CÓDIGO: P-QB-GU-10.002.

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OBJETIVO

Identificación y clasificación de carbohidratos, por medio de reacciones químicas

específicas.

ALCANCE

El estudiante empezará con el conocimiento de las pruebas de identificación de

carbohidratos y al finalizar la práctica estará en la capacidad de reconocer
diferentes familias de carbohidratos por la utilización de dichas pruebas.

GENERALIDADES

Los carbohidratos son aldehídos o cetonas polihidroxílicos o sustancias que al

hidrolizarse dan estos compuestos; los carbohidratos incluyen a los azúcares,
almidones, celulosa y otras sustancias encontradas en raíces, tallos y hojas de
todas las plantas. Estos compuestos que se hallan contenidos en los alimentos
son una fuente de energía importante para los animales y humanos. Entre los
muchos productos basados en los carbohidratos están: el papel, el rayón, algodón,
dulces.

Los carbohidratos se subdividen en tres clases: monosacáridos, oligosacáridos

(del griego oligos, pocos) y polisacáridos. La primera de ellas implica todos los
azúcares que contienen una sola unidad de carbohidratos; los monosacáridos no
pueden dar carbohidratos más simples por hidrólisis. Aunque los monosacáridos
pueden tener como mínimo tres átomos de carbono, las estructuras que cuentan
con cinco y seis carbonos se denominan pentosas y hexosas, respectivamente y
son las más numerosas e importantes. Si el azúcar contiene el grupo aldehído, ya
sea libre o combinado en forma hemiacetálica o acetálica, se le conoce como
aldosa, mientras que si contiene el grupo cetona se le llama cetosa.

Los oligosacáridos contienen un número relativamente pequeño de unidades

monosacáridos unidas mediante enlaces acetálicos, los cuales se denominan
uniones glicosídicas, en la química de los carbohidratos. Dichas uniones se
encuentran entre el aldehído o cetona de un monosacárido y el grupo hidróxilo de
otro. La hidrólisis total de la unión glicosídica produce los respectivos
monosacáridos. Dos unidades de monosacáridos se combinan para formar un
disacárido, tres para un trisacárido y así sucesivamente.

Los polisacáridos contienen de cientos a miles de unidades de monosacáridos

unidos por una serie de enlaces glicosídicos. Estas moléculas constituyen un
ejemplo de polímeros que se encuentran en la naturaleza, otros son las proteínas
y los ácidos nucleicos.
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EQUIPOS Y REACTIVOS

 6 Tubos de ensayo
 1 pipeta
 1 pinza para tubos de ensayo
 1 baño maría
 1 soporte para tubos de ensayo
 1 mechero aro y rejilla
 Glucosa 1% NaOH 10%; Sacarosa 1%; CuSO4 1%; Xilosa 1%; Ácido
Acético; Arabinosa 1%; Anilina; Fructosa 1%; HCl 10%; Almidón; solución
problema de un carbohidrato; Maltosa 1%; Lactosa 1%; Glucosa 5%; Ácido
Sulfúrico concentrado.
 Reactivo de Molish
 Reactivo de Barfoed
 Reactivo de Seliwanoff
 Solución de Lugol

PROCEDIMIENTO

Para diferenciar mejor los resultados que se obtienen en cada prueba es

conveniente que se desarrolle paralelamente con las demás muestras de
carbohidratos que se necesitan. Este procedimiento le ahorra tiempo y la permite
visualizar mejor y comparar cuándo la prueba es positiva o negativa.

Reactivo de Molish

El Ácido Sulfúrico concentrado hidroliza los enlaces glicosídicos para dar

monosacáridos que pueden ser luego deshidratados dando furfural y sus
derivados. Estos productos se combinan luego con Alfa-Naftol originando un
complejo púrpura.
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En un tubo de ensayo adicione 1 ml de Glucosa y en otro tubo 1 ml de solución de

otro carbohidrato y en un tercer tubo 1 ml de muestra problema. Agregue a cada
uno una o dos gotas del reactivo de Molish. Agítelos bien. Incline cada tubo y por
las paredes deje caer lentamente 1 ml de Ácido Sulfúrico concentrado, de tal
manera que forme una capa bien definida en la interface (no agite). La prueba es
positiva cuando aparece una coloración violeta en la interfase.

