ESPECTROFOTOMETRÍA VISIBLE

INDICE

INTRODUCCIÓN ........................................................................................................................ 4

CAPITULO I .............................................................. 5

GENERALIDADES.......................................................... 5

1.1. DEFINICIONES.............................................................................................................. 5

CAPITULO II .............................................................. 8

ESPECTROFOTOMETRÍA .................................................... 8

2.1. DEFINICIÓN ................................................................................................................... 8

2.2. HISTORIA ....................................................................................................................... 8

2.3. EVOLUCIÓN DE LA ESPECTROFOTOMETRÍA................................................... 9

CAPÍTULO III .............................................................. 10

ESPECTROFOTÓMETRO .................................................. 10

3.1. PARTES DE UN ESPECTROFOTÓMETRO .......................................................... 10

3.2. COMPONENTES DE UN ESPECTROFOTÓMETRO ........................................... 11

3.2.1. FUENTE DE LUZ ................................................................................................. 11

3.2.2. MONOCROMADOR ............................................................................................ 11

3.2.3. COMPARTIMIENTO DE MUESTRA ................................................................ 12

3.2.4. DETECTOR ........................................................................................................... 12

3.2.5. FOTODETECTORES .......................................................................................... 12

3.2.6. CELDAS ................................................................................................................ 13

3.3. TIPOS DE ESPECTROFOTÓMETROS .................................................................. 13

3.3.1. ESPECTROFOTÓMETRO DE ABSORCIÓN ATÓMICA ............................. 13

3.3.2. ESPECTROFOTÓMETRO DE ABSORCIÓN MOLECULAR ...................... 13

3.3.3. ESPECTROFOTÓMETRO INFRARROJO ...................................................... 14

3.3.4. ESPECTROFOTÓMETRO UV VISIBLE .......................................................... 14

 CAPÍTULO IV ............................................................. 15

ESPECTROFOTOMETRÍA VISIBLE ........................................... 15

4.1. DEFINICIÓN ................................................................................................................. 15

4.2. ABSORCIÓN DE LA ENERGÍA RADIANTE ......................................................... 15

4.2.1. NATURALEZA ONDA-PARTÍCULA DE LA ENERGÍA RADIANTE .......... 15

4.2.2. EL ESPECTRO ELECTROMAGNÉTICO ........................................................ 16

4.2.3. PROCESO DE ABSORCIÓN.............................................................................. 16

4.2.4. VARIACIÓN DE LA ABSORCIÓN CON LA LONGITUD DE ONDA ........... 18

4.3. ABSORBANCIA Y TRANSMITANCIA .................................................................... 19

4.3.1. LA TRANSMITANCIA (T) ................................................................................... 19

4.3.2. LA ABSORBANCIA (A) ...................................................................................... 20

4.4. ABSORTIVIDAD Y ABSORTIVIDAD MOLAR....................................................... 20

4.4.1. ABSORTIVIDAD .................................................................................................. 20

4.4.2 ABSORTIVIDAD MOLAR .................................................................................. 21

4.5. LEYES DE LA ABSORCIÓN DE LUZ ..................................................................... 21

4.5.1. LEY DE BEER ...................................................................................................... 22

4.5.2. LEY DE LAMBERT.............................................................................................. 22

4.5.3. LEY DE LAMBERT-BEER ................................................................................. 23

4.6. MÉTODOS ESPECTROFOTOMÉTRICOS EN QUE SE EMPLEA LA LUZ

VISIBLE ........................................................................................................................ 24

4.7. APLICACIONES .......................................................................................................... 27

CONCLUSIONES..................................................................................................................... 29

REFERENCIA BIBLIOGRÁFICA .......................................................................................... 30

ANEXOS .................................................................................................................................... 32
 INTRODUCCIÓN

La Espectrofotometría Visible es una de las técnicas experimentales más

utilizadas para la detección específica de moléculas. Se caracteriza por su

precisión, sensibilidad y su aplicabilidad a moléculas de distinta naturaleza y

estado de agregación. Su diversidad de aplicaciones en los diferentes campos

profesionales es muy esencial para la gran mayoría de análisis realizadas

teniendo que aplicar leyes de la absorción de la luz como la Ley de Beer, Ley de

Lambert y Ley de Lambert-Beer.

Por ello el trabajo se divide en cuatro capítulos. En el primer capítulo se presenta

generalidades y conceptos previos que se debe de tener en cuenta para la

realización del presente trabajo. En el segundo capítulo se definirá lo que es La

Espectrofotometría y se desarrolla una reseña histórica del inició de la

Espectrofotometría y su evolución hasta la actualidad. El tercer capítulo se trata

sobre el espectrofotómetro, sus partes, componentes y diferentes tipos de

espectrómetros que existen. En el cuarto capítulo se desarrolla la

Espectrofotometría Visible, las leyes de absorción de la luz, el proceso de

absorción, métodos y las diferentes aplicaciones de la espectrofotometría visible

en los diversos campos profesionales.

