INTRODUCCIÓN

Para el estudio de las sustancias se deben ocupar diversas técnicas, que han ido
evolucionando con el paso de los años. Una de las técnicas más básicas Esla
cromatografía, en sus múltiples variantes. Esta técnica se da desde siempre en la
naturaleza, como en lo que efectúan las piedras, que permiten purificar el agua.

La cromatografía como tal adquiere importancia cuando en 1850 el químico

F.F.Runge, que trabajaba con tintas, descubrió que los cationes orgánicos se
separaban por migración cuando se depositaba una disolución que los contenía
sobre un material poroso, como papel. El botánico ruso Mijaíl Tswett empleó por
primera vez en 1906 el término "cromatografía" (que proviene del griego χρομα y
γραφω que significan respectivamente chroma "color" y graphos "escribir").

Según la definición dada por Keulemans la cromatografía es un método de

separación en el que los componentes a desglosar se distribuyen entre dos fases,
una de las cuales constituye un lecho estacionario de amplio desarrollo superficial
y la otra es un fluido que pasa a través o a lo largo del lecho estacionario.
Recientemente la I.U.P.A.C define la cromatografía de forma más amplia como:
Método usado principalmente para la separación de los componentes de una
muestra, en el cual los componentes son distribuidos entre dos fases, una de las
cuales es estacionaria, mientras que la otra es móvil. La fase estacionaria puede
ser un sólido o un líquido soportado en un sólido o en un gel (matriz). La fase
estacionaria puede ser empaquetada en una columna, extendida en una capa,
distribuida como una película, etc.

Se basa en el principio de retención selectiva, cuyo objetivo es separar los

distintos componentes de una mezcla, permitiendo identificar y determinar las
cantidades de dichos componentes. Las retenciones mencionadas pueden tener
su origen en dos fenómenos de interacción que se dan entre las dos fases y que
pueden ser: La adsorción, que es la retención de una especie química por parte de
los puntos activos de la superficie de un sólido quedando delimitado

Se basa en el principio de retención selectiva, cuyo objetivo es separar los

distintos componentes de una mezcla, permitiendo identificar y determinar las
cantidades de dichos componentes. Las retenciones mencionadas pueden tener
su origen en dos fenómenos de interacción que se dan entre las dos fases y que
pueden ser:

1. La adsorción, que es la retención de una especie química por parte de los

puntos activos de la superficie de un sólido quedando delimitado el
fenómeno a la superficie que separa las fases o superficie interfacial.2.
 2. La absorción, que es la retención de una especie química por parte de una
masa, y debido a la tendencia que esta tiene a formar mezcla con la
primera, absorción pura, o a reaccionar químicamente con la misma,
absorción con reacción química, considerando ambas como un fenómeno
másico y no superficial.

La cromatografía puede cumplir dos funciones básicas, como son el de separar los
componentes de la mezcla, para así purificarlos, o para medir las proporciones de
los componentes.

Existen múltiples tipos de cromatografía, que se pueden separar en dos grandes

grupos:

a) Cromatografía plana. La fase estacionaria se sitúa sobre una placa plana o

sobre un papel. Las principales técnicas son: Cromatografía en papel,
Cromatografía en capa fina.
b) Cromatografía en columna. La fase estacionaria se sitúa dentro de una
columna. Según el fluido empleado como fase móvil se distinguen
:Cromatografía de líquidos, Cromatografía de gases, Cromatografía de
fluidos supercríticos.

Fernanda Fuente Alba, (30-Jun-2010), Cromatografía de intercambio iónico,

recuperado (28-ene-17) de https://es.scribd.com/doc/33726236/Informe-
Cromatografia-de-Intercambio-Ioni
Objetivos Generales.

 Investigar sobre la cromatografía de intercambio iónico, que no es más que

un método de separación de moléculas para un mejor análisis, sus usos e
importancia en las diferentes industria.

