ANÁLISIS DE EFECTIVIDAD

Inoculación e incubación de caldo Letheen para

pruebas
Procedimiento

1. Preparar el caldo según las instrucciones dadas en el manual “Letheen

Caldo Britania”.
2. Para su almacenamiento se necesitará una temperatura entre 2 - 8 oC.

Contaminación del caldo Letheen para pruebas TC

(Aerobios Mesófilos Totales)
Procedimiento

1. Tomar una muestra con el hisopo Q-Swab sobre una superficie

seleccionada.
2. Agregar 10 ml de Caldo Letheen dentro de una funda esterilizada
(Stomacher).
3. Colocar el hisopo del paso 1 y sellar herméticamente la funda. Puede
agregar más de 1 hisopo con muestra a la funda. Por cada hisopo
adicional, agregar 10 ml de caldo Letheen.
4. LLevar la funda a incubar por 24 o 48 horas a 37 ± 2 OC.
5. Se procede a realizar el cultivo en placas compact dry TC según el
manual “USO E INTERPRETACIÓN DE PLACAS COMPACT DRY”.

Contaminación de la superficie con Caldo Letheen de

concentración conocida para prueba TC (Aerobios
Mesófilos Totales)
1. Remojar brevemente un hisopo esteril Q-Swab en la muestra de caldo
Letheen contaminada en el procedimiento anterior.
2. Sobre un área seleccionada, frotar el hisopo o los hisopos hasta cubrir
toda la superficie.

Limpieza y desinfección de la superficie contaminada

1. Limpiar la superficie contaminada con el producto detergente de

estudio.
2. Desinfectar la superficie limpia.
3. Tomar muestra con el hisopo Q-Swab esteril y llevar a laboratorio para
el correspondiente pre-enrriquecimiento de la muestra por 24 o 48
horas a 37 ± 2 OC.
4. Realizar el cultivo en placa COMPACT DRY TC según el manual “USO E
INTERPRETACIÓN DE PLACAS COMPACT DRY”.
6. Verificar la disminución en la carga bacteriana.
 B0218605 B0218606

Letheen Caldo
Uso Almacenamiento
Medio de cultivo utilizado para determinar el coeficiente de fenol Medio de cultivo deshidratado a 10-35 ºC.
en compuestos catiónicos. Medio de cultivo preparado a 2-8 ºC.
Es recomendado en Official Methods of Analysis de la Association
of Official Analytical Chemists (AOAC) para el análisis de muestras Procedimiento
conteniendo desinfectantes catiónicos. Siembra
Consultar en bibliografía de referencia la metodología adecuada
Fundamento según el material en estudio.
La peptona, el extracto de carne y la lecitina de soya, aportan los
nutrientes necesarios para el adecuado desarrollo bacteriano. El Incubación
cloruro de sodio mantiene el balance osmótico. Consultar en bibliografía de referencia la metodología adecuada
Este medio de cultivo, tiene la capacidad para neutralizar desin- según el material en estudio.
fectantes, debido a la presencia de lecitina de soya, que además
de ser una fuente nutritiva, neutraliza compuestos de amonio cua- Interpretación de los resultados
ternario. El crecimiento microbiano se observa por la presencia de turbidez.
El agregado de polisorbato 80 (Tween 80), es útil para neutralizar
compuestos tales como fenol, formalina, hexaclorofeno, y la combi- Control de Calidad
nación de la lecitina con el Tween, permiten neutralizar etanol.
Microorganismos Crecimiento
Contenido y composición
Código B0218605: envase x 100 g. Escherichia coli Satisfactorio
Código B0218606: envase x 500 g. ATCC 25922
Escherichia coli Satisfactorio
FÓRMULA (en gramos por litro) ATCC 8739
Peptona de carne......................................................................................................10.0. Salmonella typhimurium Satisfactorio
Extracto de carne...................................................................................................... 5.0. ATCC 14028
Lecitina de soJa................................................................................................................ 0.7. Pseudomonas aeruginosa Satisfactorio
Cloruro de sodio.......................................................................................................... 5.0. ATCC 9027
pH final: 7.0 ± 0.2 Staphylococcus aureus Satisfactorio
ATCC 6538
Instrucciones
Suspender 20,7 g del polvo en 1 litro de agua purificada. Agregar 5
ml de polisorbato 80 (Tween 80). CONTROL DE ESTERILIDAD RESULTADO
Calentar agitando frecuentemente y llevar a ebullición para lograr Medio sin inocular Sin cambios
disolución completa. Distribuir en recipientes adecuados. Esterilizar
en autoclave a 121 ºC durante 15 minutos. Limitaciones
El producto adquirido no contiene polisorbato 80 y debe ser in-
Características del producto corporado por el usuario tal como se detalla en las instrucciones.
Medio de cultivo deshidratado: color beige, homogéneo, libre des- Si no se agrega el polisorbato 80 el aspecto del medio de cultivo
lizamiento. preparado es turbio.
Medio de cultivo preparado: color ámbar, aspecto límpido-ligera-
mente opalescente.