El presente trabajo pretende dar a conocer sobre La Espectrofotometría Visible,

las leyes que rigen este análisis y su importancia aplicativa, a su vez, incentivar

al estudiante a tomar interés sobre este tema y contribuir a la comunidad

estudiantil con este trabajo.

Los autores.

4
 CAPITULO I
GENERALIDADES

En el curso de Química Analítica - Cualitativa se estudia los fenómenos

relacionados con la luz que pueden servir de base para métodos analíticos,

entonces el método espectrofotométrico, es un método de análisis cuantitativo

dado a que están basados en la luz y en su interacción con la materia. En este

caso, los términos “luz” y “óptico” no están restringidos a la radiación visible, sino

que se aplican en un sentido más amplio que incluye a todo tipo de energía

electromagnética radiante. La mayor parte de los métodos ópticos se pueden

clasificar en aquellos que se basan en la absorción de la luz y en los que tienen

como fundamento la emisión de luz (emisiónmetría incluyendo espectroscopía).

1.1. DEFINICIONES

a) Luz:

La luz, basado en el presente trabajo, se define como una forma de

energía electromagnética radiante que se propaga por medio de una

onda transversal, esto es, una onda cuya vibración se produce en un

plano perpendicular a la dirección de propagación.

b) Longitud de onda:

La longitud de onda, que se representa con la letra griega lambda, λ,

es la distancia que existe, en la dirección de la propagación entre dos

puntos que están en fase en dos ondas adyacentes. La longitud de

onda se puede expresar en angstroms (Å), milimicras (mμ), o micras

(μ), dependiendo de su magnitud.

5
c) Frecuencia:

La frecuencia, se denota con la letra griega un, ʋ, es el número de ciclos

de onda por segundo. La frecuencia de luz (monocromática)

permanece constante cualquiera que sea el medio en el que se

propaga o transmite.

d) Luz monocromática:

La luz monocromática implica que se trata de energía de una sola

frecuencia o, expresado con menos precisión, de una misma longitud

de onda.

e) Espectro:

El espectro completo de la energía electromagnética radiante incluye

los rayos cósmicos, gamma, X, el ultravioleta, el visible, el infrarrojo, el

microondas y las ondas de radio.

En la química analítica, el término espectro posee diversas variantes.

Un espectro de emisión se obtiene por separación de las longitudes de

onda individuales de la energía emitida por una fuente de luz

compuesta. Un espectro de absorción es el conjunto de líneas o más

frecuentemente, de bandas, cuyas longitudes de onda son absorbidas

por el medio al pasar por éste la luz compuesta.

f) Espectro de luz visible:

Se denomina espectro visible a la región del espectro electromagnético

que el ojo humano es capaz de percibir. A la radiación electromagnética

en este rango de longitudes de onda se le llama luz visible o

simplemente luz. No hay límites exactos en el espectro visible; un típico

ojo humano responderá a longitudes de onda desde 400 a 700 nm

6
 aunque algunas personas pueden ser capaces de percibir longitudes

de onda desde 380 a 780 nm.

g) Color:

El color es la sensación psicofísica que se experimenta cuando el ojo

observa luz de una o más de las longitudes de onda de la región visible

del espectro. Debe recordarse que, para ciertos propósitos, el término

luz se emplea en su sentido más restringido para describir la energía

radiante visible. Puesto que el ojo no puede distinguir si, una luz visible

es monocromática o compuesta, el concepto de luz monocromática no

es necesariamente equivalente a un color o a un color puro.

7
 CAPITULO II
ESPECTROFOTOMETRÍA

2.1. DEFINICIÓN

La espectrofotometría es un método de análisis cuantitativo basado en la

absorción de luz visible o de otra energía radiante por una solución. Esto

quiere decir que la espectrofotometría es la medición de la cantidad de

energía radiante que absorbe un conjunto de elementos o un elemento en

su estado puro, en función de la longitud de onda de la radiación lumínica

y a las mediciones a una determinada longitud de onda.

Los métodos espectrofotométricos no se limitan al uso de la luz visible, sino

que también incluyen a aquellos que emplean energía radiante de otras

regiones del espectro electromagnético, como el ultravioleta o el infrarrojo.

2.2. HISTORIA

La espectrofotometría o el método espectrofotométrico se inició con la

creación del primer espectrofotómetro, inventado en 1940 por Arnold J.

Beckman y sus colegas en los Laboratorios National Technologies, la

empresa que Beckman había comenzado en 1935. Fueron conducidos por

el líder de proyecto Howard H.Cary. El espectrofotómetro fue el mayor

descubrimiento de la compañía.

Antes de 1940, el proceso de análisis químico era un largo emprendimiento,

que tomaba semanas para completarse con sólo el 25% de precisión, de

acuerdo con el archivo del MIT “Inventor de la semana”. En 1940, cuando

se introdujo el Espectrofotómetro Beckman DU, se simplificó el proceso en

gran medida, que requería de sólo unos minutos para llevar a cabo el

análisis. De acuerdo con la misma fuente, esta prueba ofrecería 99,99% de

8
 exactitud en el análisis. Este instrumento estableció el estándar en el

análisis químico.

