SA - DX.03.IN.56 Instructivo Técnicas Siembra de Muestras Microbiología SYMS 08-05-2020 OBS

Corporativo INSTRUCTIVO
Alimentos y Bebidas
Crédito Social
Educación y Cultura
Gestión Social
Medicamentos
Recreación y Turismo
Salud TÉCNICAS SIEMBRA DE MUESTRAS MICROBIOLOGÍA
Supermercados
Vivienda
APOYOS DIAGNÓSTICOS Y TERAPÉUTICOS

INSTRUCTIVO TÉCNICAS SIEMBRA DE MUESTRAS MICROBIOLOGÍA
Macroproceso: Proceso:
Prestación De Servicios Médicos Apoyos Diagnósticos Y Terapéuticos
Edición:
Código: SA.DX.03.IN.56 Versión: 00
30/04/2020
1. OBJETIVO
Estandarizar las técnicas de siembra de las muestras de Microbiología para la

identificación de microorganismos con el fin de emitir resultados confiables y lograr un
buen aprovechamiento del recurso tecnológico y humano.
2. ALCANCE
Este documento está dirigido a los bacteriólogos y auxiliares de laboratorio clínico que se
encuentran involucrados directamente con el procesamiento de muestras de
Microbiología en los laboratorios de la red de Colsubsidio. Abarca el aislamiento inicial
hasta la revisión del resultado en el sistema Enterprise.
3. Preparado por: Revisado por: Aprobado por:
Elizabeth Diaz Onatra Gina Pérez Diana Sanabria

Bacterióloga Coordinadora Servicios de Jefe (E) Sección de Calidad
Apoyo Diagnóstico y IPS
Terapéutico
DESCRIPCION DEL CONTENIDO
3.1 UROCULTIVO
RESPONSABLE DESCRIPCIÓN DE LA ACTIVIDAD

AUXILIAR DE TOMA DE 1. Condiciones para la toma de la muestra: verificar que
MUESTRAS se haya dado cumplimiento de las condiciones para la
toma de la muestra, de acuerdo con los parámetros
establecidos en el SA.DX.03.MA.05 Manual De Toma
De Muestras De Laboratorio Clínico
2. Revisar correcta identificación de la muestra:
nombres completos, documento de identificación y
fecha de entrega.
3. Realizar registro en Sap, y para las clínicas en el
sistema Enterprise.
4. Etiquetar la muestra y ubicarla en el lado contrario a
la etiqueta de identificación diligenciada por el
paciente de tal manera que se puedan evidenciar las
dos identificaciones.
5. Llevar la muestra al área de procesamiento
Página 2 de 45
Edición:
30/04/2020
directamente cuando la muestra sea recibida en los

servicios de urgencias de la red. Para las tomas de
muestras, en las que se cuenta con un horario de
recolección de muestras, estas deberán permanecer
bajo refrigeración ( 2 – 8 °C) hasta su envío al Centro
Integral de Diagnostico.
PROCESAMIENTO DE LA MUESTRA
1. Pegar el sticker de identificación de la muestra en el
Libro de cultivo de muestras de Microbiología o en
papeleta. Registrar si la muestra corresponde a
micción espontanea o sonda.
2. Verificar si se cuenta previamente con Gram de la
muestra o realizarlo y registrar resultado en libro de
microbiología o en la papeleta
3. Identificar la caja de medio chromoagar con los datos
del paciente (nombre) y el número de ingreso
asignado
BACTERIÓLOGO (A) 4. Con un asa calibrada desechable de 0.001 ul sumergir
verticalmente en la muestra ya que de esta manera se
mantendrá el volumen requerido, es importante
realizar la técnica de manera adecuada ya que de lo
contrario se podrían alterar hasta en un 100% los
recuentos obtenidos (1). realizar estría vertical y
luego realizar estría en zig-zag de acuerdo con la
imagen No. 1 En caso de no disponer de asa
calibrada se podrá dispensar muestra con pipeta de
10 ul en placa de agar y continuar con la técnica de
estriado
Página 3 de 45
Edición:
30/04/2020
5. Realizar lectura a las 24 horas y en caso de obtener

resultado negativo, re incubar por otras 24 horas y en
caso de continuar negativo, realizar reporte
6. Si a las 24 horas se identifica crecimiento bacteriano,
realizar recuento de acuerdo a la escala del método
de KASS e informar en libro de microbiología. (1)(2)
7. Realizar el recuento de colonias el cual debe
multiplicarse por la dilución usada (1000), el cual nos
dará el recuento por unidades formadoras de colonias
/ml.
8. Definir panel de identificación y antibiograma a
realizarse de acuerdo con el tipo de microorganismo
identificado. Y realizar montaje para equipo Phoenix
100
En Clínica infantil Colsubsidio se cuenta con el equipo
BBHL, que permite realizar determinación de
crecimiento bacteriano en 4 horas por técnica de
nefelometría. para ello deberemos:
9. Homogenizar la muestra y dispensar 250 ul en un Vial
para recuento bacteriano.
10. Realizar ingreso a incubación en el equipo BH&L
Página 4 de 45
Edición:
30/04/2020
Previa identificación de la muestra. Seguir los pasos

indicados en el instructivo de uso del equipo.
11. En caso de que la muestra arroje resultado de
crecimiento, se deberá realizar siembra en medio
chromoagar y llevar a incubación a 37°C para realizar
lectura a las 24 horas.
12. Cuando el resultado a las 4 horas sea negativo, este
se deberá informar inmediatamente en el sistema
Enterprise
REPORTE DEL RESULTADO

1. Reportar en los formatos el resultado y colocar en
observaciones cuando la muestra es tomada por
sonda o por micción espontanea.
2. Reportes de floras mixtas:
- Recuento De Colonias :
Flora Mixta. Se Sugiere Tomar Nueva Muestra De Orina
Micción Media Previo Aseo Genital.
- Recuento De Colonias: Flora Mixta Gram Positiva. Se

Sugiere Tomar Nueva Muestra De Orina Micción Media
Previo Aseo Genital.
- Recuento De Colonias: Flora Mixta Gram Positiva Con

Presencia De Levaduras. Se Sugiere Tomar Nueva
Muestra De Orina Micción Media Previo Aseo Genital.
- Recuento De Colonias: Flora Mixta (Tres Tipos

Diferentes De Gérmenes). Se Sugiere Tomar Nueva
Muestra De Orina Micción Media Previo Aseo Genital.
- Flora Mixta Con Presencia De Levaduras. Se Sugiere

Tomar Nueva Muestra De Orina Micción Media Previo
Aseo Genital.
3. Reporte de muestra positiva:

Recuento de colonias, microorganismo identificado y
el antibiograma con MIC.
4. Reporte de muestra Negativa:
Página 5 de 45
Edición:
30/04/2020
Negativo a las 48 horas.
5. Reporte de muestra Negativa en equipo BBH:

Negativo a las 4 horas de incubación.
Técnica Nefelometría
Muestra recibida en el laboratorio: día, mes y año
3.2. SECRECIÓN OCULAR, FARÍNGEA, NASAL Y ÓTICA
RESPONSABL DESCRIPCION DE LA ACTIVIDAD

E
IDENTIFICACIÓN DE LA MUESTRA
1. Realizar la hoja de trabajo correspondiente para cada muestra con

el fin de registrar la trazabilidad del procesamiento, que incluye
datos completos de los pacientes, número de identificación. Edad.
Fecha de nacimiento, servicio en el que se encuentra ubicado el
paciente, tipo de muestra y ubicación anatómica o Realizar
BACTERIÓLO
registro de ingreso de muestra en Libro de Microbiología de cada
GO (A)
una de las Clínicas.
2. Realizar lámina para coloración de Gram, fijar, enviar a
coloración, reportar: reacción leucocitaria y tipo de flora
identificada.
3. Marcar cajas con el nombre completo, tipo de muestra y los
dígitos del código de barras y código del examen.
BACTERIÓLO PROCESAMIENTO DE LA MUESTRA

GO (A)
1. Sembrar en las cajas por agotamiento y llevarlas a incubación, la
caja de agar sangre, Mac Conkey y tioglicolato (Éste último en caso
de ser muestras de secreción ocular) a 35°C - 37°C y el agar
chocolate en incubadora de CO2 (en caso de ser muestras de
secreción ocular, nasal y ótica de niños menores de 5 años). Incubar
18-24 horas.
2. Repicar el tioglicolato a las 24 horas en agar sangre.
3. Leer buscando cualquier microorganismo clínicamente importante
Página 6 de 45
Edición:
30/04/2020
para proceder a realizar su identificación y prueba de sensibilidad.

