Fisiología cardíaca a nivel celular: uso de cardiomiocitos HL-1

cultivados para estudios de la estructura y función de las

células del músculo cardíaco
Blanco, Steven M., Phillip E. Constantin y William C. Claycomb. Fisiología cardíaca a nivel
celular: uso de cardiomiocitos HL-1 cultivados para estudios de la estructura y función de las
células del músculo cardíaco. Am J Physiol Heart Circ Physiol 286: H823-H829, 2004; 10.1152 /
ajpheart.00986.2003.-Las células HL-1 son actualmente la única línea celular de cardiomiocitos
disponible que se divide continuamente y se contrae espontáneamente mientras se mantiene
un fenotipo cardíaco diferenciado. La extensa caracterización mediante técnicas
microscópicas, genéticas, inmunohistoquímicas, electrofisiológicas y farmacológicas ha
demostrado cuán similares son las células HL-1 a los cardiomiocitos primarios. En los pocos
años que las células HL-1 han estado disponibles, se han utilizado en una variedad de sistemas
modelo diseñados para responder preguntas importantes con respecto a la biología cardíaca a
nivel celular y molecular. Mientras que las células HL-1 se han utilizado para estudiar la función
normal de los cardiomiocitos con respecto a la regulación de señalización, eléctrica, metabólica
y transcripcional, también se han utilizado para tratar afecciones patológicas como hipoxia,
hiperglucemia-hiperinsulinemia, apoptosis e isquemia. reperfusión. La disponibilidad de una
línea celular cardíaca contráctil inmortalizada ha proporcionado a los investigadores una
herramienta para explorar las complejidades de la función de los cardiomiocitos. En esta
revisión, describimos el cultivo y la caracterización de los cardiomiocitos HL-1, así como varios
sistemas modelo que se han desarrollado utilizando estas células para obtener una mejor
comprensión de la biología cardíaca a nivel celular y molecular.
Célula del músculo cardíaco; cultivo de células; línea celular

AUNQUE MUCHOS MODELOS se han utilizado para estudiar la estructura y la función del
músculo cardíaco in vitro, el desarrollo de sistemas adecuados de cultivo celular ha
demostrado ser un desafío. Los cardiomiocitos HL-1 son actualmente las únicas células
disponibles que se dividen continuamente, se contraen espontáneamente y mantienen un
fenotipo cardíaco adulto diferenciado a través de pases indefinidos en cultivo (11). En esta
revisión describimos la derivación y caracterización de las líneas celulares de cardiomiocitos
HL y sus condiciones de cultivo, y discutimos los diversos sistemas modelo en los que se han
utilizado para estudiar diversas condiciones fisiológicas y fisiopatológicas.

Los cardiomiocitos primarios aislados de ratas embrionarias y neonatales han sido los
modelos más utilizados para estudiar la biología cardíaca in vitro, pero su uso es algo limitado
debido a que carecen de muchas características de cardiomiocitos adultos. Además, los
miocitos se vuelven crecidos por los no miocitos después de unos pocos días en cultivo, dejan
de dividirse después del período neonatal y la manipulación genética es difícil (10, 12). Las
células madre de embriones murinos (ES) y las células de carcinoma embrionario P19
también han proporcionado modelos útiles para estudiar el desarrollo y diferenciación de
cardiomiocitos (2, 5, 25, 34, 37, 38). Sin embargo, hasta hace poco no había forma de obtener
una población de cardiomiocitos puros o altamente enriquecidos a partir de células ES
diferenciadas. En 1996, el laboratorio de Field (34) desarrolló un método para obtener
poblaciones esencialmente puras de cardiomiocitos a partir de células ES diferenciadas
genéticamente alteradas. Posteriormente, otros grupos han utilizado una técnica similar con la
clasificación celular activada por fluorescencia para obtener poblaciones relativamente puras
de cardiomiocitos (26, 44). Debido a que los cardiomiocitos obtenidos a partir de estas células
ES de diferenciación seleccionadas dejan de dividirse, la obtención de suficientes células para
ciertos experimentos puede ser problemática. Recientemente, Rybkin et al. (51) generaron
ratones transgénicos en los que la expresión del antígeno T grande del virus simio 40 (SV40)
se controló condicionalmente mediante el promotor del gen Nkx2.5 usando la tecnología Cre-
lox. Las células aisladas de tumores ventriculares de estos ratones demostraron influjo de
calcio dependiente del voltaje, mientras que otras propiedades electrofisiológicas tales como
las características del potencial de acción permanecen indefinidas. Aunque este modelo
puede ser útil para estudiar algunos aspectos de la regulación del ciclo celular, las células
obtenidas de estos tumores no expresan ciertos genes que se sabe que se expresan en
cardiomiocitos diferenciados. Además, estas células no contienen sarcómeros bien
organizados ni mantienen actividad contráctil incluso durante la estimulación eléctrica (51).