 Identificar los aspectos más importantes de su procedimiento.

OBJETIVOS ESPECÌFICOS

• Definir el concepto de cromatografía de intercambio iónico para una mejor

comprensión del tema.

• Explicar sus aplicaciones, formas de uso y procedimientos para llevar a cabo una
cromatografía.

• Dar a conocer a conocer ventajas y desventajas de en tipo de análisis.

Cromatografía de Intercambio Iónico

Historia:

1848 Way y Thompson: Reconocieron el fenómeno de intercambio iónico en

sólidos.

1876 Lemberg: Ilustró la reversibilidad y estequiometría del intercambio iónico en

minerales como el silicato de alumino

1935 Holmes y Adams: Sintetizó resinas orgánicas para intercambio iónico

1947 Boyd, Tompkins, Spedding, Rieman, y otros: Cromatografía de intercambio

iónico aplicada a varios problemas analíticos.

1956 Sober y Peterson: Prepararon las primeras celulosas para intercambio iónico

Fundamentos:

El principio básico de la cromatografía de intercambio iónico es que las moléculas

cargadas se adhieren a los intercambiadores de forma reversible de modo que
dichas moléculas pueden ser asociadas o disociadas cambiando el ambiente
iónico. La separación mediante intercambiadores iónicos se realiza por lo general,
en dos fases: en la primera las sustancias a separar se unen al intercambiador
utilizando condiciones que originan una unión fuerte y estable.

PROPIEDADES DE LOS INTERCAMBIADORES IÓNICOS

Un intercambiador iónico es, por lo general, un polímero que tiene grupos

cargados unidos. La mayoría de las proteínas son estables dentro de un margen
de pH determinado (es decir, hay un margen en el que no se desnaturalizan), en el
que están cargadas positiva o negativamente. Por lo tanto si una proteína es
estable a valores de pH por encima del punto isoeléctrico, se debe utilizar un
intercambiador anicónico. Si es estable a valores de pH situados por debajo del
punto isoeléctrico, debe utilizarse un intercambiador catonice.

Este tipo de cromatografía se subdivide a su vez en dos técnicas.

TIPOS DE CROMATOGRAFIA DE INTERCAMBIO IONICO.

 CROMATOGRAFIA DE INTERCAMBIO ANIONICO: La cromatografía de
intercambio aniónico desempeña un papel importante en la mayoría de
procesos de purificación de proteínas, ya que con este tipo de
cromatografía se pueden obtener medios con una alta pureza y alta
recuperaciones. retiene aniónes usando grupos funcionales cargados
positivamente, como un catión de amonio cuaternario. Son portadores de
grupos con cargas positivas que unen aniones de forma reversible. Si el
grupo cargado es positivo, es un intercambiador de aniones. Los
intercambiadores débilmente básicos más corrientes son los grupos aminos
alifáticos o aromáticos.

 CROMATOGRAFIA DE INTERCAMBIO CATIONICO: retiene catiónes

cargados positivamente debido a que la fase estacionaria muestra un grupo
funcional cargado negativamente, como podría ser un ácido fosfórico. Los
intercambiadores catónicos son portadores de grupos con carga negativa
que unen cationes de modo reversible. Un grupo típico que se utiliza en los
intercambiadores de cationes es el grupo sulfónico. Si se une un H+ al
grupo, se dice que el intercambiador se encuentra en forma ácida y puede,
por ejemplo, intercambiar un H+ por un Na+ o dos H+ por un Ca+2. El
grupo ácido sulfónico es un intercambiador de cationes fuertemente ácido.
Otros grupos de utilización corriente son el carbonilo e hidroxilo fenólico,
dos intercambiadores catiónicos débilmente ácidos.
Parte anterior 883 Basic IC plus

1 Cámara del detector Cámara para el detector. 2 Puerta Con conector Luer y
orificio de paso para capilares. 3 MSM Metrohm Suppressor Module. 4 Bomba de
alta presión 5 Soporte de columna Con reconocimiento por chip para IColumns. 6
Bomba peristáltica 7 Válvula de inyección 8 Amortiguador de pulsaciones 9
Válvula de purga.