4. De no observarse crecimiento de microorganismos, dejar incubando
24 horas más.
5. Proceder a leer y hacer el pase al agar correspondiente para realizar
la identificación de los microorganismos y antibiograma en el
Phoenix 100.
6. Si el microorganismo es Neisseria o Haemophilus, se debe realizar
la identificación con lector de fluorescencia
7. En caso de identificarse Haemophilus, se realizara antibiograma
manual por técnica de antibiograma de disco de kirby Bauer
incluyendo los antibióticos y sensibilidades descritas a continuación:
ANTIBIOTICO SIGL SENSIBLE INTERMEDI RESISTENT

A O E
AMPICILINA* AM >22 19-21 <=18
AMPI/SULBA* SAM >=20 <=19
AMOXI/CLAV AMPC >=20 <=19
CEFUROXIME CXM >=20 17-19 <=16
CEFTRIAXONA* CRO >=26
MEROPENEM MEM >=20
IMIPENEM* IMP >=16
TRIMETROPIN- SXT >=16 11-15 <=10
SULFA
CLORANFENICO C >=29 26-28 <=25
L
*Antibiograma para Líquido Cefalorraquídeo
8. En caso de realizar aislamiento e identificación de Neisseria de
muestras de secreción uretral, vaginal o líquidos estériles, la cepa
deberá ser remitida al laboratorio de Salud Pública Distrital con la ficha
de notificación.
El envío deberá realizarse en medio de transporte Amies con Carbón
activado, a temperatura ambiente 18°C – 25°C, y con un tiempo
máximo de envío de 48 horas posteriores al aislamiento.
El protocolo de envío estará acorde a lo descrito en el Manual de
transporte de muestras, Manual de remisiones de la red de laboratorios
de Colsubsidio así como lo descrito en la Guía para la vigilancia por el
laboratorio de Neisseria gonorrheae del Instituto Nacional de salud.
BACTERIÓLO REPORTE DEL RESULTADO
GO (A)
1. Informar el tipo de muestra, el microorganismo identificado, el
antibiograma y en caso de ser solicitado el gram, en los formatos del
sistema Enterprise
Página 7 de 45
Edición:
30/04/2020
Secreción Ocular
Negativo: Negativo a las 72 horas
Flora Normal: Flora normal de piel.
Positivo: Microorganismo identificado y el antibiograma con MIC.
Secreción faríngea
Flora Normal: Flora Faríngea Normal.
Secreción Nasal
Flora Normal: Flora normal de vías respiratorias.
Secreción Ótica
Flora Normal: Flora normal de piel.
3.3. SECRECIÓN VAGINAL Y URETRAL

IDENTIFICACIÓN DE LA MUESTRA
1. Realizar la hoja de trabajo correspondiente para cada

muestra con el fin de registrar la trazabilidad del
procesamiento, que incluye datos completos de los
pacientes, número de identificación. Edad. Fecha de
nacimiento, servicio en el que se encuentra ubicado el
paciente, tipo de muestra y ubicación anatómica o
BACTERIÓLOGO (A)
Realizar registro de ingreso de muestra en Libro de
Microbiología de cada una de las Clínicas.
2. Marcar cajas con el nombre completo, tipo de muestra,
los dígitos del código de barras y código del examen
3. Realizar registro de ingreso de muestra en Libro de
4. Realizar lámina para coloración de Gram
BACTERIÓLOGO (A) PROCESAMIENTO DE LA MUESTRA
1. Sembrar en las cajas por agotamiento y llevarlas a

incubación, la caja de agar sangre a 35°C - 37°C y el
agar chocolate en atmosfera de CO2. Incubar 18-24
Página 8 de 45
Edición:
30/04/2020
horas
2. Leer buscando cualquier microorganismo clínicamente
importante para proceder a realizar su identificación y
prueba de sensibilidad.
3. De no observarse crecimiento de microorganismos,
dejar incubando 24 horas más.
4. Proceder a leer y hacer el pase al agar correspondiente
para realizar la identificación de los microorganismos
y antibiograma en el Phoenix 100.
5. Si el microorganismo es Neisseria, se debe realizar la
identificación con lector de fluorescencia Crystal BBL
y se envía a Secretaría Distrital de Salud.
REPORTE DEL RESULTADO
1. Informar el tipo de muestra, el microorganismo

identificado, el antibiograma y en caso de ser solicitado el
gram, en los formatos del sistema.
Secreción Vaginal
Negativo: Flora Vaginal Normal
BACTERIÓLOGO (A) Positivo: Microorganismo identificado y el antibiograma
con MIC.
Secreción Uretral
Negativo: Flora normal de piel.
Positivo: Microorganismo identificado y el antibiograma
con MIC.
Si se sospecha de Neisseria se reporta: Negativo o
Positivo para Neisseria gonorrheae.
3.4. Cultivo Vaginal-Rectal

E
BACTERIÓL IDENTIFICACIÓN DE LA MUESTRA
OGO (A)
1. Realizar la hoja de trabajo correspondiente para cada muestra con
el fin de registrar la trazabilidad del procesamiento, que incluye
datos completos de los pacientes, número de identificación.
Edad. Fecha de nacimiento, servicio en el que se encuentra
ubicado el paciente, tipo de muestra y ubicación anatómica o
Página 9 de 45
Edición:
30/04/2020
2. Marcar cajas con el nombre completo, tipo de muestra, los

BACTERIÓL PROCESAMIENTO DE LA MUESTRA

OGO (A) 1. Sembrar en cromoagar por agotamiento, incubar a 35°C - 37°C
de 18 – 24 horas.
2. Si se observa la colonia presuntiva de Streptococcus agalactiae se
debe realizar pase a agar sangre por agotamiento y llevarla a
incubación a 35°C - 37°C de 18 – 24 horas.
3. Si se observa
Identificación positiva crecimiento presuntivo de Streptococcus agalactiae
en el agar sangre realizar procedimiento de strepto-card, de no
tener el strepto-card, realizar repique de la cepa aislada en el
cromoagar en agar sangre por Identificación negativa
agotamiento y llevarla a incubación a
35°C - 37°C de 18 – 24 horas.
4. En una caja de agar sangre realizar una estría de la cepa de S.
aureus (ATCC 25923) y perpendicularmente a esta (lo más cerca
posible, sin llegar a tocarla) sembrar la cepa del estreptococo en
estudio. Incubar a 35°C por 24 horas.
5. El sinergismo se observa como un área de β-Hemolisis en forma
de “punta de flecha” en la zona de desarrollo más cercana a
ambas estrías.
Página 10 de 45
Edición:
30/04/2020
BACTERIÓL REPORTE DEL RESULTADO

OGO (A)
Secreción Vaginal - Rectal
Negativo: Negativo para Streptococcus agalactiae
Positivo: Positivo para Streptococcus agalactiae
3.5. Secreción de Glándula de Bartholin
RESPONSABLE DESCRIPCION DE LA ACTIVIDAD

BACTERIOLOGO (A) IDENTIFICACIÓN DE LA MUESTRA

paciente, tipo de muestra y ubicación anatómica o
2. Realizar lamina para coloración de gram con el fin de
evidenciar reacción leucocitaria y tipo de flora
presente, reportar en el sistema Enterprise y registrar
en el libro de microbiología
3. Marcar cajas con el nombre completo, tipo de
muestra, los dígitos del código de barras y código del
examen.
BACTERIOLOGO (A) PROCESAMIENTO DE LA MUESTRA
1. Sembrar en las cajas por agotamiento y llevarlas a

incubación, la caja de agar sangre a 35°C - 37°C y el
agar chocolate en incubadora de CO2. Incubar 18-24
horas. (Si solicitan anaerobiosis sembrar la muestra
en agar sangre por agotamiento, luego se debe
guardar dentro de una bolsa Gaspak y se lleva a
incubación mínimo 48 horas a 35°C - 37°C, si hay
crecimiento se realizará Gram y subcultivo en Agar
sangre en aerobiosis)
2. Leer buscando cualquier microorganismo
clínicamente importante para proceder a realizar su
Página 11 de 45
Edición:
30/04/2020
identificación y prueba de sensibilidad.

