das Filtrat des Hydrolysen-Niederschlags wurde im Schacherl-Apparat erschopfend rnit
Ather extrahiert. Der Atherextrakt bestand nur zur Halfte aus Gallussaure. Er wurde mit
Diazomethan methyliert und im Kniekolbchen7-1) bei 140- 150" (Bad)/0.3 Torr destilliert.

19) Bezogen von der Firma Otto Arnold Mayer, Hamburg.


20) W. Crassmann, 0.Endisch und W. Kzmtara, Das Leder 2,202 (1951) (C. A. 46,1277 (1952)l.
21) 0. Th. Schmidt, W. Mayer und A . Distelmaier, Liebigs Ann. Chem. 555, 26 (1944).
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Dabei wurden 0.87 g Trimethyl-gallussauremethylester (Schmp. und Misch-Schmp. 80")


erhalten, die 0.651 g Gallussaure (13 % des Gesamtgerbstoffs) entsprechen. - Die mit Ather
extrahierte, wujrige Phase wurde mittels Anionenaustauschers entsauert, 1 Stde. mit AI2O3
geschuttelt, mit Carboraffin entfarbt, auf 10.0 ccm gebracht und polarimetriert. Die abge-
lesene Drehung von +-1.65" entspricht 0.314 g Glucose (6.5 "/o des Gesamtgerbstoffs).
Die S. 151 angegebenen Ausbeuten von 43-44% Ellagsaure, 12.5-13.5 % Gallussaure
und 8-9% Glucose sind Mittelwerte aus mehreren Hydrolysen und nach der ublichen
Verlustberechnung 22) korrigiert.
3) lsolierung des Pedunculagins (L. Wurtele, A . Harrdus): Wie unter 1) beschrieben, werden
500 g Knoppernmehl perkoliert ; der Perkulat-Ruckstand wird durch Extraktion mit Benzol ge-
reinigt. Darauf wird die waRrige Losung, die ein Eigen-pH von 4.0--4.5 hat, mit Natron-
lauge auf 5.5 eingestellt, um bei der anschliefienden Essigester-Extraktion die ,,carboxyl-
sauren" Anteile (z. B. Gallussaure) zuruckzuerhalten. Die Extraktion, wie unter 1) durchge-
fuhrt, liefert durchschnittlich 10-12.5 g ,,pH 5.5-Extrakt". Dieser enthalt bis zu 20% wasser-
unlosliche Bestandteile, im wesentlichen Ellagsaure, aber auch noch etwas Gallussaure.
Zu ihrer Entfernung wird der Extrakt in 100 ccrn Wasser aufgenommen, filtriert und 24 Stdn.
im Schacherl-Apparat mit Ather extrahiert. Die waBrige Losung ergibt nach dem Eindampfen
i. Vak. 4--5 g braunen, amorphen Rohgerbstuff. Papierchromatogramme (Laufmittel :
2-proz. Essigsaure) zeigen diskrete Flecke bei RF = 0.75, 0.50, 0.40 und eine Laufspur vom
Start bis R F =-0.35 (Schwerpunkte bei RF = 0.50 und 0.40).
8 -- 10 g Rohgerbstoff werden in 20 ccm Wasser gelost und mittels einer Saule (I20 x 4.5 cm)
von Cellulosepulver (Macherey & Nagel Nr. 2100, quantitativ) sowie Wasser als FlieRmittel
aufgetrennt. Durch einen Fraktionssammler werden Fraktionen von 20 ccm aufgefangen und
papierchromatographisch untersucht. Alle Fraktionen, welche R F = 0.50 (Komponente A)
und RF = 0.40 sowie 0.50 (Komponenten B und A) aufweisen, werden gesammelt und i.
Vak. eingetrocknet. Sie ergeben 1.4-1.7 g A und 0.5-0.7 g A+B.
