PRÁCTICÁ.

1 MICROSCOPIÁ
DANIELA IBARRA MALDONADO, MISAEL MONDRAGÓN HERNÁNDEZ, MARÍA
FERNANDA RODRIGUEZ BRAVO
División De Ciencias Naturales Y Exactas/Universidad De Guanajuato, Guanajuato, México.
Laboratorio de Microbiología

RESUMEN
En esta sesión antes de realizar la práctica, el profesor nos dio una breve introducción del microscopio;
cuantos tipos hay, para que sirve cada uno, entre otras cosas.

Siendo para la mayoría nuestra primera vez usando el asa bacteriológica y trabajando con bacterias y
hongos nos indicó ciertas medidas de seguridad para mantener la esterilización en nuestra área de
trabajo, así como nos explicó la manera adecuada de manejar el mechero correctamente.

Por último, antes de empezar la práctica nos demostró como hacer un frotis correctamente, como
teñirlo y fijarlo.

Una vez explicado eso, nos pusimos en marcha a realizar la práctica; iniciamos con el hongo por lo que
lo llevamos rápidamente al microscopio para poder observar su morfología, hicimos lo mismo con las
bacterias y con la levadura.

Al momento de estar en el microscopio no tuvimos ninguna complicación, el microscopio estaba en

óptimas condiciones y así es como lo dejamos.

Por último, lavamos nuestros portaobjetos y desechamos los cubreobjetos en el recipiente que se nos
indicó, nos lavamos las manos e hicimos una retroalimentación grupal de la práctica.

RESULTADOS
Imagen 1.- Hongo neurospora crassa a 40x. Se puede
observar partes de emiselio

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Imagen 2.- Ecoli teñido al 40x. Se observan las bacterias
teñidas

Imagen 3.- Ecoli sin teñir al 40x. Se alcanzan a apreciar

las bacterias en forma de burbujas transparentes.

Imagen 4.- Saccharomyces cerevisiae al 40x. se observan

las bacterias teñidas de color azul. En esta imagen
pudimos observar como iban gemando

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OBSERVACIONES:
Características de los cultivos empleados:

Escherichia coli Se apreciaba una capa de células muy tenue y uniforme

Neurospora crassa
Saccharomyses cerevisiae
color blanco. también se veían colonias muy pequeñas.
El medio de cultivo se veía verde donde había mayor
concentración, y en algunas partes gris/café, tenían un
aspecto suave esponjoso tipo moho. Toda la caja
estaba invadida del hongo.
En el medio de cultivo de esta especie se percibían
colonias color blanco saturadas de células.

Al realizar los frotis no se presentó ningún problema, sin embargo, al observar el frotis de E. coli sin
tinción en el microscopio se dificultó ubicar las bacterias, por lo que se cree que al tomar la muestra del
cultivo se tomó una cantidad muy pequeña.

Respecto a los frotis restantes la observación en el microscopio fue sencilla. Sin embargo, en todos los
frotis la identificación y descripción de los organismos de interés se dificultó al no tener un conocimiento
completo de estos.

Es importante mencionar que el color amarillo de algunas de las fotografías pudo ser debido a la
cantidad de luz a la que se ajustó el microscopio.

DISCUSIÓN:
Al realizar la práctica observamos la importancia de llevar a cabo la tinción de las muestras
correctamente, los principales pasos que hay que cuidar el secado de la muestra antes de fijarla al
portaobjetos y los lavados necesarios para evitar residuos de colorantes y tampoco lavar en exceso para
no retirar más colorante del necesario. Aprendimos que es importante utilizar el colorante adecuado
según la naturaleza de la muestra, y en el caso de trabajar con preparaciones en fresco algunas veces es
posible utilizar algún colorante, sin embargo, debemos analizar que no se afecten las características del
espécimen, ni sus funciones.

CONCLUSIÓN.
En esta práctica se aprendió las técnicas para utilizar correctamente el microscopio, ya que es una de las
herramientas más utilizadas en el área microbiológica por no decir la más importante y generalmente
indispensable en un laboratorio a fin al área. El uso adecuado del microscopio es indispensable, por lo
que es necesario saber hacerlo de forma correcta; también necesitamos conocer cada una de sus partes
para así evitar accidentes. Se hizo el frotis de algunas de las muestras proporcionadas en el laboratorio

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para posteriormente analizarlas en el microscopio y poder observar sus diferentes morfologías. Pudimos
notar que la muestra teñido fue más difícil de observar.

