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UNIVERSIDAD NACIONAL DEL SANTA

FACULTAD DE CIENCIAS

ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE BIOTECNOLOGÍA

INFORME DE PRÁCTICA:

Practica 4: Cultivo por Lote Alimentado

DOCENTE:

Ángel Castro Alvarado

ESTUDIANTES:

Cano Martínez Lady

Llontop Vasquez Greis

Mendoza Quezada Marjorie

Montenegro Valderrama Mark

Morales Alvarado Leslie

NUEVO CHIMBOTE – PERÚ

2018
BIOPROCESOS I

Practica 4: Cultivo por Lote Alimentado

1. Se quiere realizar un cultivo por lote alimentado con alimentación constante con una
duración de 5 h. La transición a la zona de crecimiento limitado ocurrirá transcurrida
la mitad del tiempo total. La alimentación contendrá 77 g/L de nutriente limitante de
un rendimiento celular de 0.37 g/g. el microorganismo presenta un μM de 0.45 h-1 y al
momento de iniciar el flujo el volumen de medio es 12000 L, la concentración celular
es 1.0 g/L y la concentración del nutriente limitante es 1.11 g/L.
Se desea determinar la biomasa al final de la fermentación, el flujo de alimentación y
el volumen final de caldo en el fermentador.

T= 5h 𝑉𝑜 =1200L
𝑡𝑇 = 2,5 h 𝑋𝑜 = 1 g/L
𝑆𝑜 = 1,11 g/L 𝑆𝑓 = 77 g/L
𝑌𝑥/𝑆 = 0,37 g/L Vf=?
𝑢𝑀 = 0,45 ℎ−1 F=?
𝑋𝑜𝑉𝑜𝑒 𝑢𝑀 𝑡𝑇 = 𝑋𝑜𝑉𝑜 + 𝑆𝑜𝑉𝑜𝑌𝑥/𝑠 + 𝐹𝑦𝑋/𝑠 𝑆𝑓 𝑡𝑇

1(1200)𝑒 0,45∗2,5 = 1(1200) + (1,11)(1200)(0,37) + 𝐹(0,37)(77)(2,5)

3696,2602 = 1692,84 + 71,225𝐹

2003,4202
=𝐹
71,225

𝐹 = 28,13 𝐿/ℎ

𝑉𝑓 = 𝑉𝑜 + 𝐹𝑡
𝑉𝑓 = 1340,65
2. Una fermentación por lote alimentado se opera con alimentación constante de 375 L/h.
Al inicio de la alimentación el volumen del caldo es 21,000 L, la concentración celular
3 g/L y la concentración de nutriente limitante 1,9 g/L. El rendimiento del nutriente
limitante es 0,46 g/g y μM= 0,42 h-1.
Si el tiempo de transición es de 2,1 h y se desea que al final de la fermentación se haya
duplicado la masa celular que había al tiempo de transición, determine la
concentración de nutriente limitante en la alimentación, el tiempo total de alimentación
y el volumen final.

- Calculamos Sf
𝑋𝑜 × 𝑉𝑜 × 𝑒 𝜇𝑚 ×𝑡𝑇 = 𝑋𝑜 × 𝑉𝑜 + 𝑆𝑜 × 𝑉𝑜 × 𝑌𝑋⁄𝑆 + 𝐹 × 𝑌𝑋⁄𝑆 × 𝑆𝑓 × 𝑡𝑇

3 × 21000 × 𝑒 0.42×2.1 = 3 × 21000 + 1.9 × 21000 × 0.46 + 375 × 0.46 × 𝑆𝑓 × 2.1


𝑔
𝑆𝑓 = 195.4 ⁄𝐿

- Calculamos Tfinal
𝑋𝑜 × 𝑉𝑜 + 𝑆𝑜 × 𝑉𝑜 × 𝑌𝑋⁄𝑆 + 𝐹 × 𝑌𝑋⁄𝑆 × 𝑆𝑓 × 𝑡𝑓𝑖𝑛𝑎𝑙 = 2 × 𝑋𝑜 × 𝑉𝑜 × 𝑒 𝜇𝑚×𝑡𝑇

3 × 21000 + 1.9 × 21000 × 0.46 + 375 × 0.46 × 195.4 × 𝑡𝑓𝑖𝑛𝑎𝑙


= 2 × 3 × 21000 × 𝑒 042×2.1
𝑡𝑓𝑖𝑛𝑎𝑙 = 6.6ℎ

- Calculamos Vf
𝑉𝐹 = 𝑉𝑜 + 𝑇𝑓 × 𝐹

𝑉𝐹 = 21000 + 6.6 × 375


𝑉𝐹 = 23475𝑔/𝐿

3. Las condiciones de operación con que se lleva a cabo un cultivo por lote alimentado
con alimentación constante de una determinada bacteria, se señalan a continuación
junto con algunos de sus principales parámetros:
Vo= 59 983 L VF= 80 000 L μ M=
0.26 h-1
So= 6 g/L F= 1250 L/h Ks= 50
mg/L
Xo=3 g/L Yx/s=0.5 (limitante) SF=180
g/L

Durante el cultivo se ha tomado una muestra que indica que la concentración celular
en ese momento es de 15.3 g/L ¿Podría Ud. señalar cuántas horas restan para el
término de la fermentación?

