Mecanismos oncogénicos de la proteína CagA de Helicobacter pylori

El carcinoma gástrico es la segunda neoplasia más común en el mundo, representa 560,000

casos nuevos y representa 405,000 muertes cada año (CUADRO 1). Helicobacter pylori, una
bacteria microaerófila en forma de espiral, coloniza el estómago humano y se estima que
habita al menos la mitad de la población humana del mundo.

H. pylori infecta principalmente a personas durante la infancia y puede causar

enfermedades gástricas como gastritis atrófica crónica y úlceras pépticas más adelante en
la vida.

Estudios epidemiológicos recientes han indicado que H. pylori está involucrado en el

desarrollo de adenocarcinoma gástrico. Un estudio prospectivo a gran escala reveló que el
riesgo de desarrollar carcinoma gástrico era mucho mayor en la población infectada por H.
pylori que en la población no infectada por H. pylori1. La erradicación de H. pylori disminuyó
significativamente la tasa de desarrollo de carcinoma gástrico en pacientes infectados con
H. pylori sin lesiones precancerosas, lo que proporciona evidencia adicional del papel causal
de H. pylori en la carcinogénesis gástrica2.

Sin embargo, los mecanismos moleculares por los cuales H. pylori desencadena el proceso
que conduce al carcinoma gástrico sigue siendo en gran parte desconocido.

CagA, un factor de virulencia de H. pylori

CagA es una proteína de 120–145 kDa con una región variable carboxiterminal3–6. Primero
se describió como un factor de virulencia de H. pylori que se asocia con úlceras pépticas3,4.
El gen cagA se localiza en un extremo de la ISLA DE PATOGENICIDAD CAG (PAI) 7. El
segmento de ADN cag PAI contiene 31 genes putativos, incluido el cagA y, según lo revelado
en comparación con genes similares en otras bacterias, aquellos que codifican
componentes de un SISTEMA DE SECRECIÓN bacteriana TIPO IV: una jeringa molecular a
través de la cual se administran proteínas bacterianas en las células eucariotas.

Usando cagA como marcador para el cag PAI, la especie H. pylori se divide en cepas cagA-
positivas y cagA-negativas. Las cepas de H. pylori positivas para cagA están asociadas con
grados más altos de inflamación gástrica y son más virulentas que las cepas negativas para
cagA8.

Los estudios epidemiológicos han demostrado el papel de cagApositive H. pylori en el

desarrollo de gastritis atrófica, enfermedad de úlcera péptica y carcinoma gástrico.

Entrada de CagA en células epiteliales gástricas

La unión de H. pylori positivo para cagA, pero no negativo para cagA, a células epiteliales
gástricas humanas cultivadas induce la propagación y el alargamiento celular, denominado
"fenotipo de colibrí", que se acompaña de reordenamientos del citoesqueleto. El cambio
morfológico también se asocia con una mayor movilidad celular conocida como dispersión
celular y está precedida por la fosforilación de CagA.

La translocación de CagA en células huésped depende de presencia de genes de virulencia

de la secreción tipo IV sistema, que se encuentran en el cag PAI de H. pylori.

Resumen
• El carcinoma gástrico es la segunda causa más común de muerte relacionada con el
cáncer.

en todo el mundo. Infección crónica por Helicobacter pylori que porta la citotoxinasociación

El gen del antígeno A (cagA) está asociado con el carcinoma gástrico.

• El producto del gen cagA, CagA, es entregado a las células epiteliales gástricas por la
bacteria

sistema de secreción tipo IV y sufre fosforilación de tirosina por la familia SRC

quinasas. La fosforilación de tirosina ocurre en los motivos EPIYA en CagA.

• CagA fosforilada se une y activa específicamente SHP2, la primera fosfatasa

encontrado para actuar como una oncoproteína humana.

• A medida que SHP2 transmite señales positivas para el crecimiento celular y la motilidad,
la desregulación de SHP2

por CagA es un mecanismo importante por el cual H. pylori positivo para cagA promueve la
actividad gástrica

carcinogénesis

• CagA se destaca por su variación en el sitio de unión de SHP2 y, según la secuencia

variación, se subclasifica en dos tipos principales: CagA de Asia oriental y CagA occidental.