HOJA 1 DE 2
Letheen Caldo

Materiales necesarios no provistos
Equipos y material de laboratorio, microorganismos para control de
calidad, reactivos y medios de cultivo adicionales según requeri-
miento.
Precauciones
- Solamente para uso diagnóstico in vitro. Uso profesional exclu-
sivo.
- No utilizar el producto si al recibirlo su envase está abierto o da-
ñado.
- No utilizar el producto si existen signos de contaminación o dete-
rioro, así como tampoco si ha expirado su fecha de vencimiento.
- Utilizar guantes y ropa protectora cuando se manipula el produc-
to.
- Considerar las muestras como potencialmente infecciosas y ma-
nipularlas apropiadamente siguiendo las normas de bioseguridad
establecidas por el laboratorio.
- Las características del producto pueden alterarse si no se conser-
va apropiadamente.
- Descartar el producto que no ha sido utilizado y los desechos del
mismo según reglamentaciones vigentes.
Referencias
- Brummer. 1976. Appl. Environ. Microbiol. 32:80.
- American Society for Testing Materials, 1991. Standard test me-
thod for preservatives in water-containing cosmetics,
E 640-78. Annual Book of ASTM Standards, Philadelphia, PA.
-Association of Official Analytical Chemists. 1995. Official methods
of analysis, 16th edition. Association of Official Analytical Chemists,
Washington, D.C.
- Horwitz (ed.). 2000. Official methods of analysis of AOAC Inter-
national, 17th edition, volume 1. AOAC International, Gaithersburg,
Md.
Indicaciones al consumidor
Utilizar el producto hasta su fecha de vencimiento.
Conservar el producto según las indicaciones del rótulo.

11/2015 - REV .01

SÍMBOLOS UTILIZADOS

DIAGNÓSTICO CÓDIGO Nº ELABORADOR ESTÉRIL Nº DE LOTE Nº FECHA DE LÍMITE DE INSTRUCCIONES HOJA 2 DE 2

IN VITRO DETERMINACIÓNES VENCIMIENTO TEMPERATURA DE USO

LABORATORIOS BRITANIA S.A.

