CINÉTICA ENZIMÁTICA

Sara Zarate. sarazarate@javeriana.edu.co Cristian Barrero. c-rubiano@javeriana.edu.co Natalia

Corredor. corredor-natalia@javeriana.edu.co Joshua Rua. rua_joshuaa@javeriana.edu.co

RESUMEN

En este informe se busca contemplar los diferentes velocidades que una enzima puede tomar dependiendo
la forma con la cual se esté activando. Para esto utilizamos la enzima de las raices chinas analizando su
actividad a lo largo del tiempo en diferentes ambientes a diferentes tiempos para lo cual se utilizó un baño
Maria para activar la enzima y un espectrómetro para medir la absorbancia concluyendo que la enzima
que se sometió a baño maría tuvo un actuar mucho mayor que la que fue expuesta al ambiente normal..
Palabras clave: Baño Maria, Espectrómetro,Absorbancia.

Kinetic enzyme
ABSTRACT

This report seeks to contemplate the different speeds that an enzyme can take depending on the way in
which it is being activated. For this we use the enzyme of the Chinese roots analyzing its activity over time
in different environments at different times for which a water bath was used to activate the enzyme and a
spectrometer to measure the absorbance concluding that the enzyme that underwent Mary's bath had a
much greater performance than what was exposed to the normal environment.
Keywords: Water bath, Spectrometer, Absorbance.

1
Las enzimas son proteínas que tienen la capacidad 5)El compuesto homogéneo fue introducido en un
de acelerar las reacciones químicas sin modificar la tubo falcon.
constante de equilibrio del sistema, siendo una de 6)Se llevó el tubo Falcón a la centrifugadora
sus características más importantes y notables poniéndola a centrifugar
catalizar reacciones de diferente naturaleza en los 7)Los tubos fueron retirados después de algún
seres vivos, a una determinada velocidad, en un tiempo logrando observar que el sustrato fue
medio cuya composición, temperatura, fuerza iónica, sedimentado dejando un líquido con la enzima pura.
constante dieléctrica, pH, etc, son prácticamente El sedimento fue desechado dejando solamente la
constantes. enzima. La enzima fue dividida en 1a y 1b
Los procesos metabólicos que ocurren en una 8) Se midió la absorbancia con el espectrómetro.
célula son catalizados por enzimas, por lo cual, el 9) Al observar que la absorbancia es mucho mayor
estudio de los procesos y mecanismos de estas a 0,1; se realizó una dilución 1/20 (1ml de la enzima
tienen mucha importancia y es necesario conocerlos en 19 ml de Agua).
en distintos casos, como en el diseño de 10) La absorbancia fue menor a 0,1. Se Mantuvo la
medicamentos, producción de enzimas y para el enzima fría utilizando un beaker de 500 ml con agua
entendimiento de estos procesos. 11)Utilizando los tubos de ensayo, fueron agregados
En esta práctica se toma como fuente de la enzima 1 ml de Carbonato y 1ml de la enzima 1a
raices chinas, a las cuales mediante procesos de 12)Utilizando los prisma de espectrómetro, se midió
extracción, se separa la enzima fosfatasa ácida, a la la absorbancia en el espectrómetro.
cual se le observa y evidencia el efecto de distintas 13) Se llevó el resto de la enzima 1a a un baño maría
variables como la temperatura y el tiempo, las cuales durante 5 minutos.
afectan y varían el progreso de la actividad 14) Se repitió este procedimiento desde el punto 11
enzimática, además se obtuvo la curva de progreso hasta tomar 8 datos de absorbancia.
de la reacción. 15) Utilizando la enzima 1b y tubos de ensayo, se
Las fosfatasas ácidas son enzimas ampliamente agregaron 1 ml de citrato y 1 ml de enzima 1b la cual
distribuidas en la naturaleza y tienen la propiedad de estará al clima.
hidrolizar fosfo monoésteres a pH 5,0, liberando 16) Utilizando los prismas de espectrómetro, se
como productos de la reacción un alcohol y fosfato midió la absorbancia.
inorgánico, estas enzimas tienen elevada afinidad 17) Se repitió este procedimiento desde el punto 15
por el sustrato p-nitrofenil fosfato. con la enzima 1b hasta obtener 8 datos.
Materiales:
Raices Chinas Citrato
Tubo Tiempo Abs Abs Abs
Carbonato Agua Común
(min) Ambien 50 c 50c
te 0.1mM 1mM
3 Beakers de 100 ml 1 Beaker de 500 ml
1 Mortero con Pistilo 1 Gaza
1 0 0.082 0.158 0.192
1 Embudo 1 Pipeta
1 Pipeteador 1 Micropipeteador 2 5 0.054 0.180 0.224
Puntas para micropipeta Tubos Falcon
Papel aluminio Prismas para Espectrómetros 3 10 0.177 0.251 0.268
tubos de ensayo
4 15 0.200 0.271 0.298
1 Balanza analitica 1 Centrifugadora
1 Espectrómetro 5 20 0.233 0.372 0.390

