REACTIFS BIOLABO KIT CALCULS URINAIRES

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Méthode qualitative chimique
FABRICANT :
BIOLABO SA, Réactifs pour la détermination qualitative
02160, Maizy, France des principaux constituants des calculs urinaires.

REF 92315 : 100 tests

REF 92330 : 40 tests

SUPPORT TECHNIQUE ET COMMANDES

Tel : (33) 03 23 25 15 50
Fax : (33) 03 23 256 256
| USAGE IN VITRO

INTERET CLINIQUE (1)(2) PRECAUTIONS

La présence de calculs dans les urines est due à la concrétion et la
cristallisation de substances en sursaturation. Les raisons de ce
déséquilibre peuvent être mulitiples : nutritionnelles, métaboliques,
génétiques, anatomiques, iatrogéniques, neurologiques, infectieuses,
plusieurs d’entre elles pouvant concourir simultanément ou
successivement à la formation et à la croissance du calcul.
Les substances chimiques les plus fréquemment rencontrées sont par
ordre de fréquence décroissante : les oxalates de calcium, les
phosphates calciques et ammoniaco-magnésiens, les acides uriques et
urates, les protéines diverses, la cystine.
L’analyse qualitative d’un certain nombre de constituants (parmi les plus
fréquents) des calculs urinaires constitue une première approche dans le
diagnostic étiologique des lithiases urinaires et l’orientation du suivi
thérapeutique des patients. Elle doit impérativement être conduite en
parallèle avec des analyses morphologiques (loupe binoculaire,
microscopie optique) et/ou une identification moléculaire et cristalline
(diffraction aux rayons X, spectophotomètrie infrarouge). En raison de sa
nature, le calcul doit faire l’objet d’une analyse précise et fiable. Les
méthodes optiques et chimiques couplées et rationnellement exploitées
peuvent dans la majorité des cas fournir des informations suffisantes sur
la composition et l’étiologie du calcul.
PRINCIPE (4)(5)
La méthode utilisée permet d’identifier les principaux composants
minéraux et un composant organique (la cystine) des calculs urinaires
par des tests chimiques simples.
REACTIFS
Flacon R1 Acide chlorhydrique (HCl 1,65 M)
(irritant)
Flacon R2 Hydroxyde de sodium (NaOH 6,25 M)
(corrosif)
Flacon R3 1er Réactif pour la détermination de la cystine
(corrosif, toxique) (soude, cyanure de sodium)
Voir indications au § REACTIFS et respecter les symboles de sécurité
figurant sur les étiquettes des flacons.
La fiche de données de sécurité peut être obtenue sur simple demande.
Les réactifs BIOLABO sont destinés à du personnel qualifié, pour un
usage in vitro.
• Utiliser des équipements de protection (blouse, gants, lunettes).
• Ne pas pipetter avec la bouche.
• En cas de contact avec la peau ou les yeux, rincer abondamment à
l’eau et consulter un médecin.
• Elimination des déchets : respecter la législation en vigueur.
Par mesure de sécurité, traiter tout spécimen comme potentiellement
infectieux. Respecter la législation en vigueur.
PREPARATION DES REACTIFS
Les réactifs sont prêts à l'emploi. Flacons R1 et R2 : couper l’embout du
compte-gouttes à l’aide de ciseaux en évitant d’orienter l’ouverture du
flacon vers soi ou vers un tiers (risque de projection) .
STABILITE ET CONSERVATION
Stocker à 18-25°C et à l’abri de la lumière.
• Avant ouverture, les réactifs contenus dans le coffret sont stables à
température ambiante, jusqu'à la date de péremption indiquée sur
l'étiquette du coffret.
• Après ouverture et à l’abri de la lumière, les réactifs bien rebouchés
sont stables au moins 6 mois.
Ce kit peut voyager à température ambiante.
PRELEVEMENT ET PREPARATION DU SPECIMEN
L’étude morphologique est réalisée sur calcul entier débarassé des
impuretés éventuelles. L’analyse qualitative et le test à la flamme sont
réalisés sur calcul pulvérisé à l’aide d’un mortier et d’un pilon propres
jusqu’à obtention d’une poudre fine.

