Campbell-Biochemistry-6th-Ed (Capítulos 6 y 7 en Español)

El comportamiento de las proteínas:
Enzimas
CAPÍTULO 6
6.1 Las enzimas son catalizadores biológicos eficaces
De todas las funciones de las proteínas, catálisis es probablemente el más importante. En ausencia de la catálisis, la
mayoría de las reacciones en los sistemas biológicos se llevarían a cabo con demasiada lentitud para proporcionar
productos a un ritmo adecuado para un organismo que metaboliza. Los catalizadores que sirven esta función en los
organismos se denominan enzimas.
Con la excepción de algunos ARN (ribozimas) que tienen actividad catalítica (que se describe en las secciones 11.7 y
12.4), todas las otras enzimas son proteínas globulares (Sección 4.3). Las enzimas son los mayoría de los catalizadores
e fi cientes conocidos; que pueden aumentar la velocidad de una reacción por un factor de hasta 10 20 sobre las
reacciones no catalizadas. catalizadores no enzimáticos, por el contrario, normalmente mejoran la velocidad de reacción
por factores de 10 2 a 10 4.
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Como veremos en los dos capítulos siguientes, las enzimas se caracterizan por ser altamente específico,
incluso hasta el punto de ser capaz de distinguir los estereoisómeros de un compuesto dado, y aumentando
considerablemente la velocidad de una reacción. En muchos casos, las acciones de las enzimas son afinado por
los procesos normativos.
Viajan más de un puerto de montaña es una analogía utilizada con
frecuencia para describir el progreso de una reacción química. Los
Sección 6.1 Resumen catalizadores aceleran el proceso.
■ Los catalizadores son sustancias que aceleran la velocidad de una reacción química.
■ Las enzimas son los catalizadores biológicos que aceleran las reacciones metabólicas que tienen lugar en el
Bosquejo del capítulo
cuerpo.
6.1 Las enzimas son catalizadores biológicos eficaces
■ La mayoría de las enzimas son proteínas globulares.
6.2 Cinética frente Termodinámica
• Si una reacción es espontánea, ¿significa que el proceso será rápido?
6.2 Cinética frente a la Termodinámica • Será una reacción más rápida si se eleva la temperatura?
6.3 Las ecuaciones cinéticas enzimáticas
La velocidad de una reacción y su favorabilidad termodinámico son dos temas diferentes, aunque están • Es la velocidad de una reacción siempre se basa en la
concentración de los reactivos?

estrechamente relacionados. Esto es cierto de todas las reacciones, si es o no un catalizador está involucrado.
6.4 La unión de la enzima-sustrato
La diferencia entre las energías de los reactivos (el estado inicial) y las energías de los productos (el estado
• ¿Por qué las enzimas se unen a sustratos?
final) de una reacción da el cambio de energía para esa reacción, expresada como la cambio de energía libre
6.5 Ejemplos de reacciones catalizadas con enzima
estándar, o sol °. cambios de energía pueden ser descritos por varias magnitudes termodinámicas • ¿Por qué quimotripsina y ATCasa tener diferentes curvas de
relacionadas. Vamos a utilizar los cambios de energía libre estándar para nuestra discusión; la cuestión de si velocidad?
una reacción se ve favorecida depende sol ° (véanse las Secciones 1.9 y 15.2). Enzimas, al igual que todos los 6.6 El enfoque de Michaelis-Menten para la cinética
catalizadores, aceleran las reacciones, pero no pueden alterar la constante de equilibrio o el cambio de • ¿Cómo calculamos K METRO y V máx a partir de un gráfico? ¿Cuál es el
energía libre. La velocidad de reacción depende de la energía libre de activación o energía de activación ( sol ° ‡), • significado de K METRO y V max?
la energía de entrada requerida para iniciar la reacción. La energía de activación para una reacción no 6.7 Inhibición de la Enzima
• ¿Cómo podemos identificar un inhibidor competitivo? ¿Cómo podemos

catalizada es mayor que la de una reacción catalizada; en otras palabras, una reacción no catalizada requiere
• identificar un inhibidor no competitivo?
más energía para empezar. Por esta razón, su tasa es más lenta que la de una reacción catalizada.
Firmar en www.thomsonedu.com/login probarse a sí mismo en estos conceptos.

4 Capítulo 6 El comportamiento de las proteínas: Enzimas
UNA La reacción de la glucosa y el gas oxígeno para producir dióxido de carbono y agua es un ejemplo de una
reacción que requiere un número de catalizadores enzimáticos:
Estado de transición
Glucosa + 6O 2 3 6CO 2 + 6H 2 O
Esta reacción es termodinámicamente favorable (espontánea en el

sentido termodinámico) porque su cambio de energía libre es negativa ( sol ° = -2880 kJ mol -1 = -689 kcal
+
mol -1).
Δ sol °+ = Energía gratis
de la activación
Si una reacción es espontánea, ¿significa que el proceso será

Energía gratis
rápido?
reacción
Tenga en cuenta que el término espontáneo no significa “instantáneo”. La glucosa es estable en el aire con un
Δ sol ° = cambio de
suministro ilimitado de oxígeno. La energía que debe suministrarse para iniciar la reacción (que entonces procede
energía libre
con una liberación de energía) -la activación de energía es conceptualmente similar al acto de empujar un objeto a
productos la cima de una colina de modo que entonces se puede deslizar hacia abajo el otro lado.
El progreso de la reacción La energía de activación y su relación con el cambio de energía libre de una reacción mejor se pueden
mostrar gráficamente. En la figura 6.1a, la X coordinar muestra el grado en el que la reacción ha tenido lugar,
segundo
y el y coordinar indica la energía libre para una reacción idealizada. los perfil energía de activación muestra las
catalizada etapas intermedias de una reacción, aquellos entre los estados inicial y final. perfiles de energía de activación
son esenciales en la discusión de los catalizadores. La energía de activación afecta directamente a la
velocidad de reacción, y la presencia de un catalizador acelera una reacción cambiando el mecanismo y por
lo tanto la reducción de la energía de activación. Figura 6.1a traza las energías para una reacción
exergónica, espontánea, tales como la oxidación completa de la glucosa. En el máximo de la curva que
conecta los reactivos y los productos se encuentra el estado de transición con la cantidad necesaria de
catalizado no
energía y la disposición correcta de los átomos para producir productos. La energía de activación también
puede verse como la cantidad de energía libre necesaria para que las sustancias reaccionantes al estado de
Energía gratis
transición.
reactivos
La analogía de viajar en un paso de montaña entre dos valles se utiliza con frecuencia en las discusiones
productos de los perfiles de energía de activación. El cambio en la energía corresponde al cambio en la elevación, y el
progreso de la reacción corresponde a la distancia recorrida. El análogo del estado de transición es la parte
El progreso de los reactivos de superior del paso. Un esfuerzo considerable se ha ido a la elucidación de las etapas intermedias en las
reacciones de interés para los químicos y bioquímicos y determinar el mecanismo de vía o reacción que se
Figura 6.1 perfiles de energía libre. ( a) La encuentra entre los estados inicial y final. dinámica de las reacciones, el estudio de las etapas intermedias
rgía libre de perfil de activación para una reacción típica. La reacción
muestra aquí es exergónica (ING-releas- energía). Tenga en cuenta la de los mecanismos de reacción, es actualmente un campo muy activo de investigación. En el capítulo 7,
rencia entre la energía libre de activación ( Δ sol ° ‡) y la energía libre vamos a examinar el uso de moléculas que imitan el estado de transición, llamados análogos de estado de
ndar de la reacción ( Δ sol °). (B) Una comparación de la energía libre
transición, que se utilizan para estudiar los mecanismos específicos de la catálisis enzimática.
perfiles de activación para las reacciones catalizadas y no catalizadas.
energía libre de activación de la reacción catalizada es mucho menor
el de la reacción no catalizada.
El efecto más importante de un catalizador en una reacción química es evidente a partir de una
comparación de los perfiles de energía de activación de la misma reacción, catalizada y no catalizada, como
se muestra en la figura 6.1b. La variación de energía libre estándar para la reacción, sol °, se mantiene sin
cambios cuando se añade un catalizador, pero la energía de activación, sol ° ‡, se reduce. En la analogía de la
colina-y-valle, el catalizador es una guía que encuentra un camino más fácil entre los dos valles. Una
comparación similar se puede hacer entre dos rutas desde San Francisco a Los Ángeles. El punto más alto
en la Interestatal 5 es Tejon Pass (elevación 4.400 pies) y es análoga a la ruta no catalizada. El punto más
alto en la autopista US 101 no es mucho más de 1000 pies. Por lo tanto, la carretera 101 es una ruta más
fácil y es análoga a la vía catalizada. Los puntos inicial y final del viaje son los mismos, pero los caminos
entre ellos son diferentes, al igual que los mecanismos de las reacciones catalizadas y no catalizadas. La
presencia de una enzima disminuye la energía de activación necesaria para moléculas de sustrato para
alcanzar el estado de transición. La estafa-
6.2 Cinética frente Termodinámica 145
el centrado de los aumentos de estado de transición notablemente. Como resultado, la velocidad de la reacción catalizada
es mucho mayor que la velocidad de la reacción no catalizada. catalizadores enzimáticos mejoran una velocidad de
reacción por muchas potencias de 10.
La reacción bioquímica en la que el peróxido de hidrógeno (H 2 O 2) se convierte en agua y oxígeno
proporciona un ejemplo del efecto de los catalizadores en la energía de activación.
2H 2 O 2 3 2H 2 O + O 2
La energía de activación de esta reacción se reduce si se permite que la reacción proceda en

superficies de platino, pero se reduce aún más por la enzima catalasa. Tabla 6.1 resume las
energías implicadas.
Tabla 6.1
La reducción de la energía de activación de descomposición de
peróxido de hidrógeno mediante catalizadores
Energía libre de activación
Condiciones de reacción kJmol- 1 kcal mol 1 Tasa relativa
sin catalizador 75.2 18.0 1

superficie de platino 48.9 11.7 2,77 10 4
catalasa 23.0 5.5 6.51 10 8
Dosis se dan en unidades arbitrarias respecto a un valor de 1 para la reacción no catalizada a 37ºC.
Conexiones bioquímicos CIENCIAS DE LA SALUD
Enzimas como marcadores de la enfermedad

Algunas enzimas sólo se encuentran en los tejidos mercantiles o en un número limitado de enfermedad. Hay marcadores altamente específicos para enzimas activas en el páncreas, las células
tales tejidos. La enzima lactato deshidrogenasa (LDH) tiene dos tipos diferentes de rojas de la sangre, el hígado, el corazón, el cerebro y glándula de la próstata, y muchas de las
subunidades que se encuentra principalmente en el músculo cardíaco (H), y otro encuentra glándulas endocrinas. Debido a que estas enzimas son relativamente fáciles de ensayo, incluso
en el músculo esquelético (M). Las dos subunidades diferentes difieren ligeramente en la utilizando técnicas automatizadas, que son parte de la sangre “estándar” prueba de su médico es
composición de aminoácidos; en consecuencia, se pueden separar electroforéticamente o probable que solicitar.
cromatográficamente sobre la base de carga. Debido LDH es un tetrámero de cuatro
subunidades, y porque las subunidades H y M pueden combinar en todas las combinaciones
posibles, LDH puede existir en cinco diferentes formas, llamados isoenzimas, dependiendo
de la fuente. Un aumento de cualquier forma de LDH en la sangre indica algún tipo de daño a
los tejidos. Un ataque al corazón antes se diagnostica por un incremento de la LDH de MMMH mhmh mhhh
músculo cardíaco. Del mismo modo, existen diferentes formas de creatina quinasa (CK), una
enzima que se produce en el cerebro, corazón y músculo esquelético. Apariencia del tipo
cerebro puede indicar un derrame cerebral o un tumor cerebral, mientras que el tipo del METRO 3 H METRO 2 H 2 MH 3
corazón indica un ataque al corazón. Después de un ataque al corazón, CK aparece más formas heterogéneas
rápidamente en la sangre de LDH. Control de la presencia de ambas enzimas se extiende la
posibilidad de diagnóstico, que es útil, debido a un ataque al corazón muy suave puede ser
difícil de diagnosticar. Un nivel elevado de la isozima de músculo del corazón en la sangre es MMMM HHHH
una de indicación finito de daños en el tejido del corazón.
METRO 4 H4
formas homogéneas
Una enzima particularmente útil a ensayo es la acetilcolinesterasa (ACE), que es

importante en el control de ciertos impulsos nerviosos. Muchos pesticidas interfieren con esta
■ Los posibles isoenzimas de la lactato deshidrogenasa. El símbolo
enzima, por lo que los trabajadores agrícolas a menudo se ponen a prueba para asegurarse de
M se refiere a la forma deshidrogenasa que predomina en el músculo
que no han recibido la exposición inadecuada a estas toxinas agrícolas importantes. De hecho, esquelético, y el símbolo H se refiere a la forma que predomina en
más de 20 enzimas se utilizan normalmente en el laboratorio clínico para diagnosticar corazón muscular (diac car-).
100 Será una reacción más rápida si se eleva la temperatura?

El aumento de la temperatura de una mezcla de reacción aumenta la energía disponible para los reactantes
para alcanzar el estado de transición. En consecuencia, la velocidad de una reacción química aumenta con la
máxima actividad Porcentaje
temperatura. Uno podría estar tentado a asumir que esto es una verdad universal para las reacciones
bioquímicas. De hecho, el aumento de la velocidad de reacción con la temperatura se produce sólo en un grado
50
limitado con las reacciones bioquímicas. Es útil para elevar la temperatura al principio, pero con el tiempo llega
un punto en el que se alcanza la desnaturalización térmica de la enzima (sección 4.4). Por encima de esta
temperatura, la adición de más calor desnaturaliza más enzima y ralentiza la reacción. La Figura 6.2 muestra
una curva típica de efecto de la temperatura en una reacción enzymecatalyzed. La caja de conexiones
0 bioquímica anterior describe otra forma en que la especificidad de las enzimas es de gran utilidad.
20 0 40 60 80
Temperatura, ° do
Figura 6.2 El efecto de la temperatura sobre la actividad enzimática. La

idad relativa de una reacción enzimática como una función de la temperatura.
isminución de la actividad por encima de 50 ° C es debido a la
Sección 6.2 Resumen
naturalización térmica.
■ La termodinámica de una reacción bioquímica se refiere a si una reacción es espontánea. Una
reacción espontánea tiene una energía libre de Gibbs negativo o sol °.
■ Kinetics se refiere a qué tan rápido se produce una reacción. Una reacción puede tener un negativo sol ° y todavía no
suceder rápidamente.
■ Las enzimas aceleran una reacción mediante la reducción de la energía de activación de una reacción.
Ellos ayudan al sustrato y la enzima alcanzar el estado de transición, el punto alto de un diagrama de
energía para la reacción.
6.3 Las ecuaciones cinéticas enzimáticas

La velocidad de una reacción química se expresa generalmente en términos de un cambio en la
concentración de un reactivo o de un producto en un intervalo de tiempo dado. Cualquier método
experimental conveniente se puede utilizar para controlar los cambios en la concentración. En una reacción
de la forma A + B 3 P, donde A y B son reactivos y P es el producto, la velocidad de la reacción puede
expresarse en términos de la velocidad de desaparición de uno de los reactivos o en términos de la
velocidad de aparición del producto. La velocidad de desaparición de A es - [A] / t, dónde simboliza el
cambio, [A] es la concentración de A en moles por litro, y t es hora. Del mismo modo, la velocidad de
desaparición de B es - [B] / t, y la tasa de aparición de P es [P] / t. La velocidad de la reacción se puede
expresar en términos de cualquiera de estos cambios porque las tasas de aparición de producto y la
desaparición del reactivo están relacionadas por la ecuación estequiométrica para la reacción.
Tarifa 5 2 D 3 UNA 4
re 4t 5 D 3 PAG 4re t
re t 5 2 D 3 segundo
Los signos negativos para los cambios en la concentración de A y B indican que A y B están siendo utilizados
en la reacción, mientras que P está siendo producido.
Se ha establecido que la velocidad de una reacción en un momento dado es proporcional al
producto de las concentraciones de los reactivos planteadas a los poderes apropiados,
tasa ` 3 UNA 4 F 3 segundo 4 sol
o, como una ecuación,
Tarifa 5 k 3 UNA 4 F 3 segundo 4 sol
dónde k se llama una constante de proporcionalidad la tarifa constante. los exponentes

F y g se debe determinar experimentalmente. Son no necesariamente iguales a los coeficientes de la
ecuación equilibrada, pero con frecuencia son. Los corchetes, como de costumbre, denotan
concentración molar. Cuando los exponentes en el
6.3 Las ecuaciones cinéticas enzimáticas 147
ecuación de velocidad se han determinado experimentalmente, un mecanismo para la reacción de una descripción
de los pasos detallados a lo largo de la ruta de acceso entre los reactivos y productos se puede proponer.
Los exponentes en la ecuación de velocidad son generalmente pequeños números enteros, tal como 1 o 2.
(también hay algunos casos en los que ocurre el exponente 0). Los valores de los exponentes están relacionados
con el número de moléculas que participan en los pasos detallados que constituyen el mecanismo. los orden
global de una reacción es la suma de todos los exponentes. Si, por ejemplo, la velocidad de una reacción A 3 P
está dada por la ecuación de velocidad
Tarifa 5 k 3 UNA 4 1 (6,1)
dónde k es la constante de velocidad y el exponente para la concentración de A es 1, entonces la reacción se Para

primero con respecto a A y el orden primero en general. La tasa de la desintegración radiactiva del trazador de
isótopos de fósforo ampliamente utilizado 32 ( 32 PAG; peso atómico = 32) depende sólo de la concentración de 32 P
presente. Aquí tenemos un ejemplo de una reacción de primer orden. Solo el 32 átomos de P están involucrados en
el mecanismo de la desintegración radiactiva, que, como una ecuación, toma la forma
32 PAG 3 Tasa de productos de
desintegración 5 k 3 32 PAG 4 1 5 k 3 32 PAG 4
Si la velocidad de una reacción A + B 3 C + D está dada por
Tarifa 5 k 3 UNA 4 1 3 segundo 4 1 (6,2)
dónde k es la constante de velocidad, el exponente para la concentración de A es 1, y el exponente para la

concentración de B es 1, entonces la reacción se dice que es primer orden con respecto a A, el orden primero
con respecto a B, y segundo orden en general. En la reacción de glucógeno n ( un polímero de la glucosa con norte
residuos de glucosa) con fosfato inorgánico, P yo, para formar glucosa 1-fosfato + glucógeno norte -1, la velocidad de
reacción depende de las concentraciones de ambos reactivos.
El glucógeno norte + PAG yo 3 La glucosa 1-fosfato + glucógeno norte -1
Velocidad = k [ El glucógeno] 1 [ PAG yo] 1 = k [ El glucógeno] [P yo]
dónde k es la constante de velocidad. Tanto el glucógeno y el fosfato toman parte en el mecanismo de

reacción. La reacción de glucógeno con fosfato es el orden primero con respecto a glucógeno, orden
primero con respecto al fosfato, y segundo orden en general.
Muchas reacciones son comunes primer o segundo orden. Después de que el orden de la reacción se
determina experimentalmente, las propuestas se pueden hacer sobre el mecanismo de una reacción.
Es la velocidad de una reacción siempre se basa en la

concentración de los reactivos?
Exponentes en una ecuación de velocidad pueden ser igual a cero, con la velocidad de una reacción A 3 B dada por la
ecuación
Velocidad = k [ UNA] 0 = k (6,3)
Tal reacción se llama de orden cero, y su tasa, que es constante, no depende de las concentraciones de reactivos
sino de otros factores, tales como la presencia de catalizadores. reacciones catalizadas por enzimas pueden
presentar una cinética de orden cero cuando las concentraciones de los reactivos son tan altos que la enzima está
completamente saturado con moléculas de reactivo. Este punto se discutirá con más detalle más adelante en este
capítulo, pero, por el momento, podemos considerar la situación análoga a un cuello de botella c tráfico en el que
seis carriles de automóviles están tratando de cruzar un puente de dos carriles. La velocidad a la que se cruzan los
coches no se ve afectada por el número de coches esperando, sólo por el número de carriles disponibles en el
puente.

■ La velocidad de una reacción química se mide por la tasa de aparición de los productos o la
velocidad de desaparición de los sustratos.
■ La velocidad de una reacción es matemáticamente igual a una constante de velocidad, k, multiplicado por la
concentración de sustrato (s) elevado a un exponente.
■ El orden de una reacción es descrita por el exponente en la ecuación de velocidad. órdenes de
reacción común son de orden cero, primer orden, y segundo orden.
■ La constante de velocidad, k, y los exponentes deben ser medidos experimentalmente para cada
reacción.
6.4 La unión enzima-sustrato

En una reacción catalizada por la enzima, la enzima se une a la sustrato ( uno de los reactivos) para formar un
complejo. La formación del complejo conduce a la formación de las especies del estado de transición, que forma
entonces el producto. La naturaleza de los estados de transición en reacciones enzimáticas es un gran campo de la
investigación en sí misma, pero algunas afirmaciones generales se puede hacer sobre el tema. Un sustrato se une,
generalmente por interacciones no covalentes, a una pequeña porción de la enzima llamada la
sitio activo, con frecuencia situado en una hendidura o grieta en la proteína y que consiste en ciertos aminoácidos
que son esenciales para la actividad enzimática (Figura 6.3). La reacción catalizada se lleva a cabo en el sitio
activo, por lo general en varios pasos.
¿Por qué las enzimas se unen a sustratos?