LOS PATOS 2175 (C1283ABI)
CABA - ARGENTINA
TEL/FAX 54 11 4306 0041
Q-SwabTM
Dispositivo de recolección y suministro de muestras
Número de pieza: QS1000 (agua peptonada bufferada) y QS1200 (Letheen)
CANT.: 250 dispositivos
Descripción / Aplicaciones:
Hygiena Q-Swab es un dispositivo todo en uno que
contiene un medio para las muestras de la superficie
medioambiental. Cada dispositivo está listo para usarse y
puede ser usado con placas de agar convencionales o
sistemas de medios listos para las muestras.
Instrucciones:
Mire la demostración instructiva en
www.youtube.com/HygienaTV
1. Deje aclimatar Q-Swab a temperatura ambiente
(21 – 25 °C) antes de usarlo. Puede usar Q-Swab
seco (como está) o prehumedecido. Para usar
Q-Swab prehumedecido, sostenga firmemente el tubo
con el hisopo y rompa el dispositivo Snap-Valve con el
dedo pulgar e índice inclinando el bulbo hacia adelante
y atrás. Apriete la punta del hisopo dos veces para
eliminar el líquido hacia el tubo, lo que humedecerá la
punta del hisopo.
2. Sostenga firmemente el tubo, gire y retire el hisopo del
tubo.
3. Pase el hisopo por un área estándar de 10 x 10 cm
(4 x 4 pulgadas) para una superficie plana típica.
En superficies irregulares, asegúrese de que la técnica
de hisopado siga siendo uniforme para cada prueba y
pase el hisopo por un área lo suficientemente grande
para recolectar una muestra representativa.
Consejos importantes sobre la técnica de hisopado:
• No toque el hisopo o el interior del dispositivo
para muestras con los dedos.
• Gire el hisopo mientras toma la muestra a fin de
recolectar la mayor cantidad posible de muestra
con la punta del hisopo.
• Ejerza suficiente presión para doblar el mango
del hisopo.
• Pase el hisopo en forma entrecruzada, es decir,
de manera vertical, horizontal y diagonal en
ambas direcciones.
• Consulte el vídeo con las instrucciones para ver
una demostración: www.youtube.com/HygienaTV
4. Vuelva a colocar el hisopo en el tubo. Si Q-Swab se
usó seco, sostenga firmemente el tubo con el hisopo y
rompa el dispositivo Snap-Valve con el dedo pulgar e
índice inclinando el bulbo hacia adelante y atrás.
Apriete la punta del hisopo dos veces para eliminar el
líquido hacia el tubo.
5. Q-Swab ahora puede ser enviado al laboratorio para la
inoculación. Agite el dispositivo por 10 segundos para
mezclar la muestra.
6. Quite el hisopo del tubo y vierta el contenido sobre un
Manche
medio de gel seco o bien manche placas de agar para
cultivos, según sea necesario. Proceda según las
instrucciones del fabricante.
Almacenamiento y vida útil:
QS1000: 18 meses a 2 – 25 °C
QS1200: 18 meses a 2 – 25 °C
Consulte la etiqueta del dispositivo para ver la fecha de
vencimiento.
Eliminación:
Los dispositivos usados que confirman resultados positivos
de bacterias pueden constituir un riesgo biológico y se
deben eliminar de manera segura, de conformidad con las
buenas prácticas de laboratorio y las normas de salud y
seguridad. Desinféctelos antes de su eliminación.
Los dispositivos Q-Swab se pueden desinfectar mediante
autoclave o bien sumergiéndolos en una solución con 20%
de lejía durante 1 hora.
Seguridad y precauciones:
Los componentes de Q-Swab no presentan ningún riesgo
para la salud cuando los utiliza de acuerdo con los
procedimientos y las buenas prácticas de laboratorio
que se indican en estas instrucciones. Los dispositivos
están diseñados para un solo uso.
• No utilice los dispositivos después de su fecha de
vencimiento.
• La toma de muestras debe realizarse de manera
aséptica para evitar la contaminación cruzada.
Para obtener más instrucciones sobre seguridad, consulte
la hoja de datos de seguridad de Q-Swab (SDS).
Responsabilidad de Hygiena:
Al igual que con cualquier medio de cultivo, los resultados de
Q-Swab no constituyen una garantía de calidad de los
productos o procesos de alimentos y bebidas que se analizan
con estos dispositivos. Hygiena no se responsabilizará ante
el usuario o terceros por cualquier tipo de pérdida o daño, ya
sea directo o indirecto, inherente o derivado del uso de estos
dispositivos. Si se demostrara que este dispositivo presenta
algún tipo de defecto, la única obligación de Hygiena será el
reemplazo del producto o, a su propio criterio, el reintegro del
precio de compra. Informe a Hygiena de inmediato dentro de
los 5 días de haber detectado cualquier supuesto defecto y
devuelva el producto a Hygiena. Llame a Atención al cliente
para obtener un número de autorización para la devolución
de mercaderías.
Información de contacto:
Si desea obtener más información, visítenos en
www.hygiena.com o comuníquese con nosotros en:
Vierta
Hygiena — América Hygiena — Internacional
Teléfono: +1.805.388.8007 Teléfono: +44 (0)1923 818821
Fax: +1.805.388.5531 Fax: +44 (0)1923 818825
Correo electrónico: Correo electrónico:
info@hygiena.com enquiries@hygiena.com
INS0041 ES JUN 2019 Rev. G
5.5 PROCEDIMIENTO PARA EL USO E 3. Colocar nuevamente la cubierta sobre
INTERPRETACIÓN DE PLACAS COMPACT DRY. la placa, girándola para cerrar.

