FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

ESCUELA PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUIMICA

ASIGNATURA : Análisis Clínicos II

PRACTICA N ° 01

TEMA: Perfil Lipídico: Determinación de colesterol total.

DOCENTE: Mg. Enrique León Mejía

TURNO: mañana CICLO: VII

INTEGRANTE: Jacobe Quichca, Carmen.

Moreno Loza, Mariela.

FECHA DE LA PRÁCTICA: 30/01/20

FECHA DE ENTREGA: 05/01/20

2020-I

Lab. N° 01; PERFIL LIPÍDICO: DETERMINACIÓN DE COLESTEROL TOTAL. Página 1

 INDICE

Pág.

1. Introducción ........................................................................ 3

2. Marco teórico ....................................................................... 4

2.1. Lípidos………….…………………………………………..4

2.2. Colesterol Total…………….……………………………..4

2.3. Valores de Referencia …………………………………..5

2.4. Determinación del Colesterol………….……………….6

2.5. ¿Cuándo hacerse el análisis? …………………………6

2.6. Importancia…………….…….…………………………….7

2.7. Usos…………………..……………………………………..7

3. Parte experimental .............................................................. 8

4. Resultados ......................................................................... 10

5. Interpretación .................................................................... 10

6. Cuestionario ...................................................................... 11

7. Referencias bibliográficas ................................................ 13

Lab. N° 01; PERFIL LIPÍDICO: DETERMINACIÓN DE COLESTEROL TOTAL. Página 2

PERFIL LIPÍDICO: DETERMINACIÓN DEL COLESTEROL TOTAL

1- INTRODUCCION:
El perfil lipídico lo constituye la cuantificación analítica de una serie de lípidos
que son transportados en la sangre por los diferentes tipos de lipoproteínas
plasmáticas. La determinación de estos parámetros es un procedimiento
analítico básico para el diagnóstico y seguimiento de enfermedades
metabólicas, primarias o secundarias.

Entre estos parámetros analíticos que se pueden determinar están: el

colesterol total, el colesterol transportado por las LDL, el colesterol transportado
por las HDL, los triglicéridos totales, ciertas apoproteínas particulares etc. Altos
niveles de colesterol se asocian a riesgo de padecer enfermedades
cardiovasculares, en especial aquel unido a las LDL (colesterol malo).

El colesterol de las HDL (colesterol bueno), puesto que representa aquella

fracción de colesterol que se transporta al hígado para su metabolización y
excreción por vía biliar, no se asocia con riesgo de enfermedad.

Los objetivos de la práctica son la determinación en suero de colesterol total,

HDL-Colesterol y triglicéridos.

Lab. N° 01; PERFIL LIPÍDICO: DETERMINACIÓN DE COLESTEROL TOTAL. Página 3

 2- MARCO TEÓRICO:

2.1. LÍPIDOS.
Los lípidos son un grupo de grasas que son parte importante de las células y
fuentes de energía de nuestro cuerpo. Un perfil lipídico o lipidograma mide el
nivel de lípidos específicos en la sangre.
El colesterol y los triglicéridos son dos importantes tipos de lípidos que por su
naturaleza grasa no pueden mezclarse en la sangre y ser transportados por sí
solos. Por ello, necesitan de proteínas para transportarse de un lado a otro,
llamadas lipoproteínas.
Un nivel elevado de colesterol por sí solo no suele presentar signos ni
síntomas. Se realiza un análisis de colesterol total para determinar si el
colesterol es elevado y estimar el riesgo de desarrollar una enfermedad
cardíaca.

2.2. COLESTEROL TOTAL.

El análisis del colesterol total, también llamado «lipidograma» o «perfil lipídico»,

incluye el cálculo de cuatro tipos diferentes de grasas (lípidos) en la sangre:

 Colesterol total. Corresponde a la suma del contenido de colesterol en la

sangre.

