Exosomas y su papel en el ciclo de vida y patogénesis de los virus ARN

Abstracto: Los exosomas son vesículas con membrana envuelta activamente en el espacio extracelular, cuyo
contenido refleja el estado fisiológico / patológico de las células de las que provienen. Estas vesículas
participan en la comunicación célula a célula y la transferencia de proteínas biológicamente activas, lípidos
y ARN. Su papel en las infecciones virales recién comienza a apreciarse. Los virus de ARN son una clase
importante de patógenos y afectan a millones de personas en todo el mundo. Estudios recientes sobre el virus
de la inmunodeficiencia humana (VIH), el virus de la hepatitis C (VHC), el virus linfotrópico de las células T
humanas (HTLV) y el virus del dengue (DENV) han demostrado que los exosomas liberados de las células
infectadas albergan muchos factores regulatorios, incluido el ARN viral y proteínas, miRNA viral y celular,
y otros elementos genéticos funcionales del huésped a las células vecinas, ayudando a establecer infecciones
productivas y modulando las respuestas celulares. Los exosomas pueden diseminar o limitar una infección
según el tipo de patógeno y las células objetivo, y pueden ser explotados como candidatos para el desarrollo
de tratamientos antivirales o de vacunas. Esta revisión resume el progreso reciente en la comprensión del
papel de los exosomas en las infecciones por virus de ARN con énfasis en su posible contribución a la
patogénesis.

1. Introducción

Los exosomas son vesículas de nanopartículas (30-100 nm) de membrana bicapa lipídica, con una densidad
de 1.13-1.19 g / ml, secretadas por prácticamente todos los tipos de células y formadas durante la maduración
de los endosomas tras la invaginación y la formación de brotes de la membrana limitante de endosomas
tardíos como vesículas intralumínicas (ILV) de cuerpos multivesiculares (MVB). Los exosomas se observaron
por primera vez a principios de la década de 1980 en los medios de cultivo de los reticulocitos. En su estudio,
Harding et al. (1983) informaron que la endocitosis recubierta de clathrin y pajadas condujo al
enriquecimiento de transferrina marcada con oro en las vesículas dentro de los endosomas mu ltivesiculares
no lisosómicos. Observaron que estos endosomas, comúnmente conocidos como MVB, se fusionaron con la
membrana plasmática y liberaron sus vesículas internas por exocitosis. Johnstone, en 1987, acuñó el término
"exosomas" para tales vesículas, que se liberan de las células por exocitosis [ 1 ]. Los exosomas son liberados
por casi todos los tipos de células y también se han confirmado en todos los fluidos corporales como la sangre,
la orina, la saliva, la leche materna, el lavado bronquial, el líquido cefalorraquídeo y el líquido amniótico. Con
el fin de adaptarse mejor al microcosmos circundante y ejecutar sus funciones y deberes, la comunicación
continua, lograda mediante métodos como el contacto directo de células o la transferencia de moléculas
secretadas, es esencial para las células y los tejidos. Aunque inicialmente se propuso que la secreción de
exosomas era un mecanismo de descarte de residuos celulares, en los últimos años los exosomas han surgido
como una herramienta importante para la comunicación intercelular a través de la transferencia de pr oteínas,
lípidos y ARN biológicamente activos. Los exosomas se han implicado tanto en condiciones normales como
patofisiológicas, como la lactancia, la respuesta inmune, la función neuronal, el desarrollo y la progresión de
la enfermedad hepática, las enfermedades neurodegenerativas, el cáncer y las infecciones virales. Se ha
demostrado que la administración extracelular mediada por exosomas de ácidos nucleicos y proteínas entre
las células testigo infectadas y no infectadas juega un papel importante en la patogénesis viral y el control de
las respuestas inmunes del huésped a la infección. Esto ciertamente sugiere un papel crucial para los
exosomas en el ciclo de vida viral y esta revisión se centra en el importante papel que desempeñan los
exosomas en el ciclo de vida de los virus de ARN, con énfasis en sus posibles contribuciones a la patogénesis.

