FORMATO GUÍA DE PRÁCTICA DE LABORATORIO

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PRÁCTICA N° 1 virtual

Título de la Práctica: Desarrollo de un método espectrofotométrico

Asignatura: Análisis instrumental. Semestre: V

1. OBJETIVOS.

1.1 General:

1.1.1. Implementar una metodología para la cuantificación de compuestos que

absorben la luz en la región visible.

1.2 Específicos

1.2.1. Familiarizar al estudiante con el uso del espectrofotómetro.

1.2.2. Obtener la longitud de onda máxima de absorción de un compuesto
1.2.3. Realizar curvas de calibración para realizar un análisis cuantitativo del
compuesto.

2. INFORMACIÓN BÁSICA PARA EL TRABAJO EN EL LABORATORIO

En todos los laboratorios de química se requiere por necesidad el establecimiento de

ciertas reglas de conducta y normas de seguridad, de cuyo cumplimiento dependen el
orden en el trabajo, la comodidad y la seguridad de todos los estudiantes y docentes
dentro del laboratorio. La mesa, materiales y equipos utilizados deben quedar limpios y
en su lugar correspondiente antes de salir del laboratorio. Las llaves del gas y del agua
deben quedar debidamente cerradas.

A continuación, se enuncian algunas reglas generales que se deben leer

cuidadosamente:

• Previamente para cualquier práctica de leer las instrucciones dentro de esta guía
de laboratorio y experimento antes de ir al laboratorio.
• Utilizar los implementos para su seguridad definidos en esta práctica de
laboratorio.
• No toque nunca los compuestos químicos con las manos a menos que se le
autorice.
• Para la manipulación de compuestos químicos, utilizar espátulas, pinzas, etc.
• Lavarse las manos antes de salir del laboratorio.
• Deje pasar suficiente tiempo para que se enfríen el vidrio y los objetos calientes
antes de manipularlos.
• Todos los sólidos y papeles que sean desechados se deben arrojar a un
recipiente adecuado para desechos contenedores y caneca de color rojo.
• No arroje al sifón cerillas, papel de filtro o sólidos poco solubles.
• Compruebe cuidadosamente los rótulos de los frascos de reactivos antes de
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usarlos.
• No devuelva nunca a los frascos de origen los sobrantes de compuestos
utilizados, a menos que se le indique.

3. FUNDAMENTO TEÓRICO

Los usos analíticos de la espectrofotometría en la zona visible ultravioleta son muchos y

muy variados. Cuando un compuesto o un ion es capaz de absorber luz, es colocado en
una celda en el espectrofotómetro, por la cual, cierta cantidad de luz monocromática
será absorbida por dicho compuesto y el resto saldrá de la celda para ir a incidir sobre
el fototubo que la detectará. Este comportamiento es aprovechado para determinar la
concentración de un analito.

La ley de Beer, establece que, a una determinada longitud de onda dada, la absorbancia es
proporcional a la concentración de la especie absorbente en la solución, como lo indica la
ecuación 1, por lo que ser usada para realizar análisis cuantitativos por espectrometría UV-
Vis:
Aλ= ελbC (1)

Aλ = Absorbancia a una longitud de onda λ = -log transmitancia

ελ = Absortividad Molar
b = Longitud de la celda en cm.
C = concentración en moles/litros.

4. TRABAJO PREVIO

4.1: ¿Qué información se puede obtener de un espectro de absorción UV-vis?.

4.2. ¿Qué es una curva de calibración?
4.3: ¿Cómo se construye una curva de calibración?

5. ELEMENTOS NECESARIOS PARA LA PRÁCTICA

5.1 Materiales y Equipos

Espectrofotómetro UV-vis
Celdas para el espectrofotómetro
Pipeta

5.2 Reactivos
para-nitrofenol (pNF)
hemoglobina
NADH
Reactivo de Bradford
Colorantes azul y rojo
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5.3 Elementos de Protección Personal

6. DESARROLLO EXPERIMENTAL

La práctica virtual se desarrollará usando dos simuladores, siguiendo las instrucciones

de cada uno. http://biomodel.uah.es/lab/abs/espectro.htm
http://chemcollective.org/chem/scenariobased/foodcolor/

Preparación de las soluciones:

Se debe preparar las soluciones necesarias en cada caso.

Procedimiento:
Preparación de curvas de calibración de acuerdo con los reactivos y condiciones de
cada simulador, posterior a ello, se determinará la concentración de los diferentes
analitos a evaluar.

7. RESULTADOS

7.1. Con los resultados del punto 6, construya las gráficas de la longitud de onda en
función de la absorbancia, determine la longitud de onda de máxima absorción y
compare.
7.2. Construya una gráfica de la absorbancia en función de la concentración.
7.3. Determine la concentración de la muestra problema y reportar en M y %p/p.

8. BIBLIOGRAFÍA

H.F. Walton y J. Reyes. Análisis Químico e Instrumental moderno. Reverté. 1978

Encyclopedia of Industrial Chemical Analysis. Vol. 6. F.D. Snell y C.L. Hilton (eds.).
Interscience Publishers.
H.H. Willard, L.L. Merritt,jr, J.A. Dean. Métodos Instrumentales de Análisis. Compañía
Editorial Continental SA. 1974.