3. De no observarse crecimiento de microorganismos,
dejar incubando 24 horas más.
4. Proceder a leer y hacer el pase al agar
correspondiente para realizar la identificación de los
gérmenes y antibiograma en el Phoenix 100.
REPOTE DEL RESULTADO
identificado, el antibiograma y el Gram en los
formatos del sistema.
2. Si es negativo se informará negativo a las 72 horas.
3.6. LÍQUIDOS CEFALORRAQUÍDEO, SINOVIAL, PLEURAL, PERICÁRDICO, LÍQUIDO DE

DIÁLISIS O DE SITIOS NO CONTAMINADOS

AUXILIAR DE
LABORATORIO IDENTIFICACIÓN DE LA MUESTRA
1. Revisar el nombre completo del paciente, Identificación, tipo

de líquido a analizar, hora de toma de la muestra, responsable.
Dicha información debe corresponder con los datos
demográficos del sistema SAP y la orden medica
2. Verificar en el sistema SAP el tipo de análisis a realizar en la
muestra y en caso de identificar ausencia de solicitudes se
deberá realizar llamado al servicio con el fin de verificar el
correcto ingreso de la solicitud
BBBACTERIOL
OGO (A) PROCESAMIENTO DE LA MUESTRA
1. Realizar la hoja de trabajo correspondiente para cada muestra

con el fin de registrar la trazabilidad del procesamiento, que
incluye datos completos de los pacientes, número de
identificación. Edad. Fecha de nacimiento, servicio en el que
Página 12 de 45
Edición:
30/04/2020
se encuentra ubicado el paciente, tipo de muestra y ubicación

anatómica o Realizar registro de ingreso de muestra en Libro
de Microbiología de cada una de las Clínicas.Generalmente
llegan dos tubos, el del volumen más pequeño o a criterio de
la bacterióloga se lleva a la sección de Hematología.
2. El otro tubo se deberá centrifugar por 10 minutos a 2500 rpm
y el sobrenadante se llevará a la sección de Química. El
sedimento será utilizado para la sección de microbiología en
el proceso de siembra y elaboración de lámina para coloración
de Gram
3. Para el caso del Líquido Cefalorraquídeo, y cuando solamente
se reciban 2 tubos con muestra, se deberá utilizar únicamente
uno de los tubos recibidos para la realización del cito químico
y para el procesamiento de la microbiología, ya que el otro
tubo con muestra deberá permanecer estéril y sin destapar en
caso de que infectología solicite el procesamiento de
filmArray meníngeo o para Herpes o Mycobacterium por PCR
5. Sembrar el sedimento en las cajas por agotamiento y llevarlas
a incubación, la caja de agar sangre, Mac Conkey y
tioglicolato, a 35°C - 37°C y el agar chocolate en incubadora
de CO2. Incubar 18-24 horas. (Si solicitan anaerobiosis
sembrar la muestra en agar sangre por agotamiento, luego se
debe guardar dentro de una bolsa Gaspak y se lleva a
incubación mínimo 48 horas a 35°C - 37°C, si hay
crecimiento se realizará Gram y subcultivo en Agar sangre en
aerobiosis).
6. En el tioglicolato colocar aproximadamente 5 uL del
sedimento. Si se prefiere se podrá realizar inoculación del
sedimento en botella de cultivo con el fin de garantizar la
recuperación de microorganismos sensibles y llevar a
incubación en equipo Bacte FX 100
importante para proceder a realizar su identificación y prueba
de sensibilidad.
8. Realizar las láminas para la coloración de Gram, o coloración
de Zielh –Neelsen si es solicitada del sedimento. Para el
L.C.R también realizar examen fresco de tinta china.
9. Incubar las cajas por 72 horas si no hay crecimiento,
adicionalmente se debe repicar el tioglicolato a las 24 horas en
agar sangre.
Página 13 de 45
Edición:
30/04/2020
10. Proceder a leer y hacer el pase al agar correspondiente para

realizar la identificación de los gérmenes y antibiograma en el
Phoenix 100.
Página 14 de 45
Edición:
30/04/2020
 Diagramas elaborados por profesional del área de Microbiología basados

en procedimientos del manual de Microbiología médica. Edwin Lennette.
2016
BACTERIOLOG REPORTE DEL RESULTADO
O (A)
antibiograma, el Gram, Zielh –Neelsen y la tinta china si es
solicitado, en los formatos del sistema.
2. Reportar telefónicamente a médico tratante, a jefe de servicio o
por correo electrónico a la bacterióloga de la sede
correspondiente de manera inmediata, si el Gram inicial o el
cultivo está positivo para iniciar tratamiento lo más pronto
posible.
3. En caso de que el resultado del aislamiento sea Streptococcus
pneumoniae, Streptococcus agalactiae, Salmonella, Listeria,
Neisseria o Haemophilus se envía a la Secretaría de Salud los
cultivos y el reporte en los formatos respectivos de acuerdo a lo
establecido para el envío de muestras al laboratorio de Salud
Publica

5.
Página 15 de 45
Edición:
30/04/2020
3.7. ABSCESOS – OTRO TIPO DE SECRECIONES
RESPONSABLE DESCRIPCION DE LA ACTIVIDAD

BACTERIÓLOG
O (A) IDENTIFICACIÓN DE LA MUESTRA

paciente, tipo de muestra y ubicación anatómica o Realizar
registro de ingreso de muestra en Libro de Microbiología de
cada una de las Clínicas.
3. Realizar lamina para coloración de Gram.
BACTERIÓLOG REPORTE DEL RESULTADO

A
1. Informar el tipo de muestra, el microorganismo identificado,
el antibiograma y el Gram en los formatos del sistema y en la
papeleta o libro de registro de microbiología.
3.8. CULTIVO DE CATÉTER

E
BACTERIÓLO IDENTIFICACIÓN DE LA MUESTRA
GO (A) 1. Realizar la hoja de trabajo correspondiente para cada muestra
identificación. Edad. Fecha de nacimiento, servicio en el que se
encuentra ubicado el paciente, tipo de muestra y ubicación
anatómica o Realizar registro de ingreso de muestra en Libro de
Página 16 de 45
Edición:
30/04/2020

BACTERIOLO PROCESAMIENTO DE LA MUESTRA

GO (A)
1. Utilizar pinzas estériles con el fin de extraer el catéter contenido
en el tubo estéril.
2. Colocarlo sobre una placa de Agar sangre y hacerlo rodar sobre
la placa. (Técnica de Maki)
3. Colocar el catéter en caldo tioglicolato
4. Incubar 18 – 24 horas
5. Realizar lectura de placa de agar en busca de colonias, si se
obtiene un recuento mayor a 15 colonias se considera como
catéter colonizado y se realizara la correspondiente
identificación y pruebas de sensibilidad.
6. En los casos en los que no se observe crecimiento, se re
incubará hasta las 48 y 72 horas
Cultivo semicuantitativo de catéter (técnica de MAKI)

REPORTE DE RESULTADOS

antibiograma y el Gram en los formatos del sistema y en la
3.9. EXPECTORACIÓN RESPIRATORIA

E
GO (A) 1. Realizar la hoja de trabajo correspondiente para cada muestra con el
fin de registrar la trazabilidad del procesamiento, que incluye datos
completos de los pacientes, número de identificación. Edad. Fecha
de nacimiento, servicio en el que se encuentra ubicado el paciente,
tipo de muestra y ubicación anatómica o Realizar registro de ingreso
Página 17 de 45
Edición:
30/04/2020
de muestra en Libro de Microbiología de cada una de las Clínicas.

2. Marcar cajas con el nombre completo, tipo de muestra, los dígitos
del código de barras y código del examen.
3. Realizar lamina para la coloración de Gram

caja de agar sangre y agar Mac Conkey a 35°C - 37°C y el agar
chocolate en incubadora de CO2. Incubar 18-24 horas
2. Leer buscando cualquier microorganismo clínicamente importante
para proceder a realizar su identificación y prueba de sensibilidad.
3. De no observarse crecimiento de microorganismos, dejar incubando
24 horas más.
4. Proceder a leer y hacer el pase al agar correspondiente para realizar
la identificación de los gérmenes y antibiograma en el Phoenix 100.
5. Dejar los cultivos negativos incubando mínimo 24 horas más.
BATERIOLOG REPORTE DEL RESULTADO

O (A)
antibiograma y en caso de ser solicitado el Gram, en los formatos
del sistema.
2. Si se observa flora normal se informará flora normal de vías
respiratorias.
3.10. SECRECIÓN TRAQUEAL – CULTIVO CUANTITATIVO

E
BACTERIOLO IDENTIFICACIÓN DE LA MUESTRA
1. Realizar la hoja de trabajo correspondiente para cada muestra
GO (A) con el fin de registrar la trazabilidad del procesamiento, que
Página 18 de 45
Edición:
30/04/2020

3. Realizar lamina para coloración de Gram.
1. Coloración de Gram: tiene como fin de evaluar la calidad de la
muestra teniendo en cuenta las células epiteliales y los
Polimorfonucleares observados de acuerdo con los criterios
definidos en la tabla:
No. Por campo con objetivo de 10X REALIZAR

