INTRODUCCIÓN A LAS SEPARACIONES

CROMATOGRÁFICAS

-CAPITULO 26-
CROMATOGRAFÍA

•Separaciones analíticas

•Análisis cualitativos y cuantitativos

Migración diferenciada de los solutos de una mezcla en medio

según su afinidad con el mismo
CROMATOGRAFÍA

Fase Estacionaria (fs)

Fase Móvil (fm)

CROMATOGRAFÍA

Fase móvil:
-No debe reaccionar con los solutos*
-Polaridad inversa a la fase estacionaria
-Fácil de eliminar
CROMATOGRAFÍA - CLASIFIACIÓN

1. Según la polaridad de las fases

NORMAL

La fase estacionaria es polar y la fase móvil es no polar

REVERSA

La fase estacionaria es no polar y la fase móvil es polar

2. Según el estado físico de las fases

CROMATOGRAFÍA FASE NORMAL

Fase Estacionaria POLAR POLARIDAD

Fase Móvil NO POLAR + -

CROMATOGRAFÍA FASE REVERSA

Fase Estacionaria NO POLAR POLARIDAD

Fase Móvil POLAR + -

CROMATOGRAFÍA EN PLACA

Elución

Fase Estacionaria NO POLAR POLARIDAD

Fase Móvil POLAR + -

CROMATOGRAFÍA - CLASIFIACIÓN

1. Según la polaridad de las fases

NORMAL

La fase estacionaria es polar y la fase móvil es no polar

REVERSA

La fase estacionaria es no polar y la fase móvil es polar

2. Según el estado físico de las fases

 CROMATOGRAFÍA

Tipo Fase Medio Fase estacionaria Método

móvil Fisico

Líquido adsorbido sobre un sólido Líquido-Líquido

Sólido Líquido-Sólido
Columna Intercambio
Resina de intercambio iónico
Iónico
Cromatografía
Líquido
de líquidos Líquido en los intersticios de un sólido Exclusión por
Placa polimérico tamaño
Líquido-Fase
Especies orgánicas enlazadas a una
unida
superficie sólida
químicamente
Líquido adsorbido sobre un sólido Gas-Líquido
Cromatografía Especies orgánicas enlazadas a una Gas-Fase unida
Gas Columna
de gases superficie sólida químicamente
Sólido Gas-Sólido
 CROMATOGRAFÍA DE ELUCIÓN EN COLUMNA

Fase
móvil

Elución
Fase
estacionaria

Dilución del analito

CROMATOGRAFÍA DE ELUCIÓN EN COLUMNA
CROMATOGRAFÍA DE ELUCIÓN EN COLUMNA
CROMATOGRAMA

•Tiempo de retención: Corresponde al tiempo desde que se introduce el

analito (en la muestra) en el cromatógrafo hasta que alcanza el detector y se
genera la señal

La velocidad de migración de la especie no retenida coincide con la

velocidad promedio del movimiento de las moléculas de la fase móvil
V=L/tR

Solubilidad en la fase móvil vs interacción con la fase estacionaria

ENSANCHAMIENTO DE BANDAS

FORMA DE LA BANDA

•Curva Gaussiana

Desplazamiento de las partículas del

soluto en la fase móvil a través de la
fase estacionaria
 ENSANCHAMIENTO DE BANDAS

Variables

•Caudal/flujo de la fase móvil

A mayor flujo de la fm se tiene una disminución del ancho de la banda

Camino múltiple

Difusión longitudinal
 EFICACIA DE LA COLUMNA

El objetivo tener la mayor

resolución en el menor
tiempo posible
EFICACIA DE LA COLUMNA

Optimización

•Tiempos de retención
•Factor de selectividad

Cambiar la composición de la fase móvil

Cambiar la temperatura de la columna (gases)
Cambiar la naturaleza de la fase estacionaria
Efectos químicos especiales (complejos, etc…)
EFICACIA DE LA COLUMNA

Optimización
•Tiempos de retención
•Factor de selectividad

Cambiar la composición de la fase móvil

Cambiar la temperatura de la columna
Cambiar la naturaleza de la fase estacionaria
Efectos químicos especiales (complejos, etc…)
EFICACIA DE LA COLUMNA

Problema general de la elución: Tiempo de retención vs resolución

EFICACIA DE LA COLUMNA

Aplicaciones

•Cualitativas

•Cuantitativas

Altura de pico

Áreas de los picos

-Cuantificaciones

Curva de calibración (método del patrón interno)