El CagA de Asia oriental muestra una unión SHP2 más fuerte y una mayor actividad biológica
que

CagA occidental.

• En países de Asia oriental, circulación endémica de cepas de H. pylori que transportan

biológicamente

Las formas activas de CagA podrían ser la base de la alta incidencia de carcinoma gástrico.

Fosforilación de CagA

Una vez inyectado en las células epiteliales gástricas por el sistema de secreción tipo IV,
CagA se localiza en el plasma membrana y sufre fosforilación de tirosina por múltiples
miembros de la familia de quinasas SRC, que incluyen SRC, FYN, LYN y YES16,17. A pesar de
que la fosforilación no es necesaria para la localización de membranas de CagA, no se sabe
si esta membrana

Se requiere anclaje para la fosforilación de CagA. La interacción entre CagA y el oncogén de

la familia SRC productos indica que la proteína bacteriana podría interrumpir las vías clave
de transducción de señales, contribuyendo a la transformación celular.

La fosforilación de tirosina de CagA ocurre en el Motivo EPIYA: una secuencia de 5

aminoácidos (Glu-Pro-Ile-Tyr-Alu) que está presente en la variable carboxiterminal región de
la proteína18,19. El motivo EPIYA es parte de cuatro sitios distintos de EPIYA: EPIYA-A, -B -C
y -D (figura 2), cada uno de los cuales está definido por la secuencia de aminoácidos que
rodea la secuencia EPIYA. Las proteínas CagA de cepas de H. pylori que circulan
comúnmente en Condados occidentales como Europa, Norteamérica y Australia (Western
CagA) posee EPIYA-A y EPIYAB sitios, seguido por el sitio EPIYA-C, que se coloca dentro de
un tramo de 34 aminoácidos. Este 34 aminoácidos

el estiramiento se repite 1-3 veces en diferentes CagA occidentales especies, por lo que el
número de sitios EPIYA-C puede variar de una forma de Western CagA a la siguiente. El más
frecuente Las proteínas Western CagA tienen un solo EPIYA-C sitio ("tipo A-B-C") 5.

El sitio EPIYA-C constituye el más común sitio de fosforilación de tirosina de las proteínas
Western CagA. EPIYA-A y EPIYA-B también están fosforilados en los residuos de tirosina,
aunque mucho menos con frecuencia que EPIYA-C. Proteínas CagA de H. pylori cepas
aisladas en países de Asia oriental como Japón, Corea y China se conocen como "CagA del
Este de Asia", y poseer solo los sitios EPIYA-A y EPIYA-B, no EPIYA-C. También contienen
otro sitio EPIYA, denominado EPIYA-D19 (FIG. 2). CagA de Asia Oriental es por lo tanto
considerado como CagA "tipo A-B-D". El sitio EPIYA-D constituye la fosforilación de tirosina
más común sitio de CagA de Asia oriental.

SHP2, un objetivo celular de CagA

Una vez fosforilada, la membrana integrada CagA se une a una HOMOLOGÍA SRC
citoplasmática 2 (SH2) -Proteína que contiene DOMINIO tirosina fosfatasa (PTP) llamado
SHP2. SHP2 tiene dos repetidos en tándem Dominios SH2 - amino-SH2 y carboxi-SH2 – en la
región amino-terminal, un dominio PTP y un carboxi-cola terminal21. La estructura cristalina
de SHP2 indica que el dominio amino-SH2 interactúa con La hendidura catalítica de la
tirosina carboxiterminal dominio de fosfatasa, bloqueando el acceso al sustrato y inhibición
de la actividad catalítica de SHP2 22. Esto mantiene el nivel de actividad de fosfatasa basal
de SHP2 bajo. Unión de un péptido fosfotirosil a uno o ambos Los dominios SH2 inducen un
cambio conformacional que alivia la inhibición del dominio PTPasa por el dominio amino-
SH2, que resulta en la estimulación de Actividad de fosfatasa SHP2. CagA podría activarse
SHP2 por un mecanismo similar. SHP2 y su homólogo estructural SHP1 comprenden Una
subfamilia única de vertebrados PTP. Drosophila y Caenorhabditis elegans tienen cada uno
un ortólogo SHP, Corksrew y PTP-2, respectivamente. Mientras que SHP1 es expresado
principalmente en células hematopoyéticas, SHP2 es ampliamente expresado en células
somáticas y se requiere para procesos de desarrollo como gastrulación, desarrollo de
estructuras esqueléticas y hematopoyesis23. Numerosos estudios han indicado que SHP2
participa en la transducción de señales aguas abajo del factor de crecimiento/receptores de
citoquinas para regular las actividades celulares incluyendo proliferación, morfogénesis y
motilidad celular. SHP2 generalmente media la señal mitogénica