CASO
CULTIVO
CELULAS EPITELIALES PMN

1 25 10 NO
2 25 10 a 25 NO
3 25 > 25 NO
4 10 a 25 > 25 SI
5 < 10 > 25 SI
*Tomado de Acta Bioquímica Clínica Latinoamericana ISSN: 0325-2957 vol 46 No. 3
2. En caso de resultar no apta para procesamiento, se deberá
informar y solicitar nueva muestra
3. Si la muestra resulta apta para cultivo se podrá realizar siembra
directa en medios de cultivo A. Sangre, A. Chocolate y Mac
Conkey.
4. En caso de contar con una muestra demasiado viscosa, se podrá
diluir con 2 gotas de un agente mucolítico comercial cuyo
principio activo puede ser Acetilcisteína, Ambroxol o
Carbocisteina y se incubara a 37 °C por 30 min
5. Para siembra de muestra por método semicuantitativo preparar 3
tubos estériles cada uno con 4.95 ml de solución salina estéril.
6. En el tubo numero 1 pipetear 50 ul de muestra y mezclar con la
ayuda de un vortex.
7. Tomar del tubo No. 1, 50 ul de la dilución de la muestra y
dispensar en el tubo No.2, se deberá mezclar con la ayuda del
vortex.
8. Pipetear 500 ul de dilución del tubo número 2 y dispensar en el
tubo No. 3, mezclar con la ayuda de un vortex.
9. Realizar siembra por agotamiento de las diluciones en medio
agar chocolate, Mac Conkey y sangre. Ver gráfica.
10. Realizar recuento de colonias del medio agar chocolate.
Página 19 de 45
Edición:
30/04/2020
 *Tomado de Acta Bioquímica Clínica Latinoamericana ISSN: 0325-2957

vol45 No. 3
BACTERIOLO REPORTE DEL RESULTADO
GO (A) 1. Realizar recuento de colonias del medio agar chocolate y
multiplicar por la dilución. Por ejemplo: si se obtienen 25
colonias en la dilución 105 se reporta, 25 x 10.
antibiograma y el Gram en los formatos del sistema y en la
3. Cuando se identifique recuentos solamente en dilución 102 y
103 con uno o más microorganismos se reportará “Flora normal
de vías respiratorias”
4. Si no se observa crecimiento se reportará “Negativo a las 72
horas de incubación”
Página 20 de 45
Edición:
30/04/2020
3.11. COPROCULTIVO, HISOPADO RECTAL Y FROTIS RECTAL PARA SENSIBILIDAD A

QUINOLONAS.
 Coprocultivo
E
Microbiología de cada una de las Clínicas

GO (A)
1. Sembrar en los medios Hecktoen, XLD, Agar Mac Conkey por
agotamiento. Llevarlas a incubación, de 35°C - 37°C de 18-24
horas.
2. Proceder a su lectura buscando colonias lactosa negativa o con
producción de H2S (Salmonella, Shigella, Yersinia). En el medio
XLD se verán rojas o rosadas o con H2S y en el Hecktoen verde o
azul verdoso o con H2S.
3. En caso de que el resultado del aislamiento sea Salmonella y
Shigella se envía a la Secretaría de Salud los cultivos y el reporte en
los formatos respectivos.

GO (A)
antibiograma y en caso de ser solicitado el Gram, en los formatos
del sistema.
Página 21 de 45
Edición:
30/04/2020
2. Si se observa flora normal se informará Negativo para Salmonella y

Shigella.
3. Si no hay crecimiento de ningún microorganismo, se informará flora
bacteriana inhibida.
 Frotis Rectal para Sensibilidad a Quinolonas

E

GO (A)
1. Sembrar en la caja de agar Mac Conkey por agotamiento y llevarla a
incubación a 35°C - 37°C. Incubar 18-24 horas.
2. Proceder a su lectura buscando colonias de E. coli y hacer el pase a
agar Mac Conkey para realizar la identificación y antibiograma en el
Phoenix 100.
GO (A)
1. Informar el tipo de muestra, el microorganismo identificado y el
antibiograma en los formatos del sistema.
3.13. MUESTRAS DE BIOPSIAS Y TEJIDOS BLANDOS.
Página 22 de 45
Edición:
30/04/2020
E

GA
caja de agar sangre, agar Mac Conkey y tioglicolato a 35°C -
37°C y el agar chocolate en incubadora de CO 2. Incubar 18-24
horas.
importante para proceder a realizar su identificación y prueba de
sensibilidad.
3. De no observarse crecimiento de microorganismos, dejar
incubando 24 horas más.
4. Proceder a leer y hacer el pase al agar correspondiente para
realizar la identificación de los gérmenes y antibiograma en el
Phoenix 100.
5. Dejar los cultivos negativos incubando mínimo 24 horas más.
GA
identificado, el antibiograma y en caso de ser solicitado el
Gram, en los formatos del sistema.
3.14. INVESTIGACIÓN DE HONGOS

E
Página 23 de 45
Edición:
30/04/2020

GO (A)
1. Colocar las escamas, cabello o uñas en el KOH 20% y dejar en
incubación a 37°C, para que las células se destruyan y luego
observar al microscopio (examen directo con KOH).
2. Colocar las escamas, pelo o uñas o secreción afectadas en agar
Saboureaud y en agar Mycosel. Llevarlos a la incubadora de
hongos, por un tiempo de un mes o hasta que aparezca
crecimiento.
3. Si la muestra a procesar es líquido cefalorraquídeo, del
sedimento sembrar Método de Kass.
4. Cada semana se deben revisar las cajas incubadas y realizar el
montaje de las cajas que cumplan el tiempo.
BACTERIÓLO IDENTIFICACIÓN DEL MICROORGANISMO
GO (A)
Técnica de azul de lactofenol: Seleccionar las colonias para realizar las
improntas, con el lado adhesivo de la cinta tocar la parte superior del
hongo. En una lámina portaobjetos colocar una gota de Azul de
Lactofenol y colocar la cinta adhesiva encima de esta.
Microcultivos: Colocar un centímetro de agar glucosa Saboureaud

sobre la superficie de un portaobjeto estéril. Inocular cada ángulo con
una pequeña porción de colonia a estudiar. Calentar suavemente un
cubreobjetos rápidamente a través de la llama de un mechero y
colocarlos inmediatamente sobre la superficie del bloque de agar
inoculado, adhiriéndose firmemente al agar. Colocar el portaobjeto
sobre varillas de vidrio colocadas en una caja de Petri que contenga
papel de filtro humedecido. Tapar la placa e incubar a 30°C de 3-5 días.
Cuando el cultivo esté maduro, retirar suavemente el cubreobjetos y
colocar en otro portaobjeto con azul de lactofenol y observar al
microscopio. También se puede observar el agar del portaobjeto
Página 24 de 45
Edición:
30/04/2020
original, colocar una gota de azul de lacto fenol en el medio que queda
adherido a su superficie, y sobre el montaje colocar un cubre objeto.
Realizar fresco entre lamina y laminilla para observas presencia o no de

Blastoconidias.
Realizar pase a agar sangre, incubar de 35°C - 37°C. Incubar 18-24
horas y Realizar identificación por equipo automatizado PHOENIX 100
utilizando el panel YEAST ID.
GO (A)
1. Cultivo negativo para hongos
2. Informar el tipo de muestra, el microorganismo identificado.
3.15. ESTUDIO DE MYCOBACTERIAS
 Esputo, cepillado y lavado bronco alveolar

E
GA 1. Hacer la papeleta correspondiente, dependiendo si es cultivo o
Basciloscopia.
2. En el caso de la basciloscopias, marcar las láminas con las iniciales
del nombre del paciente, los dígitos del código de barras.
3. En caso de ser un cultivo, marcar las láminas con las iniciales del
nombre del paciente, los dígitos del código de barras y la fecha.
4. Marcar las láminas con lápiz negro, nunca con esfero o marcador ya
que este se puede borrar.
5. Registrar la muestra y cultivo de Mycobacterium en el libro de
registro para tal fin, que se encuentra en el computador de la sección
de microbiología en documentos, microbiología, tbc, tbc del año, tbc
mes.

GA
1. Dividir el aplicador de madera o baja lenguas en dos y con ambos
pedazos se selecciona la partícula útil, tomar la lámina entre los
dedos índice y pulgar, extender la muestra sobre la lámina de modo
uniforme, mezclando y homogenizando, hasta lograr una película o
capa homogénea, que cubra un espacio central de 2cm por 1cm.
2. Descartar el exceso de muestra y el material usado en el guardián o
Página 25 de 45
Edición:
30/04/2020
recipiente de paredes rígidas.

3. Dejar el extendido secando a temperatura ambiente. Evitar la luz
solar directa.
4. La Auxiliar de apoyo diagnostico debe fijar las láminas.
5. La Auxiliar de apoyo diagnostico debe colorear con coloración de
Zielh Neelsen.
6. Realizar registro en el libro de TBC digital, realizando evaluación
de la calidad de la muestra.
CULTIVO DE LA MUESTRA
 Adicionar la muestra al tubo plástico de 50 mL (tubos Falcón),
no deberá exceder de 5 mL.
 Adicionar la solución de MycoPrep (NAOH) en partes iguales al
de la muestra y mezclar por vortex, durante 20 segundos cada 5
minutos por cuatro veces.
 Llenar el tubo de 50 mL con el buffer de fosfatos pH 6.8.
 Concentrar por centrifugación 3.500 gravedades por 30 minutos
a 4°C.
 Cuidadosamente decantar la totalidad del sobrenadante en un
recipiente de paredes rígidas.
 Re suspender el sedimento con 1-3 mL de buffer estéril.
INOCULACIÓN DE LA MUESTRA
 Rotular los tubos MGIT, Lowestein Jensen y portaobjetos.