Prueba de la Anilina

Cuando se calientan pentosas con ácido se forma furfural que se condensa con la
Anilina para dar coloración rojo cereza. El calentamiento prolongado de algunas
hexosas produce Hidroximetil furfural que también reacciona con Anilina, dando
complejos coloreados.

 En un tubo de ensayo vierta 1 ml de solución de Xilosa, en otro tubo 1 ml de

solución de Arabinosa y en otro 1 ml de la solución de muestra problema.
Agregue a cada tubo 1 ml de Ácido Acético y 2 gotas de Anilina. Caliente
luego hasta que aparezca un color rojo cereza que es la prueba positiva.
Compare los resultados.

Prueba de Seliwanoff

Prueba positiva para carbohidratos que tengan un grupo cetónico. Las cetosas se
deshidratan más rápidamente que las aldosas dando derivados de furfural que se
condensan con Resorcinol para formar un complejo rojo. Hay que evitar un
calentamiento prolongado de la muestra.

 En tres tubos de ensayo vierta en cada uno 0.5 ml del reactivo de

Seliwanoff. Agregue al primero 5 gotas de Fructosa; al segundo 5 gotas de
Glucosa y al tercero 5 gotas de la muestra problema. Mézclelos bien y
colóquelos en un baño maría de agua hirviendo por 3-4 minutos. Observe la
formación del precipitado rojizo, como prueba positiva.
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Prueba de Barfoed

Prueba que distingue monosacáridos de disacáridos comparando las velocidades

de reacción.

El reactivo de Barfoed es débilmente ácido y solamente puede ser reducido por

monosacáridos. Si se deja hervir por largo tiempo, existe la posibilidad de
hidrolizar disacáridos dando así reacciones falsamente positivas. El precipitado de
óxido cuproso es menos denso y se recomienda dejar el tubo hasta que el
precipitado sedimente. El color del óxido cuproso tiende a rojo ladrillo.

 En tres tubos de ensayo vierta 1 ml del reactivo de Barfoed. Agregue al

primero 0.5 ml de Glucosa, al segundo 0.5 ml de Maltosa y al tercero 0.5 ml
de muestra problema. Mézclelos bien y colóquelos en un baño de agua
hirviendo por 5-6 minutos. Pase luego los tubos a un baño de agua a
temperatura ambiente. Observe el precipitado rojo.

Prueba para azúcares reductores

Esta prueba es positiva para carbohidratos con grupos aldehídos y alfa

hidroxicetonas libres, que tienen propiedades reductoras en soluciones alcalinas.
El ión Cúprico se reduce a Óxido Cuproso de color café rojizo.

Prueba de Trommer

En tres tubos de ensayo vierta 1 ml de solución de NaOH al 10% luego agregue al

primer tubo 1 ml de solución de Glucosa, al segundo 1 ml de solución de Sacarosa
y el tercero 1 ml de solución de muestra problema. Agítelos. Añada 0.5 ml de
Sulfato de Cobre al 1%. Caliente en baño maría. Observe los resultados.

Prueba de Fehling

En tres tubos de ensayo vierta 0.5 ml de solución de Fehling A y 0.5 ml de

solución de Fehling B respectivamente. Agítelos bien asta obtener una solución
homogénea. Caliente a ebullición en un baño maría. Añada luego al primero 0.5 ml
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de Fructosa, al segundo 0.5 ml de Lactosa y al tercero 0.5 ml de la muestra

problema. Agite. Caliente nuevamente durante 2-3 minutos. Observe los
resultados.

Hidrólisis de la Sacarosa

Cuando la sacarosa se hidroliza por medio de soluciones ácidas o por la enzima

invertasa se produce igual cantidad de D (+) Glucosa y D (-) Fructosa.