2. Composición molecular de los exosomas

Los exosomas son esencialmente citoplasma encerrado en una bicapa lipídica con dominios externos
expuestos de proteínas transmembrana. Los exosomas pueden contener todo tipo de biomoléculas como
proteínas, carbohidratos, lípidos y también una firma de ácido nucleico de origen. Los nuevos métodos de
purificación que proporcionan preparaciones de exosomas altamente puros han permitido el uso de técnicas
proteómicas y moleculares para comprender la composición molecular de los exosomas. La presencia de
proteínas celulares en preparaciones de exosomas de varias fuentes celulares se ha analizado mediante
diversos métodos como western blot, clasificación de células activadas por fluorescencia (FACS), ELISA y
espectrometría de masas. También se han realizado amplios análisis que implican la secuenciación
cuantitativa de RT-PCR y ARN para identificar las especies de ARN presentes en los exosomas. Estos amplios
y profundos análisis revelaron que un subconjunto definido de proteínas celulares, probablemente
implicadas en la biogénesis del exosoma y tal vez en algunas funciones comunes del exosoma, está dirigido
específicamente a los exosomas. Esto puede incluir componentes citoesqueletales tales como actina y
proteínas de unión a actina, tubulina y proteínas implicadas en fusiones y transporte de membranas
intracelulares, como los genes Annexins y Rab (Ras (sarcoma de rata) de las proteínas del cerebro de la
rata). Las moléculas implicadas en la transducción de señales, como las proteínas quinasas (14 -3-3) y las
proteínas G heterotriméricas, las proteínas de choque térmico (HSP), como HSP70 y HSP90, y las moléculas
MHC de clase I y II también forman parte de este conjunto definido pero común de proteínas
exosomas. Tetraspanins incluyendo CD9, CD63, CD81 y CD82, así como componentes del citoesqueleto como
la actina, se encuentran entre las proteínas más abundantes en los exosomas de prácticamente cualquier tipo
de célula. Dado que los exosomas se generan mediante la invaginación de endosomas tardíos, también se
incorporan una variedad de proteínas hospedadoras que participan en la formación y el tráfico de vesículas,
como el gen ligado a la apoptosis (ALG), la proteína X interactiva (ALIX) y el gen 101 de susceptibilidad
tumoral (TSG101) en los exosomas. Todas estas proteínas se han considerado como marcadores de consenso
para los exosomas.

La composición lipídica exosomal también se ha caracterizado y los exosomas son ricos en esfingomielina,
gangliósidos, fosfatidilserina y colesterol. La firma de ácido nucleico es el otro componente importante de los
exosomas y los estudios recientes se han centrado en el contenido de ácido nucleico exosomal. Se ha
demostrado que los exosomas portan ARNm biológicamente activo, miARN, otro ARN no codificante y una
cantidad limitada de ADN que codifica el ARN ribosómico. Sin embargo, la composición de ARN y proteínas
de los exosomas varía tanto en cantidad como en tipo de moléculas, según el origen y estado fisiológico /
patológico de las células, lo que sugiere que el reclutamiento de ARN y proteína en e xosomas es un proceso
regulado. La estructura del exosoma se representa gráficamente en la Figura 1 .

Figura 1. Estructura y composición de los exosomas. Los exosomas

contienen una membrana bicapa de fosfolípidos derivada de
membrana plasmática. La composición depende del tipo de origen
celular, el estado de salud del huésped y los estímulos
extracelulares. Los contenidos de Exosome incluyen ARNm, miRNA,
ADN y proteínas como anexinas, tetraspaninas, Alix, TSG101,
moléculas de MHC, proteínas de Rab, proteínas del citoesqueleto,
enzimas y proteínas de transducción de señales.GAPDH:
Gliceraldehído 3-fosfato deshidrogenasa PGK: 3-fosfoglicerato
quinasa, PK: piruvato quinasa, EGFR: receptor del factor de
crecimiento epidérmico, CDC42: proteína de control de la división
celular 42, PI3k: fosfatidilinositida 3-quinasas, ARF1: ADP-factor de
ribosilación 1, MUC1 : Mucina 1, vRNA: ARN viral, vmiRNA: miARN
viral.

2.1. Biogénesis de los exosomas

La biogénesis del exosoma comienza con la endocitosis y la formación de endosomas tempranos. El