Die weitere Auftrennung erfolgt an Cellulosepulver (Whatman standard grade; Saule
50 X 4 cm) mit Isobutanol/Wasser (l0:l): 3.10 g Komponente A (aus 6-7 voranstehenden
Chromatogrammen) oder 10 g A +B (aus 18 -20 Chromatogrammen) werden in 15 ccm
Wasser gelost, auf die Saule gebracht und chromatographiert. Die einzelnen Fraktionen
(je 20 ccm) werden, soweit sie nur A enthalten, i. Vak. eingedampft. Nur diejenigen, die in
2 Laufmitteln (2-proz. Essigsaure und Gemisch 102423)) einheitliche Flecke zeigen, werden
als Pedunculagin zusammengefafit. Eine Sadenpassage mit 10 g A liefert 4-4.5 g, eine solche
mit 10 g A + B 2.8-3.0 g Pedunculagin.
Pedunculagin (1). - Der Gerbstoff ist eine amorphe, schwach sandfarbene Substanz, deren
Einheitlichkeit in 2 weiteren Laufmitteln (Phenol/Eisessig/Wasser = 10:2:17 und Athanol/
Benzol/Wasser = 2:1:2, organische Phase) bestatigt wurde. Er lost sich gut in Wasser, Metha-
nol, Athanol, Aceton, Tetrahydrofuran und Dimethylformamid, weniger gut in Essigester,
n-Propanol, Dioxan und Eisessig und ist unloslich in Benzol, Ather, Chloroform und Petrol-
ather. Aus Aceton/Petrolather kann er umgefallt werden, wobei er zuerst olig abgeschieden
wird, aber beim Durchreiben in hell beigefarbenen Flocken anfallt; [M]:;~ = -1106 i 1"
(Methanol, c = 2). Die getrocknete Substanz ist hygroskopisch. Eine 1-2-proz. Losung in

22) E. Fischer und K. Freudenberg, Ber. dtsch. chem. Ges. 47, 2485 (1914).
23) n-Butanol/Eisessig/Wasser (10 : 2 : 4).
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Wasser hat p H 4.7-4.9. Die Reaktion auf freie reduzierende Zuckergruppen mit Anilin-
phthalat7) ist negativ, die mit FeC13 ist rein blau. DieReaktion auf gebundeneEllagsaure(Hexa-
hydroxy-diphensaure) 8 ) ist positiv. - Alle Versuche, den Gerbstoff zu kristallisieren sowie
ihn durch Carboraffin oder durch Bleisalzfallung vdllig zu entfarben, scheiterten.
4) Totalhydrolyse des Pedunculagins (L. Wiirtele, A . Harre'us): 360.9 (306.1) mg 1 (bei 20"/
12 Torr iiber P4010 bis zur Gewichtskonstanz getrocknet) wurden in 5 ccm 5-prOZ. Schwefel-
siiicre 24 (48) Stdn. bei 100" gehalten. Nach dem Erkalten wurde die auskristallisierte Ellag-
saure abgesaugt und bei 120" getrocknet. Die Ausbeute von 248.7 (218.5) mg entspricht
68.8 (71.6) % der Einwaage (ber. 77 % fur Di-[hexahydroxy-diphenoyll-glucoseund 62.7 %
fur Mono-[hexahydroxy-diphenoyll-glucose).Die kherextraktion des schwefelsauren Fil-
trats ergab keine Gallussaure.
5 ) Tridekaacetyl-pedunculagin (L. Wurtele, A . Harre'us). - 1.346 g 1 (bei 45"/0.5 Torr iiber
P4O10 getrocknet) werden mit 28 ccm Acetanhydrid + 28 ccm Pyridin ubergossen. Die Sub-
stanz geht mit tiefgelber Farbe in Losung. Nach 48 Stdn. wird in 210 ccm 1 n H2SO4 von 0"
eingetropft. Bei kraftigem Riihren wird der entstandene, kompakte Niederschlag flockig,
kann abgesaugt und mit Wasser gewaschen werden. Das im Exsikkator getrocknete Roh-
produkt (2.07 g, 89 %) wird 2mal in Methanol heiB gelost und durch Abkiihlen wieder zur
Abscheidung gebracht. Das dann rein weiRe, amorphe Produkt schmilzt in dem engen
Interval1 von 231 -236" und weist [MI:$ = -17.8 & 1" (Chloroform, c = 1) auf. Manchmal
erhalt man die Verbindung als Gallerte, jedoch gelang ihre Kristallisation nicht. Zur Analyse
wurde bei 70"/0.5 Torr uber P4010 getrocknet.