El primer paso es la unión del sustrato a la enzima, que se produce debido a interacciones fi C altamente
específicas entre el sustrato y las cadenas laterales y los grupos de cadena principal de los aminoácidos que
componen el sitio activo. Dos modelos importantes se han desarrollado para describir el proceso de unión. La
primera, la cerradura y la llave de modelo,
asume un alto grado de similitud entre la forma del sustrato y la geometría del sitio de unión de la enzima
(Figura 6.3a). El sustrato se une a un sitio cuya forma complementa su propia, como una llave en una
cerradura o la pieza correcta en un rompecabezas tridimensional. Este modelo tiene un atractivo intuitivo,
pero ahora es en gran parte
modelo de la cerradura y llave ajuste inducido modelo
sustrato sustrato
+
+
Sitio activo
2
12 12 3
3 12 3
3
enzima-sustrato
complejo complejo
Enzima Enzima 1
enzima-sustrato
UNA En el modelo de cerradura y llave, la forma del sustrato y la confirmación En el

segundo modelo de ajuste inducido, la enzima experimenta un cambio conformacional
del sitio activo son complementarias entre sí. tras la unión al sustrato. La forma del sitio activo se convierte en complementaria a la
forma del sustrato sólo después el sustrato se une a la enzima.
6.4 La unión de la enzima-sustrato 149
de interés histórico, ya que no tiene en cuenta una propiedad importante de proteínas, es decir, su flexibilidad
conformacional. El segundo modelo tiene en cuenta el hecho de que las proteínas tienen cierta flexibilidad en
tres dimensiones. De acuerdo a esto fi induced- t modelo, La unión del sustrato induce un cambio
conformacional en la enzima que resulta en una complementaria fi t después de que el sustrato se une (Figura
6.3b). El sitio de unión tiene una forma tridimensional diferente antes se une el sustrato. La fi t modelo induced-
también es más atractivo cuando consideramos la naturaleza del estado de transición y la energía de activación
rebajado que se produce con una reacción catalizada por la enzima. La enzima y el sustrato deben unirse para
formar el complejo ES antes que nada puede suceder. ¿Qué pasaría si esta unión eran demasiado perfecto?
Figura 6.4 muestra lo que sucede cuando E y S se unen. Una atracción debe existir entre E y S para que se
unen. Esta atracción hace que el complejo ES a ser menor en un diagrama de energía que el E + S en la
salida. A continuación, los ES encuadernados deben alcanzar la conformación de la EX estado de transición ‡. Si
la unión de la E y S para formar ES eran una perfecta fi cio, el ES estarían en una energía tan baja que la
diferencia entre ES y EX ‡ sería muy grande. Esto ralentizará la velocidad de reacción. Muchos estudios han
demostrado que las enzimas aumentan la velocidad de reacción mediante la reducción de la energía del estado
de transición, EX ‡, mientras que aumenta la energía del complejo ES. El modelo de t fi induced- ciertamente
apoya esta última consideración mejor que el modelo clave lockand-; De hecho, la fi t modelo induced- imita el
estado de transición.
Después de que el sustrato se une y el estado de transición se forma posteriormente, se puede

producir la catálisis. Esto significa que los enlaces deben ser reorganizados. En el estado de transición,
el sustrato se une cerca de átomos con los que es para reaccionar. Además, el sustrato se coloca en la
orientación correcta con respecto a los átomos. Ambos efectos, la proximidad y la orientación, la
velocidad de la reacción. Como enlaces se rompen y se forman nuevos enlaces, el sustrato se
transforma en producto. El producto se libera de la enzima, que puede catalizar la reacción de más
sustrato para formar más producto (Figura 6.5). cada enzima
Enzyme-transición
compleja estado
EX ‡
Enzima + enzima-sustrato
Energía gratis
sustrato complejo
Δ sol mi‡
Enzima +
producto
E+S
ES E+P
■ FIGURA 6.4 La energía libre de perfil de activación de
El progreso de la reacción una reacción con fuerte unión del sustrato a la enzima para
formar un complejo enzima-sustrato.
E+S ES EX ‡ E+P
Producto
formó Producto liberado de la

producto enzima
complejo +
enzima-sustrato Enzima Enzima
Producto
■ FIGURA 6.5 La formación de producto a partir de sustrato (unido a la enzima), seguido de la liberación del producto.
tiene su propio modo único de la catálisis, lo cual no es sorprendente en vista de la gran especificidad
enzimas. Aún así, existen algunos modos generales de la catálisis de reacciones enzimáticas. Dos enzimas,
quimotripsina y aspartato transcarbamilasa, son buenos ejemplos de estos principios generales.
■ Antes de que una reacción puede ser catalizada, la enzima y el sustrato deben unirse.
■ El sustrato se une a la enzima en un bolsillo especial llamado el sitio activo.
■ La unión al sitio activo es reversible y se produce a través de interacciones no covalentes.
■ Dos modelos se utilizan a menudo para describir la unión: el modelo de tecla de bloqueo-y-y el modelo
de ajuste inducido.
■ El modelo de ajuste inducido es la descripción más precisa de la formación del complejo ES, ya
que explica cómo la unión de E + S conduce hacia el establecimiento del estado de transición.
6.5 Ejemplos de reacciones catalizadas con enzima

quimotripsina es una enzima que cataliza la hidrólisis de enlaces peptídicos, con alguna especificidad para residuos
que contengan cadenas laterales aromáticas. La quimotripsina también escinde el péptido bonos en otros sitios,
tales como leucina, histidina, y la glutamina, pero con una frecuencia menor que en los residuos de aminoácidos
aromáticos. También cataliza la hidrólisis de los enlaces éster.
CO R2 + O
CO + +
H 3 norte R2
R1 norte
R1 O-
H
péptido Ácido Amina
catalizadas por quimotripsina

CO R2 + H 2 OH 2
CO + HO R2 + H+
R1 O
R1 O-
Ester Ácido Alcohol
CO
H 2 condiciones de O básicas reacciones
H 3 do O O-
+ 2H + + CO
H 3 do O-
NO 2 NO 2
pag- nitrofenilacetato pag- Nitrophenolate (amarillo)
6.5 Ejemplos de reacciones catalizadas con enzima 151
Aunque la hidrólisis del éster no es importante para el papel fisiológico de la quimotripsina en la

digestión de las proteínas, es un sistema modelo conveniente para la investigación de la catálisis de la
enzima de reacciones de hidrólisis. El procedimiento de laboratorio habitual es utilizar pag- ésteres de
nitrofenilo como sustrato y para monitorear el progreso de la reacción por la aparición de un color amarillo
en la mezcla de reacción causado por la producción de pag- ion nitrofenolato.
En una reacción típica en la que una pag- nitrofenil éster se hidroliza por la quimotripsina, la tasa
velocidad de reacción ( V)
experimental de la reacción depende de la concentración del sustrato, en este caso, la pag- éster de
nitrofenilo. A bajas concentraciones de sustrato, la velocidad de reacción aumenta a medida que se
añade más sustrato. A concentraciones de sustrato más altas, la velocidad de la reacción cambia muy
poco con la adición de más sustrato, y se alcanza una tasa máxima. Cuando estos resultados se
presentan en una gráfica, la curva es hiperbólica (Figura 6.6).
Otra reacción catalizada por enzima es la catalizada por la enzima aspartato

transcarbamilasa ( ATCasa). Esta reacción es el primer paso en un camino que conduce a la
pag concentración
formación de trifosfato de citidina (CTP) y de uridina trifosfato (UTP), que son en última instancia -Nitrophenylacetate [S]
necesaria para la biosíntesis de ARN y ADN. En esta reacción, carbamoil fosfato reacciona con
aspartato para producir aspartato carbamoil e ion fosfato. ■ Figura 6.6 La dependencia de la reacción dad veloc-, V, en pag- concentración
nitrofenilacetato, [S], en una reacción catalizada por la quimotripsina. La
forma de la curva es hiperbólica.
carbamoil fosfato + Aspartato 3 Carbamoil aspartato + HPO 42-
Reacción catalizada por la aspartato transcarbamilasa
La velocidad de esta reacción depende también de concentración de sustrato, en este caso, la concentración de
aspartato (la concentración de fosfato de carbamoílo se mantiene constante). Los resultados experimentales
muestran que, una vez más, la velocidad de la reacción depende de la concentración de sustrato a
concentraciones bajas y moderadas, y, una vez más, una velocidad máxima se alcanza a altas concentraciones
de sustrato.
Hay, sin embargo, una diferencia muy importante. Para esta reacción, un gráfico que muestra la
dependencia de la velocidad de reacción de la concentración de sustrato tiene un sigmoidal lugar de forma
hiperbólica (Figura 6.7).
¿Por qué quimotripsina y ATCasa tener

diferentes curvas de velocidad?
Los resultados de los experimentos sobre la cinética de reacción de la quimotripsina y la aspartato
transcarbamilasa son representativos de los resultados experimentales obtenidos con muchas enzimas. El concentración Aspartato [S]
comportamiento cinético global de muchas enzimas se asemeja a la de la quimotripsina, mientras que otras
■ Figura 6.7 La dependencia de la reacción dad veloc-, V, de la
enzimas comportan de manera similar a aspartato transcarbamilasa. Podemos utilizar esta información para
concentración de aspartato, [S], en una reacción catalizada por la
sacar algunas conclusiones generales sobre el comportamiento de las enzimas. La comparación entre los aspartato transcarbamilasa. La forma de la curva es sigmoidal.
comportamientos cinéticos de quimotripsina y ATCasa es una reminiscencia de la relación entre los
comportamientos de unión a oxígeno de la mioglobina y la hemoglobina, discuten en el Capítulo 4. ATCasa y
hemoglobina son proteínas alostéricas; quimotripsina y la mioglobina no lo son. (Recuerde de la sección 4.5
que las proteínas alostéricos son aquellos en los que los cambios sutiles en un sitio afectan a la estructura y
la función en otro sitio. Efectos cooperativos, como el hecho de que la unión de la molécula de primer
oxígeno a la hemoglobina hace que sea más fácil para otras moléculas de oxígeno para unen, son un sello
de proteínas alostéricas.) Las diferencias de comportamiento entre alostérico y proteínas nonallosteric puede
entenderse en términos de modelos basados en las diferencias estructurales entre los dos tipos de proteínas.
Cuando nos encontramos con los mecanismos de las muchas reacciones catalizadas por enzimas en los
capítulos siguientes, necesitaremos un modelo que explica la trama hiperbólico de los datos de cinética de
enzimas nonallosteric y otro modelo que explica la trama sigmoidal para las enzimas alostéricos. El modelo
de Michaelis-Menten se utiliza ampliamente para las enzimas nonallosteric, y varios modelos se utilizan para
las enzimas alostéricos.

■ La quimotripsina es una enzima que escinde los péptidos cerca de aminoácidos con cadenas laterales
aromáticas. Se puede estudiarse mediante el uso de un análogo de sustrato que contiene pag- nitrofenilacetato.
■ Cuando la velocidad de la quimotripsina se representa gráficamente frente su sustrato, la curva es una hipérbola.
■ Aspartato transcarbamilasa es una enzima que está implicada en la síntesis de nucleótidos.
■ Cuando la velocidad de la aspartato transcarbamilasa se representa gráficamente frente aspartato, la curva es

sigmoidal.
■ La diferencia entre las curvas de velocidad para la quimotripsina y la aspartato
transcarbamilasa demuestra la diferencia entre una enzima alostérica y una enzima
nonallosteric.
6.6 El enfoque de Michaelis-Menten

Cinética de la enzima
Un modelo particularmente útil para la cinética de las reacciones catalizadas por enzimas se ideó en 1913 por
Leonor Michaelis y Maud Menten. Todavía es el modelo básico para las enzimas nonallosteric y es ampliamente
utilizado, a pesar de que ha sido objeto de muchas modi fi caciones.
Una reacción típica podría ser la conversión de algún sustrato, S, a un producto,

P. La ecuación estequiométrica para la reacción es
S 3 PAG
El mecanismo para una reacción catalizada por la enzima se puede resumir en la forma
k1 k2
ES º ES 3 EP (6,4)
k1
Tenga en cuenta la suposición de que el producto no se convierte al sustrato de una manera

apreciable. En esta ecuación, k 1 es la constante de velocidad para la formación del complejo
enzima-sustrato, ES, de la enzima, E, y el sustrato, S; k -1
es la constante de velocidad para la reacción inversa, la disociación del complejo ES a la enzima libre y
el sustrato; y k 2 es la constante de velocidad para la conversión del complejo ES al producto P y la
posterior liberación del producto de la enzima. La enzima aparece explícitamente en el mecanismo, y las
concentraciones de tanto la enzima libre, E y complejo enzima-sustrato, ES, por lo tanto, aparecen en las
ecuaciones de velocidad. Catalizadores característicamente se regeneran al final de la reacción, y esto
es cierto de las enzimas.
Cuando medimos la tasa (también llamada la velocidad) de una reacción enzimática a diferentes
concentraciones de sustrato, vemos que la tasa depende de la concentración de sustrato, [S]. Medimos la
velocidad inicial de la reacción (la tasa de medida inmediatamente después de la enzima y el sustrato se
mezclan) de modo que podemos estar seguros de que el producto no se convierte al sustrato de una manera
apreciable. Esta velocidad se escribe a veces V en eso o V 0 para indicar esta velocidad inicial, pero es importante
recordar que todos los cálculos implicados en la cinética enzimática asumen que la velocidad medida es la
velocidad inicial. Podemos representar gráficamente los resultados como en la Figura 6.8. En la región inferior
de la curva (a bajos niveles de substrato), la reacción es de primer orden (Sección 6.3), lo que implica que la
velocidad, V, depende de la concentración de sustrato [S]. En la parte superior de la curva (a niveles más altos
de substrato), la reacción es de orden cero; la velocidad es independiente de la concentración. Los sitios
activos de todas las moléculas de enzima están saturados. En la concentración de sustrato infinito, la reacción
procederá en su velocidad máxima, escrito V máx.
6.6 El enfoque de Michaelis-Menten para la cinética 153
La concentración de sustrato a la que la reacción procede en la mitad de su velocidad máxima

tiene un significado especial. Se da el símbolo K METRO, que se puede considerar una medida inversa de
la afinidad de la enzima por el sustrato. Cuanto menor sea el K METRO, cuanto mayor es la afinidad.
la cinética de orden cero
(tarifa no dependen de la
Vamos a examinar las relaciones matemáticas entre las cantidades [E], [S], V max, y K METRO. El concentración de sustrato)
Velocidad inicial ( V en eso)

mecanismo general de la reacción catalizada por la enzima implica la unión de la enzima, E, al
sustrato para formar un complejo, ES, que forma entonces el producto. La velocidad de formación
cinética de primer orden
del complejo enzima-sustrato, ES, es (Tasa depende de la
concentración de
sustrato)
Tasa de formación 5 D 3 ES 4 (6,5) La concentración de sustrato [S]

re t 5 k 1 3 mi 4 3 S 4
dónde [ES] / t significa el cambio en la concentración del complejo, [ES], durante un tiempo dado t, y k 1
■ FIGURA 6.8 La velocidad y la cinética observada de una
es la constante de velocidad para la formación del complejo. reacción enzimática dependen de la concentración Strate sub-. La
concentración de enzima, [E], es constante.
El complejo ES se descompone en dos reacciones, devolviendo a la enzima y el sustrato o al dar lugar

al producto y la liberación de enzima. La velocidad de desaparición del complejo es la suma de las
velocidades de las dos reacciones.
Tasa de descomposición 5 2D 3 ES 4 (6,6)

re t 5 k 2 1 3 ES 4 1 k 2 3 ES 4
El signo negativo en el término - [ES] / t significa que la concentración del complejo disminuye a medida que
los complejos se rompe. El termino k -1 es la constante de velocidad para la disociación del complejo de
regenerar la enzima y el sustrato, y k 2 es la constante de velocidad para la reacción del complejo para dar el
producto y la enzima.
Las enzimas son capaces de procesar el sustrato de manera muy eficiente, y una estado estable pronto es
alcanzado en el que la velocidad de formación del complejo enzima-sustrato es igual a la velocidad de su
descomposición. Muy poco complejo está presente, y se da la vuelta rápidamente, pero su concentración se
mantiene igual con el tiempo. De acuerdo con la teoría del estado estacionario, entonces, la velocidad de formación
del complejo enzima-sustrato es igual a la tasa de su degradación,
re 3 ES 4
(6,7)
re t 5 2D 3 ES re
4t
y
k 1 3 mi 4 3 S 4 5 k 2 1 3 ES 4 1 k 2 3 ES 4 (6,8)
Para resolver la concentración del complejo, ES, es necesario conocer la concentración de las
otras especies involucradas en la reacción. La concentración inicial de sustrato es una condición
experimental conocido y no cambia significativamente durante las etapas iniciales de la reacción. La
concentración del sustrato es mucho mayor que la concentración de enzima. La concentración total de
la enzima, [E] T, es también conocido, pero una gran proporción de la misma puede estar implicada en
el complejo. La concentración de enzima libre, [E], es la diferencia entre [E] T, la concentración total, y
[ES], que puede ser escrita como una ecuación:
[E] = [E] T - [ES] (6,9)
Sustituyendo para la concentración de enzima libre, [E], en la ecuación 6.8,
k 1 ([ MI] T - [ES]) [S] = k -1 [ ES] + k 2 [ ES] (6,10)
Recopilación de todas las constantes de velocidad para las reacciones individuales,
1 3 mi 4 T 2 3 ES 4 2 3 S 4
5 k211 k2 5 K METRO (6,11)
3 ES 4 k1
dónde K METRO que se llama el constante de Michaelis. Ahora es posible resolver la ecuación
6,11 para la concentración de complejo enzima-sustrato:
1 3 mi 4 T 2 3 ES 4 2 3 S 4
5 K METRO
3 ES 4
3 mi 4 T 3 S 4 2 3 ES 4 3 S 4 5 K METRO 3 ES 4
3 mi 4 T 3 S 4 5 3 ES 4 1 K METRO 1 3 S 4 2
3 ES 4 5 3 mi 4 T 3 S 4 (6,12)
K METRO 1 3 S 4
En las etapas iniciales de la reacción, tan poco producto está presente que ninguna reacción inversa de
producto a complejo necesita ser considerada. Así, la tasa inicial determinada en reacciones enzimáticas
depende de la velocidad de descomposición del complejo enzima-sustrato en producto y la enzima. En el
modelo de Michaelis-Menten, la velocidad inicial, V, de la formación del producto depende sólo de la
velocidad de la descomposición del complejo ES,
V = k 2 [ ES] (6,13)
y en la sustitución de la expresión para [ES] partir de la ecuación 6.12,
V 5 k 2 3 mi 4 T 3 S 4 (6,14)
K METRO 1 3 S 4
Si la concentración de sustrato es tan alta que la enzima está completamente saturado con sustrato
([ES] = [E] T), la reacción procede a su tasa máxima posible ( V max). Sustituyendo [E] T para [ES] en la
ecuación 6.13,
V = V max = k 2 [ MI] T (6,15)
La concentración total de enzima es una constante, lo que significa que
V max = Constante
Esta expresión para V máx se parece que para una reacción de orden cero dada en la ecuación 6.3:
Velocidad = k [ UNA] 0 = k
Tenga en cuenta que la concentración de sustrato, [A], aparece en la ecuación 6.3 en lugar de la
concentración de enzima, [E], como en la ecuación 6.15. Cuando la enzima está saturado con sustrato,
se observan cinéticas de orden cero con respecto al sustrato.
Sustituyendo la expresión para V máx en la ecuación 6.14 nos permite relacionar la velocidad
observada en cualquier concentración de sustrato a la tasa máxima de una reacción enzimática:
V 5 V máx 3 S 4 (6,16)
K METRO 1 3 S 4
La figura 6.8 muestra el efecto de aumentar la concentración de sustrato en la tasa observada. En

un experimento tal, la reacción se realiza a varias concentraciones de sustrato, y la tasa se determina
siguiendo la desaparición de reactivo, o la aparición de producto, a modo de cualquier método
conveniente. A bajas concentraciones-sustrato, se observan cinéticas de primer orden. A
concentraciones de sustrato más altas (más allá de 10 × K METRO), cuando se satura la enzima, se observa
la característica velocidad de reacción constante de cinética de orden cero.
Esta tasa constante, cuando la enzima está saturado con sustrato, es el V máx
para la enzima, un valor que puede ser estimada aproximadamente desde el gráfico. El valor de K METRO también
puede estimarse a partir de la gráfica. De la ecuación 6.16,
V 5 V máx 3 S 4
K METRO 1 3 S 4
Cuando se ajustan las condiciones experimentales de modo que [S] = K METRO,
V máx
V 5 V máx 3 S 4
3S413S4
V máx
V 5 V máx
2 2
En otras palabras, cuando la velocidad de la reacción es la mitad de su valor máximo, la concentración

de sustrato es igual a la constante de Michaelis (Figura 6.9). Este hecho es la base de la determinación
gráfica de K METRO.
Tenga en cuenta que la reacción usada para generar la ecuación de Michaelis-Menten era la enzima
K METRO
simple ecuación posible, que con un único sustrato de ir a un solo producto. La mayoría de las enzimas
catalizan reacciones que contienen dos o más sustratos. Esto no invalida nuestras ecuaciones, sin La concentración de sustrato [S]
embargo. Para las enzimas con múltiples sustratos, las mismas ecuaciones se pueden utilizar, pero sólo un
sustrato se pueden estudiar a la vez. Si, por ejemplo, tuvimos la reacción catalizada por la enzima ■ Figura 6.9 Determinación gráfica de
V máx y K METRO partir de una gráfica de la velocidad de reacción, V,
frente a la concentración de sustrato, [S]. V máx es la tasa constante alcanzado
cuando la enzima está completamente saturado con sustrato, un valor que con
A+B3P+Q
frecuencia debe ser estimada a partir de un gráfico de este tipo.
aún podríamos utilizar el enfoque de Michaelis-Menten. Si tenemos A en niveles de saturación y luego

variar la cantidad de B en un amplio intervalo, la curva de la velocidad frente a [B] todavía será una
hipérbola, y aún podemos calcular el K METRO para
B. A la inversa, se podría mantener el nivel de B a niveles de saturación y variar la cantidad de A para determinar
la K METRO para A. Hay incluso enzimas que tienen dos sustratos en los que, si trazamos V frente a [sustrato A],
vemos la hipérbola de Michaelis-Menten, pero, si representamos gráficamente V frente a [sustrato B], vemos la
curva sigmoidal se muestra para la aspartato transcarbamilasa en la Figura 6.7. Técnicamente el término K METRO es
apropiado sólo para las enzimas que exhiben una curva hiperbólica de la velocidad frente a [sustrato].
¿Cómo calculamos K METRO y V máx a partir de un gráfico?

La curva que describe la velocidad de una reacción enzimática nonallosteric es hiperbólica. Es bastante
difícil de estimar V máx porque es una asíntota, y el valor no se alcanza nunca con cualquier concentración de
sustrato infinito que podríamos utilizar en el laboratorio. Esto, a su vez, hace que sea difícil de determinar la K
METRO de la enzima. Es considerablemente más fácil trabajar con una línea recta que una curva. Uno puede
transformar la ecuación de una hipérbola (Ecuación 6.16) en una ecuación para una línea recta mediante la
adopción de los recíprocos de ambos lados:
1
V 5 K METRO
V máx
1 33SS44
1
V máx 3 S 4 1 3 S 4V máx 3 S 4
V 5 K METRO
1 (6,17)
31
V máx
V 5 K METRO 3S411 V máx
La ecuación ahora tiene la forma de una línea recta, y = mx + segundo, donde 1 / V toma el lugar de la y coordenada
y 1 / [S] toma el lugar de la X coordinar. La pendiente de la línea, metro, es K METRO/ V max, y el y interceptar, segundo, es
1 / V máx. Figura 6.10 presenta esta información gráficamente como una Lineweaver-Burk gráfico doble
recíproco. Por lo general es más fácil trazar la mejor línea recta a través de un conjunto de puntos que para
estimar el mejor ajuste de los puntos de una curva. Existen métodos informáticos convenientes para la
elaboración de la mejor línea recta a través de una serie de puntos experimentales. Dicha línea se puede
extrapolar a altos valores de [S], los que podrían ser inalcanzable debido a los límites de solubilidad o el costo
del sustrato. La línea extrapolada se puede utilizar para obtener V máx.
(
1 K METRO 1 1
= max ( +
V [S] V máx
VV
K METRO
pendiente = V máx
-1
X intersección = K METRO
1
y intersección =
V máx
0 1
[S]
■ Figura activa 6,10 A Lineweaver-Burk trama de doble recíproco de ics enzima kinet-. El recíproco de la velocidad de
reacción, 1 / V, se traza contra el recíproco de la concentración de sustrato, 1 / [S]. La pendiente de la línea es K METRO/ V max, y el y intersección
es 1 / V máx. los X CEPT inter es -1 / K METRO. Firmar en www.thomsonedu.com/login para ver una versión interactiva de esta
figura.
Aplicar sus conocimientos
Los datos siguientes describen una reacción catalizada por la enzima. Representar gráficamente estos resultados utilizando
el método de Lineweaver-Burk, y determinar los valores de K METRO y V máx.
El símbolo m METRO representa milimoles por litro; 1 m M = 1 X 10 -3 mol L -1.
(La concentración de la enzima es la misma en todos los experimentos.)
Concentración de sustrato Velocidad
( mM) ( mM segundo 1)
2.5 0,024
5.0 0,036
10.0 0,053
15.0 0,060
20.0 0,061
Solución
El recíproco de la concentración de sustrato y de la velocidad da los siguientes resultados:
1 / [S] ( mM 1) 1 / V ( mM segundo 1) 1
0,400 41.667
0,200 27.778
0,100 18.868
0,067 16,667
0,050 15,625
45
y = 75.46x + 11,791
40
35
30
25
Velocidad
20
15
10
- -0.15 -0.10 -0.05 0.20 0.00 0.05 0.10 0.15 0.20 0.25 0.30 0.35 0.40
sustrato
Trazar los resultados da una línea recta. Visualmente a partir de la gráfica, la y

intercepción es 12 y el X intersección es -0,155. El recíproco de la y intersección es V max, que es
igual a 0,083 mM sec -1. El recíproco de la negativa de la
X intersección = K M = 6,45 m METRO. También podemos usar la ecuación exacta de la línea de mejor ajuste a
los puntos experimentales, que es 1 / V = 75,46 (1 / [S]) + 11,8. Usando la ecuación genera el siguiente: K M = 6,39
m METRO y V max = 0,0847 m METRO segundo -1.
¿Cuál es el significado de K METRO y V max?