2.3. EVOLUCIÓN DE LA ESPECTROFOTOMETRÍA

Al principio, de la creación del espectrofotómetro, hubo problemas de

rendimiento. Estos problemas llevaron a cambios en el diseño. El

espectrofotómetro modelo B utilizó un prisma de cuarzo en lugar de un

prisma de cristal, lo que mejoró las capacidades ultravioletas del

dispositivo. El modelo C continuó con los cambios que elevaron la

resolución de la longitud de onda en el ultravioleta y se realizaron tres

espectrofotómetros posteriores al modelo C. En 1941, el Modelo D, también

conocido como el Modelo DU, fue producido con una lámpara de hidrógeno

y otras mejoras. Este diseño se mantuvo esencialmente sin cambios desde

1941 hasta 1976, cuando fue descontinuado.

En 1981, Cecil Instrumentos produjo un espectrofotómetro que era

controlado por microprocesador. Este automatizó el dispositivo y mejoró la

velocidad, además de ser más confiable que otras versiones realizadas en

esa época. De 1984 a 1985, se desarrollaron versiones con doble haz que

se convertirían en el modelo de la serie 4000. Con la década de 1990 llegó

la adición de un software externo que proporcionaba control mediante PC

y pantallas de información con los espectros. Hoy en día, el desarrollo del

espectrofotómetro continúa.

9
 CAPÍTULO III

ESPECTROFOTÓMETRO

Un aparato capaz de obtener el espectro de una radiación, es decir, de

separar la radiación en sus componentes, se llama un espectroscopio.

Si el aparato es capaz de fotografiar se llama un espectrógrafo y su es

capaz de medirla diremos que se trata de un espectrómetro.

Cuando es capaz de medir también la intensidad de la radiación, se llama

espectrofotómetro.

El espectrofotómetro es un instrumento que permite comparar la radiación

absorbida o transmitida por una solución que contiene una cantidad

desconocida de soluto, y una que contiene una cantidad conocida de la

misma sustancia. Selecciona la longitud de onda mediante dispositivos

monocromadores los cuales están integrados a la máquina.

Un espectrofotómetro descompone un haz de luz (haz de radiación

electromagnético), separándolo en bandas de longitudes de onda

específicas, formando un espectro atravesado por numerosas líneas

oscuras y claras, semejante a un código de barras del objeto, con el

propósito de identificar, calificar y cuantificar su energía.

Son útiles debido a la relación de la intensidad del color en una muestra y

su relación a la cantidad de soluto dentro de la muestra.

3.1. PARTES DE UN ESPECTROFOTÓMETRO

El espectrofotómetro, en general, consta de dos dispositivos: Un

espectrómetro y un fotómetro. Un espectrómetro es un dispositivo

que produce, dispersa y mide la luz. Un fotómetro tiene un detector

fotoeléctrico que mide la intensidad de la luz.

10
  Espectrómetro: Produce un rango deseado de longitud de onda

de luz. Primero un colimador (lente) transmite un haz recto de

luz (fotones) que pasa a través de un monocromador (prisma)

para dividirlo en varias componentes de longitudes de onda

(espectro). Entonces un selector de longitud de onda (ranura)

transmite sólo las longitudes de onda deseadas.

 Fotómetro: Después de que el rango deseado de longitud de

onda de luz pasa a través de la solución muestra en la cubeta,

el fotómetro detecta la cantidad de fotones que se absorbe y

luego envía una señal a un galvanómetro o una pantalla digital.

3.2. COMPONENTES DE UN ESPECTROFOTÓMETRO

3.2.1. FUENTE DE LUZ

La fuente de luz que ilumina la muestra debe cumplir con las

siguientes condiciones: estabilidad, direccionabilidad,

distribución de energía espectral continua y larga vida. Las

fuentes empleadas son: lámpara de wolframio (también

llamado tungsteno), lámpara de arco de xenón, lámpara

de deuterio y lámpara LED que se utilizan en los laboratorios.

3.2.2. MONOCROMADOR

El monocromador aísla las radiaciones de longitud de

onda deseada que inciden o se reflejan desde el conjunto, se

usa para obtener luz monocromática.

Está constituido por las rendijas de entrada y

salida, colimadores y el elemento de dispersión. El colimador

se ubica entre la rendija de entrada y salida. Es un lente que

11
 lleva el haz de luz que entra con una determinada longitud de

onda hacia un prisma el cual separa todas las longitudes de

onda de ese haz y la longitud deseada se dirige hacia otra

lente que direcciona ese haz hacia la rendija de salida.

3.2.3. COMPARTIMIENTO DE MUESTRA

Es donde tiene lugar la interacción con la materia (debe

producirse donde no haya absorción ni dispersión de las

longitudes de onda). Es importante destacar, que durante este

proceso, se aplica la ley de Lambert-Beer en su máxima

expresión, con base en sus leyes de absorción, en lo que

concierne al paso de la molécula de fundamental-excitado.

