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CLASE TEORICO-PRACTICA
RECUENTO DE PLAQUETAS
-Anticoagulante: EDTA
-Material adecuado: tubos de polipropileno,
vidrio siliconado
-Toma de muestra adecuada: evitar ruptura de
tejido
HEMOSTASIA PRIMARIA
RECUENTO DE PLAQUETAS
Método manual
sangre venosa anticoagulada con EDTA
Dil. 1/20 con oxalato de amonio 1% (vn:
150-400 x 103/mm3
Contadores hematológicos
HEMOSTASIA PRIMARIA
RECUENTO DE PLAQUETAS
TS:
▪ sensibilidad - especificidad -
reproducibilidad
▪Afectado por: frío, ejercicio, ansiedad,
presión del corte, dirección de la incisión,
“barrido” excesivo
HEMOSTASIA PRIMARIA
PLAQUETA vW SUPERFICIE
ADHESIVIDAD
In Vivo : Borchgrevink
Adhesividad (%)= 100 *( RT0 – RT2 / RT0 )
RT0 : recuento de pq. De muestra de sangre
venosa extraída con EDTA
RT2 : recuento de pq. Luego de 2 min de TS.
VN: 30-70%
ADHESIVIDAD: método de Hellen II
•Sangre entera
•Columna: tubuladura de PVP 3mm diámetro, rellena con perlas de
vidrio de 0.5mm diámetro, 1.3 g por columna.
•Bomba de flujo constante: velocidad 1ml/ 9seg.
columna cp
EDTA 2%
bomba
sp
%Adh = 100 SP- CP
EDTA 2% VN = 27- 70% SP
HEMOSTASIA PRIMARIA
AGREGACIÓN
Agonistas especiales
TRAP6 : PAR1, PAR4
U46619: análogo de TX
Endoperóxidos cíclicos: actividad Tx sintaza
Ionóforos (A23187): movilización de Calcio
AGREGACION
COAGULACIÓN
HMWK VII
XII
PK
XI
MI IX ME
VIII
X
V
II
I TC
TOMA DE MUESTRA
• Anticoagulante: Citrato trisodico 3.2 o 3.8 %
TP
Tromboplastina
Apoproteina + Fosfolipidos
TP
• Muestra: plasma citratado ppp
• Reactivo: tomboplastina calcica
• Procedimiento: incubar 100 ul de ppp 1 min a 37°C,
disparar el cronometro al agregar 200 ul de reactivo a
37°C, medir el tiempo de coagulación.
• Los resultados se informan:
-En segundos informando entre paréntesis el valor del
testigo( 11 recombinante, 12-14 de conejo)
PRUEBAS PARA EVALUAR LA
COAGULACIÓN
TP
-En % de actividad o tasa de trombina:
Se preparan diluciones de un pool de plasmas
normales y se determina el TP por duplicado, con
los datos se grafica una curva, en papel doble log, de
TP vs % de actividad, asignando al pool de normales
el 100% de actividad.
Teniendo el TP del paciente se busca en la curva el %
o tasa que le corresponde.
VN: 70-100%
PRUEBAS PARA EVALUAR LA
COAGULACIÓN
TP
• Valores prolongados se observan en:
-Deficiencia congénita o adquirida de uno o varios de
los siguientes factores: II,V,VII,X
-Hipofibrinogenemia
-Enfermedad hepática
-Deficiencia de vitamina K
-Tratamiento con ACO
-Presencia de inhibidores de alguno de los factores
involucrados
PRUEBAS PARA EVALUAR LA
COAGULACIÓN
APTT
• -Tiempo de tromboplastina parcial activado
• -Mide el tiempo que tarda en coagular un plasma
citratado ppp en presencia de tromboplastina parcial,
un activador, e iones calcio.
• -Evalúa la vía intrínseca y tronco común.
• -Se utiliza para controlar la terapia de anticoagulación
con heparina
PRUEBAS PARA EVALUAR LA
COAGULACIÓN
APTT
• Tromboplastina parcial: fosfolipidos de la
tromboplastina que se obtienen de tejido animal o de
fuentes vegetales (cefalina)
• Activador :- particulado, caolín, celite, sílica
micronizada.
-no particulado, ac. Elagico
PRUEBAS PARA EVALUAR LA
COAGULACIÓN
APTT
• Muestra: plasma citratado ppp
• Reactivos: -cefalina - caolin
-cloruro de calcio 0.025 M
• Procedimiento: incubar100 ul de ppp con 100 ul de
rvo a 37°C durante 3 min, disparar el cronometro al
agregar 100 ul de cloruro de calcio 0,025 M, medir el
tiempo que tarda en coagular.
• VN: 30- 40 seg.
PRUEBAS PARA EVALUAR LA
COAGULACIÓN
APTT
• Valores prologados se observan en:
-Déficit congénito o adquirido de factores II, V, VIII,
IX, X, XI, y XII
-Tratamiento con heparina
-Presencia de inhibidores
-Tratamiento ACO instaurado
PRUEBAS PARA EVALUAR LA
COAGULACIÓN
TT
Evalúa la etapa de fibrinoformación midiendo el tiempo
que tarda en coagular el plasma citratado en presencia
de trombina, independientemente de las alteraciones
que podrían afectar el MI o el ME
PRUEBAS PARA EVALUAR LA
COAGULACIÓN
TT
Muestra: ppp
Reactivo: solución de trombina comercial (liofilizada) o
preparada a partir de plasmas de dadores, se ajusta la
dilución de manera tal que el testigo sea
aproximadamente 15 seg
Procedimiento: incubar 100ul de muestra 1 min a 37° C
agregar 100 ul de trombina diluida y tomar el tiempo
que tarda en coagular.
PRUEBAS PARA EVALUAR LA
COAGULACIÓN
TT
Se considera prolongado cuando el plasma del paciente
difiere en mas de 4 segundos con el normal.
Valores prolongados se observan en :
-Niveles bajos de Fibrinógeno o Disfibrinogenemia
-Tratamiento con heparina no fraccionada
-Presencia de inhibidores adquiridos
PRUEBAS ALTERADAS
Déficit de factores
o presencia de inhibidores?
corrige no corrige
cuantificación de detección de
factores inhibidores
PRUEBAS DE CORRECCIÓN
Preparación de suero
Aporta los factores VII, IX, X y un 50% de XI Y XII.
Se obtiene dejando coagular la sangre en tubo de
vidrio por espacio de 4 hs. Se centrifuga 15 min. a
3000 rpm .Se puede mantener a 4°C por 24 horas o
fraccionar y congelar
PRUEBAS DE CORRECCIÓN
• tromboplastina - calcio
DOSAJE DE FACTORES DE LA
VIA INTRINSECA
VIII,IX,XI,XII
• plasma
» patrón/pool de plasma
normal (curva de seg
calibración) pac
» paciente diluido
• plasma deficiente en el
% pac
factor a medir % factor
• cefalina - kaolín
• Cl2Ca
DOSAJE DE FACTORES DE LA VIA
FINAL :FIBRINOGENO (método
gravimétrico)
trombina
fibrinógeno fibrina
• plasma
» patrón mg/dl (curva de seg
calibración) pac
» paciente
• trombina mg/dl pac
mg/dl
SANGRADO SIN ALTERACION DE LA
PRUEBAS GLOBALES
-Metodos Funcionales:
Espectofotometricos
Fluoromericos
-Determinacion Inmunologica de factor XIII
FUNCIONES DEL SISTEMA
FIBRINOLITICO