Ya hemos visto que cuando la velocidad de una reacción, V, es igual a la mitad de la velocidad máxima posible, V
= V max / 2, a continuación, K M = [ S]. Una interpretación de la constante de Michaelis, K METRO, es que es igual a la
concentración de sustrato a la que 50% de los sitios activos de enzimas están ocupadas por sustrato. La
constante de Michaelis tiene las unidades de concentración.
Otra interpretación de K METRO se basa en los supuestos del modelo original de Michaelis-Menten de la
cinética enzimática. Recordemos la ecuación 6.4:
k1 k2
ES º ES 3 EP (6,4)
k1
Como antes, k 1 es la constante de velocidad para la formación del complejo enzima-sustrato, ES, de la
enzima y el sustrato; k -1 es la constante de velocidad para la reacción inversa, la disociación del complejo
ES a la enzima libre y el sustrato; y k 2 es la constante de velocidad para la formación del producto P y la
posterior liberación del producto de la enzima. También recordar partir de la ecuación 6.11 que
K METRO 5 k 2 1 1 k 2
k1
Consideremos el caso en el que la reacción de E + S 3 ES se lleva a cabo con más frecuencia que ES 3 E + P. En
términos cinéticos, esto significa que la constante de velocidad de disociación
k -1 es mayor que la constante de velocidad para la formación del producto, k 2. Si k -1 es mucho
mayor que k 2 ( k -1 >> k 2), como se había supuesto originalmente por Michaelis y Menten, a continuación, aproximadamente
K METRO 5 k 2 1
k1
Es informativo comparar la expresión de la constante de Michaelis con la expresión de la

constante de equilibrio para la disociación del complejo ES,
k1
ES º ES
k1
los k valores son las constantes de velocidad, como antes. La expresión de la constante de equilibrio es
K eq 5 3 mi 4 3 S 4
3 ES 4 5 k 2 1 k1
Esta expresión es la misma que la de K METRO y hace que el punto de que, cuando el supuesto de que k -1 >> k 2 es
válida, K METRO es simplemente la constante de disociación para el complejo ES. K METRO es una medida de la fuerza
con el sustrato se une a la enzima. Cuanto mayor es el valor de K METRO, el menos fuertemente el sustrato se une a
la enzima. Tenga en cuenta que en la aproximación del estado estacionario, k 2 No se supone que es pequeño en
comparación con k -1; por lo tanto, K METRO no es técnicamente una constante de disociación, a pesar de que se utiliza
a menudo para estimar la afinidad de la enzima por el sustrato.
V máx está relacionada con la número de recambio de una enzima, una cantidad igual a la constante catalítica, k 2.
Esta constante también se conoce como k gato o k pag:
V
3 mi T 4 5 número de recambio 5 k gato
El número de recambio es el número de moles de sustrato que reaccionan para formar el producto por mol de
enzima por unidad de tiempo. Esta declaración asume que la enzima está completamente saturado con el
sustrato y por lo tanto que la reacción avanza a la velocidad máxima. Tabla de números de rotación 6.2 Listas
para enzimas típicos, donde las unidades están por segundo.
Los números de recambio son una ilustración particularmente dramático de la eficiencia de la catálisis
enzimática. La catalasa es un ejemplo de una enzima particularmente eficiente. En la Sección 6.1, nos
encontramos con catalasa en su papel en la conversión de peróxido de hidrógeno en agua y oxígeno. Como la
Tabla 6.2 indica, puede transformar 40 millones de moles de sustrato a producto cada segundo. El siguiente
cuadro de conexiones bioquímicas describe algunas informaciones prácticas disponibles a partir de los
parámetros cinéticos que hemos discutido en esta sección.
Tabla 6.2
Números borde Km para algunas enzimas típicas
Enzima Función k cat = Número de recambio* K METRO**
catalasa La conversión de H 2 O 2 a 4 10 7 25
H2 0 y O2
Anhidrasa carbónica Hidratación de CO 2 1 10 6 12
Regenera la acetilcolinesterasa acetilcolina, 1,4 10 4 9.5 10 2
una sustancia importante en la
transmisión de los impulsos nerviosos,
a partir de acetato y colina
quimotripsina enzima proteolítica 1,9 10 2 6,6 10 1

lisozima Se degrada la pared celular bacteriana 0.5 6 10 3
polisacáridos
* La definición de número de recambio es los moles de sustrato convertido en producto por mol de enzima por segundo. Los une son sec 1.
* * Las unidades de KM son milimolar.

6.7 Inhibición de la Enzima 159

■ Michaelis y Menten desarrollaron una serie de relaciones matemáticas para explicar el
comportamiento de muchas enzimas nonallosteric.
■ La ecuación de Michaelis-Menten describe varios parámetros, incluyendo la velocidad
máxima, V max, y la constante de Michaelis, K METRO.
■ V máx describe la velocidad de una reacción catalizada por la enzima cuando hay un nivel de saturación
de sustrato. V máx puede ser utilizado para determinar la constante de velocidad individual, K pag, que
describe la descomposición del complejo ES a E + P.
■ La constante de Michaelis, K METRO, es matemáticamente equivalente a la concentración de sustrato que

genera un medio de V máx.
■ Una gráfica de Lineweaver-Burk es un gráfico recíproco de 1 / V frente a 1 / [S], y que puede ser utilizado para
determinar K METRO y V máx.
1
sustrato
6.7 La inhibición de la enzima

Un inhibidor, como su nombre indica, es una sustancia que interfiere con la acción de una enzima y ralentiza la Enzima
velocidad de una reacción. Una buena cantidad de información sobre las reacciones enzimáticas se puede
obtener mediante la observación de los cambios en la reacción causada por la presencia de inhibidores.
Inhibidores pueden afectar a una reacción enzimática de dos maneras. Un inhibidor reversible se puede unir a
la enzima y posteriormente ser liberado, dejando la enzima en su estado original. Un inhibidor irreversible
reacciona con la enzima para producir una proteína que no es enzimáticamente activa y de la que la enzima
2
original no puede ser regenerado.
inhibidor
competitivo
Dos clases principales de inhibidores reversibles se pueden distinguir sobre la base de los sitios
en la enzima a la que se unen. Una clase consiste de compuestos muy similares en estructura al
sustrato. En este caso, el inhibidor se puede unir al sitio activo y bloquear el acceso del sustrato al
Enzima
mismo. Este modo de acción se llama inhibición competitiva porque el inhibidor compite con el
sustrato por el sitio activo de la enzima. Otra clase importante de inhibidores reversibles incluye
cualquier inhibidor que se une a la enzima en un sitio distinto del sitio activo y, como resultado de la
unión, provoca un cambio en la estructura de la enzima, especialmente alrededor del sitio activo. El
sustrato es todavía capaz de unirse al sitio activo, pero la enzima no puede catalizar la reacción 3 sustrato
cuando el inhibidor se une a ella. Este modo de acción se llama inhibición no competitiva ( Figura
6.11).
Los dos tipos de inhibición se pueden distinguir una de otra en el laboratorio. La reacción se
lleva a cabo en presencia de inhibidor a varias concentraciones de sustrato, y las tasas obtenidos Enzima
se comparan con los de la reacción no inhibida. Las diferencias en los Lineweaver-Burk parcelas
para las reacciones inhibidas y desinhibidas proporcionan la base para la comparación. inhibidor no
competitivo
■ FIGURA 6.11 Los modos de acción de los inhibidores.

La distinción entre los inhibidores competitivos y no competitivos es
¿Cómo podemos identificar un inhibidor competitivo?
que un inhibidor competitivo previene la unión del sustrato a la
En presencia de un inhibidor competitivo, la pendiente de los cambios representación de Lineweaver-Burk, pero el y enzima, mientras que un inhibidor no competitivo no lo hace. (1) Un
complejo de enzima-sustrato en ausencia de tor inhibiciones. (2) un
intercepción no lo hace. (Los X intercepción también cambia.) V máx inhibidor competitivo se une al sitio activo; el sustrato no se puede
no se ha modificado, pero K METRO aumenta. Se necesita más sustrato para llegar a una velocidad dada en enlazar. (3) un inhibidor no competitivo se une a un sitio distinto del
presencia de inhibidor que en su ausencia. Este punto específicamente se aplica al valor c especificidad V max / 2 sitio activo. El sustrato todavía se une, pero la enzima no puede
catalizar la reacción debido a la presencia del inhibidor unido.
(recordar que en V max / 2, la concentración de sustrato, [S], es igual K M) ( Figura 6.12). La inhibición competitiva
puede ser superado por un fi cientemente alta concentración de sustrato.
+ 2 [I]
(
1 + [I]
KS
V
No inhibidor
(-I) mi ES
-1
([
K METRO 1YO] +
K yo
-1
K METRO 1
K yo
V máx
mi EI
0
[S] 1
■ Figura activa 6,12 A Lineweaver-Burk trama de doble recíproco de ics enzima kinet- para la inhibición competitiva. Firmar
en www.thomsonedu.com/login para ver una versión interactiva de esta figura.
En presencia de un inhibidor competitivo, la ecuación para una reacción enzimática se convierte
+S
EI º mi º ES 3 E + P
+I
Conexiones bioquímicos Fisicoquímica orgánica
Información práctica de la cinética de Datos

Las matemáticas de la cinética enzimática sin duda puede mirar desafiante. De hecho, la 5 m METRO, hexoquinasa se esperaría que ser plenamente activa para todas las células del
comprensión de los parámetros cinéticos a menudo puede proporcionar información clave cuerpo. El hígado no sería competir con las otras células de la glucosa. Sin embargo, después
sobre el papel de una enzima dentro de un organismo vivo. Muchas de las formas de hacer de una comida rica en carbohidratos, los niveles de glu- sangre cose a menudo exceden los 10
parcelas cinéticos de este tipo fueron desarrollados por los químicos orgánicos físicas, que m METRO, y, a esa concentración, la glucoquinasa hepática tendría actividad razonable.
uego pasó a proponer mecanismos para las reacciones de todo tipo sobre la base de los datos Además, dado que la enzima se encuentra solamente en el hígado, el exceso de glucosa se
cinéticos (ver sección 7.6). Cuatro aspectos son útiles: comparación de K METRO, comparación de k tomará preferentemente en el hígado, donde puede ser almacenada como glucógeno hasta que
gato o número de recambio, la comparación de k gato/ se necesite. Además, la comparación de los dos azúcares para hexoquinasa indica claramente
que la glucosa se prefiere sobre fructosa como un nutriente.
K METRO las proporciones, y ubicaciones fi específicos de enzimas dentro de un organismo.
Comparación de K METRO Del mismo modo, si se compara la forma de la deshidrogenasa de lactato enzima que se
Vamos a empezar por la comparación de los valores de K METRO para dos enzimas que catalizan un encuentra en el músculo cardíaco al tipo encontrado en el músculo esquelético, uno puede
paso temprano en la descomposición de los azúcares: hexoquinasa y glucoquinasa. Ambas ver pequeñas diferencias en la composición de aminoácidos. Estas diferencias afectan a su
enzimas catalizan la formación de un enlace éster fosfato a un grupo hidroxilo de un azúcar. vez la reacción catalizada por esta enzima, la conversión de piruvato a lactato. El tipo de
Hexoquinasa puede utilizar uno cualquiera de varios azúcares de seis carbonos, incluyendo corazón tiene un alto K METRO, o una bajo afinidad por piruvato, y el tipo muscular tiene una baja
glucosa y fructosa, los dos componentes de sacarosa (azúcar de mesa común), como sustratos. K METRO, o una alto afinidad por piruvato. Esto significa que el piruvato se convierte
La glucoquinasa es una isoenzima de la hexoquinasa que participa principalmente en el preferentemente a lactato en el músculo, pero se utiliza preferentemente para el
metabolismo aeróbico en el corazón, en lugar de ser convertido en lactato. Estas
metabolismo de la glucosa. los K METRO para hexoquinasa es 0,15 m METRO para la glucosa y 1,5 m METRO
para la fructosa. conclusiones son consistentes con la biología conocido y metabolismo de estos dos tejidos.
los K METRO para la glucoquinasa, una enzima específica del hígado, es 20 m M. ( Vamos a
utilizar la expresión K METRO aquí, a pesar de que algunos hexoquinasas estudiados no siguen una
cinética de Michaelis-Menten, y el término [S] 0.5 podría ser más apropiado. No todas las enzimas Comparación de número de recambio
ienen una K METRO, Como puede verse en la Tabla 6.2, las dos primeras enzimas son muy reactivos; catalasa
pero todos tienen una concentración de sustrato que da lugar a tiene uno de los números más altos de rotación de todas las enzimas conocidas. Estos
V max / 2. números altos aluden a su importancia en la desintoxicación de peróxido de hidrógeno y
La comparación de estas cifras nos dice mucho sobre el metabolismo del azúcar. Debido a que el evitando la formación de CO 2 burbujas en la sangre; estos son sus respectivas
nivel de reposo para la glucosa en sangre es de aproximadamente reacciones.
donde EI es el complejo enzima-inhibidor. La constante de disociación para el complejo

enzima-inhibidor se puede escribir
EI º E + I
K yo 5 3 mi 4 3 yo 4
3 EI 4
Se puede demostrar algebraicamente (aunque no vamos a hacerlo aquí) que, en presencia del inhibidor
del valor de K METRO aumenta por el factor
1 1 3 yo 4
K yo
Si sustituimos K M ( 1 + [I] / K YO) para K METRO en la ecuación 6.17, obtenemos
1
31
V máx
V 5 k METRO 3S411 V máx
1
una 1 1 3 1 4 segundo 3 1
V máx
V 5 k METRO K yo 3S411 V máx
y metro X segundo (6,18)
Aquí, el término 1 / V toma el lugar de la y de coordenadas, y el término 1 / [S] toma el lugar de la X coordinar,
como fue el caso en la ecuación 6.17. la intersección
Los valores para la quimotripsina y la acetilcolinesterasa están dentro del rango para las la enzima bajo condiciones nonsaturating. La relación de k gato a
enzimas metabólicas “normales”. La lisozima es una enzima que degrada ciertos componentes K METRO es mucho más constante entre diferentes enzimas que cualquiera
polisacáridos de las paredes celulares bacterianas. Está presente en muchos tejidos del cuerpo. K METRO o k gato solo. En cuanto a los primeros tres enzimas en la Tabla 6.2, podemos ver que el k
Su bajo catalítica e fi ciencia indica que funciona lo suficientemente bien como para catalizar la gato valores varían en un rango de cerca de 3000. La
degradación del polisacárido en condiciones normales. K METRO valores varían en un rango de cerca de 300. Cuando la relación de k gato
a K METRO se compara, sin embargo, el intervalo es solamente 4. El límite superior de una
constante de velocidad de segundo orden depende de la límite controlado por difusión de la
Comparación de k gato/ K METRO rapidez con la E y S pueden venir juntos. El límite de difusión en un medio acuoso está en el
Aunque k gato solo es indicativa de la catalítico e fi ciencia bajo saturar las condiciones intervalo de 10 8 a 10 9. Muchas enzimas han evolucionado para tener k gato a K METRO proporciones
del sustrato, [S] es raramente saturando en condiciones fisiológicas para muchas que permiten reacciones de proceder a estas tasas limitantes. Esto se conoce como siendo
enzimas. La relación in vivo de [S] / K METRO es a menudo en el intervalo de 0,01 a 1, lo catalíticamente perfecto.
que significa que los sitios activos no se llenan con el sustrato. En estas condiciones,
el nivel de sustrato es pequeña, y la cantidad de enzima libre se aproxima al nivel de
enzima total de, porque la mayor parte de ella no está unido a sustrato. La ecuación Las ubicaciones específicas de la enzima
de Michaelis-Menten se puede reescribir de la siguiente forma: Ya hemos visto un ejemplo importante en este caso. Debido a que el hígado es el único órgano
del cuerpo humano con la glucoquinasa, debe ser el órgano principal para el almacenamiento
de exceso de azúcar en la dieta en forma de glucógeno. Del mismo modo, para reponer los
niveles de glucosa en sangre, la glucosa producida en el tejido debe tener su grupo fosfato
eliminado por una enzima llamada fosfatasa glucosa. Debido a que esta enzima se encuentra
V 5 V máx 3 S 4
K METRO 1 3 S 4 5 k gato 3Kmi T41
METRO 3 3S S4 4 solamente en el hígado y, en menor medida, en el riñón, ahora sabemos que el hígado tiene la
función principal de mantener los niveles de glucosa en sangre.
Si a continuación, sustituimos ET con E y asumimos que [S] es insignificante en comparación con K METRO,
podemos reescribir la ecuación como sigue:
V 5 1 k gato/ K METRO 2 3 mi 4 3 S 4
Por lo tanto, en estas condiciones, la relación de k gato a K METRO es una velocidad de segundo orden
constante y proporciona una medida de la deficiencia catalítica ef de
1 / V max, la segundo término de la ecuación para una línea recta, no ha cambiado de la ecuación anterior, pero la
pendiente K METRO/ V máx en la ecuación 6.17 se ha incrementado por el factor (1 + [I] / K YO). La pendiente, la metro término
de la ecuación para una línea recta, es ahora
K METRO
una 1 1 3 yo 4segundo
V máx k yo
dar cuenta de los cambios en la pendiente de la gráfica de Lineweaver-Burk. Tenga en cuenta que la y intercepción
no cambia. Este tratamiento algebraica de inhibición competitiva está de acuerdo con los resultados
experimentales, la validación del modelo, así como los resultados experimentales validan el modelo de
Michaelis-Menten subyacente para la acción enzimática. Es importante recordar que la característica
más distintiva de un inhibidor competitivo es que el sustrato o inhibidor se puede unir la enzima, pero no
ambos. Debido a que tanto están compitiendo por el mismo lugar, su fi cientemente alta sustrato se
“outcompete” el inhibidor. Esta es la razón por V máx no cambia; es una medida de la velocidad a infinito
[sustrato].
¿Cómo podemos identificar un inhibidor no competitivo?

Los resultados cinéticos de inhibición no competitiva difieren de las de inhibición competitiva. El
Lineweaver-Burk para una reacción en presencia y ausencia de un espectáculo inhibidor no
competitivo que tanto la pendiente como la y cambio de intercepción para la reacción inhibida (Figura
6.13), sin cambiar la X interceptar. El valor de V máx disminuye, pero la de K METRO sigue siendo el mismo;
el inhibidor no interfiere con la unión del sustrato al sitio activo. El aumento de la concentración de
sustrato no puede superar la inhibición no competitiva porque el inhibidor y el sustrato no están
compitiendo por el mismo sitio.
La ruta de reacción se ha convertido en considerablemente más complicado, y varios equilibrios deben

ser considerados.
+ SE º ES 3 E + P
+ 1.EI
/ +ª yo
ESI
+S
En presencia de un inhibidor no competitivo, I, la velocidad máxima de la reacción, V Imax, tiene la

forma (que no hará la derivación aquí)
(
V máx
yo
5 V máx
yo 1 3 yo 4 / K yo
(
+I
K METRO
K yo
1 pendiente = V máx
([1YO]
+
K yo
V
mi EI - YO
KS KS
V máx
([1I] +1 K yo K METRO
pendiente = V máx
K yo 1 1
-
K METRO V máx
ES ESI
0 1
[S]
■ Figura activa 6,13 Una gráfica de Lineweaver-Burk de la cinética enzimática para la inhibición tiva noncompeti-. Firmar en
www.thomsonedu.com/login a explorar una versión interactiva de esta figura.
dónde K yo es de nuevo la constante de disociación para el complejo enzima-inhibidor, la IE. Recordemos que
la tasa máxima, V max, aparece en las expresiones para tanto la pendiente y el intercepto en la ecuación para
la gráfica de Lineweaver-Burk (Ecuación
6.17):
1
31
V máx
V 5 K METRO 3S411 V máx
y metro X segundo
En la inhibición no competitiva, reemplazamos el término V máx con la expresión de

V Imax, para obtener
1
una 1 1 3 yo 4segundo 3 1 una 1 1 3 yo 4segundo (6,19)
V máx
V 5 K METRO K yo 3S411 V máx K yo
y metro X segundo
inhibición no competitiva
Las expresiones para tanto la pendiente y el intercepto en la ecuación para una representación
de Lineweaver-Burk de una reacción no inhibida se han sustituido por las expresiones más
complicadas en la ecuación que describe la inhibición no competitiva. Esta interpretación se ve
confirmada por los resultados observados. Con un inhibidor puro, no competitivo, la unión de
sustrato no afecta a la unión de inhibidor, y viceversa. Porque el K METRO es una medida de la fi
nidad de la enzima y sustrato, y porque el inhibidor no afecta a la unión, la K METRO no cambia con
la inhibición no competitiva.
Los dos tipos de inhibición presentada aquí son los dos casos extremos. Hay muchos otros tipos
de inhibición. La inhibición no competitiva se ve cuando un inhibidor se puede unir al complejo ES,
pero no para liberar parcela E. A Lineweaver-Burk de un inhibidor no competitivo muestra líneas
paralelas. los V máx disminuye y la aparente K METRO disminuye también. inhibición no competitiva es en
realidad un caso límite de un tipo de inhibición más general llamado inhibición mixta. Con un inhibidor
mixto, el mismo diagrama de unión se ve como en las ecuaciones de equilibrio anteriores pero, en
este caso, la unión de inhibidor afecta a la unión de sustrato y viceversa. Una gráfica de
Lineweaver-Burk de un inhibidor de la enzima más mixto da líneas que se cruzan en el cuadrante de la
izquierda del gráfico. los
K METRO aumenta, y el V máx disminuye.
Aplicar sus conocimientos
La sacarosa (azúcar de mesa común) se hidroliza en glucosa y fructosa (Sección 16.3) en un

experimento clásico en la cinética. La reacción es catalizada por la enzima invertasa. Utilizando
los datos siguientes, determinar, por el método de Lineweaver-Burk, si la inhibición de esta
reacción por 2 METRO
urea es competitivo o no competitivo.
La concentración de sacarosa V, sin inhibidor V, presente Inhibidor

(Mol L 1) (unidades arbitrarias) (mismas unidades arbitrarias)
0,0292 0,182 0,083

0,0584 0,265 0,119
0.0876 0,311 0,154
0,117 0,330 0,167
0,175 0,372 0,192
Solución
Representar gráficamente los datos con el recíproco de la concentración de sacarosa en la X eje y los recíprocos
de las dos velocidades de reacción sobre la y eje. Tenga en cuenta que las dos parcelas tienen diferentes
pendientes y diferente y intercepta, típicos de inhibición no competitiva. Tenga en cuenta la misma intersección
con el negativo X eje, lo que da -1 / K METRO.
13
12
11
[
10
1 [YO]
intersección = 1 +]
[
V máx K yo K METRO [YO]
98
pendiente =
V máx 1 +] K yo
76
1
(Inhibidor no
5 V yo
competitivo)
1/V
K METRO
4
4
Pendiente = (sin inhibidor
1 V máx
3
V presente)
2
2 1
intersección =
1 V máx
1 0 5 10 15 20 25 30 35
intersección =
K METRO 1 / [S] (M 1)

■ Los inhibidores son compuestos que se unen a las enzimas y reducir la tasa de catálisis.
■ Hay dos tipos principales de inhibidores son competitivos y no competitivos.