DESARROLLO:
 Es un CLA-AC

𝑉𝑓 = 𝑉𝑜 + 𝐹𝑡

𝑉𝑓 − 𝑉𝑜
𝑡=
𝐹
80000 − 59983
𝑡=
1250

𝑡 = 16 ℎ

 Calculamos el tiempo de transición

3 ∗ 59983 ∗ ℮0.26∗𝑡𝑇 = 3 ∗ 59983 + 6 ∗ 59983 ∗ 0.5 + 1250 ∗ 0.5 ∗ 180 ∗ 𝑡𝑇

𝑡𝑇 = 7.2 ℎ Esto fue solucionado por tanteo o en Excel con la opción


Solver.

 Supongamos que estamos en ZCE, aplicamos

𝑋 = 𝑋𝑜 ℮𝜇𝑚𝑡 = 15,3
En donde t= 6.8

 Entonces está dentro de la zona exponencial, ahora restamos el tiempo


total y el tiempo en la ZCE.

16-6.8= 9.2 h

4. Una fermentación se realiza por lote alimentado, utilizando una alimentación constante
de 0.8 L/h con una concentración del nutriente limitante de 120 g/L. El cultivo se inicia
por lotes con un volumen útil de 20 L, la concentración celular después de inocular es
de 0.1 g/L y hay un medio de cultivo con 7.5 g/L de nutriente limitante. El cultivo por
lote continúa hasta que la masa celular se quintuplica, comenzando en ese momento
la alimentación. Determine:
a) Las condiciones iniciales del cultivo por lote alimentado.
b) Las condiciones de transición
c) Las condiciones finales que corresponde al momento en que el volumen del caldo
es 30 L.
Datos:
VF= 30 L Yx/s= 0.45 μM= 0.62 h-1 Ks= 80
m g/L
5. En una fermentación por lote alimentado se desea mantener una velocidad específica
de crecimiento constante e igual a 0.33 h-1. Al momento de iniciar la alimentación el
volumen del medio es 10000 L y la concentración celular es 6 g/L. Se alimenta medio
que contiene 90 g/L de nutriente limitante de rendimiento celular de 0.44 g/g. La
constante de saturación es 0.055 g/L y μM es 0.46 h-1. Al final de la fermentación se
desea obtener 600 Kg de células secas. Calcule el tiempo de alimentación, el volumen
final de medio de fermentación, la concentración de nutriente limitante, el flujo inicial
de medio y el flujo cuando transcurre la mitad del tiempo de alimentación.

DATOS

𝒱0 = 1000𝐿 RESOLUCION

𝑋𝑉 = 𝑋0 𝑉0 𝑒 𝔲𝑡
𝒳0 = 6𝑔/𝐿 𝑋𝑉
= 𝑒 𝔲𝑡𝑓
𝑋0 𝑉0
𝑋𝑉
𝑌𝑥/𝑠 = 6𝑔/𝐿 𝑙𝑛 ( ) = 𝔲𝑡𝑓
𝑋0 𝑉0

𝐾𝑠 = 0,055𝑔/𝐿 1. 𝑆=𝜇
𝔲𝐾𝑠 𝜇𝑋0 𝑉0
𝑚 −𝜇
2. 𝐹0 = (𝑆
𝐹 −𝑆0 )𝑌𝑥/𝑠

0,055𝑔 0,33(6)(1000)
0,33ℎ−1 ( 𝐿 ) =
𝑋𝑓 𝑉𝑓 = 600000 𝑠=
0,46ℎ−1 − 0,33ℎ−1 (90 − 0,14)0,44
𝐹0 = 500,78 4ℎ
−1
𝔲𝑚 = 0,46ℎ
𝑆 = 0,14 𝑔/𝐿

1 𝑋𝑉
3. 𝑡𝑓 = 𝑙𝑛 ( ) 4. 𝐹𝑡𝑓/2 = 𝐹0 𝑒 𝜇𝑇
HALLAR 𝜇 𝑋0 𝑉0
𝑔 −1
1.𝑆0 𝑡𝑓 = 6,98/13,95 500,78 𝑒 0,33ℎ (3,49ℎ)
𝐿
2.𝐹0 𝑡 1 = 3,49ℎ 𝐹𝑡𝑓/2 = 1584,25 𝐿/ℎ
𝑓
2
3.𝑡𝑓