Flacon R4 2nd Réactif pour la détermination de la cystine INTERFERENCES (4)

(nocif) (Sodium nitroprussiate) Le cobalt et le nickel n’interfèrent pas avec la détermination du
Flacon R5 Réactif pour la détermination des phosphates magnésium en raison de leur faible concentration dans l’organisme.
(corrosif) (Acide sulfurique, Molybdate d’ammonium, Test du carbonate : s'il y a eu effervescence lors de l'addition de R1
Sulfate ferreux) révélant la présence de carbonate, ajouter R1 goutte à goutte jusqu'à
Flacon R6 Réactif pour la détermination du Magnésium ce qu'il n'y ait plus de dégagement gazeux. Agiter ensuite
(NaOH, paranitrophénylazorésorcinol) vigoureusement ("Vortex") pendant au moins une minute pour éliminer
tout le gaz carbonique (ou à défaut, porter quelques secondes à
Flacon R7 Réactif pour la détermination du calcium
(irritant) (KOH, calcéine) ébullition dans un tube Pyrex puis ramener à température ambiante).
Cette opération est nécessaire pour éviter un résultat faussement
Flacon R8 Réactif pour la détermination de l’Ammonium
positif lors de la détermination de l'oxalate.
(toxique) (Iodure de potassium, iodure mercurique)

Flacon R9 Réactif pour la détermination de l’acide urique

REACTIFS ET MATERIEL COMPLEMENTAIRES
(irritant) (Acide acétique, néocuproïne, sulfate de cuivre)
1. Loupe binoculaire
Flacon R10 Réactif pour la détermination de l’oxalate
2. Pilon et mortier en porcelaine propres
(nocif) (Dioxyde de manganèse)
3. Anneau d’ensemencement
4. Balance au mg (pesée de la poudre de calcul)
5. Tubes ou plaque alvéolée en verre ou céramique à fond blanc

Version : FT 92315 20 01 2005

CONTRÔLE DE QUALITE PERFORMANCES
Lorsque les calculs présentent une morphologie anormale ou conduisent Limites de détection :
à des résultats négatifs ou incohérents au cours de l‘analyse chimique, il Carbonate : 1 mg de Calcium carbonate
convient de mener des analyses plus fines qui peuvent mettre en
Cystine : 1 mg de L-Cystine
évidence une composition ou une étiologie particulières.
Il appartient à chaque laboratoire d’établir son propre protocole Phosphate : 1 mg de Calcium phosphate
d’investigation par des techniques adaptées à la diversité non seulement Ammonium : 1 mg d’Ammonium magnésium Phosphate
de la structure, mais aussi de la composition moléculaire du calcul Magnésium: 3 mg d’Ammonium magnésium Phosphate
étudié. Calcium: 0.1 mg de calcium (phosphate, carbonate, oxalate)
Acide urique : 0.1 mg d’acide urique
Spécificité : chaque réaction est spécifique du composant testé. Pour
Oxalate : 2.5 mg de Calcium Oxalate
l’oxalate, voir le § INTERFERENCES.
Sensibilité : Les réactifs utilisés sont très sensibles et permettent donc de
détecter les différents éléments même à l’état de traces.