Parte posterior 883 Basic IC plus

 1 Interruptor de encendido/apagado 2 Toma de conexión a la red 3 Toma de
conexión del ordenador 4 Toma de conexión del detector 5 Tornillos fjiadores de
transporte 6 Tornillos moleteados Para fijar el panel posterior desmontable. 7
Panel posterior Desmontable

FUNDAMENTO Y CLASIFICACION DE INTERCAMBIADORES IONICOS.

Intercambio iónico. Operación de separación basada en la transferencia de

materia fluido-sólido.Involucra la transferencia de uno o más iones de la fase fluida
al sólido por intercambio o desplazamiento de iones de la misma carga, que se
encuentran unidos por fuerzas electrostáticas a grupos funcionales superficiales.
La eficacia del proceso depende del equilibrio sólido-fluido y de la velocidad de
transferencia de materia. Los sólidos suelen ser de tipo polimérico, siendo los más
habituales los basados en resinas sintéticas.

CLASIFICACION DE INTERCAMBIADORES IONICOS:

Los intercambiadores de iones pueden ser:

 Intercambiadores de cationes, que intercambian iones cargados

positivamente (cationes).
 Intercambiadores de aniones que intercambian iones con carga negativa
(aniones).
 Anfóteros que son capaces de intercambiar cationes y aniones al mismo
tiempo.

El intercambio iónico puede explicarse como una reacción reversible implicando

cantidades químicamente equivalentes.

Ejemplo

Un ejemplo común del intercambio catiónico es la reacción para el ablandamiento

del agua:

 Ca++ + 2NaR ↔ CaR + 2Na+

Donde R representa un lugar estacionario aniónico univalente en la malla del

polielectrolito de la fase intercambiador.
Sustancias de Intercambio iónico

Las sustancias de intercambio iónico presentan determinada selectividad o

afinidad influenciada por las propiedades de las sustancia, los iones
intercambiados, la solución en la cual están presentes los iónes, la magnitud de la
carga y el tamaño de los iónes.
Las sustancias intercambiadores se clasifican en:

 Inorgánicos naturales(arcillas zeolitas) o sintéticos (carbónsulfonado).

 Orgánicos naturales (resinasnaturales) o sintéticos (resinas sintéticas)

Los intercambiadores de iones suelen contener resinas de intercambio

iónico (porosas o en forma de gel), zeolitas, montmorillonita, arcilla y humus del
suelo.

Características

Una resina de intercambio iónico puede considerarse como una estructura de

cadenas hidrocarbonadas a las que se encuentran unidos de forma rígida grupos
iónicos libres. Estas cadenas se encuentran unidas transversalmente formando
una matriz tridimensional que proporciona rigidez a la resina y donde el grado de
reticulación o entrecruzamiento determina la estructura porosa interna de la
misma. 
Como los iones deben difundirse en el interior de la resina para que ocurra el
intercambio, la selección del grado de reticulación puede limitar la movilidad de los
iones participantes.
Las cargas de los grupos iónicos inmóviles se equilibran con las de otros iones, de
signo opuesto, denominados contraiones, que están libres y que son los que se
intercambian realmente con los del electrolito disuelto. Cuando dichos iones
son cationes, los cambiadores iónicos se denominan catiónicos y cuando
sonaniones se denominan aniónicos.

Aplicaciones

El intercambio iónico es utilizado para diversos fines entre los que se destacan :

 Ablandamiento, separación de calcio y magnesio.

 Desmineralización
 Tratamiento de agua.Proceso muy utilizado en las fábricas textiles.

