Extracción líquida a presión de

contaminantes orgánicos en muestras

ambientales y de alimentos.
Resumen
La extracción de líquido a presión (PLE) es una herramienta capaz de
proporcionar métodos de extracción ecológica para determinar aún más
los contaminantes en los alimentos y el medio ambiente. El objetivo de
esta revisión es ofrecer una visión crítica de los desarrollos recientes en
este campo y puede considerarse como una actualización de la anterior
que publicamos en 2015. Tendencias relacionadas con el tratamiento de
muestras, los solventes y los enfoques de limpieza en la celda utilizados en
Se aborda la extracción de contaminantes orgánicos. Se debe prestar
especial atención a los métodos que incluyen la limpieza en línea en la
celda de extracción. También se presenta una comparación con otras
técnicas ecológicas. El objetivo final de esta revisión es definir claramente
el papel que juega esta técnica en el análisis de contaminantes orgánicos,
sus fortalezas y debilidades, así como el espectro actualizado de
aplicaciones para las cuales PLE es una herramienta esencial.

INTRODUCCIÓN

Sorprendentemente, la extracción de contaminantes orgánicos en los

alimentos y el medio ambiente en el tercer milenio se realiza
principalmente mediante extracción con solventes, como lo ha sido
durante más de 100 años. Estos procesos son a menudo largos y tediosos,
gastan grandes volúmenes de solventes y no pueden extraer
cuantitativamente contaminantes fuertemente conjugados con proteínas
u otros componentes de la matriz, o aquellos que debido a su
liposolubilidad se acumulan en grasa, y por lo tanto requieren a su vez
una cantidad cuantitativa extracción de la misma. Además, estos
procedimientos de extracción son lo contrario de lo que recomienda la
química verde, que es reducir el consumo de energía, mejorar el uso de
solventes no tóxicos y productos naturales renovables y garantizar la
seguridad y la eficiencia. En este contexto, la extracción de contaminantes
utilizando solventes a alta presión y temperatura,[1] . Las principales
ventajas de PLE son la gran reducción en el tiempo de extracción y el uso
de solventes, un mayor rendimiento de contaminantes y una selectividad
mejorada. Sin embargo, cada matriz necesita tener sus condiciones de
operación cuidadosamente optimizadas para lograr altos estándares de
calidad.

PLE fue presentado en 1995 por Dionex Corporation en la Conferencia

Pittcon. El primer galardón que recibió fue su aceptación como método
oficial de la Agencia de Protección Ambiental de los Estados Unidos
(USEPA) para contaminantes orgánicos persistentes en muestras sólidas
ambientales. Desde entonces, PLE se ha convertido en rutina en muchos
laboratorios, como lo demuestran los artículos de revisión publicados
sobre estrategias de manejo de muestras para la determinación de
contaminantes orgánicos en matrices complejas, que siempre dedican una
sección importante a PLE [2] , [3] , [4] , [ 5] . Varios ejemplos recientes
incluyen dioxinas y furanos [6] productos farmacéuticos [7] , fragancias
en cosméticos y productos de cuidado personal [8], contaminantes
emergentes [9] , compuestos orgánicos traza [10] y contaminantes de
envases de alimentos orgánicos [11], pero también hay un largo etcétera
de otros contaminantes que no se incluyen aquí para no alargar
innecesariamente la lista de referencias.
Esta revisión trata de la aplicación de PLE a la extracción de
contaminantes orgánicos en matrices alimentarias y ambientales. Esta
revisión en realidad presenta una actualización de la publicada en 2015
sobre el mismo tema, también en un número especial sobre química
verde. Las razones que justifican la necesidad de esta actualización es que
PLE es ahora una técnica mucho más establecida que hace 5 años, y ahora
se sabe mejor cuáles son sus posibilidades reales en el campo del análisis
de contaminantes en los alimentos y el medio ambiente. Esta revisión
ofrece: (i) una mejor descripción de los conceptos básicos de interés en la
aplicación de esta técnica en el campo; (ii) un análisis más profundo de
sus ventajas y desventajas; (iii) comparación bien fundada con otras
técnicas de extracción convencionales o alternativas, y (iv) finalmente, y
no menos interesante, Estudio de sus aplicaciones en el campo analítico
de la alimentación y el medio ambiente. Desde 2015 se publicaron pocas
revisiones y capítulos sobre el uso de PLE para el análisis de
contaminantes orgánicos en muestras ambientales.[12] , [13] . Sin
embargo, se centran en comparar PLE con otras técnicas que tienen
algunos pasos comunes, y no proporcionan una visión general de sus
aplicaciones para extraer contaminantes orgánicos. La necesidad y
oportunidad de nuestra revisión radica en su visión crítica de la evolución
de la técnica en los últimos 5 años y en el hecho de que ofrece un análisis
global de sus aplicaciones.
2 . Aplicación de extracción de líquido a presión para analizar
contaminantes en matrices alimentarias y ambientales.