3.2.4. DETECTOR

El detector es el encargado de captar la radiación y, a su vez,

dejarla en evidencia para su estudio posterior. Existen dos

tipos:

 Los que respondes a fotones.

 Los que responden al calor.

3.2.5. FOTODETECTORES

En los instrumentos modernos se encuentra una serie de

16 fotodetectores para percibir la señal en forma simultánea

en 16 longitudes de onda, cubriendo el espectro visible. Esto

reduce el tiempo de medida, y minimiza las partes móviles del

equipo.

12
 3.2.6. CELDAS

Son los recipientes donde se depositan las muestras líquidas

a analizar. El material del cual están hechas varía de acuerdo

a la región que se esté trabajando; son de vidrio o plástico si

se trabaja en la región visible, de cuarzo si se trabaja en la

ultravioleta y de NaCl si se trabaja la región de infrarrojo. Se

caracterizan por tener dos paredes correspondientes a los

lados ópticos por donde cruza el haz de luz.

3.3. TIPOS DE ESPECTROFOTÓMETROS

3.3.1. ESPECTROFOTÓMETRO DE ABSORCIÓN ATÓMICA

El espectrofotómetro de absorción atómica se basa en la

medida de la absorbancia de una radiación electromagnética

a una longitud característico del elemento a medir.

Es necesario para la medida, que el elemento se encuentre

en su forma atómica. Para ello se realiza una excitación con

una llama de Acetileno/Aire o Acetileno/N2O.

Su aplicación está dada en la cuantificación de la

concentración de metales alcalinos, alcalinotérreos, de

transición y de otros elementos en disolución acuosa.

3.3.2. ESPECTROFOTÓMETRO DE ABSORCIÓN MOLECULAR

La espectrofotometría de absorción molecular ultravioleta

visible, comúnmente llamada espectrofotometría UV-VIS,

tiene una larga y continua historia en el campo de la química

analítica. Esta técnica está basada en la medición de

absorción de radiación U.V. o visible por determinadas

13
 moléculas. La radiación correspondiente a estas regiones del

espectro electromagnético provoca transiciones electrónicas

a longitudes de ondas características de la estructura

molecular de un compuesto.

3.3.3. ESPECTROFOTÓMETRO INFRARROJO

Equipo que permite la identificación de grupos funcionales de

materiales orgánicos, pinturas y determinadas estructuras de

muestras sólidas y liquidas por transmisión espectroscopia de

infrarrojo por transformada de Fourier (FTIR), en el rango

espectral comprendido entre 400 y 4000 cm-1.

Dispone de un accesorio para trabajar en reflectancia total

atenuada (ATR).

3.3.4. ESPECTROFOTÓMETRO UV VISIBLE

Equipo que permite la determinación cuantitativa de

compuestos absorbentes de radiación electromagnética en

solución, para longitudes de onda comprendidas entre 200 y

1100 nm. Adecuado para la caracterización y análisis de

aguas y efluentes papeleros (DQO, color, hierro, sulfatos,

lignina disuelta, etc.), así como la identificación y

determinación de aditivos no celulósicos en el papel, almidón,

resinas, etc.

14
 CAPÍTULO IV
ESPECTROFOTOMETRÍA VISIBLE

4.1. DEFINICIÓN

La espectrofotometría visible es un método de análisis cuantitativo

basado únicamente en la absorción de luz visible.

Un término bastante general que se aplica a los procedimientos

espectrofotométricos que emplean la luz visible es La Colorimetría o

Análisis Colorimétrico

4.2. ABSORCIÓN DE LA ENERGÍA RADIANTE

4.2.1. NATURALEZA ONDA-PARTÍCULA DE LA ENERGÍA

RADIANTE

La luz y otras formas de energía radiante parecen tener

naturaleza dual. La teoría ondulatoria es necesaria para

explicar la difracción, la refracción y otros efectos ópticos, pero

en la actualidad se sabe que tanto la emisión como la absorción

de energía radiante se efectúa mediante partículas discretas

llamadas fotones o cuantos.

La refracción y la difracción de la radiación electromagnética,

se explican por la naturaleza ondulatoria de la luz. La energía

radiante, al viajar por el espacio, se considera como una

perturbación periódica con componentes eléctricos y

magnéticos que pueden interaccionar con la materia. La

combinación de la vibración y la propagación hace que la

energía radiante tenga movimiento ondulatorio.

15
 Las ondas de energía radiante pueden describirse en términos

de la longitud de onda o de la frecuencia, que es el número de

ondas que pasan por un punto en la unidad de tiempo:

𝜆. ʋ = 𝑐

Donde “λ” es la longitud de onda en centímetros, y “ʋ” es la

frecuencia en sec-1 y “c” es la velocidad de la luz, 2.998 x 1010

cm/s.