El intercambio iónico es utilizado ampliamente en la industrias de alimentos y

bebidas, hidrometalúrgica, acabado de metales, química y petroquímica,
farmacéutica, azúcar y edulcorantes, agua subterránea y potable, nuclear,
ablandamiento industrial del agua, semiconductores, energía, acabado textil.
FASES ESTACIONARIAS.

La fase estacionaria es una sustancia cambiadora de iones que, además, debe ser
insoluble. Se forma de grupos funcionales potencialmente ionizables o ionizados,
con su carga neutralizada por un contraión. La fase estacionaria se compone de
varias partes:

La matriz. Se trata de la red o compuesto que mantiene ligado los iones. Se

encuentra cargada, bien de forma positiva o negativa, dependiendo de nuestro
objetivo. Debido a esa carga se encuentra recubierta de iones, en el caso de la
figura de iones A+. Se introduce la matriz en un medio con partículas de la misma
naturaleza y, por tanto, mismo signo que aquellos que rodeaban la matriz (a estas
partículas de igual signo las llamaremos contraiones B+). En ese momento se
produce el proceso denominado cambio iónico, consistente en el intercambio entre
iones A+ y B+, que pasan a residir en la matriz, mientras que los primeros pasan a
disolución. Se trata de un proceso reversible que tiende a formar equilibrio, de
modo que el nº de iones que salen de la matriz es igual al nº de contraiones que
entra, o expresado de otra manera uno entras a expensas de que salga otro. Hay
varios tipos de matrices. Las de tipo inorgánico suelen ser tierras siliceas. Mientras
que las de tipo orgánico pueden ser polímeros o de síntesis, estas últimas las más
utilizadas.
Naturaleza de las resinas. Formación de un intercambiador, a los
intercambiadores se les denomina resinas, y por regla general se forman por
polimerización, de forma muy similar a lo que ocurría con la acrilamida. El
compuesto base es el vinilbenceno, el cual es a capaz de formar polímeros
lineales, de modo, que si añadimos para-divinilbenceno, obtenemos el agente
ramificante. Pero eso no es todo, ya que si nos damos cuenta ese polímero no
tiene carga, con lo que no puede intercambiar iones. Para cargar entonces la
resina, procedemos a añadir a la reacción moléculas de vinilbenceno que
presentan en posición para un grupo HSO3, lo que implica que queda fijo
covalentemente el anión mientras que el catión (H+) queda sólo atraído por carga
a la resina. Hay que recordar que los iones a intercambiar pueden ser catiónicos,
aniónicos; fuertes o débiles

FACTORES QUE AFECTAN LA CROMATOGRAFIA.

 Tiempo de retención (Tr): En la cromatografía de intercambio iónico la

retención está basada en la atracción entre iones del soluto y la carga
complementaria de la fase estacionaria. Los intercambiadores iónicos
favorecen la unión de iones de mayor carga y radio inferior. Cuando la
retención de los compuestos se ve afectada, se favorece la elusión de ellos
para ser recolectados en una serie de fracciones.

 pH: Las resinas ácidas fuertes siguen ionizadas incluso en disoluciones muy
ácidas, en cambio las resinas ácidas débiles se protonan a un pH próximo a 4
y pierden su capacidad de intercambio catiónico, reduciéndose así, el tiempo
 de retención. Los grupos muy básicos de amonio cuaternario siguen siendo
catiónicos a cualquier valor de pH. Los básicos débiles de amonio terciario se
desprotonan en disoluciones moderadamente básicas y pierden entonces su
capacidad, reduciéndose también el tiempo de retención.
 Cargas: La fuerza de enlace de la muestra depende de la magnitud de la
carga. La fuerza de retención es mayor y, por consiguiente la de elusión es
menor, mientras más cargado se encuentre el compuesto, ya sea negativa
(aniones) o positivamente (cationes).
 Gradiente: Aumentando la concentración de la fase móvil, los iones compiten
cada vez más favorablemente con la muestra por los sitios activos cargados de
la fase estacionaria.

