Sie sind auf Seite 1von 4

Anh

ang

A
:Lö
sungenzudenAu
fgaben

Kap
ite
l1 Pep
tidb
indungen

1. W as serstob rü ckendon ato rensindd ieNH -undNH 2-Gruppen.Wasser


- CH3 H H O CH2OH
stob rüc ken akzepto r
ens indd ieS auers
tofatomed erC arbony
lgruppen
undd iejenigenS t
ic ks
tof atom eind enR ingen,and iek e
in Wasse
rstof N C C N C C N C C
undk e
in eD eso xy
ribo seg ebund ens ind.
2. T au sch enS ieimS echse rrin gdieP osi
tionenderEinz e
l-undDopp elbin
- H H O H H H O
dun genau s.
3.a )E lektro s
t at
ischeW ech selw i
rkun gen; α-Kohlen-
s
toffatome
b)V an-d er-W aa
ls-W e chs elwi r
kun gen.
4. R e aktion enaundb
5. DS Sys
tem =– 6 61J mo l–
1 –
K1 7
.
D S = +842 J mol–
1 –
K1 O O
Uni
ver
sum
6.a )1, 0;b )1 3,0;c)1,3;d )1 2,7 +
H3N CH C N CH C O

7.2,8 8
8.1,9 6 H H CH2
9.1 1
, 83
10.4 4 7
;0 , 000 50 +
HN
11.0
, 00 0 66M
12.6
, 0 NH
13.5
, 53 be
ipH5 ,5is
tdieNet ladung +1
to
14.6
, 48
15.7, 8
O O
16.1 0 0
+ –
17.a )1, 6;b )0, 51;c)0,1 6 H3N CH C N CH C O
18.0, 1 MN atrium ac
etatlö sun g:6 ,34
;6 ,03
;5,70
;4,75
0, 01 MN atrium a
c e
t a
tlö sun g
:5 ,90
;4 ,75
;3,38
;1,40 H H CH2
19.9 0 mME s s
i gsäure;1 6 0 mM N a
trium ace
tat
;0,18 mo lEssig
säure
;0 ,3
2
molN a
trium acetat
;1 0
,8 1gE ssig
säure;26,25gN a
trium acet
at N
20.0, 50 mo lE ss
i gsäure;0, 32 mo lN aOH ;30,03gE s
sigsäure
;1 2
,80gN aOH
NH
21.2 50 mM ;ja;n ein,ess indau ch9 0 mMN aC
lenthalt
en
22.8, 63gN aHPO4;4
2 ,7 1gN aH 2PO4 be
ipH7 ,5istd
ieNet ladung 0
to
23.7, 0
;d ieserPuf eristw eni gh ilf
reich,dasichderpH -W er
tvomp KS-W er
t
star kun t e
r scheidet 8
. Anjede
rder5 0P os
it
ionenk annein
evon2 0Am inosäu
rens
teh
en:2
050

24.1, 45k J mo l–1


;5 7
,9k J mo l–1
od
er1,
1×1 065
25.E tw a1 5M illionenun te r
s chi edl
icheB asenpaa
re 9
.
O O
+
H3N CH C N CH C O CH3
Kap
ite
l2
CH2 H CH2
1
. A)Prol
in,Pro
,P;B)T y
ros
in;Ty
r,Y;C)L
euc
in,L
eu,L
;D)L
ysin
,Ly
s,K C O
2
. a
)C,B ,A;b)D;c)D,B;d)B,D;e)B
3
. a
)6;b)2;c)3;d)1;e)4
;f)5 O–
4
. a
)A l
a;b)Tyr
;c )Ser
;d)His
5
. S
er,Glu
,T y
r,h r
6
. a
)A l
anin-G
lycin-
Serin
;b)Alan
in;c
)undd) A
spa
rtambe
ipH7

J
.M.Berg
,J.L
.T ymocz
ko,L
.Stry
er
,B
ioch
emie
DO
I10.1007/978–3
-8274–2989
-6,©Spr
inge
r-V
erl
agBe
rl
inHe
ide
lbe
rg2013
A
:Lö
sungenzudenAu
fgaben 10
77

10
.Dies ich w ied erho l end eE inh eitS tic kstof /a -K oh l en s
tof /C arbon yl- 24
.E in e mö glicheE rklä run gi st,d as
sd ieS chw ered e
rS ymp tom ed emA us-

11
koh
.D i
l
eS
en s
e
i
tof
tenk
.
ettei std iefunk tion el
l eG rupp e
,d ieama -K oh len stof atom
maßd
Sub sti
ers
tut
t ruktu
ionvonA
rel
l
l
enS
an

ing
run
e g
gen
enG l
t
y
sp
c
rich
innu
t.Soso
rzul ei
ll
ch
teb
tenS
eispi
ymp
elsw
tom
eised
enfüh
ie
-
1
derAm ino s äu reb ef estigt ist. ren,w ähr endd ieSub sti
tu tiond e
sv ielg röß erenT r yptoph ansd azufüh -
12
.D
d
i
en
e Am
ene
ino
inP
s
ro
äu
te
r e
inb
zu
e
samm
steht.D
en
i
set
eR
zun
eih
gg
en
ib
fo
tnu
lg ew
rd
irdd
ie Am
ab ein
ino
i
s
ch
äu
tb
renan
erü c k
s
,au
i ch-
s
25
r
.D
enkönn
ieEn er
t
g
e
i
,d
es
asss
chw e
i
l
chd
le,d
ieD
ieüb
rei
e
fachh
rwund
e
lixnu
enw e
rw
rd
en igod
en mu ss
erg arn
,umvond
ich tb
e
ild
rpo
e
t
l
.
y-
2
tigt.D i eAm ino säu res equ en zi std asG l eich ew ied i eP rim är
s truk tu r– merisier tenzu rh yd r olysie rtenF ormzuw ech seln,i stho ch,selb s
tw enn
d
d
i
e
eS
sP
equ
r ot
en
ein
zd
s.
erAm ino säu r envomAm ino term inu szumC abo xylend e
26
di
.Un
eR
te
e
rV
aktionth
erw
ermod
endun gd
yn
e
am
rH
i schb
end er
egün
son -H
st
i
a
g
s
t
s
i
e
s
lb
t
.
a
l ch-G leichun gl ässts ich
3
13
.a )J ed erS tr an gh a
te in eM assevon3 5 kd ,um fassta lso3 18R este(m itt- dasV e rh ä
ltn isvon A l anin -COOHzu A lan in-COO– b eipH  7a ls1 0–4