endosoma temprano se desarrolla en el endosoma tardío después de la maduración, que se caracteriza por la
formación de vesículas intralumínicas (ILV) dentro de la luz del endosoma. Los ILV, de 30-100 nm de
diámetro, se forman mediante el brote hacia adentro de la membrana endosomal, envolviendo al azar partes
del citosol e incorporando proteínas transmembrana y periféricas en la membrana invaginante; Esto conduce
a la formación de cuerpos multivesiculares (MVB). Aunque la endocitosis y el tráfico de receptores de
membrana plasmática en MVB son responsables de su degradación tras la fusión con lisosomas, el destino
de los MVB puede variar y no todos los MVB se degradan en los lisosomas, con un subconjunto que se funde
con la membrana plasmática y da como resultado la generación de exosomas. El proceso de exosoma de
biogénesis y clasificación de carga todavía no se conoce bien y muchos estudios sugieren que los mecanismos
de exosoma de la biogénesis pueden ser específicos de la célula. Los exosomas son secretados principalmente
por dos mecanismos diferentes, la liberación constitutiva a través de la red Trans-Golgi y la liberación
inducible.
En el proceso de generación de la vesícula, el endosomal clasificación complejos requeridos para el transporte
0 (ESCRT0) proteínas ubiquitinate para la entrega MVB y también reclutan ESCRTI a la membrana
endosomal, que a su vez recluta ESCRTII y ESCRTIII. ESCRTIII media la formación de filamentos
poliméricos, lo que conduce a invaginaciones de membrana y eventualmente provoca formación de ILV. La
presencia de componentes de ESCRT en los exosomas se identificó utilizando métodos de análisis de
proteínas de alto rendimiento, y la regulación a la baja de componentes clave del sistema ESCRT anula la
formación de ILV y la liberación de exosomas. Diversos estudios también sugieren mecanismos
independientes de ESCRT de biogénesis exosoma y liberación. Por ejemplo, en las células oligodendrogliales,
la generación de exosomas está regulada por la producción de un lípido ceramida. Recientemente, se informó
un mecanismo mediado por tetraspanina CD63 de clasificación de carga y formación de ILV, que es
independiente de ESCRT y ceramida. Una vez que se forman los MVB, las proteínas del receptor de fijación
del factor sensible a la N-etilmaleimida soluble (SNARE) y las GTPasas median su fusión con la membrana
plasmática. Recientemente se ha demostrado que Rab 35 es parte del acoplamiento de MVB a la membrana y
el agotamiento de Rab35 disminuyó significativamente la liberación de exosoma. Aunque los exosomas y las
ILV son similares y se generan a través de mecanismos comunes, las células tienen diferentes poblaciones de
vesículas y los mecanismos que contribuyen a la formación de exosomas y la clasificación de la carga dentro
de estas vesículas todavía no se conocen bien. El proceso de exosoma biogénesis se resume en la Figura 2 .

Figura 2. Representación esquemática de exosoma biogénesis y

liberación. La generación de exosomas comienza con la formación
temprana del endosoma durante la endocitosis.Las proteínas de
membrana se internalizan a través de vesículas revestidas con
clatrina y se administran a endosomas tempranos. Esto conduce a la
formación de vesículas intralumínicas (ILV) mediante el crecimiento
hacia adentro de la membrana limitante y se forman cuerpos
múltiples vesiculares (MVB). Tras la maduración, los MVB llenados
con exosomas se envían a los lisosomas para su degradación o se
fusionan con la membrana plasmática para liberar los exosomas al
medio extracelular. RER: Rough Endoplasmic Reticulum, GC:
complejo de Golgi.

2.2. Caracterizacion exosoma

Varios virus, como los paramixovirus, el HBV, el VHC, los rabdovirus, los herpesvirus, los filovirus y los
arenavirus utilizan o necesitan la vía ESCRT para su liberación. La caracterización e investigación de
exosomas derivados de células infectadas por virus es una tarea difícil, ya que estas vesículas a menudo
tienen una densidad similar y caen en el mismo rango de tamaño que muchos de estos virus, lo que hace
necesario y al mismo tiempo desafiante para separar las dos poblaciones. Convencionalmente, los exosomas
se aíslan de medios de cultivo o fluidos corporales usando un procedimiento secuencial de
ultracentrifugación con gradiente de sacarosa. Otros métodos de aislamiento / purificación de exosomas
incluyen tecnologías de microfiltración, dispositivos de microfluidos, reactivos de precipitación exosome
como ExoQuick ™ (System Biosciences, Mountain View, CA, EE. UU.) Y Total Exosome reagent de
aislamiento (Life Technologies Grand Island, NY, EE. UU.), Así como cuentas magnéticas recubiertas de
anticuerpos Inmunopurificación basada en [ 38. Se usan métodos de centrifugación secuencial y
ultracentrifugación similares para purificar muchos virus envueltos o no envueltos. Por ejemplo, los
exosomas derivados del VIH o de las células infectadas por el VHC no pueden distinguirse fácilmente o
separarse de las partículas virales infecciosas mediante técnicas biofísicas convencionales, ya que comparten
densidades de flotación similares y velocidades de sedimentación. Por lo tanto, al aislar los exosomas de las
células infectadas por el virus, se vuelve de vital importancia asegurarse de que el materi al sedimentado sea
exosomas y no partículas de virus. Para abordar esto, se han desarrollado varios métodos de caracterización
de exosomas, incluida la medición y el análisis de la distribución de tamaños utilizando el sistema de análisis
de seguimiento de nanopartículas NanoSight, la visualización de exosomas usando microscopía electrónica
y el análisis de inmunoblot de marcadores de proteínas exosomales universales como CD63, CD81, TSG101,
Annexin5, ICAM1 , FLOT1 y Alix ( Figura 3 ).
 Figura 3. Representación esquemática de estrategias de aislamiento
de exosomas.Representación gráfica del aislamiento del exosoma
mediante procedimientos de aislamiento basados en reactivos de
ultracentrifugación y precipitación, y herramientas analíticas para
la identificación de exosomas.