Desarrollo y caracterización de los cardiomiocitos HL-1

La línea celular HL-1 se derivó de miocitos cardíacos AT-1, que son células musculares
cardíacas auriculares obtenidas de ratones transgénicos en los que la expresión del antígeno
T grande SV40 estaba controlada por el promotor del factor natriurético auricular (ANF) (19).
Aunque las células AT-1 mantienen un fenotipo de cardiomiocitos y se contraen
espontáneamente en cultivo, no pueden pasarse en serie in vitro o recuperarse de cepas
congeladas. Las células AT-1 solo pueden mantenerse como un linaje tumoral subcutáneo en
ratones singénicos, y los miocitos deben prepararse a partir de estos tumores como cultivos
celulares primarios (17). Un derivado de células AT-1 que podría pasarse en serie mientras se
mantiene un fenotipo diferenciado y también se puede recuperar de cepas congeladas se
denominó línea de cardiomiocitos HL-1 (11).
Los cardiomiocitos HL-1 se han caracterizado por el uso de métodos microscópicos,
inmunohistoquímicos, electrofisiológicos y farmacológicos (11). Según los estudios
microscópicos e inmunohistoquímicos, las células HL-1 contienen sarcómeros altamente
organizados necesarios para la contracción mediadora y los gránulos ANF intracelulares
característicos de los miocitos auriculares (3). El análisis de la expresión génica en células
HL-1 revela que exhiben un perfil de expresión génica de tipo cardiomiocito adulto (11).
Las células HL-1 se despolarizan espontáneamente y expresan los canales de iones
necesarios para generar potenciales de acción característicos de los cardiomiocitos primarios.
Los estudios farmacológicos muestran que las células HL-1 responden apropiadamente a los
agonistas inotrópicos y cronotrópicos, lo que indica la expresión de los receptores funcionales
y las proteínas de señalización intracelular requeridas para estas vías de señalización (11).
Para que las células HL-1 se pasen repetidamente mientras se mantiene un fenotipo cardíaco
contráctil, requieren un sustrato de fibronectina-gelatina y un medio de crecimiento
especialmente formulado (11). El reciente desarrollo de Claycomb Medium (JRH Biosciences)
ha proporcionado a los investigadores un medio de crecimiento estandarizado que permite el
paso en serie y el mantenimiento del fenotipo contráctil y diferenciado de las células HL-1. La
formulación completa de este medio se proporciona en la Tabla 1. Además de los factores
encontrados en el FBS normal, componentes tales como ácido retinoico, norepinefrina,
insulina y lípidos esenciales son necesarios para mantener un fenotipo cardíaco diferenciado
in vitro. Sin embargo, para ciertos tipos de experimentos, estas células se pueden mantener
en medio de Eagle modificado de Dulbecco reducido o incluso libre de suero en ausencia de
estos componentes añadidos durante cortos periodos de tiempo (hasta al menos 72 h)
mientras se mantiene un fenotipo diferenciado.
HL-1 Cardiomiocitos como sistemas modelo
Hipoxia. Los cardiomiocitos HL-1 tienen demostrado ser útil para estudiar muchos aspectos de
la biología cardíaca in vitro. Nuestro laboratorio usó células HL-1 como un sistema modelo
para investigar los efectos de afecciones fisiopatológicas comunes tales como hipoxia,
hiperglucemia e hiperinsulinemia sobre los cambios en la expresión del gen adrenomedulina
en cardiomiocitos. La adrenomedulina es un péptido natriurético y vasodilatador secretado por
los cardiomiocitos en respuesta a diversos estímulos estresantes como la hipoxia y la
hiperglucemia (29, 50). En el corazón, la adrenomedulina ha sido implicada en la prevención
de la remodelación patológica y el desarrollo de insuficiencia cardíaca después de un infarto
de miocardio, al tiempo que también actúa como un factor inotrópico negativo (4, 18, 43, 45,
49). En las células HL-1, la hipoxia induce una regulación al alza del factor inducible por
hipoxia-? y -, que a su vez conduce a una expresión aumentada del gen adrenomedulina (14,
47).