■ Los inhibidores competitivos se unen al sitio activo de una enzima y prevenir la unión
simultánea de sustrato.
■ inhibidores no competitivos se unen a las enzimas en un sitio distinto del sitio activo, pero que
alteran el sitio activo de tal manera para reducir la eficiencia catalítica de la enzima.
■ El tipo de inhibición se puede determinar mediante el uso de un gráfico de Lineweaver-Burk.

Conexiones bioquímicos MEDICINA
Inhibición de la enzima en el tratamiento del SIDA

Una estrategia clave en el tratamiento del síndrome de la inmunodeficiencia adquirida Una de las enzimas diana más importantes es la proteasa del VIH, una enzima
(SIDA) ha sido la de desarrollar inhibidores fi específicos que bloquean selectivamente las esencial para la producción de nuevas partículas de virus en las células infectadas.
acciones de enzimas únicas para la inmunodeficiencia humana virus fi ciencia (VIH), que proteasa del VIH es única para este virus. Cataliza el procesamiento de proteínas virales
causa el SIDA. Muchos laboratorios están trabajando en este enfoque para el desarrollo en una célula infectada. Sin estas proteínas, partículas de virus viables no pueden ser
de agentes terapéuticos. Tres enzimas clave son los objetivos actuales de la terapia para liberadas para causar la infección adicional. La estructura de la proteasa del VIH,
el SIDA-transcriptasa inversa, integrasa y proteasa. incluyendo su sitio activo, se conoce a partir de los resultados de la cristalografía de
rayos X. Con esta estructura en mente, los científicos han diseñado y sintetizado
compuestos para unirse al sitio activo. Se realizaron mejoras en el diseño de fármacos
mediante la obtención de estructuras de una serie de inhibidores unidos al sitio activo de
la proteasa del VIH. Estas estructuras también fueron aclarados por cristalografía de
rayos X. Este proceso finalmente llevó a varios compuestos comercializados por
diferentes compañías farmacéuticas. Estos inhibidores de la proteasa del VIH incluyen
saquinavir de Hoffman-LaRoche, ritonavir de Abbott Laboratories, indinavir de Merck,
Viracept de Pfizer, y amprenavir de Vertex Pharmaceuticals. (Estas empresas mantienen
páginas de inicio mativo altamente informales en la World Wide Web.)
disponible debido a restricciones de copyright

El objetivo último es la enzima viral llamada integrasa, que es necesaria para que el virus se
copia de sí misma en la célula huésped. Un fármaco reciente hecha por Merck, llamado MK-0518,
inhibe la enzima grase inte-. El tratamiento del SIDA es más eficaz cuando se utiliza una
combinación de terapias con medicamentos, y la proteasa del VIH, la integrasa y los inhibidores de
la transcriptasa inversa juegan un papel importante. El uso de múltiples inhibidores para las
enzimas virales clave permite que los niveles de cada uno para permanecen por debajo de los
niveles tóxicos a la célula.
Imagen no disponible debido a restricciones de copyright imagen no está
■ sitio activo de VX-478 complejado con el VIH-1 proteasa.

esumen
mar en www.thomsonedu.com/login probarse a sí mismo en

os conceptos.
¿Por qué quimotripsina y ATCasa tener diferentes curvas de velocidad?

una reacción es espontánea, ¿significa que el proceso será rápido? espontaneidad
modinámica no puede decirnos si una reacción será rápida. La velocidad de una La quimotripsina y la aspartato transcarbamilasa exhiben diferentes tipos de
cción es una propiedad cinética controlada por la naturaleza del estado de cinética. La quimotripsina es una enzima nonallosteric y exhibe una cinética
ergía del complejo ES y el estado de transición. Las enzimas aceleran la hiperbólica. ATCasa es una enzima alostérica. Tiene múltiples subunidades,
ocidad de reacción mediante la creación de una situación en la que se reduce la y la unión de una molécula de sustrato afecta a la unión de la siguiente
tancia entre el estado de transición y el complejo ES en un diagrama de energía. molécula de sustrato. Se exhibe una cinética sigmoidal.
rá una reacción más rápida si se eleva la temperatura? Una reacción ¿Cómo calculamos K METRO y V máx a partir de un gráfico? K METRO
mica puede ir más rápido a temperaturas más altas. Sin embargo, cuando la y V máx puede ser estimado mediante el trazado de la velocidad frente a [S]. Sin embargo,
cción es catalizada por una enzima, esto es cierto sólo para un rango específico una forma más precisa es hacer una gráfica de Lineweaver-Burk de 1 / V frente a 1 / [S].
temperaturas. Si la temperatura se eleva demasiado, se desnaturaliza la enzima Con un gráfico tal, el y los rendimientos de intercepción 1 / V max, que luego puede ser
a velocidad de reacción se reduce significativamente, tal vez a cero. convertido a V máx. los X
intercepción es -1 / K METRO, que también puede ser convertido a K METRO.
la velocidad de una reacción siempre se basa en la concentración de ¿Cuál es el significado de K METRO y V max?
reactivos? En muchas situaciones, la concentración de los reactivos hace Matemáticamente, K METRO es igual a la concentración de sustrato que produce
uir en la velocidad de una reacción catalizada por la enzima. Sin embargo, si una velocidad de V max / 2. También es una medida cruda de la afinidad entre la
y muy poco enzima y una cantidad saturante de sustrato, a continuación, enzima y el sustrato, donde un bajo
as las moléculas de enzima están obligados a sustrato. Adición de sustrato K METRO indica una alta afinidad. V máx nos dice qué tan rápido puede generar la enzima
cional bajo esta condición no va a aumentar la velocidad de reacción. Cuando producto bajo condiciones de saturación de sustrato.
o sucede, la enzima ya está trabajando en su V máx y exhibe una cinética de
¿Cómo podemos identificar un inhibidor competitivo?
en cero.
La comparación de un gráfico de Lineweaver-Burk de una reacción sin inhibiciones a
uno para una reacción inhibida, se puede identificar el inhibidor como competitiva si
or qué las enzimas se unen a sustratos? Enzimas y STRATES sub se las curvas se cortan en el y eje.
aen entre sí a través de interacciones no covalentes, tales como las
¿Cómo podemos identificar un inhibidor no competitivo?
acciones electrostáticas. El sitio activo de una enzima tiene aminoácidos en
Con un inhibidor no competitivo, un gráfico de Lineweaver-Burk muestra líneas
a orientación específica en la que se pueden unir al sustrato. El diagrama de
que se cruzan en el X eje.
ergía mostrará que la energía del complejo ES es menor que la energía de la
+ S solo.
ercicios de repaso
mar en www.thomsonedu.com/login para evaluar su

mprensión de los conceptos de este capítulo con interrogando y
riales adicional.
Las enzimas son catalizadores biológicos eficaces 6.2 Cinética frente Termodinámica
Recordar ¿De qué manera la eficacia catalítica de las enzimas Comparar con 5. Recordar Para la reacción de la glucosa con el oxígeno para producir carbono
la de los catalizadores no enzimáticos? dióxido y agua,
Recordar Son todas las proteínas de las enzimas?
Glucosa + 6O 2 3 6CO 2 + 6H 2 O
Matemático La catalasa descompone el peróxido de hidrógeno sobre 10 7
veces más rápida que la reacción no catalizada. En este último caso se requiere un año, la sol ° es -2880 kJ mol -1, una reacción fuertemente exergónica. Sin embargo, una muestra de
¿cuánto tiempo se necesitaría por la reacción catalizada por la catalasa? glucosa se puede mantener indefinidamente en un ambiente que contiene oxígeno. Reconciliar
estas dos afirmaciones.
Reflexionar y Aplicar Dé dos razones por catalizadores enzimáticos son 10 3 a 6. Reflexionar y Aplicar Sería depender de la naturaleza de la misma enzima de Cata-
10 5 más eficaz que las reacciones que son catalizadas por, por ejemplo, simple H + o OH -. lisar una reacción de cualquier manera (hacia adelante o hacia atrás) si el sol fueron
- 0,8 kcal mol -1? Si fuera -5,3 kcal mol -1?
ejercicios de repaso 167
7. Reflexionar y Aplicar Sugerir una razón por la cual el calentamiento de una solución de contención 6.5 Ejemplos de reacciones catalizadas con enzima
ing una enzima disminuye notablemente su actividad. ¿Por qué es la disminución de la actividad
23. Recordar Muestran gráficamente la dependencia de la velocidad de reacción en sub-
con frecuencia mucho menos cuando la solución contiene altas concentraciones de sustrato?
concentración Strate para una enzima que sigue una cinética de Michaelis-Menten y para
una enzima alostérica.
8. Reflexionar y Aplicar Se propone un modelo para explicar la reacción de
24. Recordar ¿Todas las enzimas muestran una cinética de Michaelis que obedecen a la
catalizada por una enzima. datos de velocidad obtenidos experimentalmente se ajustan al modelo de
Menten? Cuáles no?
dentro del error experimental. ¿Estos resultados demuestran el modelo?
25. Recordar Cómo se puede reconocer una enzima que no muestra
la cinética de Michaelis-Menten?
9. Reflexionar y Aplicar ¿La presencia de un catalizador de alterar el estándar
cambio de energía libre de una reacción química? 6.6 El enfoque de Michaelis-Menten para la cinética
10. Reflexionar y Aplicar ¿Qué efecto tiene un catalizador de la activación
la energía de una reacción? 26. Recordar Mostrar gráficamente cómo la velocidad de reacción depende de la
concentración de la enzima. Puede una reacción estar saturado con la enzima?
11. Reflexionar y Aplicar Una enzima cataliza la formación de ATP a partir de
ADP e ion fosfato. ¿Cuál es su efecto sobre la velocidad de hidrólisis de ATP a ADP y 27. Recordar Definir estado estable, y observaciones sobre la pertinencia de esta
fosfato de iones? concepto a las teorías de la reactividad de la enzima.
12. Reflexionar y Aplicar ¿Puede la presencia de un catalizador de aumentar la 28. Recordar ¿Cómo es el número de recambio de una enzima relacionada con V max?
cantidad de producto obtenido en una reacción? 29. Matemático Para una enzima que muestra Michaelis-Menten
cinética, lo que es la velocidad de reacción, V ( como un porcentaje de V max),
6.3 Las ecuaciones cinéticas enzimáticas observado en los siguientes valores? (A) [S] = K METRO
13. Recordar Para la reacción hipotética
3A + 2B 3 2C + 3D (B) [S] = 0,5 K METRO
(C) [S] = 0,1 K METRO

la tasa se determina experimentalmente para ser
(D) [S] = 2 K METRO
Velocidad = k [ UNA] 1 [ SEGUNDO] 1 (E) [S] = 10 K METRO
30. Matemático Determinar los valores de K METRO y V máx para la decar-

¿Cuál es el orden de la reacción con respecto a A? Con respecto a B? ¿Cuál es el orden
boxylation de un β- ácido ceto da los siguientes datos.
global de la reacción? Sugerir cuántas moléculas cada uno de A y B son propensos a
estar involucrados en el mecanismo detallado de la reacción.
Concentración de sustrato (mol L 1) Velocity (m METRO min 1)
14. Reflexionar y Aplicar La enzima lactato deshidrogenasa cataliza la

2,500 0,588
reacción
1,000 0,500
Piruvato + NADH + H + 3 lactato + NAD + NADH absorbe luz a 340 nm en la
0,714 0,417
región cercana al ultravioleta del espectro electromagnético, pero NAD + no lo hace. Sugerir
0,526 0,370
un método experimental para el seguimiento de la velocidad de esta reacción, asumiendo
que se dispone de un espectrofotómetro disponible capaz de medir la luz en esta longitud de 0,250 0,256
onda.
31. Matemático Se obtuvieron los datos cinéticos de la siguiente tabla
para la reacción de dióxido de carbono y agua para producir bicarbon- comió y de iones de
15. Reflexionar y Aplicar Usarías un medidor de pH para controlar la prog-
hidrógeno catalizada por la anhidrasa carbónica:
O prima de la reacción descrita en la pregunta 14? ¿Por qué o por qué no?
dieciséis. Reflexionar y Aplicar Sugerir una razón para llevar a cabo reac- enzimáticos CO 2 + H 2 O 3 HCO 3- + H +
ciones en soluciones tampón.
[H. De Voe y GB Kistiakowsky, Mermelada. Chem. Soc. 83, 274 (1961)]. A partir de estos
6.4 La unión de la enzima-sustrato datos, determinar K METRO y V máx para la reacción.
17. Recordar Distinguir entre los modelos de ajuste inducido de cerradura y llave y
Concentración de dióxido de carbono 1 / Velocidad
para la unión de un sustrato para una enzima.
(Mmol L 1) ( METRO 1 segundo)
18. Recordar El uso de un diagrama de energía, demostrar por qué el modelo de cerradura y llave
podría dar lugar a un mecanismo de enzima ineficiente. Insinuación: Recuerde que la distancia 1.25 36 10 3
hasta el estado de transición debe ser minimizado para una enzima para ser un catalizador
2.5 20 10 3
eficaz.
5.0 12 10 3
19. Reflexionar y Aplicar En igualdad de condiciones, lo que es un potencial
desventaja de una enzima que tiene una afinidad muy alta por su sustrato? 20.0 6 10 3
20. Reflexionar y Aplicar Los aminoácidos que están muy alejados en el aminoácido 32. Matemático La enzima segundo- methylaspartase cataliza la deamina-
secuencia de una enzima puede ser esencial para su actividad catalítica. ¿Qué sugiere ción de segundo- methylaspartate
esto acerca de su sitio activo?
+
21. Reflexionar y Aplicar Si sólo unos pocos de los residuos de aminoácidos de una
CH 3 NUEVA HAMPSHIRE 3 CH 3
enzima están implicados en su actividad catalítica, ¿por qué la enzima necesita un gran
- - +
número de aminoácidos, tales? OOC CH CH ARRULLO - OOC CH CH 2 ARRULLO - NUEVA HAMPSHIRE 4
22. Reflexionar y Aplicar Un químico sintetiza un nuevo compuesto que mesaconato

absorbe a 240
puede ser estructuralmente análogo a las especies del estado de transición en una reacción catalizada
nm
por la enzima. El compuesto se muestra experimentalmente para inhibir la reacción enzimática
fuertemente. ¿Es probable que este compuesto es de hecho un análogo del estado de transición?
[V. Williams y J. Selbin, J. Biol. Chem. 239, 1636 (1964)]. La velocidad de la reacción se 42. Recordar Distinguir entre los mecanismos moleculares de competitividad
determinó mediante el seguimiento de la absorbancia del producto a 240 nm (A 240). A tivo y la inhibición no competitiva.
partir de los datos de la tabla siguiente, determinar K METRO para la reacción. ¿Cómo 43. Recordar Puede enzima inhibición invertirse en todos los casos?
funciona el método de cálculo difiere de la de las preguntas 30 y 31?
44. Recordar ¿Por qué es una gráfica de Lineweaver-Burk útil en el análisis cinético
datos de reacciones enzimáticas?
45. Recordar ¿De dónde líneas se cruzan en un gráfico que muestra Lineweaver-Burk
Concentración de sustrato Velocidad
¿inhibición competitiva? En una gráfica de Lineweaver-Burk que muestra la inhibición no
(Mmol L 1) ( UNA 240 min 1)
competitiva?
46. Matemático Dibuje Lineweaver-Burk parcelas para el comportamiento de una

0,002 0,045
enzima para la que están disponibles los siguientes datos experimentales.
0,005 0,115
0,020 0,285 [S] V, sin inhibidor V, Presente inhibidor
0,040 0,380 (MM) (Mmol min 1) (Mmol min 1)
0,060 0,460 3.0 4.58 3.66

0,080 0,475 5.0 6.40 5.12
0,100 0,505 7.0 7.72 6.18
9.0 8.72 6.98

Matemático La hidrólisis de un péptido que contiene fenilalanina
es catalizada por una- quimotripsina con los siguientes resultados. Calcular 11.0 9.50 7.60
K METRO y V máx para la reacción.
¿Cuáles son los K METRO y V máx los valores para las reacciones inhibidas y desinhibida? Es el
Concentración de péptido Velocidad inhibidor competitivos o no competitivos?
( METRO) ( METRO min 1) 47. Matemático Para la siguiente reacción aspartasa (vea la pregunta 32)
en presencia de la hydroxymethylaspartate inhibidor, determine
2,5 10 4 2,2 10 6
K METRO y si la inhibición es competitiva o no competitiva.
5,0 10 4 5,8 10 6
10.0 10 4 5.9 10 6 [S] V, sin inhibidor V, Presente inhibidor

15.0 10 4 7,1 10 6 (Molaridad) (unidades arbitrarias) (mismas unidades arbitrarias)
1 10 4 0,026 0,010
Matemático Para el V máx obtenida en la pregunta 30, el cálculo de la
5 10 4 0,092 0,040
número de recambio (constante de velocidad catalítica) suponiendo que 1 × 10 -4
Se han usado mol de enzima.
1,5 10 3 0,136 0,086
Matemático Usted hace un experimento cinética enzimática y calcular 2,5 10 3 0,150 0,120
una V máx de 100 mol de producto por minuto. Si cada ensayo usó 0,1 ml de una solución 5 10 3 0,165 0,142
enzimática que tenía una concentración de 0,2 mg / ml, lo que sería el número de
recambio si la enzima tenía un peso molecular de 128.000 g / mol?
48. Reflexionar y Aplicar ¿Es bueno (o malo) que las enzimas pueden ser reversible
inhibido? ¿Por qué?
Reflexionar y Aplicar La oxidasa enzima D-amino ácido tiene un muy alto
49. Reflexionar y Aplicar inhibición no competitiva es un caso límite en
número de recambio porque los D-aminoácidos son potencialmente tóxicos. los K METRO para la
que el efecto de la unión del inhibidor no tiene ningún efecto sobre la afinidad por el
enzima está en el intervalo de 1 a 2 m METRO para los aminoácidos aromáticos y en el
sustrato y viceversa. Sugieren lo que un gráfico de Lineweaver-Burk se vería como para
intervalo de 15 a 20 m METRO para aminoácidos tales como serina, alanina, y los aminoácidos
un inhibidor que tenía un esquema de reacción similar a la que en la página 162 (reacción
ácidos. Cuál de estos aminoácidos son los sustratos preferidos para la enzima?
de inhibición no competitiva), pero donde de unión del inhibidor redujo la afinidad de la IE
para el sustrato.
Reflexionar y Aplicar ¿Por qué es útil para trazar los datos de frecuencia para enzimática
reacciones como una línea recta en lugar de como una curva?
50. Conexiones bioquímicos Usted ha sido contratado por un farmacéu-
Reflexionar y Aplicar Bajo qué condiciones podemos suponer que K METRO compañía de cal para trabajar en el desarrollo de fármacos para tratar el SIDA. ¿Qué
indica la afinidad de unión entre el sustrato y la enzima? información de este capítulo será útil para usted?
Inhibición de la Enzima 51. Reflexionar y Aplicar ¿Es de esperar un inhibidor irreversible de una
enzima en obligarse por enlaces covalentes o por interacciones no covalentes? ¿Por qué?
Recordar ¿Cómo puede la inhibición competitiva y no competitiva ser dis-
tinguished en términos de K ¿METRO?
52. Reflexionar y Aplicar ¿Es de esperar la estructura de un no transmisibles
Recordar ¿Por qué no cambia un inhibidor competitivo V max?
inhibidor competitiva de una enzima dada a ser similar a la de su sustrato?
Recordar ¿Por qué un inhibidor no competitivo no cambia el
observado K ¿METRO?
Bibliografía comentada 169
Bibliografía comentada
Althaus, I., J. Chou, A. Gonzales, M. Deibel, K. Chou, F. Kezdy, D. Romero, J. Palmer, R. Hammes, G. Catálisis enzimática y el Reglamento. Nueva York: Academic Press,
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funciones.]
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1985. [A una cobertura completa de la acción enzimática.]

