EXTRACCIÓN Y SEPARACION DE LÍPIDOS DE LA YEMA DEL HUEVO.

REACCIÓN DEL COLESTEROL.

INTRODUCCIÓN

En los huevo de gallina el componente sólido mayoritario de la clara son proteínas

(9,7-10,6 %), como ovalbúmina, globulinas, ovomucoide y conalbúmina, mientras que el
contenido lipídico es insignificante; en la yema los componentes mayoritarios son proteínas
y lípidos, existiendo cantidades menores de carbohidratos y minerales, la fracción lipídica
(32-35%) está constituida por un 66% de triacilglicéridos, un 28 % de fosfolípidos, un 5% de
colesterol y cantidades minoritarias de otros lípidos.

Reactivos y Material

Cámara cromatográfica
Placas de silicagel
Capilares
Huevo de gallina
Cloroformo( CHCl3 )
Metanol ( CH3OH )
Iodo
Anhídrido acético
Ácido sulfúrico
Hidróxido amónico

Método experimental

1.- Preparar el eluyente cloroformo-metanol a 200:100 llevándolo a un volumen final de

45 ml: 30 ml de cloroformo + 15 ml de metanol.

2.- Se rompe un huevo de gallina y se separan la clara y la yema: Se descarta la clara y

la yema se utiliza en esta práctica para extraer los lípidos de acuerdo al siguiente
procedimiento:

3.- La yema se homogeneiza en un mortero con los 45 ml de la mezcla cloroformo-

metanol, anteriormente preparada. A continuación se filtra, con papel de filtro; entonces, se
podrá observar que la mezcla transparente (cloroformo-metanol) ha pasado de incolora a
amarilla, puede comprobarse que tiene lípidos dejando unas gotas sobre un papel de filtro, el
cual queda transparente al evaporarse los disolventes.

4.- El extracto se pasa a un tubo de ensayo para llevar a cabo la reacción del colesterol,
y la separación de los lípidos por cromatografía en capa fina de lípidos.
1.- CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA DE LÍPIDOS

Método experimental

Para la cromatografía en capa fina se utiliza un soporte de silicagel, extendido sobre una
placa de vidrio o aluminio. Estas placas de silicagel deben tratarse con sumo cuidado,
sujetándolas por los lados; sin poner los dedos sobre las mismas. De otra forma
obtendremos resultados falseados.

1.- El desarrollo de la cromatografía se lleva a cabo en una cámara cromatográfica que

ha de ser de material inerte (vidrio), la cual debe estar saturada, un mínimo de 8 horas, con la
fase móvil ó eluyente. En este caso se utilizan 100 ml del eluyente cloroformo-metanol
(65:25:4).

2.- El extracto obtenido se coloca a 1,5 cm de la base de la placa, sobre una línea
previamente trazada con lapicero sobre esta. La aplicación se lleva a cabo mediante capilares;
echando 1 gota del extracto, lo más extendida posible, en 1 cm a lo largo de la línea trazada.

Una vez se ha secado la muestra sobre la placa de silicagel, ya está lista para el
desarrollo, nombre que se da al proceso en el que un disolvente fluye a través de una capa
fina, produciendo la separación de los distintos tipos de lípidos para la muestra específica. Se
deja correr hasta que el frente haya ascendido 15 cm como mínimo, se saca la placa de la
cámara y se seca con secador, estando lista para el revelado.

3.- Para el revelado utilizaremos vapores de iodo. En la cubeta, que contiene en el fondo
unos pocos cristales de yodo, se introduce la placa y se deja durante unos minutos. El iodo
tiende a concentrarse en los sitios donde están los compuestos lipídicos, por lo que
aparecen manchas amarillas sobre un fondo blanco.

Se determinará la naturaleza de los distintos constituyentes por comparación de los

valores Rf con sus correspondientes a sustancias estándar conocidas; sobre el mismo
cromatograma, u otro similar.
RESULTADOS

Rf = Distancia recorrida por la sustancia / distancia recorrida frente

Rf1=
Rf2=
Rf3=
Rf4=
Rf5=
Rf6=
Rf7=
Rf8=

INTERPRETACIÓN

2.- REACCIÓN DEL COLESTEROL (REACCIÓN LIEBERMAN-BURCHARD)

Detecta la presencia de colesterol. Esta reacción es muy fácil de realizar. Además,

nos encontramos ante una reacción exotérmica, la energía que se libera la podemos apreciar
en forma de calor.

Método experimental

1.- Utilizaremos 0,2 ml del extracto clorofórmico, previamente reservado, que se

evaporará en un baño a 100º C.

2.- Una vez evaporados los disolventes se añadirá al tubo 2 ml de anhídrido acético y
0,2 ml de ácido sulfúrico concentrado. Aparece una coloración violeta que vira a verde
esmeralda estable (Reacción de Liebermann y Burchard) lo cual indica la presencia de
colesterol. (Deben utilizarse pipetas muy secas, para lo cual se tendrán pipetas de 1 y de
2 ml en la estufa)