l
R
e
e
r
s
eM
tb et
a
r
ss
ä
ep
gt,e
r
r
oR
g
ib
es
ts
t1
i
1
che
0 d
in
).D
eL
ad
än
i
g
eS t
evon4
e
i ghöh
7
, 7
ee
 nm
in e
.N
ra
o
-H
chg
elix0
en
,
au
1
e
5
r
 nmp
:B eie
r
i-
o b
d
e
i
r
e
e
se
chn
lb
en
eW
.D
eis
asV
eb e
e
s
t
rh
imm
ältni
tw
svon A
ird,b
l
e
tr
an
ä
in
g
t1
-NH2 zu A
0–1. D emn
lan
a
in
chb
-NH
el
3 ,d
+

äuts i
asau
chd a
f
s
4
nersup ersp iralisiert ena -H elixb etr ägtd ieS t eighöh ep roR est0 , 146 nm , Verh äl
tn isvonn eu tral em A laninzud enzw itterion isch enF orm enau f
sod
b)A
asss
ch
i
t
chfü
zehnR
rd
e
i
s
eL
tein
än
j
ge4
ed
6
emS
,4 nme
tr an
r
g(
g
4
eben
0m
.
inu s4g eteiltdu rch2 ) lieg en in 27
1
.D
0
i

4

eB
×1
e s
t
0–
1
=1
immun
0–5
.
gd erab solu tenK oni gur a
tione rfo rdert,d ieP rioritä
td er
5
ein erb -F a
l tblatt-K onfo rm ationvo r
.B eie in erS tei ghöh evon0 , 3 5
 nmp r o vierb eteiligten G rupp eninB ezugau fe int e
tr aed risch esK oh len s
tof-