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El comportamiento de las proteínas:
Las enzimas, los mecanismos, y
CAPÍTULO 7
Control
7.1 El comportamiento de los enzimas alostéricos

El comportamiento de muchas enzimas conocidas se puede describir muy adecuadamente por el modelo
de Michaelis-Menten, pero las enzimas alostéricos se comportan de manera muy diferente. En el capítulo
anterior, vimos similitudes entre la cinética de reacción de una enzima tal como la quimotripsina, que no
muestra comportamiento alostérico, y la unión de oxígeno por la mioglobina, que es también un ejemplo de
comportamiento nonallosteric. La analogía se extiende para mostrar la similitud en el comportamiento
cinético de una enzima alostérica tales como aspartato transcarbamilasa (ATCasa) y la unión de oxígeno
por la hemoglobina. Tanto ATCasa y hemoglobina son proteínas alostéricas; los comportamientos de
ambos exhiben efectos cooperativos causados por los cambios sutiles en la estructura cuaternaria.
(Recordar que Estructura cuaternaria es la disposición en el espacio que resulta de la interacción de
subunidades a través de fuerzas no covalentes, y que cooperatividad positiva se refiere al hecho de que la
unión de los bajos niveles de sustrato facilita la acción de la proteína en niveles más altos de sustrato, si la
acción es catalítica o algún otro tipo de unión.) Además de mostrar cinéticas de cooperación, enzimas
alostéricos tienen una respuesta diferente a la presencia de inhibidores de la de enzimas nonallosteric.
© Macduff Everton / CORBIS

¿Cómo se controlan las enzimas alostéricos?
ATCasa cataliza el primer paso en una serie de reacciones en las que el producto final es la citidina
trifosfato (CTP), un nucleósido trifosfato necesario para hacer ARN y ADN (capítulo 9). Las vías que
producen los nucleótidos son energéticamente costoso e implican muchos pasos. La reacción catalizada
Las señales regulan el flujo de tráfico en mucho la misma manera que los
por la aspartato transcarbamilasa es un buen ejemplo de cómo se controla una vía tal para evitar la
mecanismos de control en reacciones de cal químicamente.
sobreproducción de tales compuestos. Para el ADN y la síntesis de ARN, se controlan los niveles de
varios nucleótidos trifosfato. CTP es un inhibidor de ATCasa, la enzima que cataliza la primera reacción
en la vía. Este comportamiento es un ejemplo de inhibición por retroalimentación ( también llamado Bosquejo del capítulo
inhibición del producto final), en el que el producto final de la secuencia de reacciones inhibe la primera 7.1 El Comportamiento de alostéricos Enzimas
reacción en la serie (Figura 7.1). la inhibición de retroalimentación es un mecanismo de control e fi • ¿Cómo se controlan las enzimas alostéricos?
ciente porque toda la serie de reacciones se puede apagar cuando existe un exceso del producto final, 7.2 Los concertados y secuencial Modelos para alostéricos
Enzimas
evitando así la acumulación de intermediarios en la vía. inhibición de la retroalimentación es una
• ¿Cuál es el modelo para el comportamiento alostérico concertada? ¿Cuál es
característica general de metabolismo y no es confinada a las enzimas alostéricos. Sin embargo, la • el modelo secuencial para el comportamiento alostérico?
cinética observada de la reacción ATCasa, incluyendo el modo de inhibición, son típicos de enzimas 7.3 Control de la actividad enzimática por la fosforilación
alostéricos. • No siempre fosforilación aumentar la actividad enzimática?
7.4 Los zimógenos
7.5 La naturaleza del sitio activo

Cuando ATCasa cataliza la condensación de aspartato y carbamoil fosfato para formar aspartato
• ¿Cómo podemos determinar los residuos de aminoácidos esenciales?
carbamoil, la representación gráfica de la velocidad como una función del aumento de la concentración de ¿De qué manera la arquitectura del sitio activo afecta a la catálisis?
sustrato (aspartato) es una curva sigmoidal en lugar de la hipérbola obtenido con las enzimas nonallosteric • ¿Cómo los aminoácidos críticos quimotripsina catalizan la reacción?
(Figura 7.2a). La curva sigmoidal indica el comportamiento cooperativo de las enzimas alostéricos. En esta •
reacción de dos sustrato, aspartato es el sustrato para el que la concentración es variada, mientras que la
concentración de fosfato de carbamoílo se mantiene constante a niveles altos. 7.6 Reacciones químicas implicadas en los mecanismos
enzimáticos
• ¿Cuáles son los tipos más comunes de reacciones?
7.7 El sitio activo y los estados de transición

• ¿Cómo podemos determinar la naturaleza del estado de transición?
Firmar en www.thomsonedu.com/login probarse a sí mismo en estos conceptos.

7.8 Las coenzimas
2 Capítulo 7 El comportamiento de las proteínas: Las enzimas, los mecanismos, y Control
La reacción catalizada por ATCasa conduce

finalmente a la producción de CTP
carbamoil fosfato carbamoil aspartato
-2 OPO
CO NUEVA HAMPSHIRE 2
3
CO NUEVA HAMPSHIRE 2
ATCasa
+ NUEVA HAMPSHIRE
NH 3+ -
OOC CH CH 2 ARRULLO -
- HPO 2- 4
OOC CH CH 2 ARRULLO -
Serie de reacciones
aspartato
Inhibición por retroalimentación
NUEVA HAMPSHIRE 2
norte
O norte
O
-
OP O correos O correos O
O- O- O- H H
OH CH 2 O
H H
trifosfato de citidina (CTP)
inhibidor alostérico de ATCasa OH
Una representación esquemática de una vía

que muestra la inhibición por retroalimentación
precursor original (s)
enzima 1
Comentarios inhibition- bloques La serie de reacciones

de productos finales catalizadas por enzimas
enzima 2 1
una reacción constituye una vía
temprana y se apaga
toda la serie
enzima 3 2
enzima 4 3
enzima 5 4
enzima 6 5
enzima 7 6
7
Producto final
Figura 7.1 Representación esquemática de una vía, que muestra la
bición de retroalimentación.
7.1 El Comportamiento de alostéricos Enzimas 173
UNA Parcela de velocidad frente a la concentración

de sustrato (aspartato) para la aspartato
transcarbamilasa.
curva
velocidad de sigmoidal
reacción ( V)
[S]
El efecto
segundo de los inhibidores y
activadores en una enzima
+ Activador (ATP) alostérica.
Control (sin
ATP o
velocidad de CTP)
reacción ( V)
+ Inhibidor (CTP)
[S] ■ Figura 7.2
La figura 7.2b compara la velocidad de la reacción no inhibida de ATCasa con la velocidad de reacción
en presencia de CTP. En el último caso, una curva sigmoidal todavía describe el comportamiento de la tasa
de la enzima, pero la curva se desplaza a niveles de sustrato más altas; se necesita una mayor
concentración de aspartato para la enzima para alcanzar la misma velocidad de reacción. A altas
concentraciones de sustrato, la misma velocidad máxima, V max, se observa en presencia y ausencia de inhibidor.
(Recuérdese esto desde la Sección 6.7.) Debido a que en el esquema de Michaelis-Menten V máx
cambia cuando tiene lugar una reacción en presencia de un inhibidor no competitivo, inhibición no
competitiva no puede ser el caso aquí. Las mismas Michaelis-Menten asociados modelo este tipo de
comportamiento con la inhibición competitiva, sino que parte del modelo todavía no proporciona una
imagen razonable. Los inhibidores competitivos se unen al mismo sitio que el sustrato debido a que son
muy similares en estructura. La molécula de CTP es muy diferente en la estructura del sustrato, aspartato, y
se une a un sitio diferente en la molécula de ATCasa. ATCasa se compone de dos tipos diferentes de
subunidades. Uno de ellos es la subunidad catalítica, que se compone de seis subunidades de proteínas
organizadas en dos trímeros. El otro es la subunidad reguladora, que también se compone de seis
subunidades de proteínas organizados en tres dímeros (Figura 7.3). Las subunidades catalíticas se
pueden separar de las subunidades reguladoras mediante tratamiento con pag- hidroximercuribenzoato,
que reacciona con las cisteínas en la proteína. Cuando así tratado, ATCasa todavía cataliza la reacción,
pero pierde su control alostérico por el CTP, y la curva se hace hiperbólico.
La situación se vuelve más “extraña” cuando la reacción ATCasa tiene lugar no en presencia
de CTP, un trifosfato nucleósido de pirimidina, pero en presencia de trifosfato de adenosina
(ATP), un trifosfato nucleósido de purina. Las similitudes estructurales entre CTP y ATP son
evidentes, pero ATP no es un producto de la ruta que incluye la reacción de ATCasa y que
produce CTP. Tanto ATP y CTP son necesarios para la síntesis de ARN y ADN. Las
proporciones relativas de ATP y CTP son especificados por las necesidades del organismo. Si no
hay suficiente CTP con relación a la cantidad de ATP, la enzima requiere una señal para producir
más. En presencia de ATP, la tasa de
dímero reguladora
trímero catalítica
FIGURA 7.3 Organización de aspartato transcarbamilasa, que

estra las dos trímeros catalíticos y los tres dímeros
uladores.
la reacción enzimática se incrementa a niveles más bajos de aspartato, y la forma de la curva de

la tasa se vuelve menos sigmoidal y más hiperbólica (Figura 7.2b). En otras palabras, hay menos
cooperatividad en la reacción. El sitio de unión para ATP en la molécula de enzima es el mismo
que el de CTP (que no es sorprendente en vista de su similitud estructural), pero ATP es un
activador en lugar de un inhibidor como CTP. Cuando CTP es escaso en un organismo, la
reacción ATCasa no se inhibe, y la unión de ATP aumenta la actividad de la enzima aún más.
NUEVA HAMPSHIRE 2
norte
norte
norte
O norte
-
OP O correosO correosO OH
O- O- O- H
OH CH 2
H H
OH
El trifosfato de adenosina (ATP)

un nucleótido purina;
activador de la
ATCasa
A pesar de que es tentador considerar la inhibición de las enzimas alostéricos de la misma manera como
enzimas nonallosteric, gran parte de la terminología no es apropiado. Inhibición competitiva y inhibición no
competitiva son términos reservados para las enzimas que se comportan de acuerdo con la cinética de
Michaelis-Menten. Con las enzimas alostéricos, la situación es más compleja. En general, dos tipos de
sistemas de enzimas existen, llamados sistemas K y sistemas de V. sistema de AK es una enzima para la que
la concentración de sustrato que produce la mitad V máx se ve alterado por la presencia
7.2 Los concertados y secuencial Modelos para alostéricos Enzimas 175
de inhibidores o activadores. ATCasa es un ejemplo de un sistema de K. Debido a que no se trata de un tipo

de Michaelis-Menten de la enzima, el término K METRO no es aplicable. Para una enzima alostérica, el nivel de
sustrato a la una y media V máx que se llama el
K 0.5. En un sistema de V, el efecto de los inhibidores y activadores cambia el V max, pero no el K 0.5.
La clave para el comportamiento alostérico, incluyendo cooperatividad y modificaciones de cooperatividad,

es la existencia de múltiples formas para las estructuras cuaternarias de las proteínas alostéricas. La palabra alostérico
se deriva de allo, “Otro”, y estérico,
“Forma”, refiriéndose al hecho de que las posibles conformaciones afectan al comportamiento de la
proteína. La unión de sustratos, inhibidores y activadores cambia la estructura cuaternaria de las
proteínas alostéricos, y los cambios en la estructura se refleja en el comportamiento de esas proteínas.
Una sustancia que modifica la estructura cuaternaria, y por lo tanto el comportamiento, de una proteína
alostérica mediante la unión a se denomina efector alostérico. El termino efector se puede aplicar a
sustratos, inhibidores o activadores. Se han propuesto varios modelos para el comportamiento de los
enzimas alostéricos, y vale la pena compararlos.
Definamos primero dos términos. homotrópico efectos son interacciones alostéricas que se
producen cuando varias moléculas idénticas se unen a una proteína. La unión de moléculas de
sustrato a diferentes sitios en una enzima, como la unión de aspartato a ATCasa, es un ejemplo de un
efecto homotrópico. heterotropic
efectos son interacciones alostéricas que se producen cuando las sustancias diferentes (tales como el
inhibidor y el sustrato) se une a la proteína. En la reacción ATCasa, la inhibición por CTP y la activación por
el ATP son ambos efectos heterótrofos.

■ Las enzimas alostéricas exhiben comportamientos diferentes en comparación con las enzimas nonallosteric,
y las ecuaciones de Michaelis-Menten no son aplicables.
■ Un gráfico de velocidad frente a [S] para una enzima alostérica tiene una forma sigmoidal.
■ Un tipo de control de frecuencia visto con enzimas alostéricos se llama la inhibición por retroalimentación.
■ Inhibidores y activadores pueden controlar la actividad de una enzima alostérica.
7.2 La concertada y modelos secuenciales

alostérica de enzimas
Los dos modelos principales para el comportamiento de los enzimas alostéricos son el modelo concertado y
el modelo secuencial. Ellos se propusieron en 1965 y 1966, respectivamente, y ambos se usan actualmente
como base para la interpretación de los resultados experimentales. El modelo concertada tiene la ventaja de
la simplicidad comparativa, y que describe el comportamiento de algunos sistemas enzimáticos muy bien.
El modelo secuencial sacrifica una cierta cantidad de simplicidad para una imagen más realista de la estructura y
el comportamiento de las proteínas; también se ocupa muy bien con el comportamiento de algunos sistemas
enzimáticos.
¿Cuál es el modelo para el comportamiento alostérico concertada?
En 1965, Jacques Monod, Jeffries Wyman, y Jean-Pierre Changeux propusieron la modelo concertada para
el comportamiento de las proteínas alostéricos en un documento que se ha convertido en un clásico en la
literatura bioquímica. (Se cita en la bibliografía al final de este capítulo). En esta imagen, la proteína tiene dos
conformaciones, el activo R (relajado) de conformación, que se une sustrato con fuerza, y la inactiva T
(ajustado también llamado tensa,) de conformación , que se une menos fuertemente sustrato. La
característica distintiva de este modelo es que las conformaciones de todos subunidades cambian
simultáneamente. La figura 7.4a muestra una hipotética proteína con dos
subunidades. Ambas subunidades cambio de conformación de la inactiva T conformación a la

conformación R activas al mismo tiempo; es decir, un cambio concertada de conformación se produce.
La relación de equilibrio de las formas T / R se llama L y se supone que es de alta, es decir, más
enzima está presente en la forma T no unida que en la forma R no unido. La unión de sustrato a
cualquiera de las formas que puede ser descrito por la constante de disociación de la enzima y sustrato, K,
con la afinidad por el sustrato superior en la forma R que en la forma T. Así, K R <<
K T. La relación de K R / K T se llama do. La figura 7.4b muestra un caso límite en el cual

K T es infinitamente mayor que K R ( c = 0). En otras palabras, el sustrato no se unirá a la forma T en
absoluto. El efecto alostérico se explica por este modelo basado en perturbar el equilibrio entre las
formas T y R. Aunque inicialmente la cantidad de enzima en la forma R es pequeño, cuando el
sustrato se une a la forma R, elimina formulario I libre. Esto hace que la producción de más forma R a
restablecer el equilibrio, lo que hace de unión más sustrato posible. Este desplazamiento del equilibrio
es responsable de los efectos observados alostéricos. El modelo de Monod-Wyman-Changeux ha
demostrado matemáticamente para explicar los efectos observados con sigmoidal enzimas
alostéricos. La forma de la curva se basará en la L y do valores. Como L aumenta (forma T libre más
altamente favorecida), la forma se vuelve más sigmoidal (Figura 7.5). A medida que el valor de do disminuye
(mayor nidad af fi entre el sustrato y la forma R), la forma también se vuelve más sigmoidal.
L L
Sustrato sitio de unión efector o

R T T
sitio de unión
L=T L es grande. (T >> R)
R alostérico
sustrato
obligado
RR sustrato
UNA Una proteína dimérica puede existir en cualquiera de los dos estados de conformación Por
segundo el principio de Le Chatelier, la unión del sustrato desplaza el equilibrio a favor
en el equilibrio, la T forma (tensa) o la forma R (relajado). L es la proporción de la forma de la estado relajado (R) mediante la eliminación no unido R. La constante para
de T a la forma R. Con la mayoría de sistemas de alostéricos, L es grande, por lo que el complejo enzima-sustrato disociación es K R para la forma relajada y K T
hay más enzima presente en la forma T que en la forma R.
para la forma tensa. K R < K T, por lo que el sustrato se une mejor a la forma
relajada. La relación de K R / K T se llama do. Esta figura muestra un caso límite en
el que la forma tensa no se une sustrato en absoluto, en cuyo caso K T es infinita
y c = 0.
■ Figura 7.4 Monod--Changeux Wyman modelo (MWC) para las transiciones alostéricas, también llamado el modelo
concertada.
7.2 Los concertados y secuencial Modelos para alostéricos Enzimas 177
1
c = 0.00
c = 0.04
UNA c = 0.10 segundo
Como L (la relación de la El nivel de cooperatividad también se

forma de T / R) aumenta, la basa en la afinidad de los sustratos para
forma se vuelve más la forma T o R. Cuando K T es infinito
sigmoidal. (afinidad cero), cooperatividad es alta,
L=1
como se muestra en la línea azul, donde c
00
0
L=1
Y 0.5
L=1
= 0 ( c = K R / K T).
0
100
Como do aumenta, la diferencia en la
L=
unión entre las formas T y R disminuye,
0
00
y las líneas se vuelven menos
10
sigmoidal.
L=
c=0 L = 1000
0
[S] [S]
■ ANIMATED FIGURA 7.5 El Monod-Wyman-Changeux (o concertada) modelo.

(Adaptado de Monod, J., Wyman, J., y Changeux, J.-P., 1965. Sobre la naturaleza de las transiciones alostéricas: Un modelo plausible. Journal
of Molecular Biology 12:92.) Firmar en www.thomsonedu.com/login para ver una versión animada de esta figura.
En el modelo concertada, los efectos de los inhibidores y activadores también pueden ser
considerados en términos de desplazar el equilibrio entre las formas T y R de la enzima. La unión de los
inhibidores a las enzimas alostéricos es cooperativa; inhibidores alostéricos se unen a y estabilizan la
forma T de la enzima. La unión de activadores para enzimas alostéricos es también cooperativa;
activadores alostéricos se unen a y estabilizan la forma R de la enzima. Cuando un activador, A, está
presente, la unión cooperativa de A desplaza el equilibrio entre la T y las formas R, con la forma R
favorecida (Figura 7.6). Como resultado, hay menos necesidad de sustrato,
S, para desplazar el equilibrio en favor de la forma R, y menos cooperatividad en la unión de S se ve.
Cuando un inhibidor, I, está presente, la unión cooperativa de I también desplaza el equilibrio

entre la T y las formas R, pero esta vez se favorece la forma T (Figura 7.6). Se necesita más
sustrato para desplazar el equilibrio T-a-R en favor de la forma R. Un mayor grado de
cooperatividad se ve en la unión de S.
¿Cuál es el modelo secuencial para el comportamiento alostérico?

El nombre de Daniel Koshland se asocia con la directa modelo secuencial del comportamiento
alostérico. La característica distintiva de este modelo es que la unión de sustrato induce el cambio
conformacional de la forma de T para el R-forma el tipo de comportamiento postulado por la teoría fi t
induced- de la unión del sustrato. (El artículo original que describe este modelo es citada en la
bibliografía al final de este capítulo). Un cambio conformacional de T a R en una subunidad hace que
el mismo cambio conformacional más fácil en otra subunidad, y esta es la forma en la que es la unión
cooperativa expresado en este modelo (Figura 7.7a).
En el modelo secuencial, la unión de activadores e inhibidores también se lleva a cabo por el mecanismo
de ajuste inducido. El cambio conformacional que comienza con la unión del inhibidor o activador para una
subunidad afecta a las conformaciones de otras subunidades. El resultado neto es favorecer el estado R
cuando el activador está presente
Una proteína dimérica que puede existir en cualquiera

de los dos estados: R 0 o T 0. R0 T0
Esta proteína se puede unir tres ligandos: sustrato Activador
1) Sustrato (S) : Un efector homotrópico positivo

que se une sólo a R en el sitio
S
R R T inhibidor
2) activador (A) : Un efector heterotropic positivo Activador
que se une sólo a R en el sitio
F
R 1 (S) (A) T 1 (I)
3) inhibidor (I) : Un heterotropic negativo
efector que se une sólo a R sustrato 1
T en el sitio F
R
1.0
R 1 (A, S)
+A
No A o I A efectos de: Efectos de que:
A + R0 R 1 (A) I + T0 T 1 (I)
+I Aumento del número de R Aumento del número de T-confórmeros (disminución
confórmeros desplaza R 0 T0 de R 0 como R 0 T0

Y S 0.5
por lo que T 0 R0 para restablecer el equilibrio) Por lo tanto, I inhibe asociación de
(1) más sitios de unión para S hicieron S y A con R mediante la reducción de R 0 nivel. I aumenta la
disponible. (2) Disminución de la cooperatividad de la curva de saturación de sustrato. Me eleva
K 0.5
el valor aparente de L.
cooperatividad de
0 curva de saturación del sustrato. Efector A reduce
0 1.0 2.0 el valor aparente de L.
[S]
■ Figura activa 7,6 Efectos de activadores e inhibidores de la unión con el modelo concertada. Un activador es
una molécula que estabiliza la forma R. Un inhibidor estabiliza la forma T.
Firmar en www.thomsonedu.com/login a explorar una versión interactiva de esta figura.
y favorecer la forma T cuando inhibidor, I, está presente (Figura 7.7b). Encuadernación I a una subunidad provoca
un cambio conformacional de tal manera que la forma T es aún menos probabilidades de atascarse sustrato que
antes. Este cambio conformacional se pasa a lo largo de otras subunidades, haciéndolos también más propensos
a unirse inhibidor y menos probabilidades de atascarse sustrato. Este es un ejemplo de comportamiento
cooperativo que conduce a una mayor inhibición de la enzima. Del mismo modo, la unión de un activador provoca
un cambio conformacional que favorece la unión del sustrato, y este efecto se transmite de una subunidad a otra.
El modelo secuencial para efectores de todo tipo, incluyendo sustratos de unión, a alostérica enzimas
tiene una característica única que no se ve en el modelo concertado. Los cambios conformacionales inducidos
por tanto, pueden hacer que la enzima menos probabilidades de atascarse más moléculas del mismo tipo.
Este fenómeno, llamado cooperatividad negativa, se ha observado en pocas enzimas. Una de ellas es tirosilo
ARNt sintetasa, que desempeña un papel en la síntesis de proteínas. En la reacción catalizada por esta
enzima, el aminoácido tirosina forma un enlace covalente a una molécula de ARN de transferencia (ARNt). En
etapas posteriores, la tirosina se pasa a lo largo de su lugar en la secuencia de la proteína en crecimiento. El
tirosil ARNt sintetasa se compone de dos subunidades. La unión de la primera molécula de sustrato a una de
las subunidades inhibe la unión de una segunda molécula a la otra subunidad.
El modelo secuencial ha representado con éxito para la cooperatividad negativa observada en

el comportamiento de tirosil ARNt sintetasa. El modelo concertada no prevé la cooperatividad
negativa.
7.3 Control de la actividad enzimática por la fosforilación 179
UNA modelo secuencial de unión cooperativa de sustrato S a

una enzima alostérica. La unión del sustrato a una
cambio cambio conformacional en cambio
subunidad induce la otra subunidad para adoptar el
conformacional en la subunidad donde sustrato conformacional en
estado R, que tiene una mayor afinidad por el sustrato.
sustrato todo sitio de unión es encuadernado otra subunidad
T T R T
T R
modelo secuencial de unión cooperativa de inhibidor I de una

segundo
enzima alostérica. De unión del inhibidor a una subunidad cambio cambio conformacional en la cambio
induce un cambio en la otra subunidad a una forma que tiene conformacional en subunidad donde inhibidor conformacional en
una menor afinidad por el sustrato. todo sitio de unión es encuadernado otra subunidad
inhibidor de
T T T T
Menor afinidad por

el sustrato
■ FIGURA 7.7

■ Los dos modelos principales para el comportamiento enzima alostérica se llaman el modelo
concertada y el modelo secuencial.
■ En el modelo concertado, la enzima se considera como estar en una forma tensa,
T, o una forma relajada, R. Todas las subunidades se encuentran en uno o el otro, y existe un
equilibrio entre la T y las formas R.
■ Sustrato se une más fácilmente a la forma R que a la forma T, inhibidores de estabilizar la forma T,
y activadores de estabilizar la forma R.
■ En el modelo secuencial, las subunidades de la enzima pueden cambiar secuencialmente desde la
forma de T a la forma R y de vuelta.
■ La unión de una molécula de sustrato a una subunidad estimula la transición de la
subunidad a la forma R, que luego estimula otra subunidad para cambiar a la forma R.
■ La unión del inhibidor a una subunidad induce un cambio en las otras subunidades a una forma con
menor afinidad por el sustrato. La unión de un activador para una subunidad induce un cambio en las
otras subunidades a una forma que tiene una alta afinidad por el sustrato.
7.3 Control de la actividad de la enzima por fosforilación

Uno de los mecanismos de control más comunes para las enzimas es por fosforilación. Los grupos hidroxilo de
la cadena lateral de serina, treonina, y todos los ésteres forma de fosfato de tirosina puede. El transporte a
través de membranas proporciona un ejemplo importante, tal como la bomba de iones de sodio y potasio, que
se mueve de potasio en el
celular y de sodio a cabo (Sección 8.6). La fuente del grupo fosfato para el componente de proteína de la
bomba de iones de sodio y potasio y para muchas fosforilaciones enzima es el ubicuo ATP. Cuando el
ATP se hidroliza al difosfato de adenosina (ADP), suficiente energía se libera para permitir que un número
de reacciones de otra manera energéticamente desfavorable a tener lugar. En el caso de la Na + / K +
bomba, ATP dona un fosfato a aspartato 369 como parte del mecanismo, causando un cambio de
conformación en la enzima (Figura 7.8). Las proteínas que catalizan estas reacciones de fosforilación se
llaman proteínas quinasas. quinasa se refiere a una enzima que cataliza la transferencia de un grupo
fosfato, casi siempre a partir de ATP, en cierta sustrato. Estas enzimas juegan un papel importante en el
metabolismo.
Resto de proteína + ATP Resto de proteína + ADP
CH 2 CH 2
O
OH OP
O- O-
residuo de serina resto de serina fosforilado

O
C OH H COH PAG
O- O-
CH 3 CH 3
residuo de treonina residuo de treonina fosforilado
O
OH O PAG
O- O-
residuo de tirosina residuo de tirosina fosforilada
Muchos ejemplos aparecen en procesos implicados en la generación de energía, como es el caso en el

metabolismo de hidratos de carbono. La glucógeno fosforilasa, que cataliza la
ATP ADP
mi FÍSICA
EDUCACIÓN
2K + dentro de
3Na + dentro de
Cambio conformacional
conformacional cambio
2K + fuera 3Na + fuera
MI' MI' PAG
FIGURA 7.8 La fosforilación de la bomba de

io-potasio está involucrado en un ciclo la proteína de
mbrana entre la forma que se une al sodio y la forma que PAG H2 O
une a potasio.
7.3 Control de la actividad enzimática por la fosforilación 181
paso inicial en la degradación del glucógeno almacenado (Sección 18.1), existe en dos formas-la
glucógeno fosforilasa fosforilada una y la glucógeno fosforilasa desfosforilado b ( Figura 7.9). los una forma
es más activo que el segundo la forma, y las dos formas de la enzima responden a diferentes efectores
alostéricos, dependiendo del tipo de tejido. La glucógeno fosforilasa tanto, está sujeta a dos tipos de
regulación del control alostérico y modificación covalente. El resultado neto es que el una forma es más
abundante y activa cuando se necesita fosforilasa para descomponer el glucógeno para proporcionar
energía.
No siempre fosforilación aumentar la actividad enzimática?