C60H50035 (1 330.7) Ber. C 54.20 H 3.76 13 COCH3 42.05
Gef. 53.61 3.92 40.40
Hydrolyse: Die Losung von 131 mg Acetylverbindung in 10 ccm Aceton wird zu 20 ccm im
N2-Strom siedender 1 n H2S04 getropft. Nach 7 Stdn. wird das Aceton durch Wegnahme der
Kiihlung verdampft und die waRr. Losung noch 24 Stdn. bei 100" gehalten. Nach dem Er-
kalten wird der krist. Niederschlag abgesaugt und bei 120" getrocknet. 57.8 mg (44.1 % der
Einwaage, ber. 45.4 %) Ellagsaure.
6) Tridekumethyl-pedunculagin( 2 ; A . Hurre'us). - 3.0 g 1 werden in 30 ccm Aceton/Wasser
(20: 1) gelost und portionsweise mit einem UberschuR ather. Diazomethan-Losung versetzt.
Nach 75 Min. wird i. Vak. eingedampft. Diese Methylierung wird wiederholt, bis die FeC13-
Reaktion negativ ausfallt und der Methoxyl-Wert nicht mehr ansteigt. Das amorphe, gelbe
Reaktionsprodukt wird in trockenem Essigester aufgenommen, filtriert und unter Riihren
tropfenweise mit Petrolather (40") versetzt. Die schwach gelben Flocken werden abgesaugt,
mit Petrolather gewaschen und bei 70"/0.1 Torr getrocknet. Die Reinigung kann auch mit
Aceton/Petrolather oder durch Behandeln einer methanol. Losung mit Carboraffin durchge-
fiihrt werden. - Der Methoxyl-Gehalt von 37.4% kommt dem fur eine Tridekamethyl-
Verbindung berechneten (39.09 x) nahe. Sowohl das Papierchromatogramm (Laufmittel:
tert.-Butanol/Eisessig/Wasser = 15 :1 :7.5) wie auch das Diinnschichtchromatogramm
(Laufmittel: Benzol/Methanol = 9 :1) zeigen 3 getrennte Substanzflecke.
Zur Auftrennung werden 2.31 g Methylierungsprodukt in 5 ccm Benzol/Methanol (9:l)
gelost und an einer Saule (100 K 3 cm) mit einem eingeschlammten Gemisch aus 5 Gewichts-
teilen Kieselgel (pulv., p. A.) und 1 Gewichtsteil Celite 535 (beides von C. Roth, Karlsruhe)
chromatographiert. Mittels eines Fraktionssammlers werden Fraktionen zu 7 ccm abgenom-
158 0. Th. Schmidt, L. Wiirtele und A. Harre'us Bd. 690

men und dunnschichtchromatographisch untersucht. Die Fraktionen, welche einheitlich die


am schnellsten wandernde Substanz (2) enthalten, werden gemeinsam i. Vak. eingedampft.
Die amorphe, gelbstichige Substanz (842 mg) erweist sich aucb mit den Gemischen Benzol/
Chloroform/Methanol (1O:lO:1) und Essigester/Chloroform (1 :1) als dunnschichtchromato-
graphisch einheitlich. Sie ist in den ublichen organischen Solvenzien leicht, aber in Ather,
Petrolather und Wasser nicht Ioslich. Zum Umfallen eignen sich Benzol oder Aceton mit
Petrolather. Mit Anilinphthalat zeigt 2 keine Reaktion und im IR-Spektrum keine Schwin-
gung im OH-Bereich. [a]::, = -24.5 f 1" (Aceton, c = 2).
C47H50032 (966.9) Ber. C 58.48 H 5.21 13 OCH3 41.72
Gef. 58.29 5.16 40.28
Eine mit einer kleinen Menge durchgefuhrte Nachmethylierung mit Methyljodid und Silber-
oxyd fuhrte zu dem richtigen Methoxyl-Wert von 41.49 %, doch wurde fur die weiteren Ver-
suche auf diese Nachmethylierung verzichtet.