14
R
.D
es
i
te
eM
rgib
e
th
ts
y
l
i
g
che
rupp
in eL
eamb
än g evon6
-K ohl
,
en
3
s
 nm
tof a
.
tomd e sI sol eu cin sb ehind er
ts te-
a
d
tom
ieR
f
e
e
ih
s
t
en
zul
fo
e
l
g
g
en
e
:1
.B e
)Am
ia l
l enAm
ino g
ino
rupp e
s
,2
äu
)C
renm
a
rbon
itA
ylg
usnahm
rupp e,3
evonC
)S ei
t
y
enk
ste
e
ing
t
te
i
,4
l
t
)
6
rischd i eB ildun ge in e ra -H e
li x
.B eimL eu cini std ies eM eth ylgrupp ean Wassers tof.B e
iC ysteinb esitztdieS eitenk etteau f grundd esd arinen t-
d
f
a
e
sg
rn t
-K
lie
oh
gt
l en
;sob
stof
leib
atomg
td ieB
ebund
eh ind e
en ,d
run
asw
gau s.
eitervond erH aup tk etteen t- hal
sod
ten
as
enS
se ssi
chw ef
chume
elatom
in
se in
eR-undn
ehöh
i
e
ch
reP
tume
r
io
in
r
it
eS
äta
-K
l sd
oni
ieC
gu ra
a
t
rbon
ionh
ylgrupp
and e
lt.
e
, 7
15
.D iee rsteM utationz erstö rtd ieA ktivität,w eilV alin m eh rR aumb ean - 28
.ELV I SI SL IVINGINLA SVEGA S
sp ru ch ta lsA lan in;d asP r otein mu ssin fol ged e ssene in eand ereF orm 29
.Nein.P ro–Xb esitztd ie selbenE igensch at en w i ej edeand ereP eptid- 8
ann ehm en ,w enn m and avonau sg eht,d a ssd i eserR estine in erd ichtg e- bindun g
.D iesteris ch eB ehind erun gdu rchX–P r oen tsteh t
,w ei
ld i
eR -
pa ckt enUm gebun gli egt.D i ezw eiteM ut at
ions telltd i eA kti v
it ätw ied er Grupp evonP rom itd erAm ino grupp ev erbund eni st
.D esh a
lbb eind et
her,w ei
ls i ezue in e rkomp en sato risch en V e rrin ge run gd esV o
lum ens sichb eiX–P rod i eR -G rupp evonP roind erN äh ed erR -G rupp evonX . 9
füh rt
:G ly cin istk lein e ra lsI soleu cin. Dies is
tb eiP ro–Xn i chtd erF a
ll
.
16
.D ien at
i veK onfo rm ationd esIn su lin si stn i chtd i eth e rmod yn am isch 30
.A ,c ;B ,e;C ,d ;D ,a;E ,b
stab ilsteF orm ,d ad asM ole külau szw eie in zeln en,üb erD isu lidb rüc ken 31
.U rsach es indd ief als ch en D i
sulidp aare,d ies ichin G e g
enw artvon 10
ver knüpt enP eptid enb esteh t.T ats ächlichen tsteh tIn su linau sP r o
in su - Harn stofb ild en.E sg ibt1 05v e
rschied eneM öglichk eiten,a chtC ystein-
lin,e in ere ink ett
i genV o rstu fe,d ien achB ildun gd e rD isu lidb rü ckeng e- mole kül ezu rB i
ldun gvonv i erD i
sulidb rü c kenzuv e
rb ind en,ab e rnu r
sp altenw i rd,umIn sulinzue rz eu gen ,d a sau s5 1Am ino säu renb esteh t. eined ies erK om bin ation eni sten zym ati
schak ti v
.D ie1 04f a
lsch enP aa- 11
17
.E inA bschn ittd e rH aup tk et ted erP rote asek ann m itd erH aup tketted es run genwu rd enb ildh ata ls„ verworren eR ibonu cle ase“( scram bledr ibo-
Sub st ratsW asser stob rü c kenau sbild enundsoe inau s ge s
tr eckt esp ar a
l - nu c
le ase)b ezeichn et.
lele sod eran tip arallele sP a arvon b - S
t rän gene r zeu gen . 12
18
.G ly cinh atvona llenAm ino s äu rend i ek lein steS eitenk e t
te.D ieg erin ge
Größ ei s
totno tw end i g
,umP o
l yp ep t
idk ettene in een g eK eh reod ere in e
star keAnn äh erun gzue rmö glich en .
Kap
ite
l3 13
19
.G lu tam at,A sp artatundd i eend st änd i geC arbo xyl atg rupp ekönn enS alz-
brü c ken m itd erGu anid inium grupp ed esA rgin in sb ild en .D arüb erh in-
au sk annd i eseG rupp ea lsDon ato re in erW asse rstob rü ckezud enS ei- 1
.a )Ph
duk t
en
ion
y
;c
liso
)Ch
thio
ymo
cy
t
an
r
a
yp
t
;b
sin
)H
;d
arn
)CNB
stof
r
;
;e
b -M
)T r
er
yp
c
s
ap
in
toeth anolzu rD isulid re- 14
tenk ettenvonG lu tam in,A sp ara gin,S erin,h reon in ,A spart a
t,T yr osin,
Glut am atundd enC arbon y
l grupp end erH aup tk ettefun gier en.H istidin 2
.J ed erAm ino säurer e
st,auß erd emc arbo xyte rmin alen,re agiertm i
tH yd-
kann m itA r g
in inb eipH7 W as sers tob rü c kenau sb ild en . ra
no
zinzue
säu re id
in
en
emH
tiizi
yd
ert
.
razid.D erR estamC arbo x y
lend ew irda lsf reieAm i- 15
20
.D i sulidb rü cken imH a arw erd endu r chZu gab ee in esh iolsundm äß ige
Erw ärmun gau fg eb ro ch en.D asH aa rk räu s e
lts i chundk anndu rchZu- 3
.D ieS -Am ino eth y
l cystein- Seitenk etteähn el
td e
rd esL ysins.D erein z
i ge
gab ee ine sO x
id ation sm ittel szu rA usbildun gn eu erD i sulidb rü ckenin Un
g
t e
rupp
rsch
e.
iedb e
steh tine in emS chw efelatoman stellee in erM eth y
len- 16
derg ewün sch tenF orms t abilisie rtw erd en.
21
.E in ig eP r otein e
,d ieb io lo gis ch eM em bran endu r ch sp ann en,b ild en„d ie 4
. E ineLö sun gm it1 m g m l–
1
Myo globin( 1 7
, 8
 kd,T abell
e3 .2
)b esi
tztein e
Ausn ahm e,d ied i eR e gelb est ät
i gt“,d as iee in eum ge keh rteV e rtei
lun g M
1
 
olar
cmb
it ä
e
tvon5
tr ägt0
,
,
6
8
2×1
4,w a
0–5 M
se in emI
.D i
/
eE
I-V
x
e
tink
rh ä
l
t
tn
ionb
i
e
svon6
iein
, 9
erS
6ent
chi
sp
ch
ri
td
cht
ic
;e
kevon
sw er-
17
derh yd rophob enundh yd r oph i
l enAm ino s äu renau fw eisen.B et rach ten 0

Sieb eisp ielsw e


is ed ieP o rin e,d i eb eiv i elenB ak teri enind eräuß e ren dena lso1 4, 4Pr ozentd esein fallend enL ich tesdu rch gel
as sen.
Mem b ranvo r komm en.M em bran enb esteh eng röß t en teilsau sh yd ro- 5
. D
K
i
on
eP
z
r
ent
ob
r a
e wu
tiond
rd e10
aher0
0
,0
0-
0
f
1
achv
 Mod
erdünn
er1  mM
t
.N
.S
a
i
chd e
ekönn
rD i
end
al
i
yseb
eS a
lz
eträ
kon
gtd
zen
ie
t-
18
phob enK ett en.D esh albs indd i eP o
rin eanih re rA uß en seitezue in em
gr oß enT eilvonh yd rophob enR est enb ed ec kt,d iem itd enb en ach ba rten ration inIh rerP rob evon jet zt1 mMdu r che inew e
itereD ialyseine inem
hyd r ophob enK ett enin W ech selw i rkun gt reten .ImG e gen satzd azuen t-
6
Puf
. W
e rohn
ennd ieS
e(NH4)
alzkon
2SO
zent
4 n
r at
ochs t
ionzuho
är kerv e
rdünn
ch w ird,in
en
.
ter agier
end i eS alz
ion en
19
hältd asInn ered esP rotein sv i eleg elad en eundpo lar eAm ino säu ren.S ie
um geb ene in en m itW asse rg efü l
lt enK an al
,d erdu r chd i eM it
ted esP ro- mitd en W a s
s e
rmo lekül en.S chließli chg ibte sn ichtm ehrg enü g
end
tein sv er
l äut .D aP orin e ih reFunk tion ine in erh yd rophob enUm gebun g W
d
a
a
ss
sP
e rmo
r ote
le
inf
kül
ä
e
,d
l
l
i
tau
em
s.W
itd emP
enns i
r ot
chine
einin W
in erP
e
r
ch
ot
s
e
e
in
lw