CUESTIONARIO.
1. Haga esquemas de las preparaciones observadas con los diferentes objetivos

Muestra: Neurospora crassa. Objetivo 40x

Muestra: Escherichia coli Teñido 40x / sin teñir

Muestra: Saccharomyses cerevisiae

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2. Explique el funcionamiento de cada una de las partes de un microscopio de campo brillante.
Sistema óptico:
 Oculares: Los microscopios monoculares poseen un solo ocular y los binoculares
contienen dos. Poseen lentes convergentes que amplían la imagen virtual creada por el
objetivo. El ocular está formado por un cilindro que se une perfectamente con el tubo,
permitiendo que lleguen los rayos de luz junto a la imagen ampliada del objetivo. El
ocular consta de una lente superior llamado lente ocular y una lente inferior llamada
lente colector.
 Objetivos: Son los encargados de aumentar la imagen real que proviene de la muestra.
La imagen es transmitida hacia el ocular ampliada e invertida. El aumento de los
objetivos varia. Generalmente un microscopio contiene de 3 a 4 objetivos (10x, 40x y
100x).

Sistema de iluminación:

 Lampara: La lámpara utilizada para los microscopios ópticos es halógena y generalmente

son de 12 Voltios, aunque las hay más potentes. Está ubicada en la parte inferior del
microscopio, emitiendo la luz de abajo hacia arriba.
 Condensador: Su ubicación varía de acuerdo con el modelo del microscopio. Consta de
un lente convergente que como su nombre indica condensa los rayos de luz hacia la
muestra.
 Diafragma: El diafragma actúa como un regulador del paso de luz. Se ubica por encima
de la fuente de iluminación y por debajo del condensador. Si se quiere mucha
iluminación se abre y si se necesita poca iluminación se cierra. De esta manera se
controla cuánta luz pasará por el condensador.
 Transformador: Este permite que la lámpara del microscopio sea alimentada con una
fuente de poder. El transformador regula el voltaje que le llegará a la lámpara.

Sistema mecánico:

 El tubo: Es un cilindro hueco de color negro por donde viajan los haces de luz hasta llegar
al ocular.
 El revólver: Es la pieza que soporta a los objetivos, los cuales están sujetos a este por
una rosca y a la vez es la pieza que permite rotar los objetivos. Se mueve de derecha a
izquierda y de izquierda a derecha.
 Tornillo macrométrico: Permite acercar o alejar el objetico de la muestra con
desplazamiento grotesco de la platina de forma vertical.
 Tornillo micrométrico: Permite el desplazamiento extremadamente fino de la platina. El
movimiento es casi imperceptible y puede ser hacia arriba o hacia abajo.
 La platina: Es la parte de colocación de la muestra. Posee un orificio estratégicamente
ubicado para permitir el paso de luz a través de la muestra y el sistema de lentes.
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  El carro: es la pieza que permite que se pueda recorrer toda la preparación. Es
sumamente importante, ya que la mayoría de los análisis requieren la observación de al
menos 100 campos. Permite moverse de izquierda a derecha y viceversa, y de adelante
hacia atrás y viceversa.
 Las pinzas sujetadoras: Estas permiten sujetar y fijar al portaobjeto para que no se ruede
la preparación mientras se mueve el carro para recorrer la muestra. Se encuentra
ubicada sobre la platina.
 El brazo o asa: Es el sitio por donde se debe agarrar el microscopio cuando se va a
trasladar de un lugar a otro. Esta une el tubo a la base.
 La base o pie: Es la pieza que le da estabilidad al microscopio; permite que el microscopio
repose en un lugar específico sin riesgo a que se caiga.

3. ¿Cuáles son las diferencias bajo el microscopio más obvias entre los microorganismos de los tres
tipos observados?

Su morfología principalmente, algunas son esféricas y las otras en forma de bastones, su

tamaño, su movimiento y en algunas su agrupación.

4. Indique que tipo de microscopio se usaría para analizar:

 La pared celular de un hongo: Campo claro
 La pared celular de una bacteria: Campo claro
 La visualización de un ribosoma: De contraste de fases
 La reacción de un antígeno con un anticuerpo: fluorescencia
 La tinción de células con dos o más colorantes fluorescentes: Fluorescencia
 La estructura de una cápside viral: electrónico de barrido
 El nucleoide bacteriano: electrónico de transmisión
 Microorganismos (bacterias) en preparaciones frescas: Campo obscuro
 Esporas bacterianas: óptico

5. En una observación al microscopio de campo brillante, se determino que las medidas del
microorganismo eran de 0,5 μm de diámetro y 2,4 μm de largo, al observarlo con el objetivo de
inmersión. ¿Cómo considera usted que se llegó a está conclusión? Explique su respuesta.

Se llego a esta conclusión ya que con ayuda del micrómetro ocular y de la platina se pueden
determinar las medidas. Se determina cuantas divisiones de ambos micrómetros coinciden, se
grafican los datos con su respectiva tabla y se realizan los cálculos.
100x = 1μm x= división de platina y= división de ocular

REFERENCIAS
 Engelkirk, P., Duben-Engelkirk, J., (2015) Burton´s Microbiology for the Health Sciences (10 ed)
EEUU:Wolters Kluwer, pp15-18, 82
 Eduriromenterobacterias.blogspot.mx/2012/03/practica-no-1-preparacion-filacion-y.hyml
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