7) Alkalische Hydrolyse des Tridekamethyl-pedunculagins ( A . Harre'us) : 100.5 mg (0.104
mMol) 2 wurden in 3 ccm Methanol gelost und rnit 3.00 ccm I n MaOH versetzt. Der zu-
nachst entstehende Niederschlag loste sich im Verlauf einiger Stunden auf. Nach 50 Stdn.
wurde die unverbrauchte Lauge rnit 0.1 n HC1 (Phenolphthalein) zuriicktitriert. Der Ver-
brauch von 25.90 ccm 0.1 n Saure besagt, daR 0.410 ccm 1 n NaOH fur die Losung von
4 Esterbindungen (ber. 0.416) benotigt worden sind. - Nach AbschluR der Titration wurde
noch 0.1 n HCl (10 ccm) zugegeben und die Losung durch wiederholtes Einengen i. Vak.
unter neuem Wasser-Zusatz vom Methanol befreit. Nun wurde die waRr. salzsaure Losung
mehrmals mit Chloroform ausgeschuttelt. Die organische und die waRr. Phase wurden ge-
trennt weiter verarbeitet :
a) (-)-Hexumethoxy-diphensaure: Die mit Na2S04 getrocknete organische Phuse gab
beim Eindampfen i. Vak. einen Ruckstand, der iiber P4010 getrocknet wurde: 87.2 (ber.
87.8) mg. Er wurde zu 10.00 ccm in Athanol gelost und im 2-dm-Rohr polarimetriert. Aus
der abgelesenen Drehung von c( = -0.40" und der bekannten spezif. Drehung der (-)-
Hexamethoxy-diphensaure von [ x ] $ = -25.9"lO) ergibt sich eine Ausbeute von 77.1 mg
(88 %) an optisch aktiver Saure. - Beim Einengen der polarimetrierten Losung kristalli-
sierte die Saure aus. Sie wurde abgesaugt und aus Ather/Petrolather umkristallisiert. Schmp.
und Misch-Schmp. 159-161", Erstarren oberhalb 195", zweiter Schmp. 240" (Racemat);
[XI$, = -26.3" (Athanol, c = 1). - Ber. OCH3 44.07, Gef. 44.30.
b) Methyl-glucosid: Die wu&. Phase wurde neutralisiert, i. Vak. eingedampft und der
Ruckstand mehrmals niit Essigester ausgekocht. Nach Eindampfen der Essigesterausziige
blieb eine braunliche, sirupose Substanz zuruck, die auf dem Papier kcine Reaktion rnit
Anilinphthalat zeigte; Gef. OCH3 13.85% (Ber. 15.99% fur Methyl-glucosid). - Zur
Hydrolyse wurde die aus einem genau gleichen Ansatz auf diese Weise erhaltene sirupose Sub-
stanz in.2 ccm 1 n HzSO4 4 Stdn. auf dem Dampfbad unter RiickfluR erhitzt. Nach dem Erkalten
wurde die Losung durch eine kleine Austauschersaule (Amberlite I R 45) von H2S04 befreit
und i. Vak. eingedampft. Der Ruckstand wurde zu 2.00 ccm in Wasser gelost und die Losung
i n 1-dm-Rohr polarimetriert. Die abgelesene Drehung von a = +0.452" entspricht 17
(ber. 18.72) mg Glucose.
Der Versuch wurde rnit dem oben erwahnten nachmethylierten Tridekamethyl-pedunculagin
(OCH3 = 41.49 %) wiederholt. Die Ergebnisse waren die gleichen.
1965 Uber natiirliche Gerbstoffe, XXXIII 159

8) Partielle Hydrolyse des Pedunculagins mit Tannase: Isolierung eines ,,Zweierstiicks" aus
Glucose und Hexahydroxy-diphensaure ( A . Harrius) : Die Tannase wurde nach den Angaben
von Freudenberg und Mitarbeitern24) unter Beriicksichtigung der Abanderungen von Dycker-
hoff25) und von Tatarskaja26) hergestellt.