irkun
sun
gt
gzu w
reten
en
,und
igS alz
20
erfü l
l en,s inds ieim V er gleich m itP rotein en ,d iein w ässrige rLö sun g
funk tion ier en,„ von inn enn achauß eng estü lpt “
. beind e
t,in teragierend ieP r o
tein em itein and er–d iepo si
tivenL adun-
22
.D ieAm ino säu renw e rd enh ydr ophobs ein .E in ea -H el
i xi stb esond ers g
m
enau
eh rer
fd eme
enand
in
er
enP
en.E
r ot
inso
ein m
lch e
itd
rK
enn
omp
e
l
g
e
at
xw
i v
i
enL
rdd
adun g
annzug
enau
r
fe

in emod
,umno ch
e
r 21
dafü rg eei gn et,e in eM em b ranzudu rch sp ann en ,d aa ll e Am idw asser-
stof -undC arbon ylsau er stof a
tom ed esP eptid rü c kg rat san W ass erstof - vons ichau sin W a sserg elö stzub leib en.W enn m anS a
lzd azu gibt
,w e r-
brü c ken inn erh albd esP ep tid sb et ei
l igtsind ,sod assd ies epo l arenA tom e dend
zw isch
ieL
end
adun
enP
g
r
enau
otein
fd
enw
enP
e rd
r o
t
env
ein
e
enn
rhind
eu
er
t
t
r
.
a
lis
iert,W ech selw irkun gen 22
ine in erh yd rophob enUm gebun gs tabilisiertw erd en .
23
.D i ese sB eisp ielz ei gt
,d assd erp KS-W ertdu rchd ieUm gebun gb eeinlu sst 7
. T ropom yosin is
ts tabfö rm i g
,w äh rendH ämo globinf astku gel
fö rmig ist
.
wird.E in eb estimm teAm ino säu rek annabh än gigvond erch em isch en 8
. D
t
e
ion
rR
s
e
ko
ibun
ei zi
gs
en
ko
t
ei
ens
z
.G
ientfundd
en au e rge
i
s
eM
agti
a
s
s
s
t
em b
fp r
e
opo
s
t
r
imm
tion a
end enS
lzur(G
ed
lei
imen
chun
ta
g2
- 36
Um gebun gimInn erend e sP ro tein se in e An zah lv e rsch ied en erpKS-
Wert eann ehm en. aufS .7 2).D emn achi s
tfp r oportion alzu m1/3 und sp ropo rtion alzu m2/3
10
78 Anhang