 En tres tubos de ensayo que contengan 1 ml de solución de Sacarosa al

5%, se añade al primero 1 ml de Agua, al segundo 1 ml de Ácido
Clorhídrico al 10% y al tercero 1 ml de Hidróxido de Sodio al 10%. Agítelos.
Se calientan en un baño maría durante 5 minutos. Mientras calienta, en tres
tubos de ensayo vierta 0.5 ml de solución Fehling A y 0.5 ml de Fehling B
respectivamente. Agítelos, hasta obtener las soluciones homogéneas.
Luego agregue a un tubo cinco gotas de la solución de Sacarosa con ácido
y al otro agregue cinco gotas de Sacarosa en medio básico. Agítelos y
caliente de nuevo en baño maría durante 1 minuto. Observe cual de ellos
da la prueba positiva de la oxidación.

HIDRÓLISIS DE LA SACAROSA
NaOH HCl Agua

Prueba del Almidón

Prepare una solución de Almidón: 2 g de Almidón en 10 ml de agua y agregando

esta mezcla en 200 ml de agua en ebullición.

Prueba de Yodo

Vierta 3 ml de solución de Almidón en un tubo de ensayo. Agregue 2 gotas de

solución de Yodo en Yoduro de Potasio de color rojizo. Se produce luego una
coloración azul violácea. Caliente el tubo a ebullición y observe que el color
desaparece. Luego enfríe nuevamente con un baño de agua de la llave y el color
aparecerá de nuevo. Esto se debe a la estructura helicoidal del polisacárido que
se desordena por el calentamiento y se reordena al enfriase.
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Hidrólisis del Almidón

A 10 ml de solución de Almidón se agregan 0.6 ml de Ácido Clorhídrico

concentrado. Agite. Tome 1 ml y agregue 1 gota de solución de Yodo. Note el
color. Al resto de la solución de Almidón caliéntela a ebullición y a intervalos
sucesivos de 3 minutos se saca 1 ml de la solución y se le agrega 1 gota de
solución de Yodo. Repita el procedimiento hasta la desaparición del color.
Compare los colores de las soluciones.

Con el Ácido Clorhídrico se facilita la ruptura de los enlaces glicosídicos del

polímero, para formar moléculas más pequeñas de carbohidrato que no reacciona
con el Yodo.

INFORME

 Complete el siguiente cuadro indicando con un (+) si la prueba fue positiva y

(-) si fue negativa:

REACTIVOS
MOLISH ANILINA SELIWANOFF BARFOED TROMMER FEHLING

CARBOHIDRATOS

MUESTRA
PROBLEMA

GLUCOSA

XILOSA

ARABINOSA

FRUCTOSA

MALTOSA

SACAROSA

LACTOSA
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PREGUNTAS

1. ¿Por qué los carbohidratos son ópticamente activos? ¿Cómo puede

predecir este hecho?

2. ¿Por qué la Maltosa y la Lactosa reaccionan con el reactivo de Tollens

mientras que la Sacarosa no?

3. ¿Qué es Glucógeno? ¿Para qué sirve? ¿Dónde se encuentra?

4. ¿A qué se le llama azúcar invertido y por qué?

5. Nombre otros carbohidratos de importancia agrícola

BIBLIOGRAFÍA

-BOHINSKI. R.C. Bioquímica. Fondo Educativo Interamericano. S.A. 1978.

-PASTO, D.J. Y C.R. JOHNSON. Determinación de Estructuras Orgánicas.

Reverté. 1977.

-PINE, S.: HENDRICKSON, J.B. Química Orgánica. McGraw-Hill. 1982

Manuel E. Palomino R. Adriana Valencia C. Carmen Elena

ELABORÓ: REVISÓ: APROBÓ:
Carmen E. Mier B. Johannes Delgado O. Mier Barona
Auxiliares de Coordinadora de
Profesores Asociados
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