Aunque sería conveniente tener un modelo en el que la fosforilación siempre aumenta la actividad de Firmar en www.thomsonedu.com/login
una enzima, la bioquímica no es tan amable con nosotros. En realidad, no podemos predecir si la y explorar un tutorial interactivo Bioquímica de
fosforilación aumenta o disminuye la actividad de una enzima. En algunos sistemas, se coordinan los la glucógeno fosforilasa.
efectos sobre dos enzimas opuestas. Por ejemplo, una enzima clave en una ruta catabólica puede ser
activada por la fosforilación, mientras que su contrapartida en una vía opuesta anabólico es inhibida
por fosforilación.

■ Muchas enzimas son controladas por fosforilación.
■ Enzimas llamadas quinasas utilizan moléculas de alta energía, tales como ATP, para transferir un fosfato a
un residuo específico en una enzima.
■ Estos residuos de aminoácidos son por lo general de serina, treonina, o residuos de tirosina.
■ En algunos casos, la fosforilación aumenta la actividad de una enzima, mientras que en otros casos se
disminuye.
Control covalente
fosforilasa quinasa PAG
Fosfoproteína fosfatasa 1 PAG
fosforilasa segundo glucosa una

Inactivo Inactivo
(estado T) (estado T)
fosforilasa de
AMPERIO ATP
La cafeína
el control no covalente
La glucosa-6-P
glucosa cafeína
PAG
PAG
■ Figura activa 7,9 El glucógeno actividad phorylase
fosfatasa se somete a control alostérico y modificación covalente
a través de fosforilación. La forma fosforilada es más activo. La
fosforilasa segundo fosforilasa una
enzima que pone un grupo fosfato en fosforilasa se llama fosforilasa
Activo Activo
quinasa. Firmar en www.thomsonedu. com / login para explorar
(estado R) (estado R)
una versión interactiva de esta figura.
7.4 zimógenos
interacciones alostéricas controlan el comportamiento de las proteínas a través de cambios reversibles en la
estructura cuaternaria, pero este mecanismo, eficaz, aunque puede ser, no es la única disponible. UNA zimógeno,
un precursor inactivo de una enzima, puede ser transformado irreversiblemente en una enzima activa mediante la
escisión de enlaces covalentes.
El proteolítica enzimas de tripsina y quimotripsina (capítulo 5) proporcionan un ejemplo clásico de

zimógenos y su activación. Sus moléculas precursoras inactivas, tripsinógeno y quimiotripsinógeno,
respectivamente, se forman en el páncreas, donde serían hacen daño si estuvieran en una forma activa.
En el intestino delgado, donde sus propiedades digestivas son necesarios, que se activan mediante la
escisión de enlaces peptídicos específicos. La conversión de quimotripsinógeno a quimotripsina es
catalizada por tripsina, que a su vez se deriva de tripsinógeno como resultado de una reacción de escisión
catalizada por la enteropeptidasa enzima. Quimotripsinógeno consiste en una única cadena polipeptídica
de 245 restos de longitud, con bonos a cinco disulfuro (-S-S-). Cuando chymotrypsinogen se secreta en el
intestino delgado, tripsina presente en las escinde del sistema digestivo el enlace peptídico entre la
arginina 15 y la isoleucina 16, contando desde el extremo N-terminal de la secuencia de
quimiotripsinógeno (Figura 7.10). La escisión produce activo pag- quimotripsina. El fragmento de 15
residuos permanece unida al resto de la proteína mediante un enlace disulfuro. A pesar de que pag- quimotripsina
es completamente activo, no es el producto final de esta serie de reacciones. Actúa sobre sí mismo para
eliminar dos fragmentos de dipéptidos, produciendo una- quimotripsina, que también está completamente
activa. Los dos fragmentos de dipéptidos escindidos off son Ser 14-Arg 15 y Thr 147-Asn 148; la forma
final de la enzima, una- quimotripsina, tiene tres cadenas polipeptídicas unidas por dos de los cinco enlaces
originales, y todavía intactos, disulfuro. (Los otros tres enlaces disulfuro permanecen intactos, así, se
vinculan porciones de cadenas de polipéptidos individuales.) Cuando el término quimotripsina se utiliza sin
especificar el
una o la pag formar, la final una forma está destinado.

Los cambios en la estructura primaria que acompañan la conversión de quimotripsinógeno a una-
quimotripsina provocar cambios en la estructura terciaria. La enzima es activa a causa de su
estructura terciaria, tal como el zimógeno es inactivo debido a su estructura terciaria. La
estructura tridimensional de
Quimotripsinógeno (zimógeno inactivo)
1 13 14 15 147 148 245
La escisión en Arg 15
por la tripsina
π- La quimotripsina (enzima activa)
1 13 14 15 147 148 245
Auto-digestión a Leu 13,

Tyr 146, y Asn 148 por
π- quimotripsina
14 15 147 148
Ser Arg Thr Asn
ANIMATED FIGURA 7.10 La activación proteolítica de pro α- La quimotripsina (enzima activa)

motrypsinogen. Firmar en www.thomsonedu.com/login para ver Leu ile Tyr Ala
versión animada de esta figura. 1 13 dieciséis 146 149 245
7.5 La naturaleza del sitio activo 183
quimotripsina se ha determinado por cristalografía de rayos X. El grupo amino protonado del residuo
isoleucina expuesto por la primera reacción de escisión está implicado en un enlace iónico con la
cadena lateral de carboxilato del resto de aspartato
194. Este enlace iónico es necesaria para la conformación activa de la enzima, ya que se encuentra
cerca del sitio activo. Quimotripsinógeno carece de este enlace; por lo tanto, no tiene la conformación
activa y no puede unirse sustrato.
Coagulación de la sangre también requiere una serie de activaciones proteolíticas que implican varias
proteínas, en particular la conversión de protrombina en trombina y de fibrinógeno en fibrina. La coagulación
sanguínea es un proceso complejo; para esta discusión, es suficiente saber que la activación de zimógenos
juega un papel crucial. En el paso final, el mejor caracterizado de la formación del coágulo, la proteína
fibrinógeno soluble se convierte en la fibrina insoluble proteína como resultado de la escisión de cuatro enlaces
peptídicos. La escisión se produce como resultado de la acción de la trombina de enzima proteolítica, que, a su
vez, se produce a partir de un zimógeno llamado protrombina. La conversión de la protrombina en trombina
requiere Ca 2+ así como una serie de proteínas llamado factores de coagulación.

■ Los zimógenos son precursores inactivos de una enzima.
■ Un zimógeno se convierte en la forma activa por la escisión irreversible de enlaces peptídicos
específicos en la proteína.
■ Muchas enzimas digestivas, tales como la tripsina y la quimotripsina, se producen inicialmente
como zimógenos. Se vuelven activos sólo después de llegar a su destino final.
7.5 La naturaleza del sitio activo

En esta sección vamos a ver el mecanismo de fi específico por el que una enzima es capaz de aumentar
la velocidad de una reacción química. Este mecanismo se basa en la disposición tridimensional exacta
de los aminoácidos en el sitio activo. Podemos hacer varias preguntas sobre el modo de acción de una
enzima. Éstos son algunos de los más importantes:
1. qué residuos de aminoácidos de la enzima se encuentran en el sitio activo (recordar este término del
Capítulo 6) y catalizar la reacción? En otras palabras, que son los residuos de aminoácidos críticos?
2. ¿Cuál es la relación espacial de los restos de aminoácidos críticos en el sitio activo?
3. ¿Cuál es el mecanismo por el cual los residuos de aminoácidos críticos catalizan la reacción?
Las respuestas a estas preguntas están disponibles para la quimotripsina, y vamos a utilizar su mecanismo
como un ejemplo de la acción enzimática. Información sobre los sistemas conocidos, tales como la
quimotripsina puede conducir a los principios generales que son aplicables a todas las enzimas. Enzimas
catalizan reacciones químicas en muchas maneras, pero todas las reacciones tienen en común el requisito de
que algún grupo reactivo de la enzima interactúa con el sustrato. En las proteínas, la una- carboxilo y una- grupos
amino de los aminoácidos son ya no es libre ya que se han formado enlaces peptídicos. Por lo tanto, los
grupos reactivos de la cadena lateral son los implicados en la acción de la enzima. cadenas laterales de
hidrocarburos no contienen grupos reactivos y no están implicados en el proceso. Los grupos funcionales que
pueden desempeñar un papel catalítico incluyen el grupo imidazol de la histidina, el grupo hidroxilo de la
serina, las cadenas laterales de carboxilo de aspartato y glutamato, el grupo sulfhidrilo de la cisteína, la
cadena lateral amino de la lisina y el grupo fenol de tirosina. Si el una- carboxilo o el
una- grupo amino de la cadena peptídica se colocan en el sitio activo, entonces ellos también pueden jugar un papel.
permanente de ráfaga La quimotripsina cataliza la hidrólisis de enlaces peptídicos adyacentes a residuos de aminoácidos
? Acetato o pag- NO 2 -
e
liberación de fenolato
lat
no
ph
e aromáticos en la proteína de ser hidrolizado; otros residuos son atacados a una frecuencia más baja.
ro
de régimen Ni t
g- Además, la quimotripsina cataliza la hidrólisis de ésteres en los estudios de modelos en el laboratorio. El uso
pa
to
eta de sistemas de modelos es común en bioquímica porque un modelo proporciona las características
liberación Ac
esenciales de una reacción en una forma simple que es más fácil de trabajar que la encontrada en la
naturaleza. La amida (péptido) enlace y el enlace éster son lo suficientemente similares que la enzima puede
Hora aceptar ambos tipos de compuestos como sustratos. sistemas modelo basado en la hidrólisis de ésteres se
Retraso
utilizan con frecuencia para estudiar la reacción de hidrólisis peptídica.
FIGURA 7.11 La cinética observaron en la reacción de la

motripsina. Un estallido inicial de pag- fenolato nitro- es visto, seguido
na liberación más lenta, de estado estacionario que coincide con la
Un compuesto típico modelo es pag- acetato de nitrofenilo, que se hidroliza en dos etapas. El
rición del otro producto, acetato.
grupo acetilo se une covalentemente a la enzima al final de la primera etapa (Etapa 1) de la
reacción, pero la pag- se libera ion nitrofenolato. En la segunda etapa (Etapa 2), la acil-enzima
intermedio se hidroliza, liberando de etilo y regenerar la enzima libre. Las cinéticas observadas
cuando pag- acetato de nitrofenilo se mezcla primero con quimotripsina muestra un estallido inicial
y después una fase más lenta (Figura 7.11). Esta reacción es consistente con una enzima que
tiene dos fases, una frecuencia que forman una enzima intermedio acilado.
Paso 1 mi + O 2 norte O CO CH 3 CE CH 3 + O 2 norte O-
Enzima pag- acetato nitrofenil Acil-enzima pag- Nitrophenolate

intermedio
O
H2 O -
Paso 2 CE CH 3 mi + O CO CH 3
Acil-enzima Acetato
intermedio
¿Cómo podemos determinar los residuos de aminoácidos esenciales?

mar en www.thomsonedu.com/login Se requiere que el residuo de serina en la posición 195 para la actividad de la quimotripsina; A este respecto, la
xplorar un tutorial interactivo en Bioquímica
quimotripsina es típico de una clase de enzimas conocidas como serina proteasas. La tripsina y la trombina, se
motripsina.
mencionó anteriormente, son también serina proteasas (véase el cuadro Conexiones Bioquímica en la página 193).
La enzima es completamente inactivados cuando este serina reacciona con diisopropylphospho fl uoridate (DIPF),
formando un enlace covalente que une la cadena lateral de serina con DIPF. La formación de versiones fi ed
covalentemente modificadores de especí fi cadenas laterales c en las proteínas se llama etiquetado; que es
ampliamente utilizado en estudios de laboratorio. Los otros residuos de serina de la quimotripsina son mucho
menos reactivo y no están etiquetados por DIPF (Figura 7.12).
La histidina 57 es otro residuo de aminoácido crítico en la quimotripsina. marcaje químico de

nuevo proporciona la evidencia para la implicación de este residuo en la actividad de
quimotripsina. En este caso, el reactivo utilizado para etiquetar el residuo de aminoácido es crítico NORTE-
tosylamido- L- feniletil clorometil cetona (TPCK), también llamado tosil- L- fenilalanina clorometil
cetona. El resto de fenilalanina se une a la enzima debido a la especificidad para aromático
mi
mi
CH 3 CH 3 CH 3 CH 3
F-
OH + HCO PF OCH HCO correos OCH
CH 3 O CH 3 CH 3 O CH 3
■ Figura activa 7,12 pylphosphofluoridate Diisopro- (DIPF)
Diisopropylphosphofluoridate derivado Diisopropylphosphoryl etiquetas de la serina del sitio activo de la quimotripsina. Firmar
de la quimotripsina en www.thomsonedu
. com / login para explorar una versión interactiva de esta figura.
residuos de aminoácidos en el sitio activo, y el residuo sitio histidina activo reacciona debido a que el
reactivo de marcado es similar al sustrato habitual.
El etiquetado de la histidina del sitio activo de

la quimotripsina por TPCK
resto fenilalanil elegido debido a la especificidad de

quimotripsina para los residuos de aminoácidos aromáticos
O
H
CH 2 CC CH 2 Cl
grupo reactivo
NUEVA HAMPSHIRE
TPCK
R'
Estructura de NORTE- tosilamido-L-feniletil clorometil cetona

(TPCK), un reactivo de marcado para quimotripsina [R'
representa un grupo de tosilo (toluenosulfonilo)]
Enz Enz
CH 2 do norte TPCK CH 2 N
DEL NORTE
HC CH HC CH
norte CAROLINA
H CH 2
histidina 57
CR O
R = Resto de TPCK
¿De qué manera la arquitectura del sitio activo afecta a la catálisis?
Tanto la serina 195 y la histidina 57 se requieren para la actividad de la quimotripsina; Por lo tanto, deben estar
cerca unos de otros en el sitio activo. La determinación de la estructura tridimensional de la enzima por
cristalografía de rayos X proporciona evidencia de que los residuos de sitio activo de hecho tienen una relación
espacial estrecha. El plegamiento de la cadena principal de la quimotripsina, la mayoría en una matriz
pleatedsheet antiparalela, posiciona los residuos esenciales alrededor de un bolsillo del sitio activo (figura
7,13). Sólo unos pocos residuos participan directamente en el sitio activo, pero toda la molécula es
necesaria para proporcionar la disposición tridimensional correcta para aquellos residuos críticos.
norte
do do
norte
norte
Su 57
Ser 195
do
Asp 102
FIGURA 7.13 La estructura terciaria de motrypsin CHY-

oca los residuos de aminoácidos esenciales cerca uno del
o. Se muestran en azul y rojo. ( Abeles, R., Frey, P., Jencks, W. bioquímica
ton: Jones y Bartlett, Editores, 1992, reimpreso con el permiso).
Otras piezas importantes de información acerca de la estructura tridimensional del sitio activo surgen
cuando se forma un complejo entre el pecado chymotryp y un análogo de sustrato. Cuando uno de tales
análogo de sustrato, formil- L- triptófano, se une a la enzima, la cadena lateral de triptófano encaja en un
bolsillo hidrofóbico cerca de la serina 195. Este tipo de unión no es sorprendente, en vista de la
especificidad de la enzima por los residuos de aminoácidos aromáticos en el sitio de escisión.
Los resultados de muestran cristalografía de rayos X, además del sitio de unión para aminoácidos aromáticos
cadenas laterales de ácido de moléculas de sustrato, una disposición definida de las cadenas laterales de
aminoácidos que son responsables de la actividad catalítica de la enzima. Los residuos que participan en esta
disposición son la serina 195 y la histidina 57.
CH 2 CH NH CO H
ARRULLO -
norte
H
Formil-L-triptófano
¿Cómo los aminoácidos críticos quimotripsina

catalizan la reacción?
Cualquier mecanismo de reacción postulado debe ser modi fi o descartado si no es consistente con los
resultados experimentales. Existe un consenso, pero no totalmente de acuerdo, sobre las principales
características del mecanismo discutido en esta sección.
Los residuos de aminoácidos críticos, la serina 195 y la histidina 57, están involucrados en el
mecanismo de acción catalítica. En la terminología de la química orgánica, el oxígeno de la cadena lateral
de serina es una nucleófilo, o núcleo de búsqueda de sustancia. Un nucleófilo tiende a unir a los sitios de
carga positiva o polarización (sitios pobres en electrones), en contraste con una electrófilo, o sustancia de
electrones búsqueda, que tiende a unir a los sitios de carga negativa o de polarización (sitios ricos en
electrones). El oxígeno nucleófila de la serina ataca al carbono del carbonilo del grupo de péptidos. El
carbono tiene ahora cuatro enlaces sencillos, y se forma un producto intermedio tetraédrico; el grupo -C =
enlace original de O se convierte en un enlace sencillo, y el oxígeno del carbonilo se convierte en un
oxianión. La acil-enzima intermedia se forma a partir de las especies tetraédricas (Figura 7.14). La
histidina y la porción amino del grupo péptido original están implicados en esta parte
reacción primera etapa
su 57 su 57 su 57
Ser Ser Ser

195 195 195
+
O HAMPSHIRE
NUEVA NUEVA HAMPSHIRE HO norte NUEVA HAMPSHIRE norte NUEVA HAMPSHIRE
O
CNR 2 -
CN R2 CO
NUEVA HAMPSHIRE 2
R1 R1 R1
HO HO
R2
ES intermedio Acil-enzima
tetraédrico
reacción segunda etapa
su 57 su 57 su 57
Ser Ser Ser

195 195 195
+
O norte NUEVA HAMPSHIRE O H norte NUEVA HAMPSHIRE O H norte NUEVA HAMPSHIRE
H
O do -
CO CO O
R1 R1 HO R1
HO
Acil-enzima intermedio EP
tetraédrico
■ ANIMATED FIGURA 7.14 El mecanismo de acción quimotripsina. En la primera etapa de la reacción, el nucleófilo de
serina 195 ataques el carbono del carbonilo del sustrato. En la segunda etapa, el agua es el nucleófilo que ataca el acil-enzima
intermedio. Tenga en cuenta la participación de histidina 57 en ambas etapas de la reacción. ( De Hammes, G .: Catálisis enzimática
y el Reglamento, Nueva York: Academic Press, 1982.) Firmar en www.thomsonedu.com/login para ver una versión animada de
esta figura.
de la reacción como los enlaces de hidrógeno del grupo amino a la porción de imidazol de la
histidina. Tenga en cuenta que el imidazol ya está protonado y que el vino de protones del grupo
hidroxilo de la serina. La histidina se comporta como una base en la abstracción del protón de la
serina; en la terminología de la química orgánica física, la histidina actúa como un catalizador de
base general. El enlace carbono-nitrógeno de los saltos de los grupos de péptidos originales,
dejando el intermedio de acil-enzima. El protón abstraído por la histidina ha sido donado al grupo
amino de salir. En la donación del protón, la histidina ha actuado como un ácido en la
descomposición del intermedio tetraédrico, a pesar de que actuó como una base en su formación.
En la fase de desacilación de la reacción, los dos últimos pasos se invierten, con agua que
actúa como el nucleófilo atacante. En esta segunda fase, el agua es hidrógeno unido a la
histidina. El oxígeno del agua ahora realiza el ataque nucleófilo sobre el carbono acilo que vino
del grupo péptido original. Una vez más, se forma un intermedio tetraédrico. En el paso final de la
reacción, el enlace entre el oxígeno serina y los saltos de carbonilo de carbono, liberando el
producto con un grupo carboxilo en el que el grupo péptido original solía ser y la regeneración de
la enzima original de. Tenga en cuenta que la serina es hidrógeno unido a la histidina. Este
enlace de hidrógeno aumenta la nucleofilia de la serina, mientras que en la segunda parte de la
reacción, el enlace de hidrógeno entre el agua y la histidina aumentó la nucleofilicidad del agua.
El mecanismo de acción quimotripsina está particularmente bien estudiado y, en muchos aspectos,

típico. Se conocen numerosos tipos de mecanismos de reacción para la acción de la enzima, y vamos a
hablar de ellos en los contextos de las reacciones catalizadas por las enzimas en cuestión. Para
preparar el terreno, es útil discutir algunos tipos generales de mecanismos catalíticos y cómo afectan a la
especificidad de las reacciones enzimáticas.