 Colesterol de lipoproteínas de alta densidad (HDL). A veces se lo

denomina colesterol «bueno», porque ayuda a eliminar el colesterol LDL
y, por lo tanto, mantiene las arterias abiertas y la sangre fluye con más
libertad.

 Colesterol de lipoproteínas de baja densidad (LDL). A veces se lo

denomina colesterol «malo». Una cantidad excesiva en la sangre produce
la acumulación de depósitos de grasa (placas) en las arterias
(ateroesclerosis), que reduce el flujo sanguíneo. Estas placas a veces se
rompen y pueden provocar un ataque cardiaco o un accidente
cerebrovascular.

 Triglicéridos. Los triglicéridos son un tipo de grasa de la sangre. Cuando

comes, el cuerpo convierte las calorías que no necesitas en triglicéridos,
que se almacenan en células grasas. Los niveles elevados de triglicéridos
se asocian con varios factores, incluido el sobrepeso, comer muchos
dulces o beber demasiado alcohol, fumar, la vida sedentaria o tener
diabetes con niveles altos de azúcar en la sangre.

Lab. N° 01; PERFIL LIPÍDICO: DETERMINACIÓN DE COLESTEROL TOTAL. Página 4

 2.3. VALORES NORMALES O VALORES DE REFERENCIA.

Lab. N° 01; PERFIL LIPÍDICO: DETERMINACIÓN DE COLESTEROL TOTAL. Página 5

 2.4. DETERMINACIÓN DEL COLESTEROL TOTAL.

Para la determinación de colesterol total se utilizan reactivos

comerciales que incluyen las enzimas y sustratos necesarios para la
cuantificación de todas las formas de colesterol presentes en el suero
(Kit comercial de LinearChemicals). Las reacciones que tienen lugar
son:

CHE

Esteres de colesterol + H2O → Colesterol + Ac. Grasos

CHOD

Colesterol + O2 + H2O → Colestenona + H2O2

POD

H2O2 + Fenol + 4-AP → Quinona + H2O

 Una colesterol estearasa (CHE) hidroliza los ésteres de colesterol a

colesterol más ácidos grasos libre.
 A continuación una colesterol oxidasa (CHOD) oxida todo el colesterol a
colestenona y peróxido de hidrógeno.
 El peróxido de hidrógeno es sustrato de una peroxidasa (POD) que junto
con 4-amino fenazona (4-AP) da lugar a la formación de una quinona
roja.
 La quinona formada es proporcional a la concentración de colesterol en
la muestra.

2.5. ¿CUÁNDO HACER EL ANÁLISIS?

Si no tienes factores de riesgo:

 Jóvenes: Una vez entre los 9 y 11 años; y otra entre los 17 y 21 años.
 Adultos: cada 5 años.
Realizar pruebas más frecuentes si presentas alguno(s) de los
siguientes factores de riesgo:

 Fumar cigarrillos.

Lab. N° 01; PERFIL LIPÍDICO: DETERMINACIÓN DE COLESTEROL TOTAL. Página 6

  Edad (hombre mayor de 45 años y mujer mayor a 50 años).
 Colesterol HDL bajo en control previo (menos de 40 mg/dL).
 Hipertensión (presión arterial de 140/90 o superior, o tomar
medicamentos para la presión arterial alta).
 Historia familiar de enfermedad cardiaca prematura.
 Diabetes