El desprendimiento de electrones en la superficie de un metal

cuando choca contra ella alguna radiación electromagnética,

se explica en términos de la naturaleza de partículas de la

energía radiante. Un rayo de energía radiante se considera

que está constituido por varias partículas (fotones), y cada

fotón tiene una energía igual a “hʋ”.

4.2.2. EL ESPECTRO ELECTROMAGNÉTICO

La luz es la energía radiante en la región espectral visible para

el ojo humano normal. El intervalo de longitud de onda de la luz

es aproximadamente de 380 a 750 nm, obsérvese en el anexo

N°1.

4.2.3. PROCESO DE ABSORCIÓN

Una sustancia absorbe luz sólo cuando la energía de dicha luz

corresponde a la energía necesaria para ocasionar algún

cambio en la molécula química. Por lo tanto, se absorberá luz

de energía y longitud de onda determinada, y no se absorberá

la luz de otras longitudes de onda. Los cambios en una

molécula ocasionados por absorción de luz pueden ser

16
electrónicos (cambio en la energía de los electrones

distribuidos alrededor de los átomos de la molécula),

vibracionales (cambios en la separación promedio de los

núcleos de dos o más átomos) y rotacionales (rotación de un

dipolo químico). Se necesita una radiación de energía más alta

para que se efectúen transiciones electrónicas (cambios), que

la necesaria para que se efectúen transiciones rotacionales o

vibracionales. Por consiguiente, las transiciones electrónicas

son ocasionadas por absorción de la luz visible y ultravioleta.

La energía de excitación a una molécula proveniente de un

fotón durante el proceso de absorción se representa así:

𝐴 + ℎ𝑣 → 𝐴∗ → 𝐴 + 𝑐𝑎𝑙𝑜𝑟

Donde:

𝐴 = Es el absorbente en su estado de energía bajo.

𝐴∗ = Es el absorbente en su nuevo estado de excitación

energético.

ℎ𝑣 = Representa a la constante de Planck y la frecuencia

respectivamente.

La energía del fotón incidente posee una longitud de onda. 𝐴∗

es inestable y rápidamente revierte a su estado energético más

bajo, perdiendo así la energía térmica correspondiente.

La absorción de determinadas longitudes de onda depende de

la estructura de la molécula absorbente.

En la región visible, la solución tendrá un color que corresponde

a las longitudes de onda que la solución no absorbe. Dicho en

17
 forma más sencilla, el color que vemos es el color

complementario del color de la luz que absorbe. Por ejemplo,

si una solución absorbe luz de la región azul del espectro, el

color visible de la solución es el amarillo, que es el color

complementario del azul.

Las longitudes de onda aproximadas de los colores de la luz

visible son las siguientes:

Longitud de onda Color que se

Color que absorbe
nm observa
Violeta 280-450 amarillo-verdoso
azul 450-495 amarillo
de violeta hasta
verde 495-570
rojo violáceo
amarillo 570-590 azul
naranja 590-620 verde azuloso
rojo 620-750 azul verdoso
Fuente: James S. Fritz, George H. Schenk – “Química Analítica
Cuantitativa”

4.2.4. VARIACIÓN DE LA ABSORCIÓN CON LA LONGITUD DE

ONDA

En los métodos espectrofotométricos de análisis es de gran

utilidad saber que longitudes de onda de la energía radiante

absorben con mayor fuerza. Esto se hace irradiando la solución

de la muestra con un rayo de una sola longitud de onda y medir

la cantidad de absorción conforme se hace variar la longitud de

onda del rayo incidente. Al graficar la absorbancia (o

transmitancia) en función de la longitud de onda, se obtiene un

espectro de absorción.

18
 El espectro de absorción de un compuesto que absorbe luz

visible puede verse en el anexo N°2. Los espectros son

importantes para seleccionar una longitud de onda adecuada

para análisis cuantitativo. La longitud de onda elegida deberá

estar en el intervalo de longitudes de onda que la sustancia que

va a determinarse absorbe fuertemente y que otras sustancias

extrañas absorben débilmente.

4.3. ABSORBANCIA Y TRANSMITANCIA

Cuando un rayo de luz de una determinada longitud de onda de

intensidad “𝐼0 ” incide perpendicularmente sobre una disolución de un

compuesto químico que absorbe luz o cromóforo, el compuesto

absorberá una parte de la radiación incidente y dejará pasar el resto

“𝐼”.

4.3.1. LA TRANSMITANCIA (T)

La transmitancia de una sustancia en solución es la relación

entre la cantidad de luz transmitida que llega al detector una

vez que ha atravesado la muestra “𝐼” y la cantidad de luz que

incidió sobre ella “𝐼0 ” y se representa normalmente en tanto por

ciento: %𝑇 = 𝐼 ⁄𝐼0 𝑥100.

La transmitancia nos da una medida física de la relación de

intensidad incidente y transmitida al pasar por la muestra. La

relación entre %𝑇 y la concentración no es lineal, pero asume

una relación logarítmica inversa.