■ La orientación única de los aminoácidos en el sitio activo promover la catálisis de una
reacción química.
■ Para entender el mecanismo catalítico, los aminoácidos críticos en el sitio activo debe ser
determinado. reactivos de marcaje se utilizan a menudo para este propósito.
■ La histidina 57 y serina 195 desempeñan los papeles más importantes en el mecanismo de acción
quimotripsina.
7.6 Reacciones químicas implicadas

en los Mecanismos enzimáticos
El mecanismo general de una reacción puede ser bastante complejo, como hemos visto en el caso de la
quimotripsina, pero las partes individuales de un mecanismo complejo sí mismos puede ser bastante simple.
Conceptos tales como el ataque nucleofílico y la catálisis ácido entran comúnmente en las discusiones de
reacciones enzimáticas. Podemos sacar un buen número de conclusiones generales de estas dos descripciones
generales.
¿Cuáles son los tipos más comunes de reacciones?

reacciones de sustitución nucleófila jugar un papel importante en el estudio de la química orgánica, y
son excelentes ilustraciones de la importancia de las mediciones cinéticas en la determinación del
mecanismo de una reacción. Un nucleófilo es una
7.6 Reacciones químicas implicadas en los mecanismos enzimáticos 189
rico en electrones átomo que ataca a un átomo deficiente en electrones de. Una ecuación general para este tipo de
reacción es
R: X +: Z 3 R: Z + X
donde: Z es el nucleófilo y X se llama grupo saliente. En bioquímica, el carbono de un grupo

carbonilo (C = O) es a menudo el átomo atacado por el nucleófilo. nucleófilos comunes son los
oxígenos de serina, treonina, y tirosina. Si se encuentra que la tasa de la reacción que se muestra
aquí para depender únicamente de la concentración de la R: X, entonces la reacción nucleófila se
llama una S norte 1
(Sustitución nucleófila unimolecular). Tal mecanismo significaría que la parte lenta de la reacción es la
ruptura del enlace entre R y X, y que la adición de la Z nucleófilo ocurre muy rápidamente en comparación
con eso. una S norte 1 reacción sigue fi cinética de primer orden (Capítulo 6). Si el nucleófilo ataca el R: X
mientras que la X está todavía conectado, a continuación, tanto la concentración de R: X y la
concentración de: Z serán importantes. Esta reacción va a seguir la cinética de segundo orden y se llama
una S norte 2 reacción (sustitución nucleófila bimolecular). La diferencia entre S norte 1 y S norte 2 es muy
importante para los bioquímicos porque explica mucho acerca de la fi ciudad estereoespecificidad de los
productos formados. una S norte 1 reacción a menudo conduce a la pérdida de estereoespecificidad ficción
de la ciudad. Debido a que el grupo saliente se ha ido antes de que entre en el grupo agresor, el grupo de
ataque a menudo puede terminar en una de dos orientaciones, aunque la especificidad del sitio activo
también puede limitar esto. Con una S norte 2 de reacción, el hecho de que el grupo saliente está todavía
unido obliga al nucleófilo para atacar desde un lado particular de la unión, lo que lleva a solamente una
ciudad posible fi estereoespecificidad en el producto. Los ataques nucleófilos quimotripsina fueron
ejemplos de S norte 2 reacciones, aunque no se observa ninguna estereoquímica porque el carbonilo que
fue atacada se convirtió en un grupo carbonilo de nuevo al final de la reacción y era, por lo tanto, no
quiral.
Para discutir la catálisis ácido-base, es útil recordar las definiciones de ácidos y bases. En la
definición de Brönsted-Lowry, un ácido es un donador de protones y una base es un aceptor de
protones. El concepto de catálisis ácido-base general depende de donación y aceptación de protones
por grupos tales como el imidazol, hidroxilo, carboxilo, sulfhidrilo, amino, y cadenas laterales fenólicos
de aminoácidos; todos estos grupos funcionales pueden actuar como ácidos o bases. La donación y
aceptación de protones da lugar a la ruptura de enlaces y re-formación que constituyen la reacción
enzimática.
Si el mecanismo de enzima implica un aminoácido donar un ion de hidrógeno, como en la reacción de
R-H + + R-O - 3 R + R-OH
entonces esa parte del mecanismo sería llamado catálisis ácida general. Si un aminoácido toma un
ion hidrógeno de uno de los sustratos, tales como en la reacción de
R + R-OH 3 R-H + + R-O -
entonces esa parte se llama catálisis básica general. La histidina es un aminoácido que a menudo participa
en ambas reacciones, ya que tiene un hidrógeno reactivo en la cadena lateral de imidazol que se disocia
cerca de pH fisiológico. En el mecanismo de la quimotripsina, vimos tanto catálisis ácido y la base por
histidina.
Una segunda forma de catálisis ácido-base refleja otra definición, más general de ácidos y bases. En la
formulación Lewis, un ácido es un aceptor de par de electrones, y una base es un donante de par de
electrones. Los iones metálicos, incluyendo los tales biológicamente importantes como Mn 2+, mg 2+, y Zn 2+, son
ácidos de Lewis. Por lo tanto, pueden desempeñar un papel en catálisis de iones metálicos ( también llamado
Lewis catálisis ácido-base). La participación de Zn 2+ en la actividad enzimática de la carboxipeptidasa A es un
ejemplo de este tipo de comportamiento. Esta enzima cataliza la hidrólisis de
Conexiones bioquímicos QUÍMICA ORGÁNICA
Las enzimas catalizan las reacciones familiares de Química Orgánica

Las reacciones bioquímicas son las reacciones descritas en los libros de texto de química de azúcares proporciona ejemplos de esto. La glucosa, un compuesto de seis
orgánica. Compuestos importantes tales como alcoholes, aldehídos, y cetonas aparecen carbonos, se convierte en piruvato, un compuesto de tres carbonos, en la glucólisis
muchas veces. Los ácidos carboxílicos están implicados en muchas otras reacciones, con (Capítulo 17). Una condensación inversa escinde de reacción la glucosa de seis
recuencia como sus derivados, ésteres y amidas. Todavía otras reacciones, llamadas carbonos derivado de fructosa-1,6- Bis fosfato a dos fragmentos de tres carbonos,
condensaciones, forman enlaces nuevos carbono-carbono. condensaciones inversa rompen gliceraldehído-3-fosfato y fosfato de dihidroxiacetona.
enlaces carbono-carbono, como su nombre lo indica. El desglose
La fructosa-1,6- Bis fosfato dihidroxiacetona fosfato + RE- gliceraldehído-3-fosfato
6
O_ 2 do correos OH
O_
H 2 do 1 O correos O - HC 4 O
2 do 1
O OH correos O -
do 2 O O- + H do 5 OH
5 2
H ohoh O- H 2 do 3 OH
aldolasa O
4 3 H 2 do 6 correos O -
OH S.S
O-
La fructosa-1,6- Bis fosfato dihidroxiacetona RE- Glyceraldehyde-

fosfato 3-fosfato
Gliceraldehído-3-fosfato, a su vez, se convierte en 1,3- reacciones, al igual que todas las reacciones bioquímicas, son catalizadas por enzimas
Bis fosfoglicerato en una reacción que convierte el aldehído a ácido carboxílico que específicas. En muchos casos, el mecanismo catalítico es conocida, como es el caso con las dos
participan en un enlace de anhídrido mixto a fosfatasa ácido Phoric. reacciones. Varios mecanismos orgánicos comunes aparecen repetidamente en los mecanismos
bioquímicos.
La conversión de un aldehído a un ácido carboxílico es un dación oxi-, con el
compuesto NAD + como agente oxidante. Estas
O_
HC C
OO
HCOH + NAD + + H 2 O + NADH + 2H +
HCOH
H 2 do correos O_ H 2 do O POO O_
O_ O_
glyceraldehyde3-fosfato 3-fosfoglicerato
7.6 Reacciones químicas implicadas en los mecanismos enzimáticos 191
C terminal de enlaces peptídicos de las proteínas. El Zn (II), que se requiere para la actividad de la
enzima, se compleja a las cadenas laterales de imidazol de las histidinas 69 y 196 y a la cadena lateral
de carboxilato del glutamato 72. El ion zinc también está complejado con el sustrato.
imidazol
imidazol carboxilato
Zn (II)
Resto de cadena polipeptídica do
norte CHR ARRULLO -
HC
Un ion de zinc está complejado a tres cadenas

laterales de carboxipeptidasa y a un grupo carbonilo
sobre el sustrato.
El tipo de unión que participan en el complejo es similar a la unión que une hierro a la gran
anillo implicado en el grupo hemo. La unión del sustrato a la ion zinc polariza el grupo carbonilo,
por lo que es susceptible al ataque por agua y permitiendo que la hidrólisis de proceder más
rápidamente que lo hace en la reacción no catalizada.
Existe una relación clara entre los conceptos de ácidos y bases y la idea de nucleófilos y sus
sustancias complementarias, electrófilos. Un ácido de Lewis es un electrófilo y una base de Lewis
es un nucleófilo. Catálisis por enzimas, incluyendo su notable especificidad, se basa en estos
principios químicos bien conocidos que operan en un entorno complejo.
La naturaleza del sitio activo juega un papel particularmente importante en la especificidad de las enzimas.
Una enzima que exhibe especificidad absoluta, catalizar la reacción de uno, y sólo uno, el sustrato a un producto en
particular, es probable que tenga un sitio activo bastante rígido que se describe mejor por el modelo de llave de
cerradura y de la unión del sustrato. Las muchas enzimas que muestran especificidad relativa, catalizar las
reacciones de sustratos estructuralmente relacionados a los productos relacionados, al parecer tienen
La reacción catalizada por la carboxipeptidasa A.
Zn (II)
Resto de cadena polipeptídica do do norte CHR ARRULLO -
Resto de cadena polipeptídica CC O-
+
+
H 3 NOHHCHR ARRULLO -
más flexibilidad en sus sitios activos y están mejor caracteriza por el modelo inducedfit de la unión
enzima-sustrato; quimotripsina es un buen ejemplo. Por último, hay estereoespecífica enzimas con
especificidad en el que la actividad óptica juega un papel. El sitio de unión en sí mismo debe ser
asimétrico en esta situación (Figura 7.15). Si la enzima es para unirse específicamente a un sustrato
sustrato
ópticamente activo, el sitio de unión debe tener la forma del sustrato y no su imagen de espejo. Incluso
hay enzimas que introducen un centro de actividad óptica en el producto. El sustrato en sí mismo no es
UNA ópticamente activo en este caso. Sólo hay un producto, que es uno de los dos posibles isómeros, no
segundo
una mezcla de isómeros ópticos.

■ Las enzimas son conocidos para catalizar reacciones químicas orgánicas conocidas.
Enzima
■ Uno de los más comunes es una reacción de sustitución nucleófila, de los cuales hay dos
principales tipos-S norte 1 y S norte 2.
■ Otras reacciones comunes son la catálisis ácido-base general y la catálisis de iones metálicos.
sitios de unión
asimétricas
FIGURA 7.15 Un sitio de unión asimétrico en una enzima

de distinguir entre grupos idénticos, tales como A y B. Tenga 7.7 El sitio activo y los estados de transición
cuenta que el sitio de unión consta de tres partes, dando lugar a la
ón asimétrica porque una parte es diferente de los otros dos. Ahora que hemos pasado algún tiempo buscando en los mecanismos y el sitio activo, vale la pena
volver a examinar la naturaleza de la catálisis enzimática. Recordemos que una enzima disminuye
la energía de activación mediante la reducción de la energía necesaria para alcanzar el estado de
transición (Figura 6.1). La verdadera naturaleza del estado de transición es una especie química
que es intermedia en la estructura entre el sustrato y el producto. Este estado de transición a
menudo tiene una forma muy diferente del sustrato o el producto. En el caso de la quimotripsina, el
sustrato tiene el grupo carbonilo que es atacado por la serina reactivo. El carbono del grupo
carbonilo tiene tres enlaces, y la orientación es plana. Después de la serina realiza el ataque
nucleofílico, el carbono tiene cuatro enlaces y una disposición tetraédrica. Esta forma tetraédrica es
el estado de transición de la reacción,
¿Cómo podemos determinar la naturaleza del estado de transición?

El hecho de que la enzima se estabiliza el estado de transición se ha demostrado muchas veces por el
uso de análogos del estado de transición, que son moléculas con una forma que imita el estado de
transición del sustrato. racemasa Proline cataliza una reacción que convierte L- prolina a RE- prolina. En el
progreso de la reacción, la
una- carbono debe cambiar de una disposición tetraédrica a una forma plana, y luego de vuelta a
tetraédrica, pero con la orientación de dos enlaces invertido (Figura
7,16). Un inhibidor de la reacción es pirrol-2-carboxilato de metilo, un producto químico que es
estructuralmente similar a lo prolina se vería en su estado de transición, ya que siempre es plana en el
carbono equivalente. Este inhibidor se une a la prolina racemasa 160 veces más fuertemente que la prolina
hace. análogos del estado de transición se han utilizado con muchas enzimas para ayudar a verificar un
mecanismo de sospecha y la estructura del estado de transición, así como para inhibir una enzima selectiva.
De nuevo en 1969, William Jencks propuso que un inmunógeno (una molécula que provoca una respuesta
de anticuerpos) sería provocar anticuerpos con actividad catalítica si el inmunógeno imitaba el estado de
transición de la reacción. Richard Lerner y Peter Schultz, que creó el fi primeros anticuerpos catalíticos, Veri
fi cado esta hipótesis en 1986. Debido a que un anticuerpo es una proteína diseñado para unirse a moléculas
específicas c en el inmunógeno, el anticuerpo es, en esencia, un sitio activo falso. Por ejemplo, la reacción
del fosfato de piridoxal y un aminoácido para formar los correspondientes
una- ceto ácido y piridoxamina fosfato es una reacción muy importante en el metabolismo de aminoácidos.
La molécula, norte una-( 5 'phosphopyridoxyl) - L- lisina sirve como una
7.7 El sitio activo y los estados de transición 193
Conexiones bioquímicos ALIADOS DE LA SALUD
Las familias de enzimas: proteasas

Un gran número de enzimas catalizan funciones similares. Muchas reacciones de oxidación-reducción se
llevan a cabo, cada una catalizada por una enzima específica. Ya hemos visto que las quinasas transfieren
Cys S CO RHN
grupos fosfato. Todavía otras enzimas catalizan reacciones hidrolíticas. Las enzimas que tienen funciones
25
similares pueden tener estructuras que varían ampliamente. La característica importante que tienen en
R'
común es un sitio activo que puede catalizar la reacción en cuestión. Un número de diferentes enzimas
catalizan la hidrólisis de proteínas. La quimotripsina es un ejemplo de la clase de proteasas de serina, pero H
muchos otros son conocidos, incluyendo elastasa, que cataliza la degradación de la elastina proteína del
tejido conectivo y la enzima tripsina digestivo. (Recordemos que primero vio tripsina en su papel en la norte
su CH 2 papaína CH 2
secuenciación de proteínas.) Todas estas enzimas son similares en estructura. Otras proteasas emplean
159
otros residuos de amino ácido esencial como el nucleófilo en el sitio activo. La papaína, la base de ablandar NUEVA HAMPSHIRE
la carne comerciales, es una enzima proteolítica derivada de papayas. Sin embargo, tiene una cisteína en
lugar de una serina como el nucleófilo en su sitio activo. aspartil proteasas difieren todavía más
ampliamente en la estructura de las serina proteasas comunes. Un par de cadenas laterales de aspartato, a
veces en diferentes subunidades, participa en el mecanismo de reacción. Un número de las aspartil cadena principal
proteasas, tales como la enzima pepsina digestivo, son conocidos. Sin embargo, la aspartil proteasa más
notorio es el necesario para la maduración del virus de la inmunodeficiencia humana fi, el VIH-1 proteasa.
Sin embargo, tiene una cisteína en lugar de una serina como el nucleófilo en su sitio activo. aspartil
proteasas difieren todavía más ampliamente en la estructura de las serina proteasas comunes. Un par de
cadenas laterales de aspartato, a veces en diferentes subunidades, participa en el mecanismo de reacción.
Un número de las aspartil proteasas, tales como la enzima pepsina digestivo, son conocidos. Sin embargo,
la aspartil proteasa más notorio es el necesario para la maduración del virus de la inmunodeficiencia
■ La papaína es una cisteína proteasa. Un residuo de cisteína crítico
humana fi, el VIH-1 proteasa. Sin embargo, tiene una cisteína en lugar de una serina como el nucleófilo en
está implicado en el ataque nucleófilo sobre los enlaces peptídicos se
su sitio activo. aspartil proteasas difieren todavía más ampliamente en la estructura de las serina proteasas
hidroliza.
comunes. Un par de cadenas laterales de aspartato, a veces en diferentes subunidades, participa en el mecanismo de reacción. Un número de las aspartil proteasas, tales como la enzima pepsina digestivo, son conocidos. Sin embargo, la aspartil protea
Una cadena de
cadena B
Desde el comprender Bioquímica CD ROM. Derechos de autor 1999. La Mona Group LLC.
Desde el comprender Bioquímica CD ROM. Derechos de autor 1999. La Mona Group LLC.
péptido
La quimotripsina,
elastasa, y tripsina
superpone
Chrymotrypsin Áspid
elastasa tripsina
■ La quimotripsina, elastina, y la tripsina son serina proteasas y tienen estructuras ■ VIH-1 proteasa es un miembro de la clase de enzimas llamadas las aspártico
similares. proteasas. Dos aspartatos están implicados en la reacción.
análogo del estado de transición para esta reacción. Cuando se utilizó este molécula de antígeno para obtener
anticuerpos, estos anticuerpos, o abzimas, tenido actividad catalítica (Figura
7,17). Por lo tanto, además de ayudar a verificar la naturaleza del estado de transición o hacer un inhibidor, análogos
de estado de transición ahora ofrecen la posibilidad de hacer las enzimas de diseño para catalizar una amplia
variedad de reacciones.
7.8 coenzimas
Los cofactores son no proteico sustancias que toman parte en las reacciones enzimáticas y se regeneran para
una reacción adicional. Los iones metálicos con frecuencia juegan un papel, y constituyen una de las dos clases
importantes de cofactores. La otra clase importante ( coenzimas) es una mezcla de compuestos orgánicos;
muchos de ellos son vitaminas o están metabólicamente relacionados con vitaminas.
reacción racemasa Proline
H+ H+
COO- H
- COO-
norte NUEVA norte COO- H
H HAMPSHIRE H
LL prolina transición plana DD prolina
estado
ARRULLO-
NUEVA
HAMPSHIRE
FIGURA 7.16 La reacción prolina racemasa. Pirrol-2-carboxilato
Pirrol-2-carboxilato de metilo (inhibidor de
metilo y -1-pirrolina-2- carboxilato de imitar el estado de
estado de transición y analógica)
sición plana de la reacción.
ARRULLO - ARRULLO - DEL NORTE

HO
Proteína PAGOH 2 do OH
HN CH CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 NUEVA
transportadora
CH N + H3 +
HAMPSHIRE
CH 3 CH 3
CAROLINA
PAGOH 2 do OH RE- alanina El piridoxal 5 'P
N+ CH 3
H CH 2
norte α- ( 5 'Phosphopyridoxyl) - L- fracción de lisina H 2 norte H

(antígeno) ARRULLO - DEL NORTE
OH 2 do(anticuerpo) OH
P abzima
do O +
CH 3 CH 3
CAROLINA
H
piruvato La piridoxamina 5 'P
UNA norte - ( 5 'phosphopyridoxyl- L- resto lisina es un análogo del estado de transición para El abzima se utiliza entonces para catalizar la reacción.
segundo
la reacción de un aminoácido con piridoxal 5'-fosfato. Cuando este resto está unido a
una proteína y se inyecta en un anfitrión, que actúa como un antígeno, y el anfitrión
entonces produce anticuerpos que tienen actividad catalítica (abzimas).
■ FIGURA 7.17 Abzimas.