 Reconstituir el MGIT PANTA con 15 mL de MGIT
Suplemento.
 Adicionar al tubo MGIT 0.8 mL de la mezcla antes de inocular
la muestra.
 Adicionar 0.5 mL de la muestra concentrada al tubo MGIT,
tapar el tubo y mezclar.
 Adicionar 0.2 mL de la muestra concentrada al medio sólido de
Lowestein Jensen.
 Adicionar 0.1 de la muestra concentrada, a la lámina porta objetos.
CARGA DE TUBOS:
 Introducir al instrumento el mismo día de la inoculación.
 Colocar los tubos en una gradilla para prevenir rupturas.
 Escanear el código de barras del tubo MGIT y el código
correspondiente a cada paciente para ingresar al equipo
BACTEC MGIT 960.
Página 26 de 45
Edición:
30/04/2020
CULTIVOS NEGATIVOS:
 El instrumento BACTEC MGIT 960 está programado para
incubar y realizar lecturas de los cultivos durante 52 días, tiempo
en el cual el equipo saca el cultivo negativo, se procede a retirar
el tubo MGIT y se busca el medio sólido Lowestein Jensen para
verificar que no presente crecimiento y reportar el cultivo como
negativo en el sistema Enterprise.
 Reportar en el sistema negativo y finaliza en el Epicenter.
CULTIVOS POSITIVOS:
 El instrumento notificará cuando un cultivo es positivo.
 Retirar la muestra del instrumento y efectuar la tinción de ZN y
Gram.
SI LA TINCIÓN ES NEGATIVA PARA BAAR:
 A partir del tubo MGIT realizar el proceso nuevamente como si

fuera una muestra (proceso de Descontaminación)
 Registrar en el Epicenter como cultivo contaminado.
 Esperar reporte final del instrumento MGIT.
SI LA TINCIÓN ES POSITIVA PARA BAAR:
 Realizar prueba rápida MGIT TBC Identificación Test (TBC ID), si

la prueba es positiva informar en el sistema positivo para complejo
Mycobacterium tuberculosis.
 Solicitar formato único de vigilancia de Mycobacterias al jefe del
programa Promoción y prevención del centro médico procedente del
paciente. Si el paciente presenta factores de riesgo se remite el
cultivo del medio solido (LJ) a el laboratorio de referencia
autorizado.
 Si el test TBC ID es negativo se solicita nueva muestra al paciente
para descartar posible contaminación con Mycobacterias no
tuberculosa; si el nuevo cultivo vuelve a dar positivo para BAAR y
negativo para test TBC ID se procede a realizar subcultivo en medio
solido LJ, y realizar revisión semanal a los tubos originales. Solicitar
Formato único de Vigilancia de Micobacterias a la jefe del programa
de Promoción y Prevención del centro médico procedente del
paciente, remitir el cultivo del medio liquido (TUBO MGIT) y medio
solido (LJ) al laboratorio de salud pública de la Secretaría de Salud.
Página 27 de 45
Edición:
30/04/2020
CULTIVO DE LA MUESTRA EN MEDIO OGAWA KUDOH
Se utiliza este medio como plan de contingencia realizando el siguiente

procedimiento:

Para el cultivo se toma de la muestra la partícula más representativa
y se lleva a de contaminación con 3 ml NaOH al 4 % no más de dos
minutos. Sacar el escobillón sin escurrir y sembrar por
movimientos de rotación y presión. Recordar que toda muestra de
esputo debe ser sembrada mínima una vez así este examen no sea
solicitado.
 Dejar los cultivos por 8 semanas en observación registrando su
lectura semanalmente hasta completar las 8 semanas. Si el cultivo
es negativo reportar en el sistema.
 Si se observa crecimiento en el cultivo, realizar coloración de Zielh
Neelsen: si se observan bacilos acido alcohol resistentes, enviar el
cultivo para tipificación y estudio de sensibilidad a un laboratorio
de referencia autorizado.
BACTERIÓLO LECTURA Y REPORTE DEL RESULTADO
GO (A)
Lectura: Colocar dos gotas de aceite de inmersión, recorrer la lámina
en línea recta de arriba hacia abajo y de izquierda a derecha
Reporte: Los parámetros de informe son los siguientes:

No se observan BAAR en 100 campos: Negativo
1-9 BAAR en 100 campos microscópicos: Número exacto de
BAAR
10-99 BAAR por campo en 100 campos: Positivo 1+
Más de 10 BAAR por campo en 20 campos: Positivo 3+
 Jugo Gástrico
E
BACTERIÓLO  Registrar la muestra y cultivo de Mycobacterium en el libro de
GA registro que se encuentra en el computador de la sección de
microbiología en documentos, microbiología, tbc, tbc del año, tbc
mes.
 Medir con papel indicador el pH de la muestra para verificar si ha
Página 28 de 45
Edición:
30/04/2020
sido neutralizada con PTS al 10%, si no ha sido neutralizada, agregar

PTS al 10% en proporción de 2ml por cada 10 ml de muestra.
 Comprobar nuevamente el pH que debe ser neutro.
 Agitar vigorosamente.
 Dejar en reposo mínimo 2 horas a temperatura ambiente.
 Centrifugar a 3.500 gravedades por 30 minutos en centrifuga
refrigerada.
 Descartar el sobrenadante.
 Realizar baciloscopia al igual que para esputo.
 Descontaminar el sedimento por el método del escobillón de Kudoh
(NAOH Al 4%). (6)
 Sembrar la muestra.
 Dejar en observación e incubación durante 12 semanas registrando su
lectura a la primera, cuarta, octava y doceava semana. Sin embargo si
el resultado da negativo se registra en el sistema a la octava semana.
 Si salen positivos se procede de la misma manera que para la muestra
de Esputo.
 Orina
E
GO (A) registro que se encuentra en el computador de la sección de
mes.
 Colocar 30 ml de orina con 10 ml de PTS 20% por espacio de dos
horas máximo 24 horas.
 Centrifugar a 3.500 gravedades por 30 minutos en centrifuga
refrigerada.
 Homogenizar el sedimento.
 Sembrar de la misma forma que para esputo descontaminando con
NaOH al 4 % no más de dos minutos y sembrar por rotación y
presión.
lectura a la semana, 4 semanas, 8 semanas y 12 semanas. Sin
embargo si el resultado da negativo se registra en el sistema a la
0ctava semana.
 Si salen positivos se procede de la misma manera que para la muestra
de Esputo.
Página 29 de 45
Edición:
30/04/2020
 Líquidos Estériles (cefalorraquídeo, pleural, pericárdico, ascítico y sinovial)

E
GA registro que se encuentra en el computador de la sección de
mes.
 Centrifugar la totalidad de la muestra a 3.500 gravedades durante 30
minutos en centrifuga refrigerada.
 Separar el sobrenadante.
 Sembrar 0.2 ml del sedimento esparciendo el inóculo sobre todo el
plano inclinado del medio Ogawa Kudoh.
0ctava semana.
 Biopsias
E
GO (A) registro que se encuentra en el computador de la sección de
microbiología en DOCUMENTOS, MICROBIOLOGIA, TBC, TBC
DEL AÑO, TBC MES.
 Colocar la biopsia en un mortero.
 Homogenizar completamente con solución salina o agua destilada
estéril en la que viene la biopsia, hasta obtener una suspensión
homogénea libre de partículas gruesas, si es necesario agregar más
solución salina o agua destilada estéril.
 Trasvasar a un tubo tapa rosca estéril.
 Centrifugar a 3.500 gravedad por 30 minutos en centrifuga
refrigerada
Página 30 de 45
Edición:
30/04/2020
 Realizar baciloscopia
 Sembrar de la misma forma que para esputo descontaminando con
NaOH al 4 % no más de dos minutos y sembrar por rotación y
presión en medio Ogawa Kudoh.
0ctava semana.
 Secreciones
E
BACTERIÓLO  Colocar el escobillón en un tubo que contenga 3 ml de NaOH al 4%
GA por 2 minutos máximo
 Sembrar por rotación y presión en medio Ogawa Kudoh.
 Hacer la baciloscopia.
 Incubar a 37ºC
Dejar los cultivos por 12 semanas en observación registrando su lectura
a la semana, 4 semanas, 8 semanas, 12 semanas y 16 semanas. Sin
embargo si el resultado da negativo se registra en el sistema a la octava
semana.
3.16. ESTUDIO DE MYCOBACTERIUM LEPRAE
Para su lectura se buscan las globias o los bacilos y se informa según la escala de Ridley en
pacientes nuevos, y los casos de control con la escala semicuantitativa si fueron leídos con
esta.
Calcular del índice bacilar: número de cruces de cada muestra/la cantidad de muestra
observadas.