Al utilizar el análisis de inmunotransferencia, el marcador de

exosoma elegido para la caracterización debe seleccionarse
con precaución, ya que se ha demostrado que algunos virus
incorporan proteínas exosomales. Por ejemplo, los estudios
proteómicos que utilizan cromatografía líquida y
espectrometría de masas en tándem (LC-MS / MS)
encontraron que el virus de la gripe incorpora marcadores de
exosoma ICAM1, anexina A3, CD81 y CD9, mientras que CD63 y ALIX no estuvieron presentes. De manera
similar, los exosomas y los retrovirus comparten una variedad de moléculas como MHC-II , integrinas
(CD11a, CD18), moléculas coestimuladoras (CD28, CD54) y moléculas neutralizadoras del complemento
(CD55, CD59) Varias otras moléculas / proteínas del huésped adquiridas por virus envueltos se revisan en
Cantin et al. Por lo tanto, los exosomas enriquecidos aislados mediante ultracentrifugación o reactivo de
precipitación deberían someterse a métodos de inmunopurificación como el aislamiento de perlas
inmunomagnéticas CD63 u otras estrategias de purificación de virus eficaces para obtener poblaciones de
exosomas libres de contaminación ( Figura 4 ).

Figura 4. Representación esquemática del exosoma de aislamiento

inmunitario. Para obtener exosomas sin contaminantes, los exosomas se
pueden someter a selección inmunomagnética usando perlas
conjugadas con anticuerpo anti-CD63 y luego se caracterizan por
inmunotransferencia, microscopía electrónica y determinación de
tamaño.

3. Transferencia de componentes virales y celulares por exosomas

y su papel en la replicación y transmisión de virus

Aunque el campo de los exosomas y su contribución a la replicación

y la patogénesis de los virus de ARN siguen siendo en gran medida inexplorados, se han investigado algunos
virus de ARN, como el VIH-1, HTLV-1, el VHC y el virus del dengue. Los hallazgos de estos estudios han
demostrado que los exosomas liberados de las células infectadas con virus contienen una variedad de factores
celulares virales y del huésped que pueden modular las respuestas de las células huéspedes receptoras y
conducir al establecimiento de una infección productiva.

3.1. Exosomas como portadores de virus y especies de ARN huésped

Se ha informado que los exosomas portan varios ARN reguladores celulares, incluidos miRNAs, sncRNAs y
siRNAs. Se ha demostrado que los exosomas derivados de células infectadas con virus tienen componentes
virales, incluidos ARNm viral, miRNA y ARN genómico, así como elementos reguladores genéti cos. Entre
los virus de ARN, el VIH-1 fue el primero en ser estudiado un tanto en detalle en el contexto de la modulación
de la formación de exosomas. Los exosomas derivados de células infectadas por el VIH-1 o pacientes con
infección por VIH incorporan el elemento de respuesta de transactivación viral (TAR) transcrito del provirus
integrado, que se ha sugerido para mejorar la replicación del VIH en las células receptoras a través de la
regulación a la baja de apoptotis [ 42]. Se reclutan especies de ARN de VIH-1 no esplicadas para los exosomas
y la presencia de un tramo de secuencias dentro del extremo 5 'del marco de lectura abierto de Gag p17 es
suficiente para este reclutamiento, mientras que el ARN de HIV-1 de empalme simple o doble no se incorpora
En exosomas. La incorporación del ARN genómico del VIH-1 en los exosomas aumenta aún más si las células
productoras expresan el HIV-1 defectuoso para el empaquetamiento del genoma viral [ 97 ].
Se ha demostrado que las microvesículas similares a exosomas aisladas de suero durante la infección con
Pegivirus humano (un virus ARN dentro del género Pegivirus de Flaviviridae previamente conocido como
virus de Hepatitis G) portan ARN viral y pueden transmitir ARN viral a células mononucleares de sangre
periférica in vitro , dando como resultado una infección productiva [ 98 ]. Los exosomas liberados de las
células infectadas por el VHC contienen ARN del VHC, que puede transferirse con éxito a las células
dendríticas para establecer una infección productiva. Dos estudios posteriores confirmaron que los exosomas
derivados de los hepatocitos infectados por el VHC contener el genoma completo de HCV y tienen la
capacidad para mediar la transferencia de ARN de VHC subgenómico de replicación co mpetente en
PERMISSIVE células ingenuas, dando lugar a la replicación del ARN viral y la infección productiva. También
se ha descubierto que los exosomas derivados de pacientes infectados por el VHC contienen ARN del VHC
con sentido negativo (ARN viral de replicación competente), en asociación con Ago2, HSP90 y miR-122.