7.8 Las coenzimas 195
Debido a que los iones metálicos son ácidos de Lewis (aceptores de pares de electrones), que pueden actuar como
NUEVA HAMPSHIRE 2
catalizadores de ácido-base de Lewis. También pueden formar compuestos de coordinación al comportarse como ácidos de
Lewis, mientras que los grupos a los que se unen actúan como bases de Lewis. Los compuestos de coordinación son una norte
norte
parte importante de la química de los iones metálicos en los sistemas biológicos, como se muestra por Zn (II) en la
adenina
carboxipeptidasa y por Fe (II) de la hemoglobina. Los compuestos de coordinación formados por iones metálicos tienden a
norte
tener geometrías muy específicas, que ayuda en el posicionamiento de los grupos que participan en una reacción para la norte
catálisis óptima. - OH
O correosO
H
Algunas de las coenzimas orgánicos más importantes son las vitaminas y sus derivados, especialmente OH CH 2
H H
vitaminas B. Muchas de estas coenzimas están implicados en las reacciones de oxidación-reducción, que
proporcionan energía para el organismo. Otros sirven como agentes de transferencia de grupo en procesos OH
metabólicos (Tabla 7.1). Veremos estas coenzimas de nuevo cuando se discuten las reacciones en las que están ribosa
involucrados. Por el momento, vamos a investigar una coenzima de oxidación-reducción particularmente O

CO
importante y una coenzima de transferencia de grupo. NUEVA HAMPSHIRE 2
nicotinamida
nicotinamida adenina dinucleótido (NAD +) es una coenzima en muchas reacciones de
norte
oxidación-reducción. Su estructura (Figura 7.18) tiene tres partes: un anillo de nicotinamida, un anillo de +
adenina, y dos grupos de azúcar-fosfato unidos entre sí. El anillo de nicotinamida contiene el sitio en el que -
O PAG O OH
se producen reacciones de oxidación y reducción (Figura 7.19). El ácido nicotínico es otro nombre para la
O H
vitamina niacina. La porción de adenina-azúcar-fosfato de la molécula está estructuralmente relacionada OH CH 2
H H
con nucleótidos.
OH
El b 6 vitaminas (piridoxal, piridoxamina, y piridoxina y sus formas fosforiladas, que son las ribosa
coenzimas) están involucrados en la transferencia de grupos amino de una molécula a otra, un

paso importante en la biosíntesis de aminoácidos (Figura 7.20). En la reacción, el grupo amino es ■ FIGURA 7.18 La estructura de nicotinamida adenina
transferido desde el donante hasta el coenzima y luego de la coenzima al aceptor final (Figura dinucleótido amida (NAD +).
7.21).
Tabla 7.1
Coenzimas, sus reacciones, y sus precursores de la vitamina
coenzima Tipo de reacción Los precursores de la vitamina Mira la sección
biotina carboxilación biotina 18.2, 21.6

coenzima A transferencia de acilo Ácido pantoténico 15.9, 19.3, 21.6
coenzimas flavina Reducción de oxidación Riboflavina (B 2) 15.9, 19.3
Ácido lipoico transferencia de acilo - 19.3
coenzimas de nicotinamida adenina Reducción de oxidación La niacina 15.9, 17.3, 19.3
El fosfato de piridoxal transaminación La piridoxina (B 6) 23.4
ácido tetrahidrofólico Transferencia de unidades de un carbono Ácido fólico 23.4
pirofosfato de tiamina transferencia de aldehído Tiamina (B 1) 17.4, 18.4
Conexiones bioquímicos ALIADOS DE LA SALUD
Anticuerpos catalíticos contra la cocaína

Muchas drogas adictivas, tales como la heroína, operan mediante la unión a un receptor La cocaína puede ser degradado por una esterasa fi específico, una enzima que
particular en las neuronas, imitando la acción de un neurotransmisor. Cuando una persona es hidroliza un enlace éster que es parte de la estructura de la cocaína. En el proceso de
adicta a un fármaco tal, una forma común para intentar tratar la adicción es el uso de un esta hidrólisis, la cocaína debe pasar a través de un estado de transición que cambia su
compuesto para bloquear el receptor, negando así el acceso del medicamento a la misma. forma. anticuerpos catalíticos para el estado de transición de la hidrólisis de la cocaína
adicción a la cocaína ha sido siempre difícil de tratar, principalmente debido a su modus se crearon (véanse los artículos de Landry y colegas citados en la bibliografía al final de
operandi único. Como se muestra, la cocaína bloquea la recaptación del neurotransmisor este capítulo). Cuando se administra a pacientes que sufren de adicción a la cocaína, los
dopamina. Por lo tanto, la dopamina permanece en el sistema más largo, la sobreestimulación anticuerpos hidrolizados con éxito cocaína a dos productos de degradación-benzoico
de las neuronas y que conduce a las señales de recompensa en el cerebro que conducen a la inofensiva ácido y éster metílico de ecgonina. Cuando degradado, la cocaína no puede
adicción. El uso de un medicamento para bloquear un receptor no sería de uso con adicción a la bloquear la recaptación de dopamina. No prolongación del estímulo neuronal se
cocaína y probablemente acaba de hacer la eliminación de la dopamina aún más improbable. produce, y los efectos adictivos de la droga desaparece con el tiempo.
UNA señales segundo señales

neuronales neuronales
neurona neurona
presináptica presináptica
Dopamina La dopamina se
liberada y se une acumula y se
la cocaína
a los receptores une a receptores
captación de bloquea la
dopamina captación
señal
neuronal
señales
aumentó
neuronales neurona neurona
postsináptica postsináptica
■ El mecanismo de acción de la cocaína. (A) La dopamina actúa como un neurotransmisor. Se libera de la neurona presináptica, viaja a través de la sinapsis, y se adhiere a los receptores de
dopamina en la neurona postsináptica. Más tarde se libera y se recoge en vesículas en la neurona presináptica. (B) La cocaína aumenta la cantidad de tiempo que la dopamina está disponible para los
receptores de dopamina bloqueando su absorción. ( Desde Científico americano,
Vol. 276 (2), pp. 42-45. Reproducido con autorización de Tomoyuki Narashima).
UNA Cocaína Estado de transición

segundo (do)
do
éster metílico de
ecgonina
Ácido benzoico
Sitio de
corte
■ La degradación de la cocaína por esterasas o anticuerpos catalíticos. La cocaína (a) pasa a través de un estado de transición (b) en su camino a ser hidrolizado a benefi- éster metílico del ácido y la ecgonina zoico
(c). análogos del estado de transición se utilizan para generar anticuerpos catalíticos para esta reacción. ( Desde Científico americano,
Vol. 276 (2), pp. 42-45. Reproducido con autorización de Tomoyuki Narashima).
7.8 Las coenzimas 197
H - ( H +, 2 mi -)
H
+
CC CO CO CO
HC NUEVA HAMPSHIRE 2 HC NUEVA HAMPSHIRE 2 HC NUEVA HAMPSHIRE 2
Resonancia
NCC
+ H+
HC N CH HC CH HC CH
+
ICONA
RH R RHH
NAD + (oxidado) NADH (reducido)
■ FIGURA 7.19 El papel del anillo de nicotinamida en las reacciones de oxidación-reducción.

R es el resto de la molécula. En las reacciones de este tipo, un H + se transfiere junto con los dos electrones.
CHO HAMPSHIRE 2 CH 2 OH
HO CH 2 OH HO CH 2 OH CH 2 NUEVA HO CH 2 OH
do do do
NCC NCC NCC
C CH C CH C CH
H 3 do H 3 do H 3 do
piridoxal piridoxamina piridoxina
CHO CH 2 NUEVA HAMPSHIRE 2

O O
HO HO
- -
do CH 2 O correos do CH 2 O correos
NCC NCC
- -
C CH O C CH O
H 3 do H 3 do
■ FIGURA 7.20 Formas de vitamina B 6.

Las tres primeras estructuras son la vitamina B 6 en sí, y las dos
El fosfato de piridoxal fosfato de piridoxamina últimas estructuras muestran las modificaciones que dan lugar a
la coenzima metabólicamente activo.
NUEVA HAMPSHIRE 2 O E O NUEVA HAMPSHIRE 2

transaminasa
- -
OOCCH2CH2CHCOO - + H3CCCOO - OOCCH2CH2CCOO - + H3CCHCOO -
con fosfato de
Glutamato piruvato α- cetoglutarato alanina
piridoxal unido
Este amino (NH2) reacción de transferencia de grupo se produce en dos etapas:
Glu (NH 2) piruvato
P PyrP P PyrP NUEVA HAMPSHIRE 2 P PyrP
mi α- cetoglutarato Ala (NH 2)
La coenzima es aceptor La coenzima es donante
■ FIGURA 7.21 El papel de fosfato de piridoxal como una coenzima en una reacción de transaminación. PyrP es el
fosfato de piridoxal, P es la apoenzima (la cadena polipeptídica solo), y E es la holoenzima activa (polipéptido más coenzima).
Conexiones bioquímicos Toxicología Ambiental
Los catalizadores para Química Verde

Los mil millones de galones de desechos tóxicos se vierten en el medio ambiente cada y el oxígeno aniónico en el sitio de ligando. Esta molécula final es lo suficientemente potente como
año. Entre los daños causados por nuestro estilo de vida industrial y el crecimiento para reaccionar con y destruir muchos complementos Tox químicos. Mediante el ajuste de los
desenfrenado de la población mundial, muchos científicos han predicho que la Tierra se componentes de la TAML, los investigadores pueden adaptarlos para las toxinas específicas,
encamina a un colapso ambiental global. En respuesta, la ciencia y la industria están incluidas las versiones que fueron capaces de desactivar más del 99% de las esporas de Bacillus
rabajando en formas de reducir y limitar la toxicidad de los compuestos producidos por atrophaeus, una especie bacteriana similares al ántrax. También han sido utilizados para decolorar
síntesis industriales. Esto ha llevado al nuevo campo de química verde, en el que los residuos de las fábricas de celulosa. Los investigadores que trabajan con TAMLs esperan
alternativa, los compuestos menos tóxicos están reemplazando lentamente sus diseñar para atacar a otras enfermedades infecciosas y contaminantes ambientales.
predecesores más tóxicos.
La naturaleza tiene algunos sistemas de desintoxicación de su propia, a menudo

ncluyendo peróxido de hidrógeno y oxígeno. Estas dos sustancias que trabajan juntos son
TAML
capaces de purificar el agua y la limpieza de residuos industriales. Sin embargo, en la ligando
naturaleza tales reacciones requieren una enzima, tal como peroxidasa, para aumentar la agua
velocidad de reacción a un nivel significativo. La investigación actual ha llegado con algunas
moléculas sintéticas que poseen la capacidad de una enzima para catalizar una reacción
necesario. Un conjunto importante de estas moléculas se llaman
TAMLs ( tetra-amido ligandos macrocíclicos). El corazón de la ecule en moles es un átomo de

hierro ligado a cuatro átomos de nitrógeno, como se muestra en la figura y los dos sitios de
coordinación restantes están obligados a ligandos de agua. Adjunta a la presente unidad
central son llamados anillos de carbono del macrociclo. Así como el hierro en la hemoglobina
es reactivo y puede unirse a oxígeno, el TAML se aprovecha de propiedades similares. En macrociclo
este caso, reacciona con H 2 O 2 para desplazar un ligando agua. El h 2 O 2 entonces expulsa otra
molécula de agua, dejando una especie muy reactiva con una gran separación de la carga
entre el centro de hierro
Hidrógeno Oxígeno Nitrógeno Carbón Planchar

■ Las coenzimas son no proteico sustancias que toman parte en las reacciones enzimáticas y se
regeneran para una reacción adicional.
■ Los iones metálicos pueden servir como coenzimas, con frecuencia, al actuar como ácidos de Lewis.
■ También hay muchas coenzimas orgánicos, tales como NAD + y FAD, la mayoría de los cuales son las vitaminas o
están estructuralmente relacionado con vitaminas.
esumen
mar en www.thomsonedu.com/login probarse a sí mismo en

os conceptos.
ómo se controlan las enzimas alostéricos? Las enzimas alostéricas pueden ser unión de sustrato, inhibidor o activador para una subunidad desplaza el
ntrolados por muchos mecanismos diferentes, incluyendo la inhibición y la equilibrio entre una forma activa de la enzima, que se une fuertemente
vación por las moléculas de unión reversible. inhibición de la retroalimentación es sustrato, y una forma inactiva, que no se une fuertemente sustrato. El cambio
a forma común para regular una enzima alostérica que es parte de una vía conformacional se lleva a cabo en todas las subunidades al mismo tiempo.
mplicada.
uál es el modelo alostérico concertada para comportamiento? En el modelo ¿Cuál es el modelo secuencial para alostérico comportamiento? En
ncertado para el comportamiento alostérico, la el modelo secuencial, la unión de sustrato
ejercicios de repaso 199
induce el cambio conformacional en una subunidad, y el cambio se pasa La estructura tridimensional completa de la quimotripsina, incluyendo la
posteriormente a lo largo de otras subunidades. arquitectura del sitio activo, se ha determinado por cristalografía de rayos
No siempre fosforilación aumentar la actividad enzimática? Algunas X.
enzimas son activadas o inactivadas dependiendo de la presencia o ¿De qué manera los aminoácidos críticos catalizan la reacción
ausencia de grupos fosfato. Este tipo de modificación covalente se puede motrypsin CHY-? El ataque nucleofílico por serina es la característica
combinar con interacciones alostéricas para permitir un alto grado de principal del mecanismo, con histidina hydrogenbonded a serina en el
control sobre vías enzimáticas. curso de la reacción. La reacción tiene lugar en dos fases. En la primera
fase, serina es el nucleófilo, y hay una acil-enzima intermedio. En la
segunda fase, el agua actúa como el nucleófilo y la acylenzyme intermedio
¿Cómo podemos determinar los residuos de aminoácidos esenciales? Surgen
se hidroliza.
varias preguntas acerca de los eventos que se producen en el sitio activo de
una enzima en el curso de una reacción. Algunos de los más importantes de
estas preguntas abordar la naturaleza de los residuos de aminoácidos críticos, ¿Cuáles son los tipos más comunes de reacciones?
su disposición espacial, y el mecanismo de la reacción. El uso de reactivos de mecanismos de reacción orgánicos comunes, tales como la sustitución nucleófila y
marcaje y cristalografía de rayos X nos permite determinar los aminoácidos que la catálisis ácido-base general, se sabe que juegan papeles en la catálisis
se encuentran en el sitio activo y críticos para el mecanismo catalítico. enzimática.
¿Cómo podemos determinar la naturaleza del estado de transición? La

naturaleza de la catálisis ha sido ayudado por el uso de análogos de estado de
¿De qué manera la arquitectura del sitio activo afecta a la catálisis? Quimotripsina
transición, moléculas que imitan el estado de transición. Los compuestos
es un buen ejemplo de una enzima para la cual la mayor parte de las preguntas generalmente se unen a la enzima mejor que el sustrato natural y ayudan a verificar el
acerca de su mecanismo de acción han sido respondidas. Sus residuos de mecanismo. También pueden ser utilizados para desarrollar inhibidores potentes o
aminoácidos críticos se han determinado a ser serina 195 y la histidina 57. para crear anticuerpos con actividad catalítica, llamados abzimas.
ejercicios de repaso
Firmar en www.thomsonedu.com/login para evaluar su

comprensión de los conceptos de este capítulo con interrogando y
tutoriales adicional.
7.1 El Comportamiento de alostéricos Enzimas 15. Recordar ¿Qué modelo alostérico puede explicar cooperatividad negativa?
1. Recordar ¿Qué características distinguen las enzimas que se someten a alostérico dieciséis. Recordar Con el modelo concertada, ¿qué condiciones favorecen una mayor
el control de los que obedecen a la ecuación de Michaelis-Menten? cooperatividad?
2. Recordar ¿Cuál es el papel metabólico del aspartato transcarbamilasa? 17. Recordar Con respecto al modelo concertada, ¿cuál es el valor de L?
Cuál es el do ¿valor?
3. Recordar Lo molécula actúa como un efector positivo (activador) de
ATCasa? Lo molécula actúa como un inhibidor? 18. Reflexionar y Aplicar ¿Es posible imaginar modelos para el comportamiento
enzimas alostéricos de que no sean los que hemos visto en este capítulo?
4. Recordar Es el término K METRO se utiliza con enzimas alostéricos? Qué pasa
inhibición competitiva y no competitiva? Explique.
5. Recordar ¿Qué es un sistema de K? 7.3 Control de la actividad enzimática por la
6. Recordar ¿Qué es un sistema de V? fosforilación
7. Recordar ¿Qué es un efecto homotrópico? ¿Qué es un efecto heterotropic? 19. Recordar ¿Cuál es la función de una proteína quinasa?
8. Recordar ¿Cuál es la estructura de ATCasa? 20. Recordar Lo que los aminoácidos son a menudo fosforilados por quinasas?
9. Recordar ¿Cómo es el comportamiento cooperativo de las enzimas alostéricos refle- 21. Reflexionar y Aplicar ¿Cuáles son algunas de las posibles ventajas de la celda en
la disfunción eréctil en un gráfico de la velocidad de reacción frente a la concentración de sustrato? la combinación de la fosforilación con el control alostérico?
10. Recordar ¿El comportamiento de los enzimas alostéricos ser más o menos 22. Reflexionar y Aplicar Explica cómo la fosforilación está involucrado en el
cooperativa en presencia de inhibidores? función de la ATPasa sodio-potasio.
11. Recordar ¿El comportamiento de los enzimas alostéricos ser más o menos 23. Reflexionar y Aplicar Explica cómo la glucógeno fosforilasa es con-
cooperativo en presencia de activadores? controlada alostéricamente y por modificación covalente.
12. Recordar Explicar lo que se entiende por K 0.5.

7.4 Los zimógenos
13. Reflexionar y Aplicar Explicar el experimento se utiliza para determinar la 24. Recordar Nombre tres proteínas que están sujetas al control meca-
estructura de ATCasa. ¿Qué ocurre con la actividad y las actividades de regulación cuando NISM de la activación de zimógeno.
se separan las subunidades?
25. Conexiones bioquímicos Lista tres proteasas y sus sustratos.
7.2 Los concertados y secuencial Modelos para alostéricos 26. Recordar ¿Cómo se relaciona con la coagulación sanguínea zimógenos?
Enzimas 27. Reflexionar y Aplicar Explicar por qué la ruptura del enlace entre
14. Recordar Distinguir entre los modelos concertados y secuenciales arginina 15 y 16 de isoleucina chymotrypsinogen activa el zimógeno.
por el comportamiento de las enzimas alostéricos.
Reflexionar y Aplicar ¿Por qué es necesario o ventajoso para el cuerpo 40. Reflexionar y Aplicar Explicar la diferencia entre un S norte 1 reacción
para hacer zimógenos? mecanismo y un S norte 2 mecanismo de reacción.
Reflexionar y Aplicar ¿Por qué es necesario o ventajoso para el cuerpo 41. Reflexionar y Aplicar Cuál de los dos mecanismos de reacción en
para hacer precursores de hormonas inactivas? Pregunta 40 es probable que cause la pérdida de estereoespecificidad? ¿Por qué?
42. Reflexionar y Aplicar Se realiza un experimento para probar una sugerido

5 La naturaleza del sitio activo
mecanismo para una reacción catalizada por la enzima. Los resultados se ajustan al modelo
Recordar ¿Cuáles son los dos aminoácidos esenciales en el sitio activo de
exactamente (a dentro del error experimental). ¿Los resultados demuestran que el mecanismo es
quimotripsina?
correcto? ¿Por qué o por qué no?
Recordar ¿Por qué la reacción de la enzima para la quimotripsina proceder en
dos fases? 7.7 El sitio activo y los estados de transición
Reflexionar y Aplicar Brevemente describir la función de catálisis nucleófila 43. Reflexionar y Aplicar ¿Cuáles serían las características de una transición-
en el mecanismo de la reacción de la quimotripsina. análogo de estado para la reacción quimotripsina?
Reflexionar y Aplicar Explicar la función de histidina 57 en el 44. Reflexionar y Aplicar ¿Cuál es la relación entre una transición-
mecanismo de la quimotripsina. análogo de estado y el modelo de ajuste inducido de la cinética enzimática?
Reflexionar y Aplicar Explicar por qué la segunda fase de la chymotryp- 45. Reflexionar y Aplicar Explicar cómo un investigador hace un abisma.
mecanismo de pecado es más lenta que la primera fase. ¿Cuál es el propósito de una abisma?
Reflexionar y Aplicar Explicar cómo el p K una para histidina 57 es importante 46. Conexiones bioquímicos ¿Por qué puede adicción a la cocaína no tratada
a su papel en el mecanismo de acción quimotripsina. con un medicamento que bloquea el receptor de la cocaína?
Reflexionar y Aplicar Un inhibidor que específicamente etiqueta quimotripsina 47. Conexiones bioquímicos Explican cómo abzimas se pueden utilizar para tratar
en histidina 57 es N-tosylamido- L- feniletil clorometil cetona. ¿Cómo se modifique la adicción a la cocaína.
estructura de este inhibidor de etiquetar el sitio activo de la tripsina?

7.8 Las coenzimas
48. Recordar Lista tres coenzimas y sus funciones.
6 Reacciones químicas implicadas en los mecanismos enzimáticos 49. Recordar ¿Cómo son coenzimas relacionadas con las vitaminas?
50. Recordar ¿Qué tipo de reacción utiliza la vitamina B 6?

Reflexionar y Aplicar ¿Qué propiedades de los iones metálicos que sean útiles
51. Reflexionar y Aplicar Sugieren un papel de coenzimas basado en la reacción
cofactores?
mecanismos.
Conexiones bioquímicos ¿La siguiente expresión es cierta o falsa?
52. Reflexionar y Aplicar Una enzima utiliza NAD + como coenzima. Utilizando
¿Por qué? “Los mecanismos de catálisis enzimática no tienen nada en mon com- con los
La figura 7.19, predecir si un radiomarcado H: - ion tendería a aparecer preferentemente
encontrados en la química orgánica.”
en un lado del anillo de nicotinamida en oposición a la otra cara.
Reflexionar y Aplicar Lo que se entiende por catálisis ácida general
respecto a la enzima mecanismos?
ibliografía comentada
lins, TJ, y C. Walter. Las moléculas pequeñas verdes. Sci. Amer. 294 Landry, DW, K. Zhao, GXQ Yang, M. Glickman, y TM Georgiadis. Anticuerpo degradación
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El comportamiento de las proteínas:

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6.3 Las ecuaciones cinéticas enzimáticas

concentración de los reactivos?

• ¿Cómo podemos identificar un inhibidor competitivo? ¿Cómo podemos

Firmar en www.thomsonedu.com/login probarse a sí mismo en estos conceptos.

Esta reacción es termodinámicamente favorable (espontánea en el

Si una reacción es espontánea, ¿significa que el proceso será

La energía de activación de esta reacción se reduce si se permite que la reacción proceda en

peróxido de hidrógeno mediante catalizadores

Energía libre de activación

Condiciones de reacción kJmol- 1 kcal mol 1 Tasa relativa

sin catalizador 75.2 18.0 1

Conexiones bioquímicos CIENCIAS DE LA SALUD

Enzimas como marcadores de la enfermedad

Una enzima particularmente útil a ensayo es la acetilcolinesterasa (ACE), que es

100 Será una reacción más rápida si se eleva la temperatura?

Figura 6.2 El efecto de la temperatura sobre la actividad enzimática. La

6.3 Las ecuaciones cinéticas enzimáticas

tasa ` 3 UNA 4 F 3 segundo 4 sol

o, como una ecuación,

Tarifa 5 k 3 UNA 4 F 3 segundo 4 sol

dónde k se llama una constante de proporcionalidad la tarifa constante. los exponentes

Tarifa 5 k 3 UNA 4 1 (6,1)

dónde k es la constante de velocidad y el exponente para la concentración de A es 1, entonces la reacción se Para

32 PAG 3 Tasa de productos de

desintegración 5 k 3 32 PAG 4 1 5 k 3 32 PAG 4

Si la velocidad de una reacción A + B 3 C + D está dada por

Tarifa 5 k 3 UNA 4 1 3 segundo 4 1 (6,2)

dónde k es la constante de velocidad, el exponente para la concentración de A es 1, y el exponente para la

El glucógeno norte + PAG yo 3 La glucosa 1-fosfato + glucógeno norte -1

Velocidad = k [ El glucógeno] 1 [ PAG yo] 1 = k [ El glucógeno] [P yo]

dónde k es la constante de velocidad. Tanto el glucógeno y el fosfato toman parte en el mecanismo de

Es la velocidad de una reacción siempre se basa en la

Velocidad = k [ UNA] 0 = k (6,3)

Sección 6.3 Resumen

6.4 La unión enzima-sustrato

¿Por qué las enzimas se unen a sustratos?

modelo de la cerradura y llave ajuste inducido modelo

UNA En el modelo de cerradura y llave, la forma del sustrato y la confirmación En el

Después de que el sustrato se une y el estado de transición se forma posteriormente, se puede

formó Producto liberado de la

Sección 6.4 Resumen

■ La unión al sitio activo es reversible y se produce a través de interacciones no covalentes.

6.5 Ejemplos de reacciones catalizadas con enzima

catalizadas por quimotripsina

Ester Ácido Alcohol

Aunque la hidrólisis del éster no es importante para el papel fisiológico de la quimotripsina en la

Otra reacción catalizada por enzima es la catalizada por la enzima aspartato

¿Por qué quimotripsina y ATCasa tener

Sección 6.5 Resumen

■ Aspartato transcarbamilasa es una enzima que está implicada en la síntesis de nucleótidos.

■ Cuando la velocidad de la aspartato transcarbamilasa se representa gráficamente frente aspartato, la curva es

6.6 El enfoque de Michaelis-Menten

Una reacción típica podría ser la conversión de algún sustrato, S, a un producto,

Tenga en cuenta la suposición de que el producto no se convierte al sustrato de una manera

La concentración de sustrato a la que la reacción procede en la mitad de su velocidad máxima

Velocidad inicial ( V en eso)

Tasa de formación 5 D 3 ES 4 (6,5) La concentración de sustrato [S]

El complejo ES se descompone en dos reacciones, devolviendo a la enzima y el sustrato o al dar lugar

Tasa de descomposición 5 2D 3 ES 4 (6,6)

[E] = [E] T - [ES] (6,9)

Sustituyendo para la concentración de enzima libre, [E], en la ecuación 6.8,