Introducción.
El recuento en placa permite determinar el
número de microorganismos presentes en
una muestra, en base a que se desarrollen en
el medio de cultivo sólido, formando
colonias. Por lo tanto, por este método se
determinan sólo las células microbianas
VIABLES en las condiciones que se trabaja
(nutrientes, atmósfera y temperatura). 4. Siga las instrucciones de incubación
Como las colonias pueden originarse tanto interpretación para cada una de
de una célula como de un grupo de células, nuestras diferentes placas:
se utiliza el término: UNIDADES
FORMADORAS DE COLONIAS (UFC). Compact Dry TC para cuenta total

Materiales. Temperatura de incubación: 37 +/-2°C

Tiempo de incubación: 48 hrs.
 Placas Compact Dry. Interpretación de resultados: Casi todas las
 Estufa de incubación. colonias que crecen son de color rojo, junto con
las de otros colores arrojan el recuento total.
PROCEDIMIENTO
Una vez que se tiene la muestra o la dilución
deseada, al igual que la placa Compact Dry
seleccionada, proseguimos a realizar los Colonia
siguientes pasos:

1. Escribir sobre la parte inferior central

de la placa la información para
distinguirla. (por ejemplo: # de
muestra, Lugar de recolección, etc…)
Compact Dry EC para E. coli y coliformes

Temperatura de incubación: 37 +/- 2 °C

2. Abrir la placa Compact Dry depositar
1mL. de la muestra sobre la parte
central del compact dry
Tiempo de incubación: 24 hrs.
Interpretación de resultados: Los coliformes se
observan como colonias color rojo o magenta,
mientras que las colonias de E. coli, se observan
en color azul. Sumando las colonias rojas y
azules resulta la cifra total del grupo coliforme.

E.coli
+ =Coliformes totales
Coliforme

7
 Compact Dry YM para levaduras y mohos Tape herméticamente para evitar la pérdida de
Temperatura de incubación: 25 a 30 °C humedad y gire la placa (tapa abajo) para
Tiempo de incubación: 3 a 7 días incubar.
Interpretación de resultados: levaduras en
colonias puntuales azules, hongos desarrollados Temperatura de incubación: 41°+/- 2 °C
en forma radial de diferente pigmentación y Tiempo de incubación: 20–24hrs.
tamaño. Interpretación de resultados: colonias verde
claro a verde malaquita (negruzcas), cambio de
medio de morado a amarillo (alcalinización del
medio) y motilidad de crecimiento.

Levadura Hongo
Motilidad
Compact Dry SA para Staphylococcus aureus
Temperatura de incubación: 37°+/- 2 °C
Tiempo de incubación: 24hrs
Interpretación de resultados: Las colonias
características se observan verde azuladas

Salmonella positivo Salmonella negativo

S. aureus Motilidad, siembra inicial en Nota importante: La presencia de
orilla inferior y posterior otras bacterias del grupo coliforme
extensión del crecimiento al como E. coli genera el cambio de
resto de la placa con vire del color de azul-púrpura a rojo-
medio a amarillo. Presencia púrpura por fermentación de
de colonias verde a verde lactosa y/o sacarosa en el medio;
oscuras. esté vire en el medio NO deberá
considerarse para Salmonella.
Compact Dry SL para Salmonella
Compact Dry LS para Listeria
Pre-incubación: Tomar alícuota de 25gr ó mL de
Temperatura de incubación: 37°+/- 2 °C
muestra y llevar a 225mL de diluyente y
Tiempo de incubación: 24hrs
homogenizar (ver procedimiento 5.4). Incubar
Interpretación de resultados: Las colonias
la muestra de 20-24 horas a 37°C +/- 2 °C.
características se observan en color azul y
Posterior al tiempo de pre-incubación,
azul-claro.
homogenice y tome 0.1mL de alícuota (3 gotas),
siembre sobre una de las orillas del Compact dry
SL (aprox. a 1 cm lejos del borde de la placa). La
muestra se difunde automáticamente. Una vez
realizada la siembra de la muestra, aplique de
0.9mL- 1mL máximo de diluyente estéril (buffer)
en el extremo opuesto de la placa; esté se Listeria
difunde automáticamente sobre el resto de la
superficie de la placa, ver figuras siguientes:
Deje caer Aplique 1mL de
0.1mL de agua estéril
alícuota de (buffer) en el
muestra en extremo frontal
aprox. 1cm dónde se realizó
del borde de la siembra de la
la placa. muestra.