Hiperglucemia. Además de la hipoxia, también hemos utilizado las células HL-1 para estudiar
los efectos de la hiperglucemia y la hiperinsulinemia, que son características de la diabetes
mellitus tipo II, en la regulación del gen de la adrenomedulina cardíaca. La hiperglucemia
aumenta la expresión del gen de adrenomedulina vascular, y los niveles plasmáticos de
adrenomedulina aumentados se han asociado con afecciones diabéticas (24, 27, 39, 40).
Usando cardiomiocitos HL-1, Collier et al. (13) encontraron que la hiperglucemia crónica, pero
no aguda, produce una inducción cuádruple de los niveles de ARNm de adrenomedulina, un
efecto que puede ser reprimido por la insulina. Estos estudios demuestran que las células HL-
1 son un modelo ideal para estudiar los efectos de condiciones patológicas tales como la
hipoxia y la hiperglucemia en la función cardíaca in vitro.

Señalización celular. Las células HL-1 también han sido útiles para estudiar las vías de
señalización celular y diversos tipos de receptores en cardiomiocitos. Además de los
receptores adrenérgicos, las células HL-1 expresan receptores adrenérgicos \ beta, que
modulan numerosos eventos de señalización intracelular (42). La señalización de endotelina
en el corazón está asociada con condiciones fisiológicas y fisiopatológicas, como la apoptosis
y la insuficiencia cardíaca (58). Kitta y colaboradores (30) demostraron que la endotelina-1
induce la fosforilación y posterior activación del factor de transcripción cardíaco GATA-4 en
células HL-1, lo que implica una señalización mediada por el receptor de endotelina funcional.
Los receptores opioides también se expresan mediante cardiomiocitos primarios y se ha
demostrado que confieren efectos cardioprotectores después de una lesión por isquemia-
reperfusión (20, 41, 48, 54, 55). Neilan y colaboradores (46) demostraron que las células HL-1
expresan receptores opioides funcionales, lo que demuestra que las células HL-1 pueden ser
útiles para estudiar los efectos cardíacos de los opioides. Además, Seymour y colaboradores
(56) demostraron que el preacondicionamiento de opiáceos en las células HL-1 depende de la
señalización mediada por el canal de la proteína quinasa C y sensible al ATP (KATP). Otros
investigadores han usado células HL-1 para examinar características cardiomiocitarias como
el transporte de membrana (8) y la regulación de las vías metabólicas (57). Todos estos
estudios destacan la importancia potencial de los cardiomiocitos HL-1 como un sistema celular
para desarrollar nuevos agentes farmacológicos cardíacos.
Electrofisiología. Dos características importantes de las células HL-1 son los potenciales de
acción espontáneos y las contracciones que exhiben en cultivo. Hasta hace poco, la expresión
de la corriente rectificadora retrasada hacia el interior (IKr), característica de los
cardiomiocitos, era el único dato publicado sobre la electrofisiología de las células HL-1 (11).
Akhavan et al. (1) han usado los cardiomiocitos HL-1 para estudiar mutaciones en el gen
humano relacionado con el éter-a-gogo (HERG), que codifica la subunidad \ beta de las
mutaciones IKr.HERG se han asociado con el síndrome de QT largo, que se caracteriza por
repolarización cardíaca anormal y prolongación del intervalo QT en los electrocardiogramas
(1). Comprender los mecanismos moleculares de cómo las mutaciones de HERG específicas
conducen a alteraciones en la función de IKr es fundamental para tratar y prevenir la
repolarización cardíaca anormal. Estos investigadores (1) encontraron que una mutación en la
región carboxi-terminal daba como resultado una maduración defectuosa, tráfico intracelular e
inserción de HERG en la membrana plasmática. Más recientemente, Kupershmidt y
colaboradores (35) usaron células HL-1 para demostrar cómo KCR1, una nueva proteína de
unión al canal de HERG, disminuye la sensibilidad de los canales de HERG a agentes
antiarrítmicos. Estos experimentos demuestran además cómo las células HL-1 pueden
manipularse eficazmente en cultivo para estudiar los mecanismos moleculares de la función
cardíaca.