transducción a través de una vía que involucra RAS y proteína quinasa activada por
mitógeno (la RAS-MAPK vía). Sin embargo, su papel biológico parece ser más complicado,
ya que varios estudios han demostrado que SHP2 funciona aguas abajo o en paralelo a RAS
en la activación de la quinasa regulada por señal extracelular (ERK) MAPK. En la mayoría de
los casos, se requiere SHP2 para activación de la actividad quinasa de ERK, que incluye
activación sostenida de ERK26.

SHP2 como una oncoproteína

Estudios recientes han identificado mutaciones en PTPN11, el gen que codifica SHP2
humano, como la causa de Síndrome de Noonan, un trastorno del desarrollo caracterizado
por defectos cardíacos, cara dismórfica, congénita enfermedades del corazón,
malformación esquelética y hematológica tumores malignos 27. Además, mutaciones
PTPN11 contribuir a la patogenia de las leucemias infantiles, como la leucemia
mielomonocítica juvenil (JMML), Leucemia linfocítica aguda precursora de células B, y
leucemia mielocítica aguda (AML) 28,29. La mayoría de

mutaciones reportadas en el síndrome de Noonan y la leucemia son mutaciones sin sentido

en los exones 3 y 8, que codifican segmentos del dominio amino-SH2 y el dominio PTPasa,
respectivamente. Modelado molecular de SHP2 ha indicado que las mutaciones afectan
residuos ubicados cerca de la interfaz entre el dominio amino-SH2 y el dominio PTPasa, y
por lo tanto, podría debilitar la autoinhibición para promover Actividad de fosfatasa SHP2.
Como SHP2 regula positivamente RAS, las mutaciones SHP2 en esta región podrían actuar
para inducir señalización dependiente de RAS. Consecuentemente, mutaciones en genes
que codifican otros miembros de la La vía de señalización RAS también está asociada con
estos tipos de leucemias infantiles. Curiosamente, sin embargo, la expresión de la SHP2
asociada a leucemia mutante en las células B dependientes de interleucina-3 no pudo
resultar en hiperactivación de RAS, aunque aumentó supervivencia independiente del
factor de crecimiento de las células 29. Esta el hallazgo plantea la posibilidad de que el SHP2
oncogénico el mutante también puede perturbar el control del crecimiento de células
linfoides a través de un mecanismo independiente de RAS.

Desregulación de SHP2 por CagA

La formación del complejo CagA-SHP2 requiere tirosina fosforilación en el EPIYA-C o EPIYA-

D sitios en CagA occidental y proteínas CagA de Asia oriental, respectivamente 19. La
formación de este complejo también requiere tanto el amino-SH2 como el carboxi-SH2
dominios de SHP2. Como se ha observado que CagA existen como un multímero en las
células19, EPIYA-C o EPIYA los sitios, ya sea cis o trans, pueden unirse a un solo SHP2 a
través de sus dos dominios SH2. Como se esperaba de la modelado molecular de SHP2,
formación compleja con CagA estimula la actividad fosfatasa de SHP2 (REF. 18). Entonces,
CagA podría funcionar como un andamio que recluta SHP2 a la membrana plasmática y
activa SHP2 en una tirosina-fosforilación dependiente manera (figura 3). CagA induce el
fenotipo del colibrí en células epiteliales gástricas e inducción del colibrí el fenotipo se
inhibe al prevenir CagA fosforilación Interrupción del complejo CagA – SHP2 formación, así
como constitutiva o condicional derribo de SHP2, también inhibe la inducción de la fenotipo
del colibrí por CagA30,31. Estas observacionesindicar que la activación desregulada de SHP2
se requiere para la actividad morfogenética de CagA. Inducción del fenotipo del colibrí por
CagA también requiere actividad ERK, pero es independiente de RAS o proteína 2 unida al
receptor del factor de crecimiento (GRB2). Tras su expresión en células epiteliales gástricas,
CagA prolonga la duración de la activación de ERK en respuesta a la estimulación
mitogénica. Como actividad SHP2 se requiere para la activación sostenida de ERK,
independiente de RAS potenciación de la actividad ERK por SHP2 podría mediar en los
cambios morfológicos inducidos por CagA30.