5.432 g (6.9 mMol) 1 werden in 100 ccm Wasser gelost und mit der klaren Losung von
764.5 mg Tannase (Spaltwert 34)24) in 50 ccm Wasser versetzt. Aus der Losung, die ver-
schlossen im Brutschrank bei 40" aufbewahrt wird, werden alle 2 Stdn. Proben zur papier-
chromatographischen Untersuchung (Laufmittel: 2-proz. Essigsaure; Markierung mit me-
thanol. FeC13-Losung) entnommen. Das Ausgangsmaterial ( R F= 0.50) ist in der Regel nach
12-14 Stdn. verschwunden. Zugleich hat das Hauptabbauprodukt ( R F= 0.70) ein Maximum
erreicht; es sind aber noch schwachere Flecke bei R F = 0.15 (gelb), 0.35 und 0.80 zu sehen.
Die Losung ist braunlich geworden und hat Ellagsiiure abgeschieden. Diese wird nach Erkalten
der Losung abgesaugt, mit Wasser gewaschen und bei 120" getrocknet; Ausbeute 2.02g
(entspr. 97 % von 1 Mol). Die Ellagsaure wird durch die positive Reaktion nach Griessmuyer-
Reichel27.28) und durch Vergleichschromatogramme rnit dem Gemisch Benzylalkohol/
tert.-Butanol/Isopropylalkohol/Wasser(3 :I :1:1) unter Zusatz von 1.8 % (g/Vol.) absol.
Ameisensaure29) identifiziert. Das Filtrat ist triib und griingelb. Es gibt beim Eindampfen
i . Vak. 2.985 g Spaltprodukte (55.5 % des eingesetzten Materials).
1. Auftrennung: 2.985 g Substanz werden in 30-40 ccm Wasser aufgenommen, filtriert und
i. Vak. auf 10 bis 15 ccm eingeengt. Das Konzentrat wird an einer Saule (90 x 3 cm) von
Cellulosepulver (Macherey & Nagel Nr. 2100) rnit 2-proz. Essigsaure chromatographiert.
Die rnit dem Fraktionssammler abgenommenen Fraktionen (je 7 ccm) werden papierchro-
matographisch (2-proz. Essigsaure) untersucht. Alle Fraktionen, welche das ,,Zweierstiick"
+
( R F= 0.70) rein oder im Gemisch rnit der Vorlaufkomponente (RF = 0.70 0.80) enthalten,
werden gesammelt und gemeinsam i. Vak. eingedampft: 2.587 g amorphe, schwach gelbe
Substanz. Bei dieser Reinigung werden ein groRer Teil der Tannase, die Substanz mit R F =
0.35 und die gelbe Komponente abgetrennt.
2. Auftrennung: Das vorgereinigte Material (2.587 g) wird mittels einer Saule (30 x 3 cni) von
Cellulosepulver (Whatman, standard grade) rnit Isobutylakohol/Wasser (10: 1.3) chromato-
graphiert. Die Untersuchung der abgenommenen 20-ccm-Fraktionen wird wie bei der 1.
Auftrennung durchgefiihrt. Bei dieser 2. Auftrennung gelingt die Abtrennung der Vor-
laufkomponente ( R F= 0.80) vollstandig. Weitere Verunreinigungen bleiben im oberen Teil
der Saule zuriick. Die Fraktionen, die nur das ,,Zweierstiick" enthalten ( R F= 0.70), werden
gemeinsam i. Vak. eingedampft (1.6 g Riickstand).
Im Verlauf der beiden Saulentrennungen, die langere Zeit erfordern, wird das ,,Zweier-
stuck" z. T. weiter hydrolysiert. Es entstehen Ellagsaure, die durch Filtration entfernt wird,
und Glucose, deren Abtrennung eine 3. Siulentrennung erforderlich macht.

24) K. Freudenberg, F. Bliimmel und Th. Frank, Hoppe-Seyler's Z. physiol. Chem. 164, 262
(1 927).
2 5 ) H. Dyckerhoff und R. Armbruster, Hoppe-Seyler's Z. physiol. Chem. 219, 38 (1933).
2 6 ) R. I. Tatarskaja, C . 1938 I, 4481.
27) V. Griessmayer, Liebigs Ann. Chem. 160, 40 (1871), und zwar S. 51.