Nota: Evite la siembra al borde de la placa ya que la alícuota de la muestra es pequeña 8

y puede ser absorbida hacia la periferia; y no sobre la superficie de la placa SL.
Expresión de resultados, criterios generales.
Para el caso de bacterias, contar el número de
colonias desarrolladas en la placa, si el número
de colonias se encuentra entre 25 y 250 colonias,
multiplicar la cantidad de colonias por el inverso
de la dilución (10, 100, 1000), y expresar el
resultado como UFC/g ó mL.
En el caso de Hongos y levaduras, si el número
de colonias se encuentra entre 10 a 150 colonias,
multiplicar el número de colonias por el inverso
de la dilución (10, 100, 1000) y expresar el
resultado como UFC/g ó mL.
Cuando esto no se cumple se considera el
resultado obtenido como “VALOR ESTIMADO”
del recuento.
Para el caso de Salmonella se reporta como
crecimiento positivo ó negativo, se sugiere en
caso de presentar crecimiento positivo,
confirmar por medio de ensayos bioquímicos ó
pruebas API.
CONFIABILIDAD DE MINILAB
ESTUDIO DE VALIDACION INDEPENDIENTE DE
LAS PLACAS COMPACT DRY
(JOURNAL OF AOAC INTERNATIONAL Vol. 88, No.6,2005)
El estudio de validación fue conducido por el
Servicio de Salud Publica Nacional, bajo la
responsabilidad de Richard Meldrum y la
dirección de AOAC RI.
El método oficial de referencia realizado fue el
de la AOAC 966.23, exactamente según lo
especificado sin desviaciones ni alteraciones.
Preparación y análisis de las muestras:
A cada muestra se le asigno un código de
identificación, las muestra fueron examinadas
por duplicado usando el procedimiento de
Compact Dry, y el Método Oficial AOAC 966.23,
respectivamente.
Las placas fueron incubadas a 35°C por 48 hrs.,
posteriormente fueron contadas las placas que
contenían entre 30 y 300 UFC.

Resultados
En la siguiente tabla se compara el análisis por
Compact Dry TC y el método Oficial 966.23, los
cuales presentan un rango decimal parecido. La
evaluación en la desviación estándar es similar
en las muestras para ambos métodos.
Se realizaron 5 réplicas de cada análisis.

Tabla Comparativa Compact Dry TC contra

Método AOAC 966.23 en UFC/g

Lote Replicas CFU/g Log 10 CFU/g Log 10

CFU/g CFU/g
1 5
Promedio 11500 4.06 23780 4.37
(104UFC/ ST 2200 0.08 3280 0.06
g) RSDr% 19.1 1.89 13.8 1.38
2 5
Promedio 1616000 6.20 1415000 6.14
(106UFC/ ST 307000 0.09 321000 0.10
g) RSDr% 19.0 1.49 22.7 1.68
3 5
Promedio 13840000 0.12 27250000 0.10
(108UFC/ 0
g) ST 38400000 0.12 27250000 0.10
0
RSDr% 27.7 1.50 23.2 1.22

9
La Desviación Estándar en los 3 diferentes lotes
es similar en ambos métodos. La correlación del
coeficiente en ambos métodos es de 0.9961.

Discusiones:
De acuerdo a los resultados, la gran ventaja del
sistema Compact Dry, es que reduce las horas -
hombre, y es un método económico. En
términos de preparación de la placa, inoculación
y lectura de resultados, el sistema Compact Dry
fue más rápido que la técnica convencional de
vaciado en placa.
La lectura de las placas con el sistema Compact
Dry fue más rápida debido a su indicador
TTC,(Cloruro de tetrazol) ya que el indicador no
es absorbido por las partículas que contenga la
muestra y por lo tanto permite la identificación
rápida de las colonias.

Conclusiones:
Los resultados obtenidos en este estudio
en la comparación del método Compact Dry, vs.
el Método Tradicional de vaciado en placa, para
la estimación de la cuenta total de
microorganismos aerobios, muestra que los dos
métodos son igualmente buenos. Por lo tanto
las placas Compact Dry El Sistema Compact Dry
(elemento fundamental en sistema Minilab)
puede ser una alternativa para realizar un
análisis microbiológico de rutina.

Para el caso de México

La Secretaria de Salud, a través de COFEPRIS
extiende un oficio con número
CAS/DEACIP/07330060063377/2007, donde
exonera al Comapact Dry de registro o permiso
sanitario para el uso y aplicación en la Industria
cosmética, alimenticia y de bebidas.

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