Esquema del gradiente del Buffer con contraiones cargados negativamente. Se

presenta un gráfico con el poder de elusión (fuerza iónica) y el porcentaje de
proteína eluída, que muestra una gradiente directamente proporcional.

 Porosidad: El tamaño del poro de la resina al que se une el compuesto móvil

por intercambio iónico influye directamente en la capacidad de unión. En
membranas cuyo tamaño de poro es pequeño (menor de 600Å) no hay espacio
suficiente para unir el ión dentro de dichos poros por lo que la cantidad de
intercambiador por unidad de superficie es menor. Sin embargo, en
membranas con tamaño de poro mayor (mayor de 600Å) se puede unir el
compuesto móvil dentro de dichos poros, con lo que se incrementa la cantidad
de intercambiador por unidad de superficie. La porosidad busca una mayor
superficie de intercambio.

PROCEDIMIENTO

Esta técnica está basada en 4 etapas:

1- Equilibrio:

El primer paso es el equilibrio de la fase estacionaria con las condiciones iniciales

deseadas. Cuando el equilibrio se ha logrado, toda la fase estacionaria se
encuentra asociada a iones complementarios (que pueden ser cloro o sodio). Por
ejemplo, un intercambiador catiónico sulfonado asociado a Na+ producto de la
disociación de NaOH.

2- Aplicación y Lavado:

El paso siguiente es sembrar la muestra a la cual queremos filtrar a través de la

columna mediante un lavado específico. Para ello es necesario aplicar un buffer
con el mismo pH y fuerza iónica que el buffer inicial para que todas las proteínas
cargadas se unan al intercambiador. Por ejemplo: A la forma sódica de la resina
lavada se le añade una solución ácida (pH=3) de la mezcla de aminoácidos; a
dicho pH los aminoácidos se encuentran en forma de cationes con carga neta
positiva. Los aminoácidos catiónicos tienden a desplazar algunos de los iones
ligados a las

partículas de resina. A pH 3 los aminoácidos más básicos se unirán a la resina de

forma más estrecha que los más ácidos.

3- Elusión:

Las moléculas captadas por el intercambiador son eluídas debido a cambios en la

composición del buffer. La elusión puede realizarse de dos formas diferentes; la
más usual consiste en aumentar progresivamente la concentración de un contra
ión, de modo de desplazar el equilibrio de unión de la macromolécula hacia la
forma libre. El contraión es normalmente una sal, disuelta en eluyente (NaCl, KCl,
etc).

Las macromoléculas de una mezcla se irán desplazando de manera secuencial,

de acuerdo a la fuerza de unión: las que posean menos densidad de carga eluiran
antes, mientras que para las de mayor carga neta el tiempo de retención será
mayor.

La otra manera es realizar un cambio en el PH del solvente; esta técnica se

emplea con intercambiadores débiles. La lógica es que al cambiar el PH, de modo
de acercarnos al PI de cada proteína, la carga neta de esta irá disminuyendo y en
algún punto dejara de interaccionar con la matriz. Sin embargo, esta técnica posee
sus desventajas. Dado que es este caso las proteínas se eluiran a un PH igual a
su PI su solubilidad estará disminuida y pueden precipitar. Además, La
disminución del pH protonará a los grupos negativos de los aminoácidos, por lo
que su carga neta tenderá a ser positiva, por lo cual se necesitaran
intercambiadores cationicos ( portadores de grupos con cagas negativas) que van
a unir estos cationes de forma reversible; en contraposición el aumento del PH
provocara una desprotonación de los grupos positivos de los aminoácidos, por lo
cual su carga neta tendera a ser negativa; necesitándose asi intercambiadores
aniónicos que unan reversiblemente cargas negativas.

Las diversas fracciones pueden analizarse cuantitativamente mediante la reacción

con ninhidrina. Los aminoácidos aniónicos aparecen primero y los más catiónicos
aparecen posteriormente (con un intercambiador catiónico).