En 2002, Sartiani y colaboradores (53) publicaron una extensa caracterización

electrofisiológica de las células HL-1 estudiando el ciclo del calcio, las características del
potencial de acción y la expresión de una corriente marcada por marcapasos, activada por
nucleótidos cíclicos, hiperpolarizada. Los marcapasos o la conducción de los cardiomiocitos
se despolarizan espontáneamente debido a la activación de una corriente de catión hacia
dentro activada por hiperpolarización denominada corriente "divertida" (If). Los genes que
codifican subunidades de los canales responsables de la corriente If son los genes del canal
regulado por nucleótidos (HCN) cíclico activado por hiperpolarización. Sartiani y
colaboradores (53) utilizaron el colorante sensible al calcio Fluo 3-AM para medir las
oscilaciones de calcio intracelular. Encontraron oscilaciones de calcio rítmicas, espontáneas y
sensibles al cesio que se correlacionaban con la frecuencia del potencial de acción
espontánea para estas células. Utilizando condiciones de abrazadera de corriente de células
enteras, Sartiani y colaboradores (53) observaron que la capacitancia de la membrana, que es
indicativa del tamaño de las células, para las células HL-1 variaba entre 5 y 50 pF. Además,
las células tenían un potencial diastólico máximo de? 68.8? 1.6 mV con un sobreimpulso de
15.3? 1,9 mV y una forma de onda de potencial de acción característica de los miocitos
auriculares (53). Luego demostraron la presencia de marcapasos si la corriente con un
potencial de activación semimáxima que oscilaba entre 50 y 60 mV y mostraba que la
corriente If podía bloquearse con cesio extracelular, que es una característica de esta
corriente. También observaron que la activación de adenylyl cyclase, lo que aumenta el cAMP
intracelular, causó un cambio positivo en el potencial de activación If, también característico
de esta corriente. Estudios adicionales revelaron que el porcentaje de células que expresaban
la corriente If y las características de la corriente no cambiaban significativamente con la
confluencia o el número de pasaje. Finalmente, estos investigadores determinaron que las
células HL-1 expresan las cuatro isoformas del gen HCN, expresándose HCN-1 y HCN-2 a
niveles mucho más altos que las otras dos isoformas. Los resultados de estos estudios
destacan cómo las células HL-1 muy similares son a los cardiomiocitos auriculares primarios
con respecto a sus propiedades electrofisiológicas. Debido a que las propiedades
electrofisiológicas de las células HL-1 son muy similares a las de los cardiomiocitos primarios,
se han utilizado para desarrollar un sistema biosensorial celular portátil capaz de controlar los
efectos de los agentes químicos y biológicos en la función cardíaca fuera del laboratorio (16 ,
22)

Manejo del calcio. Además de la despolarización de la membrana, es necesario un manejo