(G le
i chun g au f
S. 77). Ein ku gel
fö rm i ges 80 -kd -Pr otein sed im enti ert
21
.DieB eh and lun gm itH a rn stoft renn tn ich tko valent eB indun g en.D es-
1
, 59-m al
s chn e
ller als e
in ku gelfö rm i ge s
4 0- kd -Pr ote
in . halb mu ss das ursprün glich e Pr ote
in mi
t 60 kd au s
zw ei Un te
r einh e
iten
9.
D er l ange h yd rophob e Schw an z am SD S-M ol ekül (S. 74) zer s
tört die zu je 3 0
 kd b estehen . W enn di ese Un ter e
inh eiten mi
t Ha rn s
tof und β-
hydr ophob en W e ch selw ir kun g enimInn erend esP r oteins.D asP rot ein Merc ap to eth ano lb eh and eltw erd en,e rh äl
tm ane inee in zigeM olekül-
entfaltets ich, wob eid ieh ydr ophob en R -G rupp enj et ztm itSD Sund sp ezie s mit 1 5
 kd . Da s d eu tet auf D
isu lidb rü c ken in d en 30- kd-Un t e
r-
nichtm eh rm ite
in and erin W e ch selw i rkun gt reten. einh eit enh in.
10. 50 kd .a
22 )D iee le k
t rost a
tisch eA bstoßun gzw isch enpo s
itivg elad enen e -Am i
-
11.DasP roteini st mö gli ch erw eise mod ii ziert.Sokönn enb eispi e
lsw eis e no grupp env erh ind ertd i eB i
ldun ge in erα -H elix bei pH 7. B e
i pH 10
Serin,h er oninod erT yr osine in ePho sph at grupp etr ag en
. werd end ieS ei
t enk ettend ep r otonie r
tundd ieB ildun ge in erα -H el
ixi s
t
12.Ein luo res zen zm arki erte sD e r
i vate in esb ak teriel
l en A bb aup roduk ts mö gl
i ch .
(zumB e
isp iele in esF orm ylm ethion ylp ep t
id s)wü rd eanZ ellenb ind en , b)P o
l y-l -G lutam at lie gt bei pH 7 als Zu falls kn äuel vo r und wird un-
died eng esu chtenR e zep torb esitzen . terh alb von pH 4,5 α-he lik al,w e
ild i eγ -C arbo xylatg rupp enp roton ier
t
13.a)T r ypsinsp al
t etn a ch A r g
in in(R )undL ysin(K );d abeien tsteh en werd en .
AVGWR ,VKundS .D as ies ichind erG r öß eun tersch eid en,k ann m an 23
.Der Un ters chiedzw is ch end e rvo rh er ges agtenunde rm itte
lten M a
s se
dieseP roduk t edu r chG eliltrationaut renn en. bei dies em F ragm ent b etr ägt 28,0. D as en tsp rich t gen au der Massen-
b)Ch ym otr yp s
in ,d a sn ach g roß en a l
iph atisch en od era rom ati- vers chi ebun g,d iem anb eie in emfo rm yliert enP ept
ide rw ar
t enwü rd e
.
sch enR -G rupp ens chn eidet,e rzeu gtzw e
iP ep tid em itg leich erG r öß e Diese sP eptid i
stw ah rs ch ein lichans ein emAm ino tem inu sfo rm y
liert.
(AVGWundRVK S).E in eT rennun gau fgrundd erG röß ew äreh ierw e- 24
.DieS yn th esed i eserP ep tid ewu rd edu rchd ieV e rw endun gvonL ichtg e-
nige rf o
lgr eich .D asP ep tidRVK Sen th ältj edo chzw e
ipo sitiv eL adun- steu ert.J ed ed erzu rf est en M atr
ixzu g egeb en enAm ino säu renen thiel
t
gen(RundK ),w äh rendd asand ereP eptidn eutr a
li st.D esh albl ass en and erα -Am ino grupp ean stattd ert -BOC -S chu tzg rupp e ein e du rch
sichd ieb eid enP r odu ktem ith ilfee in erI on en au s
t au schch r om ato gr a- Lichtab sp altb areS chu tz grupp e
.D ieB el
i chtun gb estimm te
rB ereiche
phiet renn en . derf e stenUn terlagefüh rtezu rF reiset zun gd erS chu tz grupp e,wodu rch
14.Antikö rp e
rmo lekül e,d i eane in enf estenT räg erg ebund ens ind ,e ign en and i esenS tellend ie Am ino grupp enr eakti vg em acht wu rden .D am i
t
sich fü r
die Ain itätsr eini gun g von Pr otein en, für die kein L
i gand enmo- bestimm end iefü rdi eB elich tun gein g esetzt enS ch ablon enundd ieR e
i-
lekü lb ekann tistod erzu rV e
r fü gun gs teh t
. hen fol ged erR e agen ziend iel et z
tlichen tsteh end enP r oduk teundd eren
15.Wennd asP r oduk td eren zym at
i schk atal ys
i ert enR eak tiona lss tark es Position ierun g.
Antig enw ir kt,iste sv i elleich t mö glich ,An tikö rp erg e gend iese ssp ezii- 25
.DieM ass en sp ektr om etri ei ste inho ch empind lich e sV erf ah ren,m itdem
sch eM olekü lzue r zeu gen.M ith ilfed i eserAn tikö rper lä ss
ts ichd annd as sich M ass enun terschi ed ezw isch ene in emP rot einunds e
in emD euteri
-
Vorh and ens eind esP r oduk tsdu rche in enEL I SAn achw eisen.M ithilf e umd e r
i v atf eststellenl ässt.M ithilfevonF r agm en tierun gsm ethod eni st
der An t
ikö rp erl äs sts iche in A ss ayfü rd ieA ufreini gun gd esP rotein s esmö gli ch,d ieAm ino säu r enzu id entii zier en,d ied ieI sotopm ar k
i e
run g
etablieren. enth alt en.A ltern ativk ann m anau chdu rchNMR -Sp e k
t ro kop ied ieiso-
16.Möglich erw eis ew are inInh ibito rd esg er e
in ig tenEn zym svo rhand en , top isch en A tom eb estimm en,d ad erD eu teriumk ernundd a sP roton
derind erF ol gedu rche in enR e
in i gun gssch ritten tfern twu rd e.Sok ann seh run t ersch iedlich eSp in e
i gen sch at enb esit zen.
eszue in ers ch ein b arenZun ahm ed e rin s gesam tvo rh and en enEn z ym - .E
26 rsteAm ino säu re
:A
men gekomm en. Letzt eAm ino säu re
:R( kein eSp a
ltun gdu rchd ieC a
rbo xyp eptid a
s e)
17.V
i e
leP rotein eh ab enähn lich eM a ssen ,w eis enab erun t er
s ch i
edli ch e Sequ en zd esN -
t erm in al ent r yptisch enP ep tid s
: AVR(d ast ryptische
Sequ en zenau funde rz eu gensob eiSp al
tun gm itT r ypsinun terschi ed - Pep t
idend eth i erm i
tR )
licheF ra gm en tmu st er.D ieK om bin a
tiond erM ass end ert ryptisch en S equ en z de s N-term in al en ch ymo tr yptisch en Fr agm en ts: AVRY ( e
in
Fragm enteb i
ld ete in eng en au en„F in g erabd ru ck“e in esP r oteins,d ae s ch ymo t ryp t
i sch es Fra gm en t end e
t mit Y)
sehrunw ah rsch einli chi st
,d as se inso lch esM usterine inemand e ren Sequ en z:
AVRY SR
Proteinaut ri
t t
,s elb stw enn m and ieG röß eauß erA cht lässt.E inen ach- 27
.ErsteAm ino säu re
:S
vollzieh bareAn alo giel autet:G en au sow i eF in g e
rvond erse
lb enG röß e Zw eiteAm ino s äure:L
unter schiedli cheF in g erabd rü ck eli efern ,z eig eng lei chg roß eP rotein e Sp al
tun gdu rchB r om c y an:M istand e rz ehn tenP osition
unter schiedli cheSp a
ltun g smu sterm itT ryp sin. Carbo x yterm in aleR est e:( 2 S,L ,W )
18.Isoleu cinundL eu cins indI som ereundb esitz end esh albd ies e
lb eM a sse. Am ino t erm in ale Reste: (G , K, S
,
Y)
, tr yp t
is ch es Peptid, end et m
it K
Durche ineP ep t
id sequ en zierun gm ith ilfed erM assen sp e k
trom etrie,w i e Am ino t erm in ale Sequ en z
: SYGK
sieind iesemK ap itelb esch rieb enwu rd e
,s indd ieseR esten ichtzuun t er- Reih en fol ged erch ymo tr yp t
i sch enP eptid e:
sch e
id en.D a
fü rs indw e
it erean alytis ch eV erfah renno tw end ig. ( S
, Y), (G ,
K, L), (F,
I, S),
(M , T), (S, W), ( S
,
L)
19.Betra chtenS iedi eun t ens teh end eT ab elle
. S equ en z:
SYGKL SIFTM SW SL
20.DieB ildun gvonP r oteink r
istallene rfo rd ertd i eg eordn eteZu samm en- 28
.Wennd a sP roteink ein eD i sulidb rü ck enen th ält,i stdi ee le ktropho re
ti-
lage run gvong lei chpo sition ie r
t en M o
l ekül en .P ro teinem itl ex
ib l en sch eM obilitätd e sT r yp sinf ra gm entsvo rundn achd erB ehand lun gm i
t
Verbindun gs s
tü c kenkönn end ie seA s so z
i at
ions törenundd ieB i
ldun g Peram eisen säu reg leich :A lleF r agm en tel iegenen tlan gd erP api e
rd iago-
geeign eterK ristallev erh ind ern .E inL igandod erB indun gsp artnerk ann nale.W enne in eD isu lidb rü ckevo rh and eni st
,e rsch ein end iedu rchd ie
einemso lch en V erbindun gsstü cke in eg eordn eteK on fo rm ationv erl ei- Disulidb rü ck ezu samm en g eh altenenF ra gm en teind ere rstenL au fr
ich-
henundkönn ted annd e rLö sun gzu ge setztw erden,umd i eK ri
stallbil- tun ga lse in zigerF l ec k
,n a chd erB eh and lun gm itP er am eisen säurej e
-
dun gzue rleich tern . do cha l szw eiF le cke.D adu r chs indauß erhalbd erD iagon alezw eiF lecke
zus eh en .