1) Se pesaron 30 g de raíces chinas utilizando el 6 25 0.204 0.392 0.333

papel aluminio en la balanza analitica.
2) Fueron colocadas las raices chinas en el mortero 7 30 0.278 0.340 0.349
con 5 ml de citrato, procediendo a macerar hasta que
se pudo observar una mezcla homogénea. 8 35 0.242 0.332 0.355
3)Fueron agregados otros 5 ml de citrato.
4)Utilizando la gaza y el embudo, se depositó en un
Beaker de 100ml

2
Tabla 1. Datos de absorbancia. Esta tabla sirve para 1. 0.192/0,0049= 39.183
observar de una manera ordenada los resultados 2. 0.224/0,0049= 45.714
obtenidos al variar la temperatura y concentración. 3. 0.268/0,0049= 59.694
4. 0.298/0,0049= 60.816
5. 0.390/0,0049= 79.591
6. 0.333/0,0049= 67.96
7. 0.349/0,0049= 71.224
8. 0.355/0,0049= 72.449

Gráfica 1. Absorbancia vs tiempo. En esta gráfica la

información está ordenada en una gráfica lineal para
visualizar la acción enzimática en cada uno de los
casos.

Las Ecuaciones de la recta de los tres casos:

-Ambiente: y = 0,0056 x + 0,0857
-0.1mM: y = 0,0061 x + 0,1811 Gráfica 2. Concentración y tiempo. En esta gráfica
-1mM: y = 0,0049 x + 0,2156 ordenamos las concentraciones halladas en el eje x,
A partir de estas ecuaciones obtenemos la y así ser más fácil la visualización y la comparación
pendiente, con este dato y la absorbancia hallamos con la Gráfica 1.
la concentración y así poder realizar la respectiva
gráfica. Con respecto a la actividad enzimática vista,
(1) podemos ver el efecto que pueden tener diversos
factores externos como la temperatura, el pH, el
A partir de la ecuación anterior (Ley de Lambert-
tiempo o la concentración del sustrato, producto o de
Beer) podemos llegar a la siguiente ecuación.
la enzima; estos pueden ser tanto positivos como
A/p=C
negativos.
-Ambiente concentraciones:
En el experimento los factores trabajados para poder
1. 0.082/0.0056= 14.643
obtener los parámetros cinéticos necesarios para la
2. 0.054/0.0056= 9.643
curva fueron la temperatura y el tiempo, tanto la
3. 0.177/0.0056= 31.607
concentración de sustrato y enzima como el pH se
4. 0.200/0.0056= 35.714
mantuvieron constantes, manteniendo un control por
5. 0.233/0.0056= 41.607
medio de su absorbancia; por lo tanto, en la curva se
6. 0.204/0.0056= 36.428
ve como la actividad de la enzima va aumentando
7. 0.278/0.0056= 49.643
con respecto al tiempo que se mantuvo en el baño
8. 0.242/0.0056= 43.214
maria.
-0.1mM
Sin embargo, la más agresiva fue la de mayor
1. 0.158/0,0061= 25.9
concentración y la más desordenada la de
2. 0.180/0,0061=29.51
temperatura ambiente.
3. 0.251/0,0061= 41.147
Además a través de las dos gráficas se puede
4. 0.271/0,0061= 44.426
evidenciar que la absorbancia y la concentración son
5. 0.372/0,0061= 60.983
directamente proporcionales, pues en las dos
6. 0.392/0,0061= 64.262
gráficas se puede ver que estos dos ejes crecen.
7. 0.340/0,0061= 55.737
8. 0.332/0,0061= 54.426
3. CONCLUSIÓN
-1mM

3
Hay que tener presente que factores externos nos
pueden afectar en diversas medidas a la actividad
enzimática, como lo pudimos observar al modificar
la concentración del sustrato y la temperatura de su
actividad en el baño maria.
Se observa un crecimiento progresivo debido a la
interacción entre la enzima y el sustrato, y un
crecimiento del producto final del complejo formado.
Teniendo en claro que condiciones y factores
afectan a la actividad enzimática podemos
establecer un momento óptimo donde su interacción
(como se ve en la gráficas), alcance su velocidad
máxima.

4. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

Ecuaciones:
(1) Ley de Lambert-Beer