eficiente del calcio intracelular para mantener las contracciones rítmicas en los cardiomiocitos.
El manejo alterado del calcio intracelular en cardiomiocitos se asocia con el desarrollo de
arritmias y la progresión de la insuficiencia cardíaca. Por lo tanto, el desarrollo de sistemas
modelo celulares para estudiar el manejo del calcio intracelular es importante para desarrollar
nuevos agentes farmacéuticos terapéuticos. George y colaboradores (21) utilizaron células
HL-1 para estudiar tres mutaciones del receptor de rianodina (RyR) asociadas con la
taquicardia ventricular inducida por estrés en humanos. De las tres isoformas de RyR
conocidas, RyR2 es la isoforma expresada en cardiomiocitos primarios y también es la
isoforma expresada por las células HL-1. Estos investigadores transfectaron transitoriamente
células HL-1 con vectores de expresión que codifican RyR2 humana etiquetada con GFP
recombinante (tipo salvaje) y con cada una de las tres mutaciones RyR2 de aminoácido único
que se sabe que están asociadas con la taquicardia ventricular inducida por estrés. George y
colaboradores (21) demostraron la localización correcta de los receptores al retículo
endoplásmico y la colocalización con la proteína de unión a FK506, que modula la actividad
de RyR. La liberación de calcio intracelular aumentó significativamente en células HL-1 que
expresan RyR2 mutante después de la adición de agonistas o estimulación adrenérgica (21).
Este documento proporciona un ejemplo de cómo las células HL-1 se pueden utilizar para
estudiar las condiciones patológicas cardíacas a nivel molecular.
Apoptosis. Las células HL-1 se han utilizado ampliamente para estudiar los mecanismos
implicados en la apoptosis cardíaca. Los factores de crecimiento se liberan en el miocardio
después de una lesión para estimular el crecimiento celular o la supervivencia. Kitta y
colaboradores (31, 33) han demostrado que el factor de crecimiento de hepatocitos (HGF) es
capaz de proteger a los cardiomiocitos HL-1 de la apoptosis inducida por estrés oxidativo.
Este mismo grupo investigó el papel de GATA-4 en los efectos cardioprotectores de HGF
porque GATA-4 puede inducir la supervivencia celular. Utilizando células HL-1, demostraron
que HGF induce la fosforilación de GATA-4 y la actividad de unión al ADN a través de la
proteína quinasa activada por mitógeno / vía de señalización de proteína quinasa (ERK)
quinasa (MEK) regulada por señal extracelular. Además, la fosforilación de GATA-4 induce la
expresión de Bcl-xL antiapoptótica (32). Se demostró además que GATA-4 es crítico para la
supervivencia celular y que supresión de la expresión de GATA-4 en células HL-1 conduce a
la apoptosis (28). Las células HL-1 también se han usado para estudiar los efectos del agente
antihipertensivo doxazosina sobre la apoptosis de los ocyte cardiomio. La doxazosina, un
antagonista de los receptores adrenérgicos β1, se asocia con un mayor riesgo de insuficiencia
cardíaca en pacientes hipertensos. Sin embargo, los mecanismos celulares responsables del
desarrollo de insuficiencia cardíaca en estos pacientes son desconocidos. Gonzalez-Juanatey
y colaboradores (23) demostraron que el mecanismo de lesión celular inducido por
doxazosina es independiente de su bloqueo de receptores 1-adrenérgicos, lo que implica que
el fármaco tiene efectos celulares distintos a los mediados por estos receptores. Otros
investigadores (6, 52) también han usado células HL-1 como modelos para estudiar la
apoptosis de los cardiomiocitos.