Un estudio reciente informó que los exosomas derivados de las células infectadas por el virus T -linfotrópico
humano tipo 1 (HTLV-1) contienen los transcritos de ARNm de genes Tax, HBZ y Env, lo que sugiere que los
exosomas pueden servir como vehículos para administrar ARNm de HTLV-1 funcional a células receptoras.

Los exosomas secretados de los macrófagos alveolares primarios infectados por el VIH -1 llevan microRNAs
virales vmiR88, vmiR99 y vmiR-TAR; Estos miRNA también se han detectado en exosomas purificados a
partir de los sueros infectados por el VIH. Se demostró que los microRNAs virales vmiR88 y vmiR99
estimulaban la señalización en macrófagos, dando como resultado una liberación robusta de TNFα a través
del macrófago endosomal TLR8 [ 104 ]. La expresión de la proteína Nef del VIH en células de tipo macrófago
da como resultado el reclutamiento selectivo de 47 miRNA en exosomas, con dos miRNAs retenidos
selectivamente en las mismas células [ 105], lo que sugiere que la modulación de la composición del RNA
exosomal durante una infección viral es un proceso regulado y que existen mecanismos específicos para
reclutar o retener miRNAs / RNA específicos. Los astrocitos expuestos a una combinación de proteínas de
VIH Tat y drogas de opiáceos secretaron exosomas con niveles elevados de miR-29b. En las neuronas
humanas expuestas a los exosomas enriquecidos con miR-29b, la expresión del factor de crecimiento derivado
de plaquetas B se reprimió y la viabilidad de las neuronas disminuyó correspondientemente [ 106 ]. La
presencia de Ago2, una proteína esencial del complejo silenciador inducido por ARN (RISC) para mediar la
supresión génica dirigida por miARN y los miARN celulares en exosomas secretados de células infectadas
con HTLV-1 sugirió que HTLV-1 podría manipular la traducción de ARNm en células receptoras [ 107 ].

3.2. Exosomas como portadores de proteínas virales

La composición de la proteína exosomal varía según el tipo de célula y el estado de la enfermedad. Se ha

demostrado que varios virus ARN modulan no solo la composición proteica de células huésped de los
exosomas, sino que también reclutan sus propias proteínas en exosomas. Se ha demostrado que los exosomas
de las células infectadas por el VIH-1 incorporan tanto las proteínas Gag [ 108 ] como Nef [ 109 , 110 ]. Este
último se incorpora a los exosomas al anclarse en microdominios de balsas lipídicas a través de su
miristoilación N-terminal y un tramo de aminoácidos básicos que residen en su alfa-hélice-1 [ 111 ], así como
en la interacción con la proteína de la célula hospedadora Mortalin [ 112]. ]

Similar al VIH, la proteína transactivadora HTLV-1 Tax, un factor crítico para la proliferación y
transformación de las células T, se incorpora en los exosomas secretados de células infectadas por virus
[ 103 ]. Varias proteínas celulares también parecen reclutarse a los exosomas de una manera dependiente de
los impuestos, muchos de ellos implicados en la síntesis de proteínas y la presentación del antígeno [ 103 ]. Se
ha demostrado que los exosomas derivados de células infectadas por el VHC portan proteína central d el
VHC, además de las apolipoproteínas ApoE y ApoB [ 101 ]. En pacientes positivos para el VHC, se ha
demostrado que la proteína de membrana celular CD81 se asocia con la glicoproteína E2 de la envoltura. La
liberación extracelular de E2-CD81 dentro de microvesículas se asocia con un aumento de la capacidad de
fusión del virus y la infectividad de las células ingenuas [113 ]. La Tabla 1 recluta la proteína y las especies
de ARN de los virus de ARN reclutados para los exosomas.
 Tabla 1. Proteína viral y especies de ARN presentes en
los exosomas derivados de células infectadas por el
virus de ARN.