Interacción de CagA con CSK

Además de SHP2, la tirosina fosforilada La forma de CagA se une específicamente al
terminal carboxi SRC quinasa (CSK) 32, aunque con menor eficiencia que SHP2: la mayoría (~
80%) de la CagA expresada en las células epiteliales gástricas se unen a SHP2 y solo una
pequeña fracción (menos del 20%) de CagA se une a CSK (M.H., datos no publicados). CSK
es una quinasa que negativamente regula las quinasas de la familia SRC mediante
fosforilación específica el residuo inhibidor de tirosina que se conserva entre sus regiones
carboxi-terminales. Los La interacción CagA-CSK estimula CSK y por lo tanto inhibe la
actividad de la quinasa de la familia SRC. Como la familia SRC es responsable de la
fosforilación de CagA, este SRC La inhibición de la quinasa da como resultado la reducción
de la tirosina fosforilada CagA y disminuye el nivel de Complejo CagA-SHP2. Por lo tanto,
mediado por CagA La activación de CSK atenúa la señalización CagA – SHP2 Como la
activación sostenida de SHP2 induce

apoptosis en células epiteliales gástricas, tal retroalimentación

la regulación podría servir para establecer una infección crónica

de H. pylori positivo para cagA, que persiste durante décadas

sin causar daños graves al host en la mayoría

casos 32. Recientemente, Selbach et al. También informó inhibición

de SRC por CagA33. En su trabajo, sin embargo, CagA

SRC directamente unido e inhibió su actividad quinasa

independientemente del estado de fosforilación de CagA.

La inhibición de SRC por CagA resultó en la desfosforilación

de otro sustrato SRC, cortactin,

que es una proteína del citoesqueleto que podría estar involucrada

en los cambios morfológicos dependientes de CagA.

Papel de CagA en la carcinogénesis gástrica

El desarrollo de carcinoma gástrico es un paso múltiple

proceso que requiere alteraciones en la expresión de

genes, incluidos oncogenes y supresores de tumores

genes, que duran varias décadas. La integridad de la gástrica.

La mucosa se mantiene por el equilibrio de la proliferación celular.

y muerte celular. Durante cagA-positivo H. pylori

infección, las células epiteliales gástricas son continuamente

expuesto a CagA de la bacteria, y la desregulación de CagA

de SHP2 imita una situación en la que SHP2

adquiere una mutación de ganancia de función. Sin embargo, gástrica

el carcinoma no es una característica de pacientes con

Síndrome de Noonan, por lo tanto, desregulación de SHP2 solo

podría no ser suficiente para transformar el epitelio gástrico

Células. De hecho, la activación sostenida de SHP2 por CagA

induce apoptosis en lugar de proliferación celular en cultivo

células epiteliales gástricas 32. Como SHP2 puede actuar como un

activador aguas arriba de la señalización RAS, el pro-apoptótico

la actividad de CagA podría deberse a un desequilibrio mitogénico

señales generadas por la interacción CagA-SHP2,

como se ha demostrado en el caso de la expresión oncogénica de RAS

en células no transformadas34. Pérdida crónica de gástrico.

células epiteliales, debido a la apoptosis inducida por CagA,

podría ser la base del desarrollo de H. pylori asociado

gastritis atrófica, que se caracteriza por la pérdida de gástrico

glándulas y disminución de la secreción de ácido gástrico. los

El aumento posterior del pH gástrico facilitaría la

colonización a largo plazo de H. pylori en el estómago.

Entonces, ¿cómo podría CagA eventualmente conducir a células gástricas?

