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Partes del m.o.:
Parte mecánica:
Pie.
Brazo.
Pletina y subpletina.
Tornillos de ajuste macrométrico y micrométrico.
Tubo del ocular.
Revolver.
Fuente luminosa.
Parte óptica:
Condensador.
Lentes objetivo.
Lentes oculares.
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CARACTERISTICAS DE LOS OBJETIVOS:
PODER DE RESOLUCIÓN: es la capacidad de mostrar la
imagen en sus detalles más finos. Distancia necesaria para que
dos objetos aparezcan a nuestra vista como separados. 0,2
micras en los mejores microscopios.
PODER DE PENETRACIÓN: es la propiedad de permitir la
observación simultánea de varios planos del preparado.
AUMENTO TOTAL: Debemos notar que el ocular también
tiene un aumento, por lo tanto el aumento total de la imagen
que observamos es el producto entre el aumento del objetivo y
el del ocular.
Ejemplo: si tenemos colocado el objetivo cuya escala de
reproducción es 40:1 y nuestro ocular tiene un aumento de 10x,
entonces el aumento total será 40 x 10 = 400.
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Tipos de m.o.:
M. de campo claro es el utilizado habitualmente.
M. de contraste de fases permite observar muestras in vivo o
que no se pueden teñir.
M. confocales de barrido combina partes de un microscopio de
campo claro con equipo fluorescente y un sistema de barrido que
emplea un rayo láser. A través de una computadora se
reconstruye la imagen tomada por planos, a una imagen
tridimensional.
M. de luz polarizada es una modificación del microscopio de
campo claro. Debido al fenómeno de birrefringencia se pueden
observar sustancias cristalinas y moléculas fibrosas.
M. de fluorescencia permite la observación de estructuras
fluorescentes, ya sea naturales o artificiales.
M. de luz ultravioleta sus resultados se registran
fotográficamente ya que la luz U.V. no es visible y daña la retina.
Se utiliza en la detección de ácidos nucleicos, que absorben esta
luz.
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Características de los m.e.:
La m.e. ofrece un poder de resolución mucho mayor y permite ver las
estructuras con más aumentos.
Utiliza un haz de electrones, estos tienen una longitud de onda mucho
menor que la de la luz por lo que pueden mostrar estructuras mucho
más pequeñas.
4.000 ángstroms luz visible.
0,5 ángstroms electrones.
Se utilizan lentes magnéticas para crear campos que dirigen y enfocan
el haz de electrones.
Es necesario un sistema de vacío ya que los electrones pueden ser
desviados por las moléculas del aire.
Todos los microscopios electrónicos cuentan con un sistema que
registra o muestra la imagen que producen los electrones.
Tipos de m.e.:
M.e. de transmisión MET (Transmission Electron Microscope, TEM)
M.e. de barrido o Scaning MEB (Scanning Electron Microscope,
SEM)
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Permite la observación de muestra en cortes ultrafinos, de entre
20-100 nm. (ultramicrotomos).
Las muestras hay que impregnarlas con metales pesados (osmio,
sales de plomo y uranio) para que las imágenes sean más nítidas.
Un MET dirige el haz de electrones hacia el objeto que se desea
aumentar. Una parte de los electrones rebotan o son absorbidos
por el objeto y otros lo atraviesan formando una imagen
aumentada del espécimen.
Para utilizar un MET debe cortarse la muestra en capas finas, no
mayores de un par de miles de ángstroms.
Se coloca una placa fotográfica o una pantalla fluorescente detrás
del objeto para registrar la imagen aumentada.
Los MET pueden aumentar un objeto hasta un millón de veces.
Permite la observación de detalles a escala macromolecular.
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Crea una imagen ampliada de la superficie de un objeto.
No es necesario cortar el objeto en capas para observarlo, sino que
puede colocarse en el microscopio con muy pocos preparativos.
El MEB explora la superficie de la imagen punto por punto.
Su funcionamiento se basa en recorrer la muestra con un haz muy
concentrado de electrones, de forma parecida al barrido de un haz
de electrones por la pantalla de una televisión.
A medida que el haz de electrones barre la muestra, se presenta
toda la imagen de la misma en el monitor.
Los microscopios electrónicos de barrido pueden ampliar los objetos
200.000 veces o más.
Este tipo de microscopio es muy útil porque, al contrario que los
MET o los microscopios ópticos, produce imágenes tridimensionales
realistas de la superficie del objeto.
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Técnica especial que se utiliza en la M.E.B.
(especialmente en el estudio de las membranas
celulares).
La muestra se congela con nitrógeno líquido (-196
ºC)
Se fracciona con una cuchilla, rompiéndose la
muestra, se produce una fractura que se baña
(sombrea) con vapores de platino.
Se eliminan los restos de materia orgánica con
detergentes y se deja la impresión de platino
replica.
Por último se observa al MEB.
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MET MEB-criofractura
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M.E.T.
M.O.
M.E.B.
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La radioactividad es capaz de impresionar una placa fotográfica.
Becquerel descubrió este fenómeno en 1896.
Esta propiedad nos va a permitir tanto seguir el destino de un
compuesto radioactivo en el interior de un organismo como cuantificar,
ya que la intensidad de la impresión en la placa fotográfica es
proporcional a la cantidad de radioactividad presente en la muestra.
El procedimiento es el siguiente:
La muestra es tratada previamente, generalmente en vivo, con un isótopo
radiactivo.
Se coloca la muestra sobre una placa fotográfica protegida de la luz.
Se espera el tiempo suficiente para que la radioactividad emitida por la muestra
impresione la placa.
Se revela la placa fotográfica según los procedimientos normales
Se obtiene una placa impresionada
La intensidad de la impresión es proporcional a la cantidad de radioactividad
presente en la muestra.
La técnica se utiliza también en m.e.
Fue un método decisivo en los estudios de biología molecular del ADN y
las proteínas.
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Estas técnicas se utilizan para realizar el estudio de las células in
vivo.
El método comienza aislando células y obtener poblaciones
celulares homogéneas, que luego pueden ser incluso mantenidas y
multiplicadas in vitro, utilizando un medio adecuado (suero o
soluciones salinas).
Los cultivos celulares son esenciales en la investigación científica:
Permiten estudiar los procesos que ocurren en las células.
En aplicaciones de la biotecnología, como la producción de moléculas de
interés industrial, ingeniería de tejidos, etc.
Estudios de cariotipo humano.
Para observar protozoos, bacterias y otros m.o.
Se suelen utilizar células transformadas (cancerosas) para evitar que
las células sufran autolisis y mueran.
A los fibroblastos humanos se los puede forzar a proliferar
indefinidamente si se les provee el gen para la telomerasa;
propagándose como una línea celular “inmortalizada”.
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