19
 4.3.2. LA ABSORBANCIA (A)

Es un concepto más relacionado con la muestra puesto que

nos indica la cantidad de luz absorbida por la misma, y se

define como el logaritmo de 1⁄𝑇, en consecuencia: 𝐴 =

𝐿𝑜𝑔 1⁄𝑇 = −𝐿𝑜𝑔 𝑇 = −𝐿𝑜𝑔 𝐼 ⁄𝐼0 .

Cuando la intensidad incidente y transmitida son iguales, la

transmitancia es del 100% e indica que la muestra no absorbe

a una determinada longitud de onda y entonces 𝐴 vale 𝐿𝑜𝑔 1 =

0.

4.4. ABSORTIVIDAD Y ABSORTIVIDAD MOLAR

4.4.1. ABSORTIVIDAD

La absortividad, representada por la letra “a”, es una medida de

la capacidad de un material para absorber la luz. Se puede

definir como la relación entre la absorbancia y el producto de la

concentración real de la especie absorbente y la longitud de

paso óptico por el medio. Por consiguiente, a es la absorbancia

específica, esto es, la absorbancia por unidad de concentración

y por unidad de espesor. Se ha convenido en expresar la

concentración “c” e, gramos por litro y la longitud de paso óptico

“b” en centímetros. Por lo tanto:

𝑎 = 𝐴⁄𝑏. 𝑐

Y “a” tiene unidades de litros por gramo-centímetro.

20
 4.4.2 ABSORTIVIDAD MOLAR

La absortividad molar, que se representa con la letra griega

“ε”, es la absortividad cuando la concentración se expresa en

moles por litro “C” y la longitud de paso óptico en centímetros.

La absortivdad y la absortividad molar dependen de la longitud de

onda de la luz y de la naturaleza de las especies absorbentes.

4.5. LEYES DE LA ABSORCIÓN DE LUZ

Supóngase que la muestra que se está estudiando es una solución de

un soluto que absorbe luz, en un disolvente no absorbente, colocada

en una celda rectangular de vidrio. Supóngase, además, que un haz

paralelo de luz monocromática incide sobre la celda a un ángulo recto

con una de sus caras. Se observará que, en términos generales,

solamente se transmitirá una porción del poder de radiación de la luz

incidente, es decir, únicamente emergerá una parte en la cara

opuesta. Una fracción del poder de radiación se pierde por reflexiones

en las interfaces aire-vidrio y vidrio-solución. Una segunda fracción se

disipa por la dispersión causada por las partículas de polvo y por las

heterogeneidades de la solución y del vidrio, y una tercera porción se

consume en el proceso de absorción que se verifica en el soluto.

Para propósitos analíticos, el interés se centra en la disminución de

poder de radiación causada por la absorción. Por consiguiente, es

necesario tomar en cuenta las pérdidas por reflexión y dispersión. En

la discusión de las leyes de la absorción de la luz, que se presentan a

continuación, se supondrá que no existe ni reflexión ni dispersión.

21
4.5.1. LEY DE BEER

La ley de Beer, es la relación entre la concentración de la

especie absorbente y el grado de absorción. Esta ley es

análoga a la de Lambert, que dice, cuando un rayo de luz

monocromática pasa a través de un medio absorbente, su

intensidad disminuye exponencialmente a medida que la

concentración del medio absorbente aumenta.

𝐼 = 𝐼0 . 𝑒 −𝑘𝑐 (1) ; 𝐼 = 𝐼0 . 10−ԑ𝑐 (2)

κ= Coeficiente de absorción.

b= Concentración de la solución.

ԑ= Coeficiente de extinción o absortividad.

La ley de Beer se aplica solo para radiaciones monocromáticas,

donde la naturaleza de concentración en cuestión.

4.5.2. LEY DE LAMBERT

La ley de Lambert quiere decir que cuando un rayo de luz

monocromática (𝐼0 ) pasa a través de un medio absorbente

(sólido homogéneo o líquido puro), su intensidad disminuye

exponencialmente (𝐼) a medida que la longitud del medio

absorbente aumenta.

𝐼 = 𝐼0 . 𝑒 −𝑘𝑏 (1) ; 𝐼 = 𝐼0 . 10−ԑ𝑏 (2)

Relacionando (1) y (2):

𝜅 = 2,303ԑ

Donde:

κ= Coeficiente de absorción.

b= Espesor de filtro.

22
 ԑ= Coeficiente de extinción o absortividad.

La absorción de la luz depende del número de moléculas de la

capa absorbente.

En los sólidos homogéneos y en líquidos puros, el número de

moléculas por las cuales pasa la luz está definido por el

espesor “b” del material absorbente.

Cuando las moléculas absorbentes están repartidas en un

solvente inactivo, constituyendo una solución líquida o cuando

el absorbente es un gas, además del espesor del conjunto (b)

se necesita conocer la concentración molecular del soluto o la

presión parcial del gas.