¿transformación? Un resultado indeseable a largo plazo de continuo

la apoptosis de la mucosa gástrica es el aumento

recambio de células epiteliales gástricas. Exceso de rondas de ADN

la replicación en células epiteliales podría aumentar significativamente

El riesgo de acumulación de cambios genéticos que predisponen

Las células a la transformación. En particular, adquisición

de mutaciones en genes que regulan la apoptosis podría

Promover la supervivencia y la proliferación de CagA-inyectado

células con actividad SHP2 desregulada. Desarrollo de el adenocarcinoma gástrico de tipo

intestinal está precedido

por cambios patológicos secuenciales de la mucosa gástrica,

desde mucosa normal hasta gastritis superficial, atrófica

gastritis y metaplasia intestinal35. El CagA – SHP2

complejo puede detectarse en muestras de mucosa gástrica

tomado de pacientes con gastritis atrófica crónica, pero

no en la mucosa gástrica de pacientes con metaplasia intestinal

o carcinoma gástrico36, lo que indica que CagA es

importante durante las primeras fases de la carcinogénesis gástrica.

Podría contribuir a la progresión de la gastritis superficial.

a gastritis atrófica y metaplasia intestinal, un

lesión precancerosa bien reconocida.

La infección con cepas cagA-positivas de H. pylori es

también asociado con ulceración duodenal, pero pacientes

con úlceras duodenales tienen bajo riesgo de carcinoma gástrico

desarrollo37,38. Notablemente, la ulceración duodenal es

caracterizado por hiperacidicidad, mientras que la ulceración gástrica

y los carcinomas gástricos están asociados con hipoacidicidad.

El resultado clínico de H. pylori cagA-positivo

por lo tanto, la infección puede estar fuertemente influenciada por el huésped

polimorfismos genéticos, como los que determinan

la capacidad de inducir citocinas proinflamatorias que

regular la secreción de ácido gástrico39.

CagA de Asia oriental versus CagA occidental

Un misterio de la infección por H. pylori es por qué algunas poblaciones

con alta incidencia de infección por H. pylori, como

aquellos en Japón y Corea, tienen altas incidencias de gástrico

carcinoma, mientras que otras poblaciones altamente infectadas,

como las poblaciones en África central, no. Posible

Las razones son las diferencias en la susceptibilidad genética entre las poblaciones, factores
ambientales como los hábitos alimenticios,

y las diferencias de tensión de H. pylori. Entre estas, la diversidad

de CagA en cepas de H. pylori podrían estar involucradas en el

determinación del tipo y gravedad de la enfermedad. Como se discutió

arriba, formas de CagA de Asia oriental y occidental

poseer la fosforilación de tirosina claramente estructurada /

Sitios de unión a SHP2: EPIYA-D y EPIYA-C,

respectivamente 19. De Souza et al. informó recientemente que el

los dominios amino y carboxi-SH2 de SHP2 se unen con

alta afinidad con la secuencia consenso pY- (S / T / A / V / I) -

X- (V / I / L) -X- (W / F) 40 (figura 5a). La secuencia de consenso

coincide perfectamente con la secuencia que rodea el EPIYA-D

sitio, pero difiere de la secuencia que rodea a EPIYA-C

por un solo aminoácido en la posición (pY + 5).

con esto, EPIYA-D muestra una unión SHP2 más fuerte y

mayor actividad morfogenética que EPIYA-C19. Notablemente,

los grados de inflamación, actividad de gastritis y atrofia

son significativamente mayores en pacientes con gastritis que

fueron infectados con la cepa CagA-positiva de Asia Oriental

que en pacientes infectados con CagA-negativo o

Cepa CagA-positiva occidental 41. Además, la prevalencia

de la cepa cagA-positiva del este asiático está asociada

con la tasa de mortalidad por cáncer gástrico en Asia41.

Por lo tanto, las poblaciones infectadas con cagApositivo de Asia Oriental

H. pylori tiene mayor riesgo de cáncer gástrico que

aquellos infectados con cepas occidentales positivas para cagA.

Entre las especies de CagA occidental, el número de

Los sitios EPIYA-C se correlacionan directamente con los niveles de tirosina

fosforilación, actividad de unión a SHP2 y morfológica

transformación (figura 5b) 19. Además, molecular

estudios epidemiológicos han demostrado que el número

de los sitios EPIYA-C está asociado con la gravedad de

gastritis atrófica y carcinoma gástrico en pacientes

infectado con cepas de CagA-positivas occidentales de

H. pylori42. Estas observaciones refuerzan la idea de que

El potencial de CagA individual para perturbar la célula huésped

funciones está determinada, al menos en parte, por su grado de

Actividad de unión a SHP2, que a su vez depende de

La secuencia de la región EPIYA de CagA.