28) L . Reichel und A. Schwab, Liebigs Ann. Chem. 550, 152 (1942).
29) D . E. Hathwuy, Biochem. J. 67, 445 (1957).
160 0. Th. Schmidt, L . Wiirtele und A . Harre'us Bd. 690

3. Saulentrennung: Die Substanz aus der 2. Saulentrennung wird in 10 ccm Wasser aufgenom-
men und an einer S&ule (85 x 3 cm) von Cellulosepulver (Whatman) rnit Wasser als Lauf-
mittel in Fraktionen zu 7 ccm aufgetrennt. Bei der papierchromatographischen Untersuchung
der einzelnen Fraktionen wird zum Nachweis der Glucose zuerst rnit Anilinphthalat 71,
dann mit FeC13 markiert. Die erste Fraktionsgruppe (1 .I 19 g) ist noch immer rnit etwas Glu-
cose (RP= 0.85 - 0.90) verunreinigt. Die anschlieeende zweite Fraktionsgruppe (0.209 g) ist
Glucose-frei. Die beim Eindampfen dieser Gruppe i. Vak. zuriickhleibende Substanz wird
in absol. Methanol gelost und unter Turbinieren durch langsamen Zusatz von Petrolather
(40") gefallt. Das so erhaltene Zweierstiick ist nicht ganz aschefrei und wird, in Methanol
gelost, auf einer kleinen Austauscher-SPule (Dowex 50) von Kationen befreit. Nach dem Ein-
dampfen wird iiber P4O10 und Paraffin getrocknet.
2.3-[( -)-Hexahydroxy-diphenoyli-glucose (3, Zweierstiick). - Es ist amorph, schwach
sandfarben und hygroskopisch; [E]$~ = +55.6 & 1" (Methanol, c = I). 3 lost sich leicht in
Wasser und den niederen Alkoholen, etwas schwerer in Aceton; in Ather und Petrolather
ist es unloslich. Die Reaktion auf gebundene Ellagsaure (Hexahydroxy-diphensaure) 8) ist
positiv; die Reaktion mit Anilinphthalat 7) ist schwach positiv.
CzoH18014.2 HzO (518.4) Ber. C46.33 H 4.28 Gef. C 46.47 H 4.33
Die Verbindung konnte nicht kristallisiert erhalten werden. Sie ist verhaltnismaeig leicht
hydrolysierbar. Eine methanol. Losung scheidet schon bei Raumtemperatur in einigen Tagen
Ellagsaure aus und enthalt dann freie Glucose.
9) Methylierung der 2.3-[( -)-Hexnhydroxy-diphenoyll-glucose ( A . Harrins) : 2.3-[( --)-
Hexamethoxy-diphenoyll-methyl-glucosid(3a). - a) Mit Diazomethan: 0.5 g 3 (nicht ganz
Glucose-frei) werden in 10 ccm Aceton/Wasser (1O:l) gelost und rnit einer ather. Diazo-
methnn-Losung (aus 10 g Diactin) sowie einigen Tonstiickchen versetzt. Nach 75 Min. wird
von einer braunen, harzigen Abscheidung abgegossen, i. Vak. eingedampft und der gelbe
Riickstand noch einmal in der gleichen Weise methyliert. Nach 45 Min. wird wiederum
eingedampft. Das im Exsikkator getrocknete Produkt wird aus Aceton unter Riihren mit
Petrolather (40") gefallt : 230 mg Gemisch von Methyl-Derivaten (34.13 % OCH3). Weitere Ein-
wirkung von Diazomethan erhohte den Methoxyl-Wert nicht. - Zur Auftrennung wird das
Gemisch in einigen ccm Benzol/Methanol (9:l) gelost und iiber eine Saule (45 x 3 cm) von
KieselgellCelite (5 :1; vgl. unter 6 ) geschickt. Die ahgenommenen Fraktionen (je 4 ccm)
werden in Diinnschichtchromatogrammen mit dem gleichen Laufmittel untersucht. Nur die
Fraktionen rnit iibereinstimmenden RF-Werten werden zusammengefaet und i. Vak. ein-
gedampft. Der Riickstand der so erhaltenen ersten Fraktionsgruppe (17 des eingesetzten
Materials) besteht aus 3a; [a]$ = -16.3 & 1" (Aceton, c = 2). Er ist amorph, schwach
gelbstichig und gibt keine Reaktion mit Anilinphthalat.