4.5.3. LEY DE LAMBERT-BEER

Al combinar las leyes de Beer y Lambert se crea la ley de Beer-

Lambert donde: “La fracción de luz incidente que es absorbida

por una solución es proporcional a la concentración de soluto y

al espesor de la sustancia atravesada por la luz”. La relación

entre la luz incidente (𝐼0 ) y la reflejada (𝐼) dará una idea de la

cantidad de radiación que ha sido absorbida por la muestra.

Cumplen esta ley la mayoría de las soluciones cuando son

diluidas, pero en las más concentradas se observan

desviaciones.

Esta ley tiene aplicaciones importantes en el análisis por

instrumentación, puesto que la medida de la luz absorbida sirve

para determinar la cantidad de una sustancia absorbente de la

luz que se encuentra en una solución.

23
 La ley de Beer-Lambert es un medio matemático de expresar

cómo la materia absorbe la luz. Esta ley afirma que la cantidad

de luz que sale de una muestra es disminuida por tres

fenómenos físicos:

1) La cantidad de material de absorción en su trayectoria

(concentración).

2) La distancia que la luz debe atravesar a través de la

muestra (distancia de la trayectoria óptica).

3) La probabilidad de que el fotón de esa amplitud particular

de onda sea absorbido por el material (absorbencia o

coeficiente de extinción).

Esta relación puede ser expresada como:

𝐴 = ԑ. 𝑏. 𝑐

4.6. MÉTODOS ESPECTROFOTOMÉTRICOS EN QUE SE EMPLEA LA

LUZ VISIBLE

Pasos a seguir en un análisis:

a) Formación de especies que absorban luz

Generalmente se pueden usar varios métodos para determinar

específicamente una sustancia determinada. En algunos de ellos

se mide la luz que absorbe la sustancia en sí, pero en la mayoría

de los métodos se añade un reactivo para formar una nueva

sustancia colorida.

El reactivo que forma color deberá reaccionar en forma selectiva,

sin formar colores que interfieran con las sustancias extrañas que

24
 probablemente estén presentes. La reacción del reactivo con la

sustancia que se desea medir deberá ser rápida y cuantitativa, o

cuando menos, reproductible. En ocasiones es muy importante el

orden en que se añaden los reactivos porque podría producir

reacciones no deseadas que podrían afectar el análisis.

b) Selección de la longitud de onda

Cuando no hay interferencias, se escoge para la determinación

cuantitativa una longitud de onda donde la absorbancia sea

máxima. Desafortunadamente, no siempre es posible emplear

esta longitud de onda. Un procedimiento mejor es emplear una

longitud de onda la cual el complejo absorba con fuerza, pero

donde la absorbancia debido al exceso de reactivo será cero, o

cuanto menos, sea pequeña.

A menudo un espectro se determina empleando un blanco de

reactivo en lugar del acostumbrado blanco de disolvente puro.

c) Preparación de una curva de calibración

Para preparar una curva de calibración se miden las absorbancias

de varias soluciones coloridas de concentraciones conocidas y

distintas. Generalmente se prepara una solución estándar diluida

de la sustancia que se desea determinar. Se pipetean

cuidadosamente porciones de esta solución, de distinto volumen.

Se añade el reactivo que forma color, y se ajustan las condiciones

para que se desarrolle el color en forma óptima. A continuación,

se diluye cada solución a un volumen determinado en un matraz

volumétrico, y se mide la absorbancia de cada solución a la

25
 longitud de onda analítica. Al hacer la gráfica de absorbancia en

función de la concentración deberá obtenerse una línea recta,

cuya pendiente es la absorbancia “a”.

Esta gráfica se emplea al analizar muestras reales (ANEXO N°3)

y generalmente se grafican los puntos, a continuación, se dibuja la

línea recta que atraviesa por los puntos o lo más cerca posible de

ellos. Así se promedia y se disminuye el error inherente a la

preparación y medición de los diversos estándares.

d) Medición de la muestra y manejo de diluciones

El color de la muestra se forma bajo las mismas condiciones de

los estándares. Midiendo la absorbancia de la solución de la

muestra se puede leer directamente su concentración de la curva

de calibración.

La concentración de la solución de la muestra deberá estar

ajustada para que, al efectuar la medición en el espectrofotómetro,

la absorbancia esté dentro del intervalo de 0.12 a 1.0

aproximadamente, o la transmitancia está aproximadamente entre

0.10 y 0,75. El error usual probable en una lectura de transmitancia

es aproximadamente de 0.005 (±0.5% T).

Para obtener una solución colorida final que se encuentre dentro

del intervalo apropiado, probablemente será necesario efectuar

una o más diluciones en matraces volumétricos. La absorbancia

de la solución final se medirá y podrá determinarse la

concentración con ayuda de la curva de calibración. Para

26
 determinar la cantidad de material de la muestra original será

necesario tener en cuenta el factor de dilución.

e) Desviaciones de la ley de Beer

Cada especie absorbente tendrá propia constante de absortividad

molar a cualquier longitud de onda determinada, y en general ésta

será diferente de la de cualquier otra especie absorbente. Por

ejemplo, los iones dicromato y cromato, ambos de los cuales son

formas de cromo (IV), tienen absortividades molares distintas, a

cualquier longitud de onda, como 440 nm.