Regulación del ciclo celular. Además del uso de células HL-1 para el examen de la apoptosis
de los cardiomiocitos, también pueden ser muy útiles para estudios del ciclo de las células de
los cardiomiocitos. Debido a que las células HL-1 han sido inmortalizadas mediante el uso del
antígeno T grande SV40, que se une y altera la función de los supresores tumorales pRb y
p53, pueden servir como un modelo útil para estudiar cómo se inmortalizan las células
mientras se mantiene un fenotipo diferenciado. Tenemos proteínas inmunoprecipitadas de
células HL-1 mediante el uso de anticuerpos contra el antígeno T y p53 para determinar la
identidad de otras proteínas involucradas con esta T
inmortalización dependiente de antígenos. Tres proteínas que se aislaron y secuenciaron
después de la inmunoprecipitación se identificaron como MRE11, NBS1 y RAD50, que actúan
conjuntamente en un complejo que participa en la detección y reparación de roturas de doble
cadena de ADN y es necesario para un punto de control de fase S funcional ( 7, 36). Por lo
tanto, parte del mecanismo de inmortalización por el antígeno T grande SV40 puede
explicarse por la unión del antígeno T al complejo MRE11-NBS1-RAD50 además de pRb y
p53, ablando así este punto de control de fase S del ciclo celular en cardiomiocitos (36) El
ciclo celular alterado en las células HL-1 las convierte en una herramienta útil para estudiar la
inmortalización celular, pero este hecho también debe tenerse en cuenta cuando los datos se
interpretan a partir de otros tipos de experimentos. Aunque las células HL-1 están
inmortalizadas con una proteína viral oncogénica, las usamos para estudios de trasplante
celular en un modelo porcino de infarto de miocardio y no se encontraron tumores 3 meses
después del injerto. Curiosamente, la microscopía electrónica demostró que algunas de estas
células HL-1 trasplantadas en realidad formaban uniones celulares con los cardiomiocitos del
huésped al tiempo que inducían una angiogénesis local sustancial (59).
Manipulación genetica. Los cardiomiocitos HL-1 también son susceptibles de manipulación
genética utilizando diversas técnicas. Los reactivos lipídicos catiónicos típicamente producen
una eficacia de transfección de \ geq 75 - 80%. El tratamiento de células HL-1 con adenovirus
deficientes en replicación proporciona una eficacia de transducción cercana al 100%. Por lo
tanto, los estudios de knock-in y knock-in genético cardíaco se pueden realizar inicialmente en
estas células sin tener que generar animales transgénicos. Las células HL-1 también se usan
en estudios de la función del promotor del gen cardíaco o la identificación de nuevos
elementos reguladores genéticos (15). También se han usado como control positivo para
evaluar el grado de diferenciación de los cardiomiocitos derivados de células madre
embrionarias murinas (61). Debido a que las células HL-1 expresan los mismos receptores
que los cardiomiocitos primarios, pueden ser útiles para estudiar los efectos de nuevos
agentes farmacológicos cardíacos. Como con la mayoría de los modelos de cultivo celular, la
confluencia celular y la frecuencia de los pases deben considerarse al diseñar experimentos.
Por lo tanto, el uso de células HL-1 a densidades similares para una serie de experimentos es
crítico para obtener resultados reproducibles.
Derivación de líneas de células HL adicionales
Después del desarrollo de la línea de cardiomiocitos HL-1, líneas de células HL adicionales
(HL-1P, HL-2 y HL-5) se han obtenido en nuestro laboratorio a partir de células cultivadas AT-
1. Los análisis morfológicos, genéticos e inmunohistoquímicos (Figura 1) de estas líneas
celulares de HL muestran que todos exhiben esencialmente el mismo fenotipo de
cardiomiocito adulto que las células HL-1. Los genes expresados en estas líneas de células
HL incluyen aquellos que codifican factores de transcripción, proteínas sarcoméricas, canales
iónicos, proteínas de unión gap y varios otros genes característicos de los cardiomiocitos
como se representa esquemáticamente en la figura 2. La línea celular HL-5 ya se ha utilizado
para estudiar el procesamiento intracelular del péptido natriurético auricular mediante el uso
de la tecnología de interferencia de ARN (60). Además, las células HL-5 han demostrado ser
útiles para caracterizar los mecanismos de señalización apoptótica en un modelo in vitro de
isquemia-reperfusión (9).
En resumen, nosotros y otros hemos demostrado que los cardiomiocitos HL-1 y las líneas de
células HL derivadas de manera similar son modelos útiles para estudiar muchas
características de la fisiología y la fisiopatología cardíacas porque demuestran características
de cardiomiocitos diferenciados mientras proliferan continuamente en cultivo. Aunque las
células HL-1 se derivaron originalmente de miocitos auriculares, han demostrado ser útiles
como un modelo general para el estudio de los cardiomiocitos contraídos (en funcionamiento)
debido a su estructura organizada y su capacidad de contraerse en cultivo. La Tabla 2
proporciona una visión general de los diversos tipos de estudios que han utilizado células HL-
1 como sistema modelo, y la Fig. 2 proporciona un resumen de las características de las
células HL-1 que los convierten en un modelo útil para estudiar la fisiología de los
cardiomiocitos. Muchos de los estudios descritos en esta revisión demostraron que se
obtuvieron resultados similares cuando se usaron simultáneamente HL-1 y cardiomiocitos
primarios aislados. Por lo tanto, la disponibilidad de células HL proporciona a los
investigadores un sistema de cultivo celular simple y reproducible que puede usarse como
modelos para desarrollar una mejor comprensión de la intrincada regulación celular y
molecular de la función cardíaca.
Fig. 1. Imágenes de células HL que demuestran morfología y expresión de proteínas representativas
de un fenotipo de cardiomiocito. A: una imagen de contraste de fase de dos cardiomiocitos HL-1P que
acaban de completar una citocinesis adyacente a un miocito contraído. B-F: todas las imágenes
inmunofluorescentes indirectas (todos los núcleos están teñidos de azul con colorante Hoechst). B: dos
cardiomiocitos HL-2 teñidos con el anticuerpo sarcomérico de miosina MF-20 (Developmental Studies
Hybridoma Bank), uno de los cuales está en metafase de mitosis (la flecha indica cromosomas en
metafase) adyacente a un miocito no divisor que contiene sarcómeros organizados (punta de flecha).
La estructura sarcomérica en estas células se desorganiza durante la división celular y se reorganiza
rápidamente después de una citocinesis similar a la que ocurre en los cardiomiocitos embrionarios con
actividad mitótica en el corazón en desarrollo. C: un cardiomiocito HL-2 que contiene sarcómeros
altamente organizados también teñidos con el anticuerpo MF-20 para la miosina. D: localización de la
expresión del factor natriurético auricular (ANF) (Península Laboratories) en los cardiomiocitos HL-2
(nótense los gránulos que contienen ANF perinuclear intensamente teñidos). E: estructura sarcomérica
altamente organizada en cardiomiocitos HL-2 teñidos para titina (Developmental Studies Hybridoma
Bank). F: células HL-1 teñidas para la proteína sarcomérica \ beta - actinina (Sigma).
Fig. 2. Representación esquemática de características características de un cardiomiocito HL típico.
Aunque las células HL-1 poseen componentes adicionales, solo las que se han publicado se muestran
en este diagrama. Los componentes enumerados se agrupan de acuerdo con su función y ubicación
dentro de la celda. Cx, connexin; iNOS, óxido nítrico sintasa inducible; MAPK, proteína quinasa
activada por mitógeno (MAPK); ERK, quinasa regulada por señal extracelular; MEK, MAPK / ERK
quinasa; JNK, Jun cinasa; MHC, cadena pesada de miosina; MLC, cadena ligera de miosina; GLUT,
transportador de glucosa; RyR, receptor de rianodina; FKBP, proteína de unión a FK506; Si, ritmo o
corriente "divertida"; ICa, corriente de calcio; INa, corriente de sodio; IK, corriente de potasio; INa / Ca,
corriente de intercambio sodio-calcio. Los siguientes genes expresados en células HL-1 se muestran
bajo la corriente con la que están asociados in vivo: la hiperpolarización, los canales controlados por
nucleótidos cíclicos (HCN), el canal de Ca2 de tipo L controlado por voltaje (Cav1.2), el canal de sodio
dependiente de voltaje (Scn5a), subunidad moduladora para la corriente de potasio rectificador hacia
adentro (minK) y el intercambiador de sodio / calcio (Ncx).
Table 1. Formulación de Claycomb Medium