4, 𝐹𝑡𝑓/2

5.𝑉𝑓 𝐹
5. 𝑉𝑓 = 𝑉0 + 𝜇(𝑒 𝜇𝑡0−1)
−1
500,78𝐿/ℎ(𝑒 0,33ℎ (3,49ℎ) − 1)
= 1000𝐿 +
0,33ℎ−1
𝑉𝑓 = 23670𝐿
6. Una fermentación por lote alimentado se lleva a cabo con una levadura que presenta
una velocidad específica de crecimiento máxima de 0.35 h-1 y una constante de
saturación y un rendimiento del nutriente limitante de 0.026 g/L y 0.46 g/g,
respectivamente. Se alimenta con 100 g/L de nutriente limitante de forma tal de
mantener una velocidad específica de crecimiento de 0.23 h-1. El fermentador contiene
al inicio de la alimentación 11300 L de caldo de una concentración celular de 3.7 g/L.
La alimentación se continua hasta alcanzar una concentración celular el triple de la
inicial. Calcule el tiempo de alimentación y el volumen final del caldo.

DATOS RESOLUCION
𝑔
𝐾𝑠 = 0,026 𝑋𝑉 = 𝑋0 𝑉0 𝑒 𝜇𝑡
𝐿
0,46𝑔 3𝑋0 𝑉𝑓 = 𝑋0 𝑉0 𝑒 𝜇𝑡
𝑌𝑥 =
𝑠 𝑔
3𝑉𝐹 = 11300𝐿 𝑒 0,23𝑡
𝑔
𝑆𝑓 = 100 𝑉𝐹 = 3766,7𝑒 0,23𝑡
𝐿
𝜇 = 0,23ℎ−1 𝐾0 𝜇𝑡−1
𝑉𝐹 = 𝑉0 + (𝑒 )
𝜇
𝑉0 = 11300𝐿
𝑔
𝑋0 = 5,7 𝜇𝑥0 𝑣0
𝐿 𝑘𝑠 𝜇 𝐹0 =
𝑆0 = (𝑆𝑓 − 𝑆)𝑌𝑥
𝑋𝑓 = 3 𝑋0 = 17,1 𝑔/𝐿 𝜇𝑚 𝜇 𝑠

0,026(0,23) 0,23(3,7)(11300)
𝑆0 =
0,35ℎ−1 − 0,23ℎ−1 (100 − 0,05)0,46
HALLAR
𝑆0 = 0,05𝑔/𝐿 𝐹0 = 209,95 𝐿/ℎ
1. 𝒕𝒇
2. VF
𝐹0 𝜇𝑡
𝑉𝐹 = 𝑉0 + (𝑒 − 1)
𝜇
209,95 0,23𝑡
𝑉𝐹 = 11300 + (𝑒 − 1)
0,23
209,95 0,23𝑡
3766,7 𝑒 0,23𝑡 = 11300𝐿 + (𝑒 − 1)
0,23
2857,35𝑒 0,23𝑡 = 11300 − 969,35

𝑒 0,23𝑡 = 3,64

RESPUESTA

𝟏. 𝑡𝑓 = 5,6

2. 𝑉𝐹 = 3766,7 𝑒 0,23(5,6)
7. Se quiere instalar un sistema de cultivo por lote alimentado en el𝑉𝐹cual se obtenga
= 13656,28 𝐿 un
crecimiento exponencial a flujo constante y con una concentración del sustrato limitante
variable con el tiempo.
a) Deduzca las ecuaciones que representan el comportamiento del sistema
b) Determine el tiempo de alimentación y la masa de glucosa total adicionada al
fermentador si el fermentador inicialmente con 22 m3 de líquido se desea obtener 640
Kg de biomasa seca a un μ= 0.5 h-1
Datos:
Xo=8 g/L Yx/s= 0.4 μM= 0.62 h-1 F=
3
1 m /h
Ks= 0.045 g/L

8. A usted le han solicitado que diseñe un ensayo a nivel laboratorio de un CLA con
alimentación constante operado en condiciones de estado pseudoestacionario (e.p.e)
para evaluar la producción de un metabolito M mediante una bacteria aerobia. Las
condiciones de operación del cultivo deben ser tales que la velocidad específica de
crecimiento de la población celular al inicio del e.pe. sea 0.083 h-1. Al término del
CLA se espera alcanzar una biomasa de 237.3 g. El nutriente limitante será la fuente
de carbono y energía y único componente de la corriente de alimentación. Todos los
demás nutrientes se adicionaran en cantidades adecuadas al medio de cultivo inicial.
Se sabe que la productividad específica de M es igual a 3.8*10-4 U.A. (g cel)-1h-1
cuando µ ≤ 0.083 h-1.
A usted le solicitan que determine la velocidad específica de crecimiento de la
población y la concentración de metabolito M al término del CLA.
Datos:
X0= 4,8 g/L µM= 0,38 h-1
V0=8L Yx/s=0,5
S0=20 g/L
P0=0 g/L
Indique todas las suposiciones realizadas.