Se obtendrá una curva de calibración lineal cuando toda la

sustancia absorbente esté presente en la misma forma química o

cuando la proporción relativa de dos o más especies químicas no

varíe con la concentración. No obstante, se producen desviaciones

de la linealidad cuando la proporción de especie absorbentes

distintas varía con la concentración. Puede haber desviaciones de

la Ley de Beer cuando existen atracciones intermoleculares,

disociaciones y asociaciones dependientes de la concentración,

reacciones con el disolvente o con iones de hidrógeno, o formación

de complejo con número de ligandos (iones o moléculas que se

unen a un átomo de metal central para formar un complejo de

coordinación).

4.7. APLICACIONES

La espectrofotometría visible tiene distintas aplicaciones, entre ellos

se tiene para el análisis cuantitativo en diversas áreas como es el caso

27
de la química, física, biología, bioquímica, materiales e ingeniería

química, aplicaciones clínicas, industriales, etc.

La aplicación más resaltante es la usada en el área ambiental y

bioquímica, por ejemplo, para determinar las reacciones enzima-

catalizadores, concentraciones de soluciones. En el área ambiental se

emplea para el análisis de agua, la determinación de hierro, de

cationes o metales.

En la aplicación clínica, se utiliza para examinar la sangre o los tejidos

para el diagnóstico clínico.

28
 CONCLUSIONES

 La aplicación de la espectrofotometría visible es importante para el análisis

de las diferentes áreas, desde la física y química hasta las industriales.

 Es muy importante, para la aplicación de este método de análisis, tener en

cuenta la calibración del espectrofotómetro para la precisión y exactitud del

resultado.

 La preparación y dilución de las muestras afecta mucho en los resultados

obtenidos por el espectrofotómetro.

 El método espectrofotométrico visible es el más eficiente en la detección de

metales como el hierro en los diferentes análisis como las de las aguas.

 La espectrofotometría visible es un método analítico cuantitativo por la

utilización de la luz que contiene espectros y estos contienen longitudes de

ondas.

29
 REFERENCIA BIBLIOGRÁFICA

 H. A. Flaschk & A. J. Barnard, P. E. STURROCK. (1997). Química

Analítica Cuantitativa Vol. I. México: CONTINENTAL, S.A.

 James S. Fritz & George H. Schenk. (1989). Química Analítica

Cuantitativa. México: LUMINOSA.

 Glenn H. Brown. (1977). Química Cuantitativa. España: REVERTÉ S.A.

 Daniel C. Harris. (2007). Análisis Químico Cuantitativo. España:

REVERTÉ S.A.

 Ing. Yupanqui Torres E. – Fotoquímica.

 Mg. Aldo Medina Gamero. (2015). Estructura de la Monografía.

diciembre 20, 2018, de CARLOS LIVÁN ARROYO CASAS Sitio web:

https://www.youtube.com/watch?v=zKQJ_dF5sEE&t=281s

 Anónimo. (2016). ESPECTROFOTOMETRÍA. diciembre 20, 2018, de

MH52 TOROCOL Sitio web: https://youtu.be/V_Xltq0J_Ws

 López F. (2015). 1.4 Laboratorio para Análisis de Agua.

Espectrofotómetro y Análisis de Agua. noviembre 22, 2018, de El

Espectrofotómetro Sitio web: https://youtu.be/o8kkhqmatzA

 Moreno N. & Guerra J. (2013). ESPECTROFOTOMETRIA DE HIERRO.

noviembre 22, 2018, de NORLEYMORETO Sitio web:

https://youtu.be/b59zHPTfE1o

30
 Anónimo. (2012). Prácticas para el uso del laboratorio: uso del

espectrofotómetro. noviembre 22, 2018, de WILLIAM PINEDA BOLIVAR

Sitio web: https://youtu.be/laHsQIUUaJ4

31
 ANEXOS

ANEXO N°1
TÍTULO: Espectro electromagnético visible

Fuente: Ivanovic I."El color es luz".

Descripción: La parte del espectro electromagnético que el ojo humano es capaz de
percibir.
ANEXO N°2
TÍTULO: Espectro de absorción de un compuesto

Fuente: Página web 123R/ Espectro científico absorción

Descripción: El espectro de absorción de una materia muestra la fracción de la radiación
electromagnética incidente que un material absorbe dentro de un rango de
frecuencias.

32
 ANEXO N°3
TÍTULO: Curvas de calibración

Fuente: Página web geocities

Descripción: La curva de calibración es un método muy utilizado en química analítica
para determinar la concentración de una sustancia (analito) en una
muestra desconocida, sobre todo en disoluciones.

33