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Fundamento.
A través de un antígeno bacteriana de S. “O” tiphy ajustada al patrón 3 de la escala de
McFarland equivalente a 900 bacterias/mL (valor x 106) con cuatro dosis sucesivas
separadas a intervalos de 0, 4, 8 y 12 días con 0.5, 1.0, 2.0, 3.0 mL, respectivamente, se le
administra a un conejo macho de raza Nueva Zelanda para inmunizarlo, y posteriormente
determinar los títulos correspondientes de anticuerpos producidos que se encuentran en el
suero inmune. La detección de anticuerpos se realiza in vitro al hacer interactuar el suero
(los anticuerpos) obtenido después de la inmunización, con el antígeno de Salmonella en
una placa con pocillos, dando como resultado una aglutinación visible macroscópicamente
por la unión del antígeno particulado con los anticuerpos, comparándolo con un suero
testigo (obtenido previo a la inmunización).
Resultados
# Inyección Día Dosis Vía Fecha Observaciones
1 0 0.5 IM 14-Oct-19 Se administró la dosis correctamente. Horas después el
mL conejo presentó temperatura, un efecto adverso de la
administración del antígeno. Formación de una pequeña
cicatriz por incisión.
2 4 1.0 IM 18-Oct-19 Se administró la dosis correctamente. No se presentaron
mL efectos adversos.
3 8 2.0 IM 22-Oct-19 Se administró la dosis correctamente. No se presentaron
mL efectos adversos.
4 12 3.0 IM 26-Oct-19 Se administró la dosis correctamente. No se presentaron
mL efectos adversos.
Sangrado 11-Nov- El conejo presentaba hematoma en la oreja,
19 probablemente debido a la punción para la obtención de
muestra de sangre el día 0.
Títulos
Aglutinación activa de anticuerpos
producidos después de inmunización
con antígeno de S. “O” tiphy.
Discusión de resultados
Manejo de conejo
Se utilizaron conejos de raza Nueva Zelanda adultos y sanos, por las ventajas que supone
manejarlo en el laboratorio para la producción de anticuerpos. Se trata de utilizar la misma
raza y todos adultos, para que no varíen muchos los resultados obtenidos, así como verificar
que se encuentre en buenas condiciones de salud.
Se suelen utilizar los conejos blancos de Nueva Zelanda, dado que su gran tamaño
garantiza la producción de abundante antisuero, con niveles de anticuerpos suficientes para
análisis posteriores. Otra de las razones es porque poseen grandes vasos en la oreja y
fácilmente apreciables.
Preparación de antígeno
Es de suma importancia que la preparación del antígeno sea bajo condiciones de esterilidad
para evitar la contaminación microbiológica, ya que puede provocar resultados erróneos y
afectar al organismo del conejo. se prepararon de la siguiente manera
tubo 1: tubo 2:
4 ml de solución salina 2 ml de solución salina
Vía de inmunización
Se administraron 0.5 ,1.0, 2.0 y 3.0 mL, teniendo en cuenta el volumen permitido según la
especie seleccionada. Volúmenes de inoculación excesivos pueden llevar a una pérdida de
bienestar de los animales. Es importante también, la utilización de vehículos para la dilución
de las sustancias a administrar que no alteren las propiedades y estabilidad del antígeno a
inocular, además de no ser toxica para el conejo. Aparte de las soluciones isotónicas
acuosas, también podrían utilizarse como vehículos soluciones buffer, suspensiones y
aceites (este último puede tener bajas tasas de absorción por vía intramuscular).
Al administrar por vía intramuscular debe tenerse en cuenta la ubicación por el riesgo de
lastimar nervios o vasos sanguíneos, por lo que debe ser en zona con una masa grande
apropiada.
Presencia de anticuerpos contra S. tiphy
Al poner en contacto el reactivo del antígeno, contra los anticuerpos contenidos en el suero
del conejo, se debe tener cuidado de colocar la gota del reactivo sin tocar la muestra para
no contaminar el gotero, y mezclar con aplicadores para una solución homogénea y que se
presente aglutinación.
Estas pruebas serológicas se basan en el hecho de que los anticuerpos del suero,
producidos al verse expuestos a los antígenos bacterianos, se aglutinan con las bacterias
que cuentan con antígenos homólogos.
La reacción de aglutinación se caracteriza por la interacción entre la reacción de un
antígeno particulado y un anticuerpo soluble
Al haber ausencia de aglutinación en el suero control, suero no inmune o suero negativo
(S1) significa una ausencia de anticuerpos en el suero debido a que el conejo no había
estado expuesto con la bacteria anteriormente.
Al presentarse la aglutinación en todas las diluciones realizadas experimentalmente
equivale a la presencia de anticuerpos contra el antígeno O de S. tiphy debido a la
inmunización realizada.
Conclusión
Se obtuvo el efecto deseado asociado a la sustancia inoculada, por lo que se realizó una
técnica adecuada y exitosa de preparación e inoculación del antígeno. Lo anterior llevó a la
determinación de anticuerpos ante la inmunización con S. “O’ tiphy con títulos ≥ a 1:640
después de una extracción de sangre para el suero problema.
Bibliografía
Bennett, C.W. Clinical Serology, pág. 145, Charles Thomas Co. (1964).
Kindt T., Osborne B., Goldsby R. Kuby Inmunology, WH Freeman, 6th edition, 2006.
ISBN 1429202114
https://www.ins.gov.co/conocenos/sig/SIG/INT-R04.6030-022.pdf