2.6. IMPORTANCIA.

El seguimiento y mantenimiento de niveles saludables de estos lípidos es

importante para mantenerse saludable. Mientras el cuerpo produce parte del
colesterol necesario para funcionar correctamente, otra parte del colesterol
proviene de la dieta. Comer demasiados alimentos altos en grasas saturadas y
no saturadas, comer alimentos con demasiado aporte de energía que no
gastamos (por ejemplo, exceso de harinas en una persona con poca actividad
física) o tener una predisposición hereditaria, puede resultar en un alto nivel de
colesterol y/o triglicéridos en la sangre.
El exceso de colesterol LDL puede ser depositado en placas ubicadas en las
paredes de los vasos sanguíneos formando una “placa”, la cual puede crecer y
eventualmente bloquear el flujo de sangre a través de los vasos sanguíneos, lo
que lleva a producir infartos en el corazón o en el cerebro. Además, produce el
endurecimiento de las arterias (aterosclerosis).
Un alto nivel de triglicéridos en la sangre, también se asocia con un mayor
riesgo de desarrollar una enfermedad cardiovascular.
2.7. USOS.
El médico utiliza la información para evaluar, junto con otros signos y síntomas,
el riesgo de una dislipidemia y sus complicaciones, como un infarto cardíaco o
una apoplejía, provocados por obstrucción de los vasos sanguíneos, causados
por ateromas o placas de colesterol, es decir para valorar el riesgo
cardiovascular de la persona e instituir así un régimen adecuado de prevención
y tratamiento.

Lab. N° 01; PERFIL LIPÍDICO: DETERMINACIÓN DE COLESTEROL TOTAL. Página 7

 3- PARTE EXPERIMENTAL :

3.1. Materiales y Equipos a usar:

 Tubos de ensayo 13x100mm.
 Gradilla de metal.
 Micropipetas 10 y1000uL.
 Espectrofotómetro.
 Cubetas.
 Centrifuga.
 Equipo para extracción de sangre venosa.
3.1.1. Muestra: Suero sanguíneo

3.1.2. Solución estándar: 200mg/dl

3.2. Reactivos Enzimático:

 Colesterol éster hidrolasa
 Colesterol oxidasa
 Peroxidasa

3.3. Procedimiento:
A. Extraer sangre venosa para luego proceder a centrifugar por 10 minutos
3000RPM.

Luego de
centrifugar

Lab. N° 01; PERFIL LIPÍDICO: DETERMINACIÓN DE COLESTEROL TOTAL. Página 8

B. Rotular 3 cubetas con las letras B (blanco), S (estándar) y D (desconocido).
Y colocar en cada cubeta como se indica en el siguiente cuadro.

B S D

Reactivo Enzimático (ml) 1,0 1,0 1,0

H2O (d) (ml) --------- 1,0 ---------
Solución estándar (ml) ----------- ----------- 1,0

C. Mezclar, incubar por 10 minutos a temperatura ambiente. Leer en el

espectrofotómetro a 505 nm.

D. Con los resultados de la lectura realizar los cálculos correspondientes

utilizando la siguiente fórmula.

DONDE:
F = [200] / lect. Abs.st F= factor

[200] = concentración del

Col. Total (mg/dl) = F x lect. Abs. D
estándar.

Valores normales:

140 – 200 mg/dl

Lab. N° 01; PERFIL LIPÍDICO: DETERMINACIÓN DE COLESTEROL TOTAL. Página 9

 4- RESULTADOS:
Lectura St Lectura D RESULTADOS

1 0,474 0,453 191.14 mg/dl

2 0,417 0,386 185.13 mg/dl
3 0,469 0,457 194.88 mg/dl
4 0,295 0,491 332.88 mg/dl
5 0,355 0,318 179.15 mg/dl
6 0,454 0,336 148.02 mg/dl

5- INTERPRETACION :
De las 6 lecturas realizadas casi todos se encuentran dentro d los valores
normales a excepción del número 4; con esto se podría sospechar la
existencia de una enfermedad seria del metabolismo, como la
hipercolesterolemia familiar o como consecuencia de otras enfermedades, tales
como defecto de hormonas tiroideas, enfermedades renales o diabetes.

Lab. N° 01; PERFIL LIPÍDICO: DETERMINACIÓN DE COLESTEROL TOTAL. Página 10

 6- CUESTIONARIO :

1.- cómo se explica las reacciones que ocurren en la determinación de

colesterol total por el método enzimático.

