BIOTECNOLOGÍA

PROGRAMA: INGENIERÍA AGROINDUSTRIAL

FACULTAD DE INGENIERÍA
2019-B
DOCENTE: MARCELA REY ARÉVALO

Guía de laboratorio 4

Práctica de laboratorio No. 4: Curvas de crecimiento microbiológico.

1.Introducción

Los microorganismos presentan diferentes fases en su crecimiento como colonias, estas

fases son importantes para identificar cual es el mejor momento para su uso, así garantizar
que la utilidad de los microorganismos sea la ideal. Por tal razón, es necesario tener
presente que industrialmente algunas bacterias pueden ser usadas solo en la fase
exponencial o solo en la fase estacionaria, por tanto, estandarizar la producción de la
especie de interés cobra mayor importancia.

El objetivo de esta práctica es determinar el recuento microbiano de una muestra

comercial, así mediante una curva de crecimiento, identificar en que fase de crecimiento
se encuentra la bacteria de interés.

2. Pre conceptos
 Fisiología de bacterias y hongos
 Coloración de Gram
 Siembra por superficie.
 Recuento en placa.
 Diluciones seriadas

3. Objetivos
Determinar el crecimiento microbiológico a partir de una curva de crecimiento.

4. Materiales

 (6) Microscopios y aceite de inmersión.

 (6) Mecheros.
 Asa curva.
 Colorantes de Gram.
 Azul de lactofenol.
 (12) Tubos de 16x150 ml estéril.
 (40) Tubos de 16x150 ml con 9 ml de solución salina (s/s)
0.85% estéril.
 (40) Cajas de petri con TSA.
 (12) Pipetas de 5ml estéril.
 Pipetiador.
 Laminas.
 Alcohol al 70% (atomizador).
 Hipoclorito al 0,25% (atomizador).
 Peróxido de hidrógeno.
 Agua destilada para Gram.
 KOH 30%.
  Palillos.
 Yogurt comercial de elección.

5. Metodología
Según muestra seleccionada de yogurt realice diluciones seriadas y siembra en placa de
la muestra de yogurt de la siguiente manera:

1. Tubo Mx: transfiera aproximadamente 5 ml de la muestra de yogurt a un tubo de

16x150 cm estéril.
2. Realizar tres diluciones seriadas (1/10), Transfiriendo 1 ml del tubo Mx (contiene la
muestra de yogurt) a un tubo rotulado como número (1) que contiene 9 mL de (s/s)
al 0.85% estéril.
3. A partir del tubo No. (1) transferir 1 ml de manera seriada al tubo No. (2) y (3) de la
siguiente manera.

4. Siembre en la placa de agar (TSA) por superficie 0.1mL de cada dilución (de la más
diluida a la más concentrada) e incube a 37o C.
5. Realice los recuentos de las placas de las siembras realizadas a las 24h ó 48h en
caso de no observar crecimiento.
6. Según el recuento realizado, identifique en la curva de crecimiento en que etapa
(adaptación, exponencial, estacionario o muerte), se encuentra el inoculo
analizado.
7. Extrapole la información en una curva que debe construir, use los datos
proporcionados en la curva construida para el taller 1 de curvas de crecimiento.

Tabla 1. resultados de recuentos

Recuento en placa Número de células

(UFC/ml)
Dilución No. (1)
Dilución No. (2)
Dilución No. (3)
Características Macro y
microscópicas.
6.Resultados esperados
Conteo y recuento de UFC/mL
Desarrollar la curva de crecimiento
Identificar la etapa de crecimiento del microorganismo analizado
7.Bibliografia
 Madigan et al. Biology of Microorganisms. Unidad 1. The Funtamentation
of microbiology. Ed Pearson.