OBJETIVOS

Objetivo general:
 Analizar el comportamiento de la Glucoamilasa y la Invertasa frente al proceso
de inmovilización.
Objetivos específicos:
 Determinar el rendimiento de inmovilización de la enzima Glucoamilasa y de la
Invertasa en base a la actividad enzimática en solución antes y después del
procedimiento.
 Identificar los factores que pueden interferir en un óptimo proceso de
inmovilización enzimática.

https://tesis.ipn.mx/bitstream/handle/123456789/9619/168.pdf?sequence=1&isAllowed=y

Adsorción Este método simple de inmovilización, se basa en enlaces débiles donde

Intervienen fuerzas de Van der Waals, interacciones iónicas e hidrofóbicas y puentes de
hidrógeno. El inconveniente en este método, es que el enlace es reversible y sólo se
puede monitorear la reacción en periodos cortos. Hay una alta tasa de fuga del
biocatalizador, enlace inestable, no es posible controlar lo anterior y por lo tanto tiene
un índice de reproducibilidad bajo. Además, es muy susceptible a los cambios que se
producen en el ambiente como las modificaciones en el pH, temperatura y fuerza iónica.
Estos soportes generalmente dan como resultado, cantidades bajas de proteína
dispuesta (1 mg/g de soporte) y la elución continúa del sistema enzima/células.

La técnica de atrapamiento, consiste en la inclusión de la enzima por unión covalente o no,

dentro de geles o fibras. Además, minimiza la lixiviación de la enzima y mejora su estabilidad,
pero con frecuencia resulta en limitaciones de transporte de sustrato / analito al sitio activo de
la enzima. Sin embargo, esta técnica permite la posibilidad de adaptar el material de
encapsulación para proporcionar el microambiente óptimo para la enzima, es decir, que
coincida con el entorno físico-químico de la enzima y el material de inmovilización. La
encapsulación eficiente se ha realizado empleando alginato de calcio, que previene la perdida
de la enzima y aumenta la estabilidad mecánica. La disminución en la lixiviación y el aumento en
el índice de eficiencia de atrapamiento,
Cuando se hace en geles, la enzima queda atrapada dentro de espacios internos formados por
la unión de las cadenas poliméricas (principalmente de poliacrilarnida) insolubles en agua

Toda enzima ya sea en solución o inmovilizada tiene un pH óptimo. Sin embargo, cuando se
realiza la inmovilización este óptimo cambia. Esto se debe a que la superficie del soporte se
carga eléctricamente. Entonces, el pH en la superficie del soporte donde se localiza la enzima
será más grande o más alto que el de la solución exterior, creando un cambio aparente en el p1-
I (Weetall, 1973).

https://repositorio.tec.mx/bitstream/handle/11285/570330/DocsTec_283.pdf?sequence=1&is
Allowed=y ()23

El alginato de sodio al interactuar con el bicloruro de calcio forma el alginato de calcio,

polímero que forma una estructura en enrejado o malla. Dentro de estas esférulas quedan
atrapadas las células de levaduras como enjauladas. González, Pérez, Manuel, et
al. Producción de etanol y proteínas por una cepa de Saccharomyces Cerevisiae
inmovilizada en Alginato de Calcio. Tecnología Química 23(1):44-53, 2003, Editorial
Universitaria, 2010. ProQuest Ebook Central,
http://ebookcentral.proquest.com/lib/udlasp/detail.action?docID=3186951.
Created from udlasp on 2019-12-23 10:27:30.

Mientras mas grande es conga mas cantidad de enzima se pega cuando se captura inhibe
el sustrato

(i) inmovilización de las células en alginato de calcio (Ca-alg), (ii) encapsulación de las
esferas de Ca-alg conteniendo las células en un monolito de sílica obtenido por la vía sol-
gel y (iii) redisolución del Ca-alg por quelación de Ca con citrato, tornando líquido el
contenido de las macrocavidades dentro del gel. El ión Ca 2/1 y los iones Ca 2+ 2+ , al igual
que otros cationes alcalinotérreos, se une preferentemente a los residuos G del alginato.
Los bloques de residuos G adoptan una conformación helicoidal son coordinados por dos
hélices de polímero, formando un dímero. estructura del gelato puede resultar más o menos
compacta según cual sea la relación Ca 2+ La /G. A medida que ésta aumenta se forman
trímeros, tetrámeros o multímeros con mayor número de polímeros de alginato, pudiendo
llegar a adoptar una conformación helicoidal 3/1, más cerrada.

El primer paso del protocolo de encapsulado consistió en encapsular las células en Ca-alg,
a partir de alginato de sodio (Na-alg, Fluka Bio chemica). Para esto, se hizo gotear una
solución de Na-alg aguja, de flujo concentración de solución definida sobre de Na-alg que
una de colectó de la solución de CaCl 2 se inyecta, CaCl 2 0,1 M, formándose las
concentraciones inmediatamente cápsulas esféricas de Ca-alg. El tamaño de éstas depende
de diversos factores: diámetro de la de alginato y de empleadas, el tiempo de contacto de la
gota del polímero con la solución de CaCl 2 Ca 2+ y la viscosidad de la solución o suspensión
celular en Na-alg.

La formación de Ca-alg es un proceso complejo, que ocurre en varias etapas. Cuando la

gota de Na-alg toma contacto con los cationes Ca 2+ , se forma una capa de gel en la
superficie y posteriormente, a medida que el calcio difunde hacia el interior, va aumentando
el espesor de la película de gelato y disminuyendo el espacio líquido en el interior de la
esfera. Dependiendo de las concentraciones de las especies involucradas, en el término de
minutos o pocas horas, todo el volumen de la esfera está ocupado por el gelato.

Por inyección continua de Na-alg en la solución de CaCl 2 se pueden obtener fibras de

Caalg. También en este caso se puede ajustar el diámetro de la fibra variando el tamaño de
la aguja y/o regulando la velocidad de inyección de la suspensión celular

En este esquema, el gel se forma cuando la conectividad entre unidades produce una trama
elástica y con alta viscosidad, que no fluye. Uno de gelificación, t g los parámetros de síntesis
que incide sustancialmente sobre el tiempo de , es el pH. En líneas generales, se busca que
la reacción sol-gel proceda con la rapidez suficiente para que el contacto del sistema
biológico con precursores que puedan resultar nocivos sea breve, reduciendo al mínimo el
tiempo de hambreo de las células. Sin embargo, la velocidad de gelificación no puede ser
excesivamente rápida para permitir la incorporación de las células pre-inmovilizadas en
alginato en el material final. Por lo tanto, el pH de trabajo resulta entonces de un compromiso
entre estos factores y del rango de tolerancia de la cepa encapsulada.