PLE es una técnica de extracción que emplea solvente a temperaturas y

presiones elevadas para extraer analitos, principalmente de muestras
sólidas. Esta extracción necesita un equipo especial capaz de soportar
tanto la alta temperatura como la presión. Aunque un sistema PLE puede
ser casero, los sistemas comerciales disponibles son de uso común. Los
sistemas PLE son fabricados actualmente por tres proveedores: Thermo
Scientific (el sistema de extracción acelerada de solventes [ASE],
anteriormente comercializado por Dionex); Fluid Management Systems,
Inc. (FMS) (el sistema PLE); y Büchi (el sistema Speed Extractor). Un
diagrama esquemático de un sistema PLE se muestra en la figura 1 .

Para realizar un PLE, se cargan entre 5 y 100 g de muestra en la celda de

extracción y se cubren con dos accesorios de filtración. Hay diferentes
tamaños de células (comúnmente medidas en volumen que varían de 1 a
100 ml). El más común es el de 33 ml. El sistema comienza
automáticamente a presurizar y calentar las muestras. La presión se
mantiene a 1500–3000 psi, a una temperatura de 70–200 ° C. En el
modo estático, el disolvente extraído, que contiene los analitos diana y los
compuestos de matriz coeluidos, se vierte automáticamente en el
recipiente de recolección con nitrógeno. La mayoría de los equipos
permite cargar hasta 24 celdas y todos los procedimientos son
automáticos.
Durante el desarrollo del método PLE es necesario optimizar varios
parámetros, incluidos la temperatura, el tiempo de extracción, el número
de ciclos de extracción, el tipo de sorbente y los solventes como los pasos
más importantes. Se equilibran para obtener recuperaciones aceptables
para la mayoría de los analitos. Esto es especialmente cierto cuando los
compuestos objetivo tienen diferentes grupos funcionales y propiedades
fisicoquímicas.

TIPO SORBENTE

Para reducir la aglomeración de partículas y la canalización de solventes

en la celda de extracción, la muestra podría mezclarse con un agente de
dispersión / secado para facilitar la eficiencia de la extracción. Estos
dispersantes incluyen sulfato de sodio anhidro [14] , tierra de
diatomeas [10] , [15] , [16] , [17] , [18] , [19] , [20] , arena [21] , [22] ,
poliacrilyc ácido y arena [23] , hidromatriz - una tierra de diatomeas
inerte [24] -, alúmina ácida [25] , alúmina y cobre [26] , Florisil [27],
isotiocianato de cobre [28] , [29] . La muestra y el dispersante se mezclan
antes de cargarse en la celda de extracción de acero inoxidable
(comúnmente, llenando completamente la celda con el agente sorbente
para reducir el consumo de solvente) y se cubren con dos accesorios de
filtración, que están ajustados para alta presión. cierre. Otra opción
creciente es insertar la muestra tal como está en una celda que contiene el
sorbente (por ejemplo, Cu e hidromatriz [30]) Ya sea homogeneizado con
la muestra o colocado en el fondo de la celda de acero inoxidable, el
sorbente puede retener algunos de los co-extractantes de la matriz que
pueden interferir con el análisis y, por lo tanto, actuar como un paso de
limpieza. Esta característica ha sido bastante explotada en el PLE y ha
evolucionado hacia lo que se conoce como extracción selectiva de líquidos
a presión (SPLE) en la que se colocan diferentes fases sólidas en el fondo
de la celda para obtener una limpieza en la celda (como ilustrado Fig.
2 ). Los sorbentes y mezclas de sorbentes más comunes utilizados fueron
Florisil [31] , alúmina neutra [32] , alúmina y ácido-sílice [16] , ácido,
básico y sílice de NO 3 Ag [16]. La integración de extracción y limpieza en
un solo paso evita la necesidad de manipulación adicional de extractos de
muestra.

Temperatura

Se informa que las temperaturas elevadas mejoran la eficiencia de la

extracción debido a la velocidad de difusión y la solubilidad de los analitos
en solventes. Las altas temperaturas ayudarán a la interrupción de las
interacciones matriz de analito-muestra causadas por las fuerzas de van
der Waals, los enlaces de hidrógeno y la atracción de dipolos, lo que
resulta en una eficiencia de extracción mejorada. Sin embargo, las
temperaturas de extracción elevadas pueden aumentar simultáneamente
la tasa de degradación del analito, especialmente cuando se combina con
largos tiempos de extracción. Además de eso, la solubilidad de los
componentes de la matriz también aumenta con la temperatura,
produciendo extractos más oscuros que contienen más interferencias, lo
que puede afectar la precisión en el paso de determinación adicional. El
rango de temperaturas utilizado en las aplicaciones informadas en esta
revisión oscilaba entre 50 y 150 ° C, siendo la temperatura más utilizada
para realizar las extracciones de 100 ° C. Esta temperatura está por
encima del punto de ebullición de la mayoría de los solventes orgánicos
reportados y es lo suficientemente baja como para evitar la degradación
del analito o el exceso de coextractantes.
PRESIÓN

Se utilizan presiones elevadas de 500 a 3000 psi (35–200 bar o 3,44–

20,68 MPa) para mantener el disolvente de extracción en estado
líquido. Su misión es solo mantener el solvente en estado líquido a
temperaturas superiores a su punto de ebullición y una vez que sea lo
suficientemente alto, su valor tiene poca influencia en la eficiencia de
extracción.