3.3. Papel de los exosomas en la patogénesis

Las células dendríticas inmaduras capturan el VIH-1

y pueden transferir estas partículas de VIH-1
capturadas a las células T. Wiley y Gummuluru, en
2006, informaron que los exosomas derivados de
VIH-1 que contienen células dendríticas inmaduras
pueden transferir HIV-1 a células T sin infección de
novo. Los exosomas aislados con cuentas magnéticas
conjugadas con HLA-DR-1 del sobrenadante de DCs
expuestos a virus informadores de HIV-luc incubados con células Jurkat T resultaron en una infección
productiva de las células. También informaron que las partículas de virus endocitadas fueron las principales
contribuyentes a la fracción de virus exocitosis, ya que el tratamiento de las DC expuestas a virus con tripsina
no tuvo efecto o es insignificante en la cantidad de partículas de virus precipitadas por perlas magnéticas
conjugadas con HLA-DR-1 [ 114]. ]

Aunque el papel de los exosomas en la infección por el VIH aún no se ha comprendido completamente, cada
vez hay más pruebas que sugieren que los exosomas facilitan tanto la mejora como la inhibición de la
infección y la replicación, según las células de origen. Por ejemplo, se ha demostrado que los exosomas
derivados de células infectadas por el VIH contienen los correceptores del VIH CCR5 y CXCR4, y la
transferencia de estos correceptores a células no permisivas no infectadas puede aumentar la susceptibilidad
a la infección por el VIH [ 115 , 116 ]. En un estudio reciente, Kadiu et al. informaron que una porción de
viriones del VIH desprendidos de macrófagos derivados de monocitos se asocia con agregados exosómicos
y estos viriones atrapados muestran una infectividad mejorada hacia CD4 +las células diana, en comparación
con las partículas del virus del VIH-1 purificado [ 117 ]. Los individuos infectados por VIH y virémicos
exhiben niveles elevados de citoquinas plasmáticas. Se ha encontrado que muchas citoquinas están
marcadamente enriquecidas en los exosomas de individuos VIH positivos en relación con los controles
negativos y la exposición de células mononucleares de sangre periférica ingenuas a exosomas purificados de
pacientes VIH positivos induce la expresión de CD38 en la memoria central y ingenua CD4 + y CD8 + T las
células, probablemente contribuyendo a la inflamación y la propagación viral a través de la activación de la
célula espectador.

El factor negativo de la proteína accesoria del VIH (Nef) es una de las proteínas virales más antiguas y más
abundantemente expresadas. Nef también se libera en los exosomas. Lenassi et al. (2010) informaron que Nef
no solo estimula su propia exportación a través de los exosomas, sino que estos exosomas de Nef también
facilitan el agotamiento de las células T CD4 + que es un sello distintivo del síndrome de inmunodeficiencia
adquirida (SIDA). De hecho, el VIH Nef, a través de los exosomas, induce la activación de los
linfocitos T CD4 + en reposo, lo que hace que estos linfocitos T CD4 + quiescentes sean permisivos para la
replicación del VIH-1 y estimulan así la diseminación viral. HIV-1 Nef promueve la replicación viral y la
patogénesis al mediar el agotamiento de las moléculas de CD4 y MHC-I. Nef se une a la cola citosólica (TC)
de CD4 y MHC-I e interrumpe el tráfico intracelular de estas proteínas dirigidas a los cuerpos
multivesiculares (MVB) y, en última instancia, a los lisosomas para la degradación. En un estudio reciente,
Carvalho et al. (2014) reportaron que los exosomas secretadas por CD4 + células T, pero no CD4 - células T,
inhiben eficazmente la infección por VIH-1 in vitro, lo que sugiere que exosomal CD4 se puede unir a envolver
proteínas de VIH-1, lo que dificulta la interacción virus con las células diana y eventual mente reduciendo la
infección. También mostraron que este efecto podría invertirse agotando los exosomas de CD4 liberados por
las células T CD4 + que expresan Nef. Los exosomas restantes tienen una capacidad reducida para inhibir la
infección por HV-1 in vitro. HIV Nef también modula la composición exosomal de miARN, lo que sugiere un
papel adicional para los exosomas en la patogénesis del VIH y la replicación viral.
Los exosomas también desempeñan un papel importante en la infección por HTLV -1, probablemente
mediante la administración de proteínas tributarias HTLV-1 funcionales, mediadores proinflamatorios y
transcritos de ARNm vírico de las proteínas Tax, HBZ y Env. Junto con otras proteínas del huésped, el
principal complejo de histocompatibilidad (MHC) clase IA y el precursor de clase IE también se identificaron
en exosomas derivados de células infectadas con HTLV-1. La adición de exosomas derivados de células C81
(que contienen proteína Tax) a las células dendríticas mieloides dio como resultado un aumento significativo
en los niveles de citoquinas IL-2, IL-5 e IL-6. De hecho, el Impuesto sin células podría inducir la secreción de
IL-10, IL-12, IL-17A, IFN-γ y G-CSF de las células dendríticas. Los hallazgos de Jaworski et al. (2014) sugieren
que los exosomas juegan un papel crucial en la transducción de señales y pueden contribuir a la patogéne sis
de la infección por HTLV-1.