2.- qué precauciones se deben tener con respecto a las reacciones que
intervienen en esta prueba enzimático.
Los reactivos son para uso diagnóstico "in vitro".

Provoca irritación cutánea y ocular.

Evitar el contacto con los ojos, la piel o la ropa.

En caso de contacto con los ojos: Enjuagar cuidadosamente con agua durante
varios minutos.

En caso de contacto con la piel: lavar con agua y jabón abundantes.

Utilizar los reactivos guardando las precauciones habituales de trabajo en el

laboratorio de análisis clínicos.

Todos los reactivos y las muestras deben descartarse de acuerdo a la

normativa local vigente

3.-expplique como se sintetiza el colesterol en nuestro organismo

La mayor parte del colesterol sintetizado es recogido in situ por las
lipoproteínas LDL y VLDL, que también se fabrican en el hígado, y el complejo
resultante se transporta al interior del retículo endoplásmico, de donde pasa al
aparato de Golgi para ser exportado a la sangre.

Lab. N° 01; PERFIL LIPÍDICO: DETERMINACIÓN DE COLESTEROL TOTAL. Página 11

4. porqué e importante la determinación de colesterol en una persona de
edad avanzada.
Es importante, porque el colesterol empieza a subir a partir de los 20 años y
continua subiendo hasta los 60 o 65 años, suele ser más alto en los hombres
que en las mujeres de la misma edad hasta los 50 años, pero a partir de esta
edad (50) ocurre lo contrario, en las mujeres comienza a subir con la
menopausia.

A medida que una persona envejece, sus niveles sanguíneos de ciertas grasas
disminuyen. Por este motivo, hasta ahora no estaba muy claro hasta qué punto
concentraciones elevadas de estas sustancias indicaban un mayor riesgo
cardiaco en los ancianos. Un estudio confirma que a esa edad tener alto el
colesterol 'malo' o LDL y un tipo de proteína (ApoB) aumenta la probabilidad de
sufrir una enfermedad cardiaca.

Lab. N° 01; PERFIL LIPÍDICO: DETERMINACIÓN DE COLESTEROL TOTAL. Página 12

 7- REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS :

1. Díaz L. Qué es Perfil Lipídico y los Valores Normales de Perfil de

Lípidos. 2018. Disponible en: https://tuchequeo.com/perfil-lipidico-
valores-normales-de-lipidos-en-sangre/

2. José Henry Osorio. Determinación de los niveles de colesterol

LDL en una especie con patrón HDL. ISSN. Rev. Investig. Vet.
Perú vol.24 no.3 Lima ago. 2013. Disponible en:
http://www.scielo.org.pe/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1609-
91172013000300003
3. Bauer JE. 1997. Metabolismo comparado de lípidos y
lipoproteínas. Pet´s Ciencia 13: 362-376.
4. Isaac Túnez Fiñana. Perfil lipídico. Departamento de Bioquímica y
Biología Molecular, Avda. Menéndez Pidal s/n, 14071- Córdoba, 2
Campus de Rabanales, Edif. Severo Ochoa 14071-Córdoba.
Disponible en : https://www.uco.es/dptos/bioquimica-biol-
mol/pdfs/25%20PERFIL%20LIPIDICO.pdf
5. D’Ocon Navaza C, García-Saavedra MJ, Vicente García JC
(1999): Fundamentos y Técnicas de Análisis Bioquímico, Análisis
de Muestras Biológicas. Editorial Paraninfo, Madrid.
6. TRABAJOS MÉDICOS-CONSULTA DE ARTÍCULOS DE
MEDICINA/ AUTOR : Lourdes Sánchez/ Disponible en :
http://trabajosmedicos.blogspot.com/2012/08/determinacion-de-
colesterol- total-y-ldl.html

Lab. N° 01; PERFIL LIPÍDICO: DETERMINACIÓN DE COLESTEROL TOTAL. Página 13