Les Biotechnologies Végétales et leurs applications
agronomiques : Production des métabolites secondaires in
vitro
Conférence dirigée par
Prof. Stefaan Werbrouck
Et
Prof. Hannachi Cherif
Compte rendu préparé par
Cheima Ben Ali
1ère année mastère professionnelle
Année universitaire 2016/2017
Culture in vitro
Définition La culture in vitro des parties de plantes isolées est basée sur la mise en culture d’explant en milieu artificiel (synthétique) contrôlé (dans des conditions stériles), dans l’environnement et dans l’espace réduit d’un récipient à l’abri de toutes contaminations.
Le but de la culture in vitro est de permettre la régénération de la plante entière autonome et
fertile à partir de la propriété des cellules végétales : la totipotence.
La totipotence est l’habilité d’une cellule à se différencier puis après de se développer en un
nouvel organisme à part.
Les avantages de la culture in vitro
- Production en masse et rapide pour toutes les saisons - Facilité de stockage (économie de l’espace) - Assainissement des végétaux - Multiplication d’espèces difficiles à obtenir avec les méthodes traditionnelles et sauvegarde d’espèces en danger - Obtention des clones caractérisés par leur vigueur.
Les inconvénients
- Grands investissements - Automatisation qualifiée et main d’oevre spécialisée - Vitrification et anomalies Composition des milieux de culture
Composés inorganiques •Macro-éléments •Micro-éléments •Charbon active
Composés organiques •Sucres •Vitamines et acides aminés. •Régulateurs de croissance •Gel Les techniques de culture in vitro
Micropropagation
La micropropagation dérive de ce phénomène naturel, elle consiste à multiplier, stérilemet, un
individu donné à partir d'un fragment, plus ou moins grand, de végétal placé sur un milieu nutritif synthétique. Cette technique constitue une des premières applications des biotechnologies modernes.
Les plantes obtenues sont génétiquement identiques à la plante ou variété de départ et
la puissance de multiplication du clonage in vitro permet une production d'un grand nombre de plantes génétiquement homogènes en un laps de temps court.
Les étapes de cette technique sont les suivantes :
1. Le prélèvement : Le choix de l’explant à prélever est particulièrement important
2. La mise en culture in vitro : Les explants, sont ensuite désinfectés, travaillés sous conditions aseptiques, puis placés sur un milieu de croissance stérile. Ce support comprend des aliments : macro-éléments (N, P, K, Ca, Mg, Mn…), des micro- éléments (Bo, Fe, Cu…), sucre, vitamines, régulateurs de croissance (essentiellement auxines et cytokinines dont l’équilibre détermine l’organogenèse) et une base d’agar qui solidifie le milieu de culture.
3. La multiplication : Un contrôle rigoureux de l’environnement est nécessaire à la
bonne croissance des vitroplants en milieu artificiel.
4. L’acclimatation : Cette phase d’acclimatation se déroule dans des locaux spécifiques
permettant un contrôle précis des conditions d’éclairage, de température et surtout d'humidité.
5. L’élevage : Après acclimatation, les plants sont rempotés en godets et conduits sous serres d’élevage pendant quelques mois. Figure 1. Prélèvement des explants d’une plante mère
Induction des méristèmes
Les méristèmes sont des zones de cellules à divisions intenses, situés au cœur des bourgeons et des extrémités de racines et à l'origine des tiges feuillées ou du système racinaire.
La culture de méristèmes permet le sauvetage des variétés menacées de disparition car très virosées. Elle concerne essentiellement les plantes à reproduction par voie végétative: bouturage, marcottage, etc
Les plantes produites sont saines: sans virus, champignons et bactéries.
Figure2. Induction de pousses adventives
Figure 3. Induction de méristèmes racinaires
L’embryogenèse somatique
L'embryogenèse somatique est une forme de multiplication végétative qui permet d'obtenir une multitude de plantules identiques génétiquement à la plante donneuse d'explants. C'est l'obtention d'embryons à partir de cellules somatiques, c'est à dire non sexuelles.
De nombreuses divisions cellulaires sont rapidement provoquées à partir des tissus cultivés grâce à l'apport d'une forte dose d'auxine. Un cal est alors obtenu, c'est à dire un amas de cellules indifférenciées, rejuvénilisées et qui pourront donner naissance à des embryons bipolaires qui vont se comporter comme des embryons zygotiques.
Les principales étapes in vitro :
1. Induction de cals embryogènes par de fortes doses d'auxine (2,4D + cytokinine)
2. Prolifération et subculture de cal embryogène (2,4-D)