Re
inigung
sve
rfah
ren Ge
samtp
rote
in Ge
samtak
tiv
itä
t spe
ziis
cheAk t
ivi
tät Re
inhe
itsg
rad Au
sbeu
te
(mg) (Un
its
) (Un
its mg
–1
) (%)

Rohe
xtr
akt 20000 4000
 000  200 1 100

Ammon
ium
sul
fat
fäl
lung 5000 3000
 000  600 3 75

DEAE
-Ce
l
lulo
se-Ch
rom
atog
raph
ie 1500 1000
 000  667 3
,3 25

Mo
leku
lar
sieb  500  750
000 1500 7
,5 19

Ain
itä
tsch
rom
atog
raph
ie  45  675
000 15000 75 17
A
:Lö
sungenzudenAu
fgaben 10
79

ke
ineDisu
lf
idbrü
cken e
ineD
isu
lf
idb
rückevo
rhanden .
14 5
, 88 × 103
Bas enp aa re

e
r
vo
s
rhanden
teDimen s
ion e
rsteDimen s
ion
15
.B
H
e
ä
ie
lt
in
ed
e
e
rkon
rM o
s
le
er

v
l
a
ti
ed
v
i
enR
eM
ep
ark
l
ik
ie
a
t
run
ion wü
g15N
rd
-15N
en
,d
a
i
che
eand
in
e
e
r
rG
eH
en
ä
lt
er
ed
at
iond
ieM a
ie
r-
1
de
rE lek
tropho
rese de
rE lek
tropho
rese kierun g14N -14Nt rag en.N achzw eiG en eration ene rg äb es ichfü re in

lung m
E
2

lek
Viert e
ld erM ole küle15N -15N ,fü rd ieand erend reiV i ertel 14N -14N .M o-

t
le kül em itH yb ridm ar kie run g( 1
N-5N
4 1
)w är enb eie in e rkon s er vativen

ropho
Rep lik at
ionn ich tzub eob a chten .

itPe
16
.a)T ritiumm ar kiertesh ym inod erh ym idin 3

re
rame
b)dATP ,dGTP ,dCTPundTTP m itein e r32P -M ar kie run gam inn e rs
t en

sena
(α- )Pho spho ratom
4

i
17
.DieM o
l ekü leaundbfüh r enn ichtzue in e r DNA -S yn th e
s e,d aihn en

sen
chBehand
R CH2 SO3–
ein e fr e
i e
3ʹ-OH -G rupp e (ein P r
im e r) f ehlt. Mol ekü l d b es
itz t ein freies

säu
R CH2 SO3– 3ʹ-OH an e
in em End e jed es Str ang es
, ab e r d an ach k einen Matriz en-
5

re
stran g.N urb eick anne se in eDNA -S ynth e seg eb en.
18
.EinR etr ovirusi stein V i ru sm itRNAa lsg en etis ch esM a
t erial.D am it