C27H32014 (580.5) Ber. 7 OCH3 37.42 Cef. OCH3 36.71
Der Ruckstand der zweiten Fraktionsgruppe (26.7 % des eingesetzten Materials) besteht
aus 2.3-[( --)-Hexamethoxy-diphenoyll-glucose,giht aber ebenfalls keine Reaktion rnit
Anilinphthalat. [a]$,= -11.2 & 1" (Aceton, c = 1).
C26H30014 (566.5) Ber. 6 OCH3 32.8 Gef. OCH3 33.42
b) Mit Diazomethan und Glucosidierung: 4.62 g nach a) aus 3 rnit Diazomethan erhaltenes
Gemisch der Methyl-Derivate werden nach der Methode von Freudenberg und Jakob13) in
1965 u b e r natiirliche Gerbstoffe, XXXIII 161

10 g Orthoameisensauremethylester + 6 ccm absol. Methanol gelost. Nach Zugabe eines


Tropfens Acetylchlorid wird 20 Stdn. bei Raumtemperatur aufbewahrt. Die rotbraune
Losung wird i. Vak. eingedampft und der Ruckstand noch einmal in der gleichen Weise
behandelt. Das rotlichgelbe Reaktionsprodukt (4.87 g) ist chromatographisch einheitlich und
stimmt nach RF-Wert und Methoxyl-Gehalt rnit dem unter a) beschriebenen 3 a iiberein.
4.6-Dimethyl-2.3-[( -) -hexamethoxy-diphenoyll-i3-methyl-glucosid (3b, @-Form).- Zur Per-
methylierung werden 2.5 g 3 a in 33 g Methyljodidgelost, mit 5 g Silberoxydversetzt und 6 Stdn.
unter RiickfluR gekocht. Darauf wird das Methyljodid abdestilliert und der Ruckstand rnit
warmem Aceton extrahiert. Die acetonische, durch Talkum filtrierte Losung ergibt beim Ein-
dampfen einen tief goldgelben Riickstand (2.53 g). Er wird zur Reinigung und Auftrennung
in 15ccm Benzol/Aceton/Chloroform (8 :1 :1) gelost und an einer Saule (95 x 3.5 cm) von Kiesel-
gel (vgl. unter 6) chromatographiert. Die abgenommenen Fraktionen (je 7 ccm) werden dunn-
schichtchromatographisch (mit dem gleichen Laufmittel) untersucht und in Fraktionsgruppen
zusammengefaBt. Die weitaus starkste Gruppe (Fraktionen 63-95) ergibt beim Eindampfen
440 mg Substanz, die nach Aufnehmen in wenig Aceton zu kristallisieren beginnt. Nach Ein-
dunstenlassen des Acetons wird das rohe Kristallisat mehrmals rnit trockenem Ather digeriert,
abgesaugt und rnit Ather gewaschen, wobei 3 b (@-Form)rein weiR anfallt. Es wird aus Aceton/
Petrolather umkristallisiert. Farblose, dreieckige Blattchen vom Schmp. 216-217", [a]:&=
-21.25" (Aceton, c = 2). Die Verbindung lost sich gut in Aceton, Chloroform, Benzol und
Methylenchlorid, etwas weniger gut in Dioxan und Essigester, schwerer in den niederen
Alkoholen, sehr schwer in Ather und gar nicht in Petrolather.
C29H36014 (608.5) Ber. C 57.23 H 5.96 9 OCH3 45.89 Gef. C 57.14 H 6.19 OCH3 45.81
Aus den Fraktionen 28 -38 wurde ein ebenfalls schon kristallisiertes Nebenprodukt in
sehr kleiner Mcnge (20 mg) isoliert. Es besteht aus farblosen Nadeln vom Schmp. 255" und
hat ahnliche Loslichkeitseigenschaften wie das Hauptprodukt. [a]$g= -~42.8 1" (Aceton,
c = I).