4- Regeneración:
Por último, se remueven las partículas que aún están asociadas al intercambiador.
Los iones que se adhieren a los sitios activos de la resina son de muy diferente
tipo y pueden ser removidos total o parcialmente durante el proceso de
regeneración. Una vez agotadas las resinas, se pueden regenerar a su forma
inicial para reanudar la operación de intercambio. Así, el intercambio iónico es un
proceso cíclico y no continuo. La regeneración de las resinas se hace según
reacciones inversas.

TIPOS DE RESINAS INTERCAMBIADORAS.

1*Resinas de intercambio catiónico.

Las cuales intercambian iones positivos tales como Na+ y Ca+.

Estas son clasificadas como acido fuerte o acido débil dependiendo el grado de
acidez.

2*Resinas de intercambio aniónico.

Intercambian aniones, como cloruros. Estas son clasificadas de acuerdo a la

fuerza de su base en resinas de intercambio de base fuerte y base débil.

3*Resinas de intercambio Ionico porosas.

Si son utilizados métodos especiales para llevar a cabo la polimerización del

estireno y DVB, pueden ser manufacturadas resinas de mas alta porosidad.

APLICACIONES.

*Utilidad clínica
La Cromatografía de intercambio iónico se emplea para medir los niveles
de Hemoglobina glucosilada , porfirinas y para purificar agua y producir agua
desionizada en pequeñas cantidades.
*Aplicaciones industriales
La Cromatografía de intercambio iónico permite el testeado cuantitativo de los
electrolitos y aditivos patentados de los baños de electrochapado. Esto supone un
avance en las pruebas de testeado cualitativo del electrochapado o en pruebas
menos precisas de testeo de UV. En estas tanto los iones, como los catalizadores,
como los abrillantadores, como los aceleradores pueden ser medidos.
 VENTAJAS
 Alta capacidad
 Alta resolución
 Paso concentrador: se puede sembrar un gran volumen para luego eluirlo
en un menor volumen.

DESVENTAJAS

 Las muestras deben estar desalinizadas antes de ser aplicada a este tipo
de cromatografía.
Otras Aplicaciones

 Purificación de agua
 Análisis de antibióticos de poliéster
 Determinación de pesticidas
 Extracción y purificación de ácidos nucleicos
 Determinación de metabolitos en el suero umbilical
 Determinación de ácidos orgánicos en la fruta y en el jugo.

PRINCIPIOS DE LA TECNICA.
Este método se centra en la separación y determinación de iones (y moléculas
polares), basándose en el uso de columnas de intercambio iónico. Estas columnas
retienen en mayor o menor grado a los analitos en función de sus interacciones
iónicas (polaridades). La superficie de la fase estacionaria presenta grupos
funcionales de carácter iónico que interaccionan con los iones de carga opuesta
presentes en la disolución. Cada analito es eluido de la columna con diferente
tiempo de retención, parámetro que permite su identificación cualitativa. Existe una
amplia gama de detectores (conductimétrico, amperométrico, UV, etc) donde se
registra la señal obtenida respecto al tiempo. El resultado es un cromatograma
donde la posición de los máximos indica el ión presente (análisis cualitativo) y el
área corresponde a su concentración en la disolución (análisis cuantitativo).
Este tipo de cromatografía se subdivide en cromatografía de intercambio catiónico
y cromatografía de intercambio aniónico, siendo esta última la que presenta
mayores aplicaciones.
TIPOS DE ENSAYOS.
 Análisis de Cationes (Li+, Na+, NH4+, K+, Mg2+, Ca2+) en matrices
acuosas.
 Análisis de Aniones (F-, Cl-, NO2-, Br-, NO3-, PO43-, SO42-) en matrices
acuosas.
 Moléculas orgánicas polares (consultar con el laboratorio).