-
dieIn form atione xp rim i ertw ird, mu ssj edo chd i eRNAzu e rstinDNA
D
l
i
e
i
e
s
r
eFragm
tunddu
en
r
tekönn
ch Mas
s
t
end
enspe
annau
k
trome
t
sd
ri
em Ch
ean a
ly
r
s
i
om
er
tw
a
to
e
g
rd
r
aph
en
iepap
,umih
ie
r
ri
eAm
so-
i
-
um
tas
gew
ek a
and
taly
e
l
s
i
tw
ert
e
.D
rd en
emn
;d i
a
es
chv
eR
e
e
rl
aktionw
äutd e
irddu
rIn fo
r
rm
chd
at
i
ion
eR e
slu
v
s
e r
s eT
szum
r an
ind
s
e
k
s
rip-
tzu
6
nosäu
rezus
amm ens
etzungzubes
timm enundsodieCyste
inezue rmi
t- Be ginnind eren tge gen g ese tz
t enR ichtun gw ieine in erno rm alenZ el
l e
:
te
ln,dieanderDi
sulidbrü
ckebe
tei
lig
tsind
.
19
RNA DNAundn
.AlsP rim erso l
lt ee
i
in h
chtDNA
ym id ylatoli
RNA
gonu
.
cleo tidv e rw end etw erd en .E in e
7
Poly (A )-M atrizefüh rtzumsp e ziisch enE in bauvonT ;d ah e rso lltein
Kap
ite
l4 d
g
ies
rupp
em V
e)e
e
in
rsu
g e
s
chr
et z
tw
adio
erd
ak
en
ti
.
v e
s TTP(m ar kiertan d er α-Pho spho ryl
- 8
.D
20 ieR ibonu c
le ased i entzumA bb aud esRNA - Str an g es
;d i e
si ste inno t-
1.E in N
knüpti
u cl
s
eo
t.E
sidb
in N
est
u
eh
cl
tau
eot
se
idi
in
ste
erB
in N
ase,d
ucl
iem
eo s
id
i
te
,b
in
eid
emR
eme
ibo
in
s ezu
eod
ck
e
erv
rm
e
r-
eh r
wend igerS ch rittzu rB ildun ge in er DNA -Dopp e
lh eli xau sd emRNA - 9
DNA -H yb rid.
Pho sph at grupp enand erR ibo seb ef es
ti gtsind . 21
.Manb eh and elte inA liquo td e
rP r obem itR ibonu cle ase,d a
sand erem it
2.D
d
i
e
eP
rB
a
a
as
run
eCüb
gzw
e
i
rW
sch
a
end
ss er
e
s
rB
tob
aseAundd
rü cken ind
e
e
rB
rDNA
aseTod
.
e rd erB aseGund Deso xyribonu cl easeundun tersu chtd iein fe k
tiö s eW irkun gd iese rnu c- 10
lea seb eh and e
lt enP r ob en.
3.
[T ]
i s
t imm e r
gleich [A ], sod ass
die se beid en Molekü le 4 0 Pr o
z ent aller 22
.Des am in ierun gv eränd ertd asu rsp rün glich e GC -B as enp aarzue in em
B
P
a
r
s
o
en
z en
au
t
sm
zu j
a ch
ew e
en
i
.
l
s

3
[G
0
]
P

r
i
o
st
z
imm
en t au
er
f


g
G
leich
und
[C
C v
],

e
sod
rte
il
as
en
s
.
sich d
i e üb r
ig en 6 0 GU -P aar
.N ache inerR ep lik at
ion s rund ew irdd i ee in eT o chterdopp elh e- 11
lixe inGC -P aaren th a
lt en,d ieand eree inAU -P a ar.N a chzw eiR eplikati
-
4.Ni chts,d ad ieR e g
elnd erB a senp aarun gn i chtau fe inz e
l st
r än gigeN ucle- on srund ens indzw eiGC -P a a
r e
,e inAU -unde inAT -P a arvo rh and en .

5.a
ins äurenzu
)TTGATC
tr
;b
ef en.
)GTTCGA ;c )ACGCGT ;d )ATGGTA
23
. a)
4 8
= 6 5
536. In d er Compu t e
rt e
rm ino lo gie ent sp r
i ch t dies 6 4 K an 12
DNA -O ktam eren .
6.
a )
[T ]
+ [C ] = 0, 4
6; b) [T ]
= 0, 30;
[C ] = 0, 24
und [A ] + [G ] = 0,4 6 b)E inB itsp ezii z
ie rtzw eiB asen( e
tw aAundC ),einzw eitesd i eb eid en
7.S
P
t
a
ab
ar
ileW
en
.D
a
a
ss
rüb
ers
e
tob
rh in

au
c k
ss
enb
indzw
ild ens
eiPu
ichnu
rin
rinn
ezug r
e

rha
,um
lbvonGC
ine in
-undAT
eDopp elhe-
- and eren( alsoGundT ).Fü rd i eF estle gun ge in ese in zeln en N u cleotids 13
(od erB as enp aa res)b enö ti gtm ana lsozw eiB it.Sokönn t enb ei
sp iels
-
lixh in einzup assen ,undzw eiP yrim idin es indzuk lein,ume inB asen- weis e 00, 0 1
,
1 0 und 1 1 A, C, G und T cod ier en. E
in Ok tam er sp eich er
t

8.D
pa
i
arzub
eth erm
ild
is
en
ch
.
eEn er giefüh rtd azu,d asss ichd ieSträn geg e genein and er
16B it( 2 1
6
=6 55 36)
,d asG enomvonE .c oli ( 4,6
× 1 06
bp ) 9,2 × 106
Bi
t, 14
das men sch liche Genom (3, 0
× 109