E
BACTERIÓLO PROCEDIMIENTO PARA EL CÁLCULO DEL ÍNDICE
GO (A) BACILAR (IB)
ESCALA DE RIDLEY PARA LA LECTURA DE LEPRA

CRUCES No BAAR CAMPOS MICROSCÓPICOS
+ 0,01-0,1 100
2+ 0,1-1 25
Página 31 de 45
Edición:
30/04/2020
3+ 1-10 25
4+ 10-100 25
5+ 100-1000 25
6+ >1000 25
*Tomado de Manual para el Diagnostico Bacteriológico de la Tuberculosis parte 1
Para cada muestra se registrará el número de cruces, de acuerdo con la
escala anterior.
Un Índice bacilar (IB): es el promedio aritmético de las cruces
encontradas en cada una de las muestras leídas. Totalizar el número de
cruces del punto anterior y dividir por el número de muestras leídas.
Ejemplo:
Moco (++)
Linfa del lóbulo derecho (++)
Linfa de lóbulo izquierdo (++)
Linfa de la lesión 1 (+)
Linfa de la lesión 2 (+)
IB = 2+2+2+1+1 = 8/5 = 1,6
El rango del índice bacilar, cuando es positivo, oscila entre 0,2 (1/5)
hasta 3,0 (15/5), si se utilizan cinco muestras, pero puede tener otros
rangos, dependiendo del número de muestras utilizadas.
El índice bacilar es un indicador objetivo para acompañar el
seguimiento de los pacientes multibacilares y evaluar los resultados
del tratamiento.
La clasificación bacteriológica será entonces:

Multibacilares (MB): IB mayor de cero; o Paucibacilares (PB): IB
igual a cero.

GO (A) 1. El resultado debe informarse positivo o negativo, indicando
además número de cruces por muestra y el índice bacilar.
2. Las láminas deben ser remitidas a la Secretaria de Salud,
Laboratorio de Salud pública.
3.17 HEMOCULTIVO
RESPONSABL DESCRIPCIÓN DE LA ACTIVIDAD

E
AUXILIAR DE IDENTIFICACIÓN DE LA MUESTRA.
LABORATOR
IO 1 Verificar la correcta identificación de la muestra y que incluye:
Página 32 de 45
Edición:
30/04/2020
dos nombres, dos apellidos, documento de identificación,

servicio y cama, responsable de toma de la muestra, volumen
de muestra, sitio de toma de la muestra especificando si
corresponde a toma central o periférica, hora de toma de la
muestra.
2 Descargar del sistema SAP por separado cada uno de los
hemocultivos recibidos en el Laboratorio, con el fin de asignar
de manera independiente identificación de código de barras
GO (A) 1. Realizar registro en el libro de Microbiología de cada una de
las botellas de muestras indicando el número de hemocultivo y
anexando el stiker de la botella, también se deberá relacionar
todos los datos de la identificación de la muestra
2. Realizar ingreso de los datos demográficos en el sistema
Epicenter
3. Ingresar las botellas en el módulo de incubación realizando
previamente el escaneo del código de barras de la botella y del
código de barras asignado por Enterprise.
4. Realizar incubación por 5 días a 37°C
BACTERIÓLO REPORTE DE RESULTADOS
GO (A)
1. Negativo a los 5 días de incubación.
2. Cuando un hemocultivo se encuentra positivo, el equipo Bacte
FX dará aviso a través de una alarma audible y lumínica.
3. Extraer la botella del equipo y realizar coloración de gran
4. Reportar de manera inmediata al médico tratante y realizar
registro de morfología observada en el libro de microbiología
así como registrar horas de incubación hasta el momento en
que pita como positivo, y hora y profesional al cual se realiza el
reporte.
5. Realizar repique en medios de cultivo agar sangre y chocolate
y/o Mac Conkey e incubar a 37°C.
6. Realizar lectura a las 18 – 24 horas de incubación y realizar
pruebas de identificación y antibiograma
7. Reportar en los formatos del sistema Enterprise.
3.19. EVALUACIÓN DE LA MUESTRA – MICROSCOPIA
 Secreción Ocular, Faríngea, Nasal y Ótica
Página 33 de 45
Edición:
30/04/2020
RESPONSAB DESCRIPCIÓN DE LA ACTIVIDAD

LE
AUXILIAR Identificación de la muestra
APOYO
DIAGNOSTIC 1. Marcar las láminas que llegan de las Unidades de tomas de
O muestras y dar el número del código de barras.
2. Fijar las láminas y colocarlas en el coloreador Aerospray Gram.
3. Realizar coloración manual para las clínicas, en donde no se
encuentra el coloreador, de acuerdo a lo descrito en el numeral
5.4. coloraciones
BACTERIÓL Procesamiento de la muestra

OGO (A)
1. Colocar una gota de aceite de inmersión sobre la lámina
portaobjetos coloreada y leer en objetivo de 100X.
2. Anotar lo observado en libro de microbiología de clínicas o en
papeleta para el CID, identificando reacción leucocitaria y flora
observada.
3. Transcribir los resultados en el sistema Enterprise.
 Secreción Vaginal

LE
AUXILIAR IDENTIFICACIÓN DE LA MUESTRA
APOYO
DIAGNOSTIC 1. Hacer la papeleta correspondiente o realizar registro en libro de
O microbiología.
2. Marcar los tubos que llegan de las Unidades de tomas de muestras
con Solución salina (Frescos) en orden consecutivo, y de igual
manera las láminas para Gram.
3. Realizar la coloración de gram en el equipo automatizado Aerospray
Gram, o realizar coloración manual.

OGO (A)
1. Marcar un portaobjetos con el numero consecutivo de la muestra
asignado por el sistema
2. Depositar una gota de solución salina del tubo enviado por la
Página 34 de 45
Edición:
30/04/2020
Unidad de toma de muestras sobre un portaobjetos.

3. Colocar sobre la preparación un cubreobjetos.
4. Visualizar al microscopio con los objetivos 10x y 40x. buscando
la presencia de Trichomonas, levaduras o células guía.
5. Reportar siguiendo los parámetros indicados por la secretaria de
salud.
TIPO DE MUESTRA: FLUJO VAGINAL

EXAMEN FRESCO:
Trichomonas vaginalis: negativo o positivo
Estructuras micóticas: ausencia o presencia
Células guía: negativo o positivo
Polimorfonucleares: 1-5 xc, 6-10 xc, >10 xc
6. Para la lectura del Gram Colocar una gota de aceite de inmersión

y leer en objetivo de 100X.
7. Anotar lo observado en la respectiva papeleta.
9. Reportar siguiendo los parámetros indicados por la secretaria de
salud
COLORACIÓN DE GRAM:
1. Reacción leucocitaria: escasa (1-5 xc), moderada (6-10 xc),
abundante( >10xc)
2. Células guía: negativo o positivo
3. Estructuras micóticas: (si se observan, escasas <10xc, moderada
10-20 xc, abundante >20 xc)
4. Flora bacteriana presente: (Informar por cruces)
5. Interpretación del resultado: (Flora Vaginal Normal, Vaginosis
bacteriana
Vaginitis Por Cándida, Vaginitis Inespecífica, Vaginosis
Bacteriana Y Vaginitis Inespecífica, Vaginosis Bacteriana Y
Vaginitis Por Cándida)
 Otro Tipo de Secreciones

LE
Página 35 de 45
Edición:
30/04/2020

APOYO
DIAGNOSTIC 1. Hacer la papeleta correspondiente
O 2. Marcar las láminas que llegan de las Unidades de tomas de
muestras y dar el número consecutivo correspondiente.
3. Colocar la lámina en el coloreador Aerospray Gram.

OGO (A)
2. Anotar lo observado en la respectiva papeleta. Identificando
reacción leucocitaria y tipo de flora observada
 Secreción Uretral

LE
APOYO
DIAGNOSTIC 1. Hacer la papeleta correspondiente.
O 2. Marcar las láminas que llegan de las Unidades de tomas de
muestras y dar el número consecutivo correspondiente.
3. Colocar la lámina en el coloreador Aerospray Gram.