C29H34015 (622.6) Ber. C 55.95 H 5.50 Acyl30) 1.00 8 OCH3 39.88
Gef. 56.15 5.73 1.02 37.40
10) Alkalische Hydrolyse des 4.6-Dimethyl-2.3-[(-)-hexamethoxy-diphenoyl.i-~-methyl-
(4). - 406 mg 3 b @-Form) werden
glucosids ( A . Harrdus) 31): 4.6-Dimetlzyl-~-methyl-glucosid
mit je 20 ccm Methanol und 1 n NaOH versetzt. Im Laufe einiger Stunden ist die Substanz klar
gelost. Nach 52 Stdn. werden 22 ccm 1 n HC1 zugefiigt. Zur Vertreibung des Methanols wird
mehrmals unter Zusatz von Wasser i. Vak. auf ein kleines Volumen eingeengt, wobei ein
Teil der Hexamethoxy-diphensaure ausfallt, und schlieRlich mit Wasser auf 40 ccm gebracht.
Darauf wird mehrmals rnit j e 200 ccm Benzol ausgeschiittelt. Die benzol. Losungen werden
vereint, i. Vak. eingedampft und ergeben 231 mg (84%) (-)-Hexamethoxy-diphensuure.
Schmp. und Misch-Schmp. 159- 161" (aus Ather/Petrolather), [cc]$, = -25.9" (Athanol,
c = 2).
Die (farblose) wzfir. Phase wird rnit 2 n NaOH auf p H 8-9 gebracht und i. Vak. einge-
dampft. Der gut getrocknete Ruckstand wird mehrmals rnit Essigester ausgekocht. Die heil3

30) Die Saure, moglicherweise Ameisensaure, wurde nach der Umesterungsmethode rnit
p-Toluolsulfonsaure in k h a n o l bestimmt.
31) Fraulein S. Kruger danken wie fur ihre vorziigliche Mitarbeit.
Liebigs Ann. Chem. Bd. 690 11
162 0. Th. Schmidt, L. Wiirtele und A . Harr6us Bd. 690

filtrierten Auszuge werden gemeinsam i. Vak. eingedampft. Der teilweise olige Ruckstand
(134.7 mg) zeigt im Dunnschichtchromatogramm (Laufmittel: Benzol/Methanol = 9 :1) als
Hauptbestandteil eine Substanz des gleichen RF-Wertes wie das zum Vergleich mit auf-
getragene 2.4-DimethyZ-~-methyI-gZucosid.Zur Isolierung werden die 1 34.7 mg in 4 ccm
Laufmittel gelost und an einer Saule (30 x 2 cm) von Kieselgel (vgl. unter 6) chromatographiert.
Die abgenommenen Fraktionen (ie 5 ccm) werden dunnschichtchromatographisch unter-
sucht. Soweit sie 4 enthalten, werden sie gemeinsam i. Vak. eingedampft und geben 70 mg
eines weinen, amorphen Produkts. Eine kleine Probe schied aus ather. Losung beim
Eindunstenlassen farblose Kristalle ab. Mit diesen wird die Auflosung der Hauptmenge
4 in wenig absol. Ather geimpft und liefert nach einigen Stunden bei 0" ein farbloses Kristal-
lisat vom Schmp. 71". Zur weiteren Reinigung wird bei 90-100" (Bad)/l2 Torr destilliert
(Kuhlfinger). Das erhaltene 0 1 kristallisiert beim Ablosen vom Kuhlfinger mit Ather in
farblosen, feinen Prismen und wird aus Diisopropylather umkristallisiert. Schmp. 77" (un-
korr.); Mischprobe mit authent. 4 (Schmp. 77-78") 17) keine, mit 3.4-Dimethyl-P-methyl-
glucosid (Schmp. 80-83") 18) starke Schmelzpunktsdepression. [a]& = -28.0 & 1" (Chloro-
form, c = 0.6)17), = -15.6& I" (Aceton, c = 0.7).
C9H18O6 (222.6) Ber. 3 OCH3 41.89 Gef. OCH3 41.02
W651