Direcciones futuras

La prevalencia mundial de la infección por H. pylori es

es probable que disminuya a medida que aumenta el nivel de vida.

Sin embargo, muchas personas ya han sido infectadas.

con H. pylori positivo para cagA y tienen un alto riesgo de

desarrollar carcinoma gástrico a corto plazo o

término medio. SHP2, la primera fosfatasa conocida por

actuar como una oncoproteína humana, es una molécula clave que

determina la virulencia de H. pylori cagA-positivo.

Se requieren más estudios para identificar objetivos de

SHP2 que están involucrados en la transformación. Judd y col.

informó recientemente el desarrollo de carcinoma gástrico

en ratones que carecen del sitio de unión a SHP2 en el

correceptor de la familia interleucina-6 gp130 (REF. 43).

Aunque se requieren más estudios para determinar

El mecanismo por el cual esta mutación contribuye a

patogénesis del cáncer gástrico, los resultados son consistentes

con la idea de que la desregulación de la función SHP2 es

involucrado en el desarrollo del cáncer gástrico. Estudios recientes también han

demostrado que CagA puede unirse

a otras moléculas de señalización, como GRB2, c-MET

y fosfolipasa-Cγ, aunque estos complejos

forma independientemente de la fosforilación de CagA44,45.

Además, Amieva et al. informó que CagA interactúa

con componentes del complejo apical-junctional

como ZO-1 y, al reclutar SHP2 y otros

moléculas de señalización, provoca el ensamblaje ectópico de un TIGHT

JUNCTION en el sitio de fijación de H. pylori46. So CagA

podría interactuar con varios transductores de señal intracelular

tanto en tirosina-fosforilación dependiente

y modales independientes. Al hacerlo, la bacteria

la proteína puede perturbar simultáneamente varias señales

vías para promover la carcinogénesis gástrica.

Después del receptor de intimina translocado (Tir) de

Escherichia coli enteropatógena (EPEC), CagA es un

segundo ejemplo de una proteína bacteriana que se entrega

en células eucariotas y se somete a fosforilación de tirosina.

Tir se inyecta en las células huésped a través de

sistema de secreción tipo III, se somete a fosforilación de tirosina

y luego se une específicamente al adaptador NCK

proteína 47. La interacción de Tir e intimina desencadena un

reordenamiento del citoesqueleto de actina del huésped, que

induce pseudopodos "tipo pedestal" en sitios de adherencia

bacterias, mediante el reclutamiento del síndrome neuronal de Wiskott-Aldrichsyndrome

proteína y la proteína 2 relacionada con la actina

(ARP2): complejo ARP3 a través de la NCK ligada a Tir.

EPEC no parece tener ninguna relación con humanos

Sin embargo, no es sorprendente que otros agentes patógenos

las bacterias explotan este tipo de factor de virulencia-huésped

interacción celular, objetivo importante señalización intracelular

vías y promover el desarrollo del cáncer.

Otras variaciones dentro de la región EPIYA de Oriente

Las especies asiáticas de CagA o CagA occidental deben ser

analizados, ya que también podrían afectar la capacidad de esta proteína

para unirse a SHP2. En consecuencia, epidemiológica

estudios sobre la relación entre H. pylori y

el carcinoma gástrico debe ser reexaminado en el contexto

de polimorfismos CagA. Resultados obtenidos de tales

estudios comparativos podrían permitir el desarrollo de un

sistema de detección de alto rendimiento para grupos de alto riesgo

dentro de la enorme población de individuos infectados por H. pylori.

Estudios recientes han demostrado que la infección por H. pylori

protege contra el reflujo gastroesofágico y

carcinoma esofágico48, por lo que será importante

erradicar selectivamente H. pylori en personas que están en el

mayor riesgo de desarrollar carcinoma gástrico.

Erradicación de H. pylori cagA-positivo específicamente de

los grupos de alto riesgo reducirían notablemente el mundo

incidencia de cáncer gástrico.