SOLVENTE

Al contrario de lo que sucede con la presión, el solvente o la mezcla de

solventes utilizados es crucial para obtener una recuperación
eficiente. Como en las extracciones tradicionales, la polaridad del solvente
tiene que ser idealmente similar a los analitos "como se disuelve
como". Sin embargo, a veces también es importante lograr un equilibrio
para que el solvente no solo extraiga la cantidad máxima de analito
posible sino también el mínimo de otros compuestos presentes en la
matriz. Los solventes informados son principalmente diclorometano [33 ,
# 168], hexano [23] , [28] , [34] , [35] , [36] , [37] , [38] , acetona [15] ,
metanol [5 ] ,[18] , [29] , [39] , [40] , [41] , [42] , [43] , [44] , tolueno [45] ,
acetato de etilo [10] , [19] , [31] , [46] , acetonitrilo [47] . Las mezclas son
hexano-diclorometano [14] , [16] , [32] , [48] , metanol-agua [5] , [24] ,
tolueno-acetona [49] , hexano-acetona [22] , [30] ,[50] , acetona-
diclorometano [17] , [51] , acetonitrilo-agua [21] , [25] , [52] ,
diclorometano-acetonitrilo [53] . Hay claramente dos tipos de sistemas,
aquellos basados en el uso de solventes inmiscibles en agua (o mezclas de
solventes inmiscibles en agua con algunos miscibles para alargar el rango
de polaridad) que se usan para contaminantes no polares o
moderadamente no polares y esas mezclas de agua y solventes miscibles
utilizados para extraer contaminantes polares y solubles en agua.

CICLOS DE EXTRACCIÓN

El volumen de disolvente puede introducirse en un ciclo o fraccionarse en

varios. Esto es similar a la partición líquido-líquido, por lo que fraccionar
el volumen de extracción puede mejorar la eficiencia. Los equipos
generalmente pueden llevar a cabo hasta cinco ciclos, pero el
procedimiento normal es llegar hasta tres. El uso de varios ciclos no
siempre mejora la eficiencia, por el contrario podría proporcionar
recuperaciones más bajas debido a una mayor extracción conjunta de
sustancias interferentes  .

El volumen de descarga se expresa como un porcentaje del volumen de

la celda (que varía de 0 a 150%). Cuando se especifica más de un ciclo, el%
de volumen de descarga se divide entre los ciclos [54] . Este parámetro es
el menos mencionado en los diferentes estudios, aunque es importante
conocer el volumen final del extracto. Normalmente, los volúmenes
oscilan entre 60 y 100%, ya que se debe alcanzar un equilibrio entre un
volumen suficiente para proporcionar una extracción cuantitativa de
contaminantes y usar el volumen mínimo para reducir el consumo de
solvente y concentrar el contaminante tanto como sea posible.

Otro paso crítico en el desarrollo de un método PLE es la limpieza del

extracto en la celda o fuera de línea.

•
La limpieza en la celda implica que la celda de acero inoxidable se
ha llenado previamente con fases sólidas y la muestra o muestra
homogeneizada con el agente dispersante se coloca encima de estas
fases. Al mismo tiempo que se eluye el disolvente presurizado, parte
de los componentes de la matriz y otras interferencias se retienen
en estas fases sólidas. Luego, la elución de los analitos y la limpieza
del extracto se realiza simultáneamente. Las fases más utilizadas
para la limpieza en la celda han sido: Florisil, ácido, versiones
básicas y neurales, activadas o no, de sílice y alúmina o incluso a
veces tratadas con AgNO 3 o cobre.
 •
La limpieza fuera de línea del extracto implica extracción en fase
sólida (SPE) utilizando cartuchos convencionales (principalmente
fases tipo Oasis HLB u Oasis HLB y modos mixtos Oasis HLB con
un intercambiador catiónico o aniónico), cromatografía en columna
con sílice, alúmina, Florisl, Carbopak o celite y cromatografía de
permeación en gel.

3 . APLICACIONES
La Tabla 1 , Tabla 2 compila los estudios más relevantes publicados desde
2015. Estos estudios se han clasificado en aquellos que se enfocan en
matrices ambientales abióticas (aire, partículas, polvo, suelo, sedimentos
y lodos) y aquellos que se enfocan en alimentos y matrices bióticas.
(debido a la afinidad en la composición de las muestras). PLE se ha
aplicado para extraer contaminantes orgánicos persistentes
[organoclorados (OCP), policlorobifenilos (PBC) y difenil éteres
polibromados (PBDE)] y compuestos emergentes polares [productos
farmacéuticos, sulfatos de alcohol, etoxisulfatos de alcohol, pesticidas
utilizados actualmente, compuestos disruptores endrocrinos,
micotoxinas].