bp ) 6,0
× 1 09
Bitang enetis ch erIn for
-
bew e gen,sod assd ieW asser stob rü c kenzw is chend enB asenp aarenund mation .
d
t
i
r
eS
enn
tap
en
e
.
lkr ät ezw i sch end enB aseng elö stw erdenunds i chd ieStr äng e c )
E in e no rm a
l e CD k ann etw a 7 00 Me gab yte sp e
i ch ern , was 5, 6 × 1 09
15
Biten tsprich t.A ufso lche in erCDl ässtsi che in eg r oß eAn z ahlvon8 er-
9.D ieW ah r sch einlichk ei
t,d as se in eb estimm teS equ en zvo r komm t
,b e- Sequ en zensp ei chern .D i eDNA - Sequ en zvonE .c oli könn t
em anau fd ie
-
t
i
r
s
ä
t
g
.D
t 4
i
n
,
eW
wob
ah
ei
rs
4
ch
d
i
e
e
in
An
li
zah
chk e
l
it
d
,d
er
a
N
s
u
se
cl
in
eot
eb
id
e
e
st
und
imm t
nd
eS
i eL
equ
än
en
ged
zvon1
erS equ
5B a
en
s
z
en
serCDsp eich e rnundh ät teno chv ielP l atzfü rM usik .A bere in ee in z
i g
e 16
CDwü rd en ichtau sreich en ,umd asg es am t em en s chli ch eG enomau fzu-
vor komm t, ist
1/ 415

od er 1/ 1
0 73 74 1
8 24. Demn ach komm t e
in e Sequ en z nehm en.
von
kei

td
15
e

sV
N uc
l
or
eotid
komm
en
en
e
s
tw
).D
a
i
d r
eW
eim
ah
a
l
r
s
vo
ch
r
e

in
(3
l

i
Mil
l
chk
i
e
a
rd
i
en
tfü rd
×
a
W
ah
sA
rs
ut
ch
re
e
t
inl
ene
ich-
in er
24
.a)D e so xyribonu c
leo sidt ripho sph ateg e genüb erR ibonu cleo sidtripho- 17
ph aten
Sequ en z
von 16
Bas en ist
1/ 4 1
6
oder 1/4 29 4
  96 7
2 96
. Ein e sol che Sequ en z b)5 ʹ 3 ʹ(b eib eid en )

10
komm
.Ane in
tw
emEnd
ah rsch
ed
ein
e
l
sN
i chn
ucle
ich
in s
tm
äu r
ehra
epol
lse
ym e
inm
rsb
alvo
eind
r.
e
tsi che in efr e
i e5ʹ-H y-
c)S em ikon s erv at
ivb eid er DNA -P olym eras eI ,kon s erv at
i vb eid er 18
RNA -P o
l ym e ras e
dro xylgrupp e(od ere in ePho sph at grupp e
,d iem i
td erH yd r oxylgrupp e d)D i e DNA -P olym eras eIb rau chte in enP r im e r
,d ieRNA -P olym eras e
v
b
e
e
re
id
sterti
enEnd
st),amand
enun te rs
e
ch
renEnd
eid ens
es
i
t
cha
eh
l
te
so
in
.Zw
ef
e
reie3
i DNA
ʹ-H
-S
yd
tr
r
än
ox
g
ylgrupp
ekönn
e.D
ennu
ie
r
da ge genn icht. 19
.M
25 ess en ger-RNAcod i ertd i eIn fo rm ation ,d i eüb erd ieT r anslationzum
danne in e Dopp e
lh elixb ild en ,w ennd i eS trän geg e gen läui go r
ien tiert Prot einfüh r
t.R ibo som al eRNAi ste ink at a
l ytis ch erB es tand teild erR i-

11
s
.D
ind–d
iee inz
a
e
sh
ln
eiß
enB
t,w enns
indun g
i
ens
ee in een
indzw
t
a
g
rs
egen
chw
ges
a
e
ch
tzt
,ab
eP
e
ol
rd
ar
i
it
eG
ä
tb
es
es
am
it
z
th
en
.
e
itvon
bosom en ,d e r mo l ekul ar en K omp l
e xe,d ied ieP rotein es yn th etisieren. 20
Tran sfe r
-RNAi ste inAd apt ermo l ekül,d ase in esp ezii sch eAm ino säu re
Taus end enb isM il
lion enso lch erB indun gen füh rtzue in e
rg roß enS tabi- bind enk annunde inzu gehö ri gesCodone rk enn t.T r an sfer-RNA sm i
t

12
l
.D
i
i

t
eA
.D
bs
ieS t
toßun
ärk
gd
eli
e
eg
rn
th
eg
ie
a
t
r
i
ind
vg e
l
erg
ad
r
en
oßenZ
enPho
ahlb
sph a
e
t
g
g
ründ
rupp
et
.
enw ä
r ezus tark.
dar anb efe st
i g
t erAm ino s äu resindSub s
t rat efü rd asR ibo som . 21
26
.a )5 ʹ-UAACGGUACGAU - 3ʹ
Umd ies enL adun genen tge g enzuw irk en,s indK a
tion ene rford erl
ich . b)L eu–P ro– Se r–A sp–T rp–M et
13.D
h
ied
äui
re
g
s
iF
t
o
en
rm
vo
ens
r
indA
komm t.
-DNA
Es be
,B
steh
-DNAundZ
en z ahlr e
i ch
-DNA
e
Un t
,wob
ersch i
ed
e
iB
e
-DNAam
(Tab. 4.2).
c)P o
l y(L eu–L eu–h r –T yr) 22
27
. Di e
2 ʹ-OH -G rupp e d er RNA w irkt a ls in tr amo le ku la r
e nu cleoph ile
Einig een tsch e
id end e Un te rschied es ind :A -DNA und B -DNAs ind Stelle.B eid e ra lkalisch en H ydr olysed erRNAw irde in2 ʹ-3ʹ- zyk l
is ches
r
e
ech
ine
ts
rg
gän
er
g
in
i
g
g
e
,Z
r
-DNAi
enH yd ra
s
t
i
th
si
in
erun
gegenl
galsB
ink s
-DNA
gän g
.D
i g
.A
ieA
-DNAb
-F ormi
i
s
ld
tkü
e
ts
r
i
z
chb
erund
ei Zw isch enp roduk tg ebild et. 36
breitera lsd i eB -F orm .