La citidina deaminasa humana APOBEC3G (A3G) es parte de un sistema de defensa celular contra el VIH -1
así como otros retrovirus. En un estudio reciente, Khatua et al. (2009) encontraron que el APOBEC3G
secretado por las células en los exosomas puede conferir resistencia tanto a la infección defectuosa como al
tipo salvaje de VIH-1 en células receptoras exóticas. Esser et al. demostraron que las moléculas CD45, CD86
y MHC Clase II presentes en los exosomas derivados de células infectadas por el VIH pueden ayudar a
silenciar la respuesta inmune, lo que favorece la replicación del virus. Los exosomas derivados de
células T CD8 +infectadas con VIH-1 suprimieron la replicación de cepas de VIH-1 CCR5 y CXCR4-trópico in
vitromediante la inhibición de la transcripción del VIH-1 en modelos agudos y crónicos de infección. Los
exosomas no solo pueden transmitir HCV a células ingenuas, sino que también ofrecen cierto grado de
protección contra los anticuerpos neutralizantes del VHC. Al hacer uso de imágenes microscópicas
electrónicas de transmisión, Liu et al. demostraron que el VHC estaba presente tanto en las formas libres de
exosomas como en las asociadas a exosomas y la asociación con exosomas confería la capacidad de resistir la
neutralización mediada por anticuerpos contra el VHC, lo que sugiere que el VHC puede utilizar la
transmisión vía exosomas como un mecanismo de evasión inmune.

Recientemente se ha demostrado que un nuevo conjunto de proteínas llamadas proteínas transmembrana

inducibles por el IFN 1, 2 y 3 (IFITM1, 2 y 3) muestran actividades antivirales inducidas por el IFN, lo que
confiere resistencia de las células huésped a diversos patógenos virales [ 124 ]. En su estudio Zhu et al. (2015)
encontraron que el nivel de proteína IFITM3 en las células huésped se correlaciona inversamente con su
susceptibilidad a la infección por Dengue Virus-2 (DENV-2). Los exosomas derivados de células HUVEC o
HepG2 contienen proteína IFITM3 y pueden transferir esta proteína a las células vecinas. Al investigar el
aspecto funcional de esta transferencia de IFITM3 mediada por exosomas, descubrieron que en las células
receptoras, la infección por DENV-2 fue efectivamente suprimida por los exosomas que contienen IFITM3 de
una manera dependiente de la dosis. Los autores sugirieron que los exosomas que contienen IFITM3 no
afectaron los pasos de unión o posterior a la entrada durante la infección por DENV-2, pero redujeron la
penetración de DENV-2 en las células, lo que demuestra un papel importante para los exosomas en la
infección por DENV-2 [ 124].] También hay evidencia de que algunos virus aprovechan los exosomas para
evitar el reconocimiento inmune en el torrente sanguíneo o como reservorios de latencia del virus. Se
descubrió que el virus de la hepatitis A (VHA), un virus no envuelto, se encapsula en vesículas derivadas de
membranas endosomales [ 47 ]. Estas partículas con envoltura de HAV eran completamente infecciosas. Se
parecían a los exosomas y su biogénesis dependía de los ESCRT y los efectores de ESCRT [ 47]. Su capa de
membrana los protegió de la neutralización del anticuerpo y los anticuerpos específicos del virus aparecen
solo después de 3-4 semanas de infección.