Proteina total 261 mg/l

Albúmina bovina 48.85 mg/l
Aminoácidos no esenciales 0.1 mM
Fetuin 165 mg/l
Transferrina 31.8 mg/l
Ácido retinoico 30 g/l
Insulina humana (recombinante) 15 g/l
Long R3IGF-1 (recombinante) 0.1 g/l
EGF largo (recombinante) 0.1 g/l
Colesterol 1.96 mg/l
Ácido linoleico 0.78 mg/l
-Oleyl- -pal- -fosfatidilcolina 1.96 mg/l
Ácido ascórbico 0.3 mM
Norepinefrina 100 M
L-Glutamina 2 mM
Penicilina-estreptomicina (opcional) 100 U/ml-100 g/ml
Suero bovino fetal 10%

El medio basal para Claycomb Medium es el medio modificado de Eagle de Dulbecco. Esta formulación completa para medio Claycomb fue
proporcionada por JRH Biosciences, Lenexa, KS.

Table 2. Types of studies that have utilized HL-1 cardiomyocytes as a cell culture model
Type of Study Reference

Apoptosis Carlson et al. (6)

Cicconi et al. (9)
Gonzalez-Juanatey et al. (23)
Kim et al. (28)
Kitta et al. (30)
Kitta et al. (31)
Kitta et al. (32)
Cell cycle Lanson et al. (36)
Zandstra et al. (61)

Electrophysiology Akhavan et al. (1)

Claycomb et al. (11)
DeBusschere and Kovacs (16)
Gilchrist et al. (22)
Kupershmidt et al. (35)
Sartiani et al. (53)

Oxidative stress Cicconi et al. (9)

Signal transduction
Transcriptional regulation
Kitta et al. (30)
Kitta et al. (31)
Nguyen and Claycomb (47)
Sanders et al. (52)
Suzuki et al. (58a)
Chaudary et al. (8)
Cicconi et al. (9)
Gonzalez-Juanatey et al. (23)
Kim et al. (28)
Kitta et al. (30)
Kitta et al. (32)
McWhinney et al. (42)
Neilan et al. (46)
Sanders et al. (52)
Seymour et al. (56)
Soltys et al. (57)
Wu et al. (60)
Collier et al. (13)
Dai et al. (15)
Kim et al. (28)
Kitta et al. (30)
Kitta et al. (32)
Nguyen and Claycomb (47)

Cellular transplantation Watanabe et al. (59)