OGO (A)
4. Si existe la presencia de Diplococos Gram negativos, reportar si
estos se encuentran intra o extracelulares e informar con la
siguiente nota: “Se sugiere solicitar cultivo para realizar pruebas
de identificación y de susceptibilidad para Neisseria
gonorrhoeae.”
 KOH

LE
Página 36 de 45
Edición:
30/04/2020

APOYO
DIAGNOSTIC 1. Hacer la papeleta correspondiente.
O 2. Agregar hidróxido de potasio a los tubos con la muestra que llegan de
las Unidades de tomas de muestra.
3. Dejar en la incubadora de 37°C por 24 horas.
OGA
1. Colocar una gota de la suspensión sobre una lámina portaobjetos y
leer en objetivo de 40X.
3.19. Coloraciones
 Coloración Manual de Gram

E
AUXILIAR DE IDENTIFICACIÓN DE LA MUESTRA
LABORATOR
IO 1. Marcar las láminas con las iniciales del nombre del paciente, tipo
de muestra y los dígitos del código de barras.
2. Marcar las láminas con lápiz de cera o lápiz negro, nunca con
esfero o marcador ya que este se puede borrar.
AUXILIAR DE PROCESAMIENTO DE LA MUESTRA
LABORATOR
IO 1. Fijar las láminas. Y realizar procedimiento junto con la lámina de
control de coloraciones
2. Agregar el Violeta de Gram por un minuto.
3. Enjuagar la lámina con agua y escurrir.
4. Agregar el Lugol de Gram por un minuto.
6. Agregar alcohol-acetona por 30 segundos.
Página 37 de 45
Edición:
30/04/2020

8. Colocar Fucsina o Safranina por 30 segundos.
10. Dejar secar.
11. Realizar diariamente coloración de control positivo y control
negativo.
BACTERIÓLO 1. Leer al microscopio e informar de acuerdo a los formatos
GO (A) preestablecidos para cada muestra y del control de calidad
2. Los tiempos de la coloración estarán sujetos a modificaciones por
parte de la bacterióloga de acuerdo al control de calidad realizado o
por cambios de colorantes. Estos controles se realizarán con cepas
ATCC de gérmenes Gram positivos y Gram negativos.
AUXILIAR DE ACTIVIDADES GENERALES
LABORATOR
IO 1. Lavar periódicamente los frascos. (Una vez por mes)
2. Filtrar los colorantes. (Una vez por mes).
3. Realizar control de calidad a la coloración diariamente.
 Coloración De Zielh Neelsen Manual

E
AUXILIAR DE IDENTIFICACIÓN DE LA MUESTRA
LABORATOR
IO 1. Marcar las láminas con las iniciales del nombre del paciente, tipo
de muestra y los dígitos del código de barras.
2. Marcar las láminas con lápiz de cera o lápiz negro, nunca con
esfero o marcador ya que este se puede borrar.
AUXILIAR DE PROCESAMIENTO DE LA MUESTRA
LABORATOR
IO Para realizar esta coloración es indispensable que la auxiliar de
apoyo diagnostico use el tapabocas N95.
1. Fijar las láminas. Realizar el procedimiento junto con la lámina de

control de coloración del día.
2. Flamear los bordes de las láminas y no colocar muestra en los
mismos bordes.
3. Colocar las láminas fijadas de los pacientes, control positivo y
negativo, sobre el soporte con el extendido hacia arriba, separadas
y con el número de identificación orientado hacia el operador y
Página 38 de 45
Edición:
30/04/2020
conservando orden numérico.

4. Cubrir la totalidad del extendido con Fucsina de Zielh Neelsen.
5. Calentar suavemente con la llama de un mechero, pasándolo por
debajo de las láminas hasta que se produzca emisión de vapores,
hasta completar 5 minutos (no recalentar, no dejar hervir, ni dejar
secar, máximo tres emisiones de vapores).
6. Dejar enfriar y lavar suavemente con agua de chorro
7. Cubrir el extendido con alcohol ácido durante un minuto o hasta
completar decoloración y lavar suavemente con agua de chorro.
8. Cubrir el extendido decolorado con azul del metileno por tres
minutos.
9. Lavar suavemente con agua de chorro.
10. Limpiar La parte posterior de la lámina, para retirar residuos de
colorante que interfieran con la lectura.
11. Dejar secar a temperatura ambiente en posición vertical. No dejar
secar las láminas al sol ni a la luz directa.
BACTERIÓLO Realizar la lectura con objetivo 100x recorriendo la lámina en
GO (A) zigzag, observando como mínimo 100 campos microscópicos
GO (A)
1. Los parámetros de informe son los siguientes:
No se observan BAAR en 100 campos: Negativo
1-9 BAAR en 100 campos microscópicos: Número exacto de
BAAR
Más de 10 BAAR por campo en 20 campos: Positivo 3+
3.20. Sistemas de Identificación bacteriana

 Sistema Crystal

E
BACTERIOLO 1. Saque las tapas de la envoltura. Deseche el desecante. Una vez
Página 39 de 45
Edición:
30/04/2020
GO (A) sacadas de la envoltura, las tapas cubiertas deben usarse dentro

de 1 h.
2. Tome un tubo de fluido de inóculo y anote el número de la
muestra del paciente en la etiqueta. con un palillo de madera o
un asa plástica desechable tome varias colonias de la misma
morfología de uno de los medios recomendados
3. Ponga las colonias en suspensión en un tubo BBL Crystal
ANR, GP, RGP, N/H ID de fluido de inóculo.
4. Vuelva a tapar el tubo y agite en un vórtex por 10–15 seg. La
turbidez deberá ser equivalente a un patrón Mc Farland Nº 0,5.
Si la concentración de la suspensión del inóculo es mayor que
el patrón Mc Farland recomendado, se recomienda seguir uno
de los siguientes pasos:
5. Tome un panel y anote el número del paciente en el costado.
6. Vierta todo el contenido del tubo de fluido de inóculo en el área
demarcada del panel
7. Tome el panel con ambas manos, balanceándola suavemente
hasta que los pocillos se llenen con el inóculo. Balancee la base
nuevamente para escurrir el exceso de líquido de vuelta al área
demarcada, y ponga la base sobre la mesa.
8. Alinee la tapa de modo que el extremo donde se encuentra la
inscripción esté sobre el área demarcada del panel.
9. Presione hacia abajo hasta sentir una leve resistencia. Ponga los
pulgares a cada lado del borde de la tapa en el medio del panel
y presione hacia abajo simultáneamente hasta que la tapa se
asiente en su lugar (se escucharán dos “golpecitos”).
 Sistema Phoenix

E
BACTERIOLO 1. Confirme la reacción del aislado a la tinción Gram.
GA 2. Saque el panel apropiado de la bolsa. Utilice el panel en el
plazo de 2 horas tras sacarlo de la bolsa.
3 Coloque el panel en la Estación de Inoculación con los orificios
de inoculación hacia arriba
4 Etiquete el tubo de caldo para ID Phoenix con el número de la
muestra del paciente. Utilizando una técnica aséptica, tome del
medio colonias de la misma morfología, con la punta de un asa
de siembra.
Página 40 de 45
Edición:
30/04/2020
5 Inocule las colonias en el caldo para ID Phoenix (4,5 mL).

6 Coloque el tapón del tubo y póngalo en un agitador durante
cinco segundos.
7 Deje pasar aproximadamente diez segundos para que las
burbujas de aire alcancen la superficie.
8 Introduzca el tubo tan pronto como sea posible en el
nefelómetro
9 Lea el tubo para confirmar una solución 0,5 Mc Farland (0,5 –
0,6 es aceptable). Si la densidad de organismos es baja, puede
añadir más colonias del aislado. Vuelva a agitar la muestra y
léala de nuevo. Se debe utilizar la suspensión bacteriana
estandarizada en caldo ID en el plazo de 60 minutos después de
su preparación.
10 Etiquete el tubo de caldo AST Phoenix (8,0 mL) con el número
de la muestra del paciente. Añada por caída libre una gota de la
solución indicadora para AST al tubo con caldo AST. Invierta
el tubo para mezclar. NO UTILICE UN AGITADOR. NO
inocule en exceso el caldo y NO llene en exceso el panel. Si
los tubos están expuestos a la luz, se deben utilizar en el plazo
de 2 horas después de añadir la Solución Indicadora para AST.
11 Utilizando una pipeta, transfiera 25 μL de la suspensión
bacteriana estandarizada desde el tubo de ID al tubo con el
caldo AST. Se deben inocular los paneles en el plazo de 30
minutos desde el momento de la preparación del inóculo para
AST.
12 Tape el tubo para AST con un tapón e inviértalo varias veces
para mezclarlo.
13 Deje pasar algunos segundos para que las burbujas de aire
alcancen la superficie.
14 Vierta el inóculo del tubo para ID en el puerto de llenado en el
lado del panel destinado para ID. Deje que el líquido baje por
las vías antes de moverlo.
15 Vierta el inóculo del tubo para AST en el puerto de llenado en
el lado destinado del panel para AST. Deje que el líquido baje
por las vías antes de moverlo.
16 Asegure completamente el cierre de resorte del panel.
Asegúrese de que el cierre esté completamente plano.
17 Inspeccione visualmente los paneles para asegurarse que cada
uno de los pocillos esté lleno. Mire a ambos lados del panel.
Asegúrese de que los pocillos no se llenen en exceso. Si alguno
de los pocillos no está lleno o se ha llenado en exceso, vuelva a
inocular un nuevo panel.
Página 41 de 45
Edición:
30/04/2020
18 Se deben cargar los paneles en el instrumento Phoenix dentro

de los 30 minutos siguientes a su inoculación.
3.21. Antibiograma de disco

LE
BACTERIÓL PRUEBA DE SENSIBILIDAD
OGO (A)
1. Preparar el inóculo en un caldo o solución Salina a partir de
colonias aisladas seleccionadas de una caja de agar de 18-24
horas de incubación.
2. Ajustar la turbidez a un Mc Farland de 0,5
3. Utilizar la suspensión dentro de los 15 minutos después de
ajustar la turbidez.
4. Realizar siembra masiva con escobillón sobre una placa de agar
mueller hinton
5. Enfrentar la bacteria a ceftazidima, cefotaxima, ceftriaxona y
aztreonam, en método de difusión de disco o MIC basado en los
resultados obtenidos y de acuerdo con los parámetros de
interpretación del CLSI, el aislamiento que presente resistencia
franca a uno o todos los antibióticos utilizados, será sospechoso
de BLEES.
6. Realizar lectura de halo de inhibición a las 18 -24 horas de
incubación
 Test de Hodge
Fundamento: permite inferir la producción de carbapenemasas en