4. Posibles aplicaciones en infecciones virales

Los exosomas parecen ser una herramienta importante de comunicación intercelular, como se discutió
anteriormente. Sin embargo, su uso adicional en varios otros procesos también se está evaluando. Los
exosomas se pueden usar como marcador de diagnóstico, como vacunas, y como un vehículo de
administración de fármacos para la administración sistémica o dirigida. Dado que los exosomas se han
detectado en todos los fluidos corporales, pueden purificarse fácilmente y tener una composición que varía
en condiciones normales y enfermas, pueden explotarse como marcadores de diagnóstico de
enfermedades. Sin embargo, el uso de exosomas como marcador de diagnóstico para la infección vi ral aún
no se ha explorado adecuadamente.
La entrega dirigida es otra área donde se está evaluando el potencial de los exosomas para transportar carga
terapéutica a órganos o tejidos específicos. La expresión de moléculas de ligando específicas del receptor en
la superficie del exosoma a través de la ingeniería genética puede transformar los exosomas en potentes
vehículos de administración que pueden administrar un resto terapéutico basado en el fármaco / ARNip /
miARN a células o tejidos de elección. De hecho, la capacidad de los exosomas para suministrar restos
terapéuticos o material genético puede mejorarse aún más mediante la incorporación de proteínas virales
seleccionadas en los exosomas como proteínas de envoltura codificadas por virus que exhiben una unión
superior y especificidad de entrada (revisado en [ 125]). Por ejemplo, los exosomas diseñados para expresar
un péptido de 29 mer derivado de la glicoproteína del virus de la rabia (RVG), que se une específicamente a
los receptores de acetilcolina expresados en las células del cerebro, fueron explotados por Alvarez-Erviti et
al. (2011) para transportar pequeños ARN interferentes al cerebro [ 126 ]. Las células dendríticas inmaduras
(DC) se transfectaron con plásmidos que codifican la proteína exosomal Lamp2b, fusionada con el péptido
RVG 29-mer. Los exosomas se purificaron a partir de cultivos de DC, se cargaron con si ARN de GAPDH o
BACE-1 y se inyectaron por vía intravenosa a través de la inyección de la vena de la cola. La entrega dirigida
dio como resultado una caída específica de GAPDH y BACE-1 en el cerebro del ratón [ 127]. En otros estudios,
los CD fueron transducidos con vector adenoviral para expresar interleucina (IL) -10, IL-4 o FasL, y los
exosomas modificados genéticamente se usaron para tratar trastornos autoinmunes y enfermedades
inflamatorias (revisado en [ 128 ]). Se pueden utilizar métodos similares para diseñar exosomas para
administrar siRNAs para controlar infecciones virales tales como el virus del Nilo Occidental u otras
infecciones virales del cerebro u otros órganos como el hígado o los pulmones. Los exosomas también se están
evaluando como vacunas en el campo de las enfermedades infecciosas. Aline et al. (2004), investigó la eficacia
de los exosomas derivados de la línea celular DC2.4 para montar una respuesta inm une protectora contra la
toxoplasmosis [ 129 ]. Encontraron que Toxoplasma gondiilos exosomas derivados de DC pulsados
transferidos al bazo provocaron una fuerte respuesta sistémica sistémica Th1 modulada por el Toxoplasma in
vivo y pudieron proteger a los animales contra la infección por Toxoplasma [ 129].] Esto sugiere que los
exosomas también pueden usarse para inmunoprofilaxis contra patógenos virales; sin embargo, es necesario
realizar estudios sistémicos para evaluar el papel terapéutico o protector que pueden desempeñar los
exosomas diseñados en el campo de las enfermedades infecciosas. Los exosomas ofrecen muchas ventajas,
que incluyen, entre otros, vehículos de antígenos y señales entre las células, que proporcionan un entorno
estable para los ácidos nucleicos y las proteínas al protegerlos de DNasa, RNasa y proteinasas, asociaci ón /
interacción eficiente con presentación de antígenos células y ofrecen mejores capacidades de distribución
molecular como están presentes en todos los fluidos corporales [ 125 , 130 ].

5. Conclusiones

Varios estudios han demostrado que los exosomas son canales de comunicación intercelulares cruciales y
destacaron su papel potencial en la transmisión viral y la modulación de las respuestas inmunes, ya que los
virus explotan la ruta exosomal para su ensamblaje / brote, transferencia de ARN virales y s upresión de la
activación inmune. Además, los exosomas se podrían utilizar como marcadores de diagnóstico en infecciones
virales y para la administración de fármacos dirigida. Dado que la investigación exosómica relacionada con
las infecciones virales se encuentra todavía en una etapa temprana, se requieren más estudios para descifrar
la interacción entre la biología del exosoma y los virus, ya que una comprensión exhaustiva de la exótica
biología y su participación en infecciones virales permitirían el des arrollo de nuevas estrategias para
interferir con replicación viral y desarrollo de la enfermedad.