MODE OPERATOIRE (1)

Procéder à l’étude morphologique du calcul avant de pulvériser le calcul pour réaliser les tests chimiques.
Test à la flamme : Immerger un anneau métallique d'ensemencement dans l'eau distillée, puis dans la poudre de calcul. Porter à la flamme. La
carbonisation ou la disparition de la poudre indique que les composants sont principalement de nature organique. L'absence de
carbonisation indique que le calcul est constitué de substances minérales.
Tests chimiques qualitatifs : (voir tableau ci-dessous)
• Etape 1 : Peser environ 50 mg de poudre du calcul, transvaser dans un tube à hémolyse et ajouter 10 gouttes de réactif R1. Une
effervescence indique la présence de carbonate (voir § INTERFERENCES). Dans ce cas, agiter vigoureusement pendant une minute. Le
restant du mélange est appelé M1 dans le tableau ci-dessous.
• Préparation du mélange M2 : Mélanger 50 Hl de M1 et 5 ml d’eau distillée. Bien mélanger et utiliser uniquement pour la détermination du
calcium (Etape 5).
• Selon le cas, verser une goutte du mélange M1 ou M2 dans chaque cavité d'une plaque à touche en céramique ou dans des tubes et
continuer les tests ci-après (Etape 2 à 8). :

Etape 1 Etape 2 Etape 3 Etape 4 Etape 5 Etape 6 Etape 7 Etape 8

CARBONATE CYSTINE PHOSPHATE MAGNÉSIUM CALCIUM AMMONIUM ACIDE OXALATE

URIQUE

POUDRE DE 1 GOUTTE 1 GOUTTE 1 GOUTTE 1 GOUTTE 1 GOUTTE 1 GOUTTE MELANGE

CALCUL
M1
M1 M1 M1 M2 M1 M1 RESTANT
50 mg
+ + + + + + +
+ R3 R5 R6 R2 R2 R2 R10
1 GOUTTE 2 GOUTTES 1 GOUTTE 1 GOUTTE 1 GOUTTE 1 GOUTTE
R1 LA POINTE D'UNE
+ + + + SPATULE
MELANGER. MELANGER.
environ 60 mg
10 gouttes ATTENDRE ATTENDRE R2 R7 R8 R9
5 MINUTES 5 MINUTES 5 GOUTTES 2 GOUTTES 1 GOUTTE 1 GOUTTE

+ R4 ATTENDRE
= M1 MELANGER MELANGER MELANGER MELANGER QUELQUES
1 GOUTTE
SECONDES

RESULTAT EFFERVESCENCE COULEUR COULEUR PRECIPITE COULEUR PRÉCIPITÉ COULEUR EFFERVESCENCE

POSITIF RQ 2 ROUGE BLEUE BLEU JAUNE MARRON/ORANGE JAUNE/ORANGE RQ 2

RESULTAT PAS DE ABSENCE DE PAS DE

ABSENCE COULEUR COULEUR COULEUR ABSENCE
NEGATIF CHANGEMENT DE PRECIPITE CHANGEMENT
d’effervescence JAUNE ORANGE JAUNE d’effervescence
COULEUR COULEUR DE COULEUR
VIOLETTE

Remarques :
1) Témoin négatif : pour les étapes 2 à 7, il peut être utile de réaliser un témoin négatif en remplaçant le mélange M1 ou M2 (selon le cas ) par de l’eau
déminéralisée afin de mieux différencier les couleurs.
2) Effervescence : audible et visible.

REFERENCES
(1) Les calculs urinaires : M. DAUDON, le Biotechnologiste, n°4, (02/1994), p.8 à 11.
(2) Comment analyser un calcul et comment interpréter un résultat : M. DAUDON, l’Eurobiologiste (1993), 27, n°203, p.35-46
(3) Revue critique des méthodes d’analyse des calculs urinaires M. DAUDON et R. J. REVEILLAUD., Actualités nephrologiques de l’hôpital Necker, Flammarion médecine
sciences, éd. Paris,(1985) p. 203-224
(4) Routine Analysis de urinary calculi : Rapid simple method using spot tests, J. H. WINER et MATICE M. R., J. Lab. Clin. Med. (1943), 28, p.898-904
(5) P-nitrobenzenazoresorcinol solution ; use in test reagent for Magnesium : WELCHER F., Chemical solutions (1966)p.244
(6) Practical Value de analysis de urinary calculi, WINER. J. H., J.A.M.A. (1959), Vol.169, n°15, p.1715-1718.

Made in France

Version : FT 92315 20 01 2005

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