Enterobacteriáceas mediante la reducción en la zona de diámetro de un
carbapenem indicador (Ertapenem o Meropenem) y una cepa multi-
sensible: E. coli ATCC 25922.
Procedimiento:
1. Prepare una suspensión 0.5 Mc Farland de la cepa E. Coli
ATCC 25922 en solución salina estéril.
2. Realice una dilución 1:10, tomando 50ul de la suspensión
anterior y adicionándolos a 450 ul de solución salina estéril.
Página 42 de 45
Edición:
30/04/2020
3. Haga siembra masiva con hisopo de

algodón de la suspensión diluida 1:10 en
una placa de agar Mueller Hinton.
Permita que se seque el agar (3-5 min).
4. Con pinzas estériles coloque 1 disco de
Ertapenem o Meropenem de 10ug en el
centro de la placa de agar.
5. Con asa de argolla, trace una línea con el
microorganismo problema desde el borde del sensidisco hasta el
borde de la placa de Petri.
6. Utilice siempre controles positivos y negativos para facilitar la
lectura del test.
7. Incube la placa a 35°C por 16-20h
8. Interpretación de Resultados: Busque el crecimiento en forma
de trébol del control positivo y de la cepa problema. Se
observará un adentramiento de la cepa ATCC E.coli 25922
hacia el disco del carbapenem indicador.
 Test de Sinergia con Ácido

Borónico (APB)
Fundamento: puede inferirse la presencia de

carbapenemasas tipo Serina (KPC like)
mediante el uso del inhibidor: Acido Borónico.
No debe emplearse en Pseudomonas
Procedimiento:
1. Realice un antibiograma de Kirby-

Bauer con el microorganismo
problema.
2. Aplique sobre la superficie del agar
Mueller Hinton los sensidiscos de
Imipenem, Ceftazidime y Acido Borónico, dejando 15mm de
distancia de centro a centro como se observa en la imagen.
3. Incube por 16-20h a 35°C
4. Busque la sinergia entre los sensidiscos que se evidenciará
como una deformidad en los halos de inhibición simulando la
Página 43 de 45
Edición:
30/04/2020
forma de un huevo.
5. Registre los datos y realice el reporte al médico.
cepas de control de calidad interno para test de hodge y sinergia con

ácido borónico:
Klebsiella pneumoniae ATCC BAA 1705 (+)

Klebsiella pneumoniae ATCC BAA 1706 (-)
 Test de Sinergia con EDTA-

SMA
Fundamento: puede inferirse la presencia de

carbapenemasas tipo Metalo-enzima (VIM,
NDM, etc.) mediante el uso del inhibidor:
EDTA (Ácido etilendiamina tetracético) y SMA
(Mercapto Acetato de sodio).
Puede emplearse para Pseudomonas y Enterobacteriáceas.
Procedimiento:
1. Realice un antibiograma de Kirby-Bauer con el microorganismo

problema.
2. Aplique sobre la superficie del agar Mueller Hinton los
sensidiscos de Imipenem, Meropenem y EDTA dejando 15mm
de distancia de centro a centro como se observa en la imagen.
3. Incube por 16-20h a 35°C
4. Busque la sinergia entre los sensidiscos que se evidenciará
como una deformidad en los halos de inhibición simulando la
forma de un huevo.
5. Registre los datos y realice el reporte al MD.
Página 44 de 45
Edición:
30/04/2020
Cepas de control de Calidad interno para Test de Sinergia con

EDTA/SMA:
Klebsiella pneumoniae ATCC BAA 2146 (+)

Klebsiella pneumoniae ATCC BAA 1705 (- )
REVISIÓN DE RESULTADOS
Revisar los resultados correlacionando con historia clínica e

BACTERIOLOGA
histórico del paciente, sexo, edad y tipo de muestra
procesada.
Página 45 de 45

SA - DX.03.IN.56 Instructivo Técnicas Siembra de Muestras Microbiología SYMS 08-05-2020 OBS

Hochgeladen von

Dokumentinformationen

Originalbeschreibung:

Originaltitel

Copyright

Verfügbare Formate

Dieses Dokument teilen

Dokument teilen oder einbetten

Freigabeoptionen

Stufen Sie dieses Dokument als nützlich ein?

Sind diese Inhalte unangemessen?

Copyright:

Verfügbare Formate

SA - DX.03.IN.56 Instructivo Técnicas Siembra de Muestras Microbiología SYMS 08-05-2020 OBS

Hochgeladen von

Copyright:

Verfügbare Formate

Corporativo INSTRUCTIVO

APOYOS DIAGNÓSTICOS Y TERAPÉUTICOS

Estandarizar las técnicas de siembra de las muestras de Microbiología para la

3. Preparado por: Revisado por: Aprobado por:

Elizabeth Diaz Onatra Gina Pérez Diana Sanabria

RESPONSABLE DESCRIPCIÓN DE LA ACTIVIDAD

directamente cuando la muestra sea recibida en los

5. Realizar lectura a las 24 horas y en caso de obtener

Previa identificación de la muestra. Seguir los pasos

REPORTE DEL RESULTADO

- Recuento De Colonias: Flora Mixta Gram Positiva. Se

- Recuento De Colonias: Flora Mixta Gram Positiva Con

- Recuento De Colonias: Flora Mixta (Tres Tipos

- Flora Mixta Con Presencia De Levaduras. Se Sugiere

3. Reporte de muestra positiva:

Negativo a las 48 horas.

5. Reporte de muestra Negativa en equipo BBH:

3.2. SECRECIÓN OCULAR, FARÍNGEA, NASAL Y ÓTICA

RESPONSABL DESCRIPCION DE LA ACTIVIDAD

1. Realizar la hoja de trabajo correspondiente para cada muestra con

BACTERIÓLO PROCESAMIENTO DE LA MUESTRA

para proceder a realizar su identificación y prueba de sensibilidad.

ANTIBIOTICO SIGL SENSIBLE INTERMEDI RESISTENT

3.3. SECRECIÓN VAGINAL Y URETRAL

RESPONSABLE DESCRIPCIÓN DE LA ACTIVIDAD

1. Realizar la hoja de trabajo correspondiente para cada

BACTERIÓLOGO (A) PROCESAMIENTO DE LA MUESTRA

1. Sembrar en las cajas por agotamiento y llevarlas a

1. Informar el tipo de muestra, el microorganismo

3.4. Cultivo Vaginal-Rectal

RESPONSABL DESCRIPCION DE LA ACTIVIDAD

2. Marcar cajas con el nombre completo, tipo de muestra, los

BACTERIÓL PROCESAMIENTO DE LA MUESTRA

BACTERIÓL REPORTE DEL RESULTADO

3.5. Secreción de Glándula de Bartholin

RESPONSABLE DESCRIPCION DE LA ACTIVIDAD

1. Realizar la hoja de trabajo correspondiente para cada

BACTERIOLOGO (A) PROCESAMIENTO DE LA MUESTRA

1. Sembrar en las cajas por agotamiento y llevarlas a

identificación y prueba de sensibilidad.

3.6. LÍQUIDOS CEFALORRAQUÍDEO, SINOVIAL, PLEURAL, PERICÁRDICO, LÍQUIDO DE

RESPONSABLE DESCRIPCIÓN DE LA ACTIVIDAD

1. Revisar el nombre completo del paciente, Identificación, tipo

1. Realizar la hoja de trabajo correspondiente para cada muestra

se encuentra ubicado el paciente, tipo de muestra y ubicación

10. Proceder a leer y hacer el pase al agar correspondiente para

 Diagramas elaborados por profesional del área de Microbiología basados

4. Si es negativo se informará negativo a las 72 horas.

3.7. ABSCESOS – OTRO TIPO DE SECRECIONES

RESPONSABLE DESCRIPCION DE LA ACTIVIDAD

1. Realizar la hoja de trabajo correspondiente para cada

BACTERIÓLOG REPORTE DEL RESULTADO

3.8. CULTIVO DE CATÉTER

RESPONSABL DESCRIPCION DE LA ACTIVIDAD

Microbiología de cada una de las Clínicas.

BACTERIOLO PROCESAMIENTO DE LA MUESTRA

Cultivo semicuantitativo de catéter (técnica de MAKI)

1. Informar el tipo de muestra, el microorganismo identificado, el

3.9. EXPECTORACIÓN RESPIRATORIA

RESPONSABL DESCRIPCION DE LA ACTIVIDAD

de muestra en Libro de Microbiología de cada una de las Clínicas.

1. Sembrar en las cajas por agotamiento y llevarlas a incubación, la