Beruflich Dokumente
Kultur Dokumente
Fonte de proteína
DETERMINAR CONCENTRAÇÃO DE
PROTEÍNAS
SOLUBILIDADE
Solubilidade
“Salting out”
“Salting in”
Ribonucleasa
200
Seroalbúmina
160
120 IgG
Tiroglobulina
80
40
3 4 5 6
10 10 10 10
Peso molecular
GEL FILTRAÇÃO
Purificação de proteínas
Cromatografia
Equipamentos, soluções e resinas
• Soluções tampão de pH
• Coluna de vidro com filtro
• Bomba peristáltica
• Coletor de frações
Espectrofotômetros
GEL FILTRAÇÃO
HOCH2
HOCH2
O O
H
O
O
OH H
O OH H H O
H CH2
H OH H OH O Dextrano
H H
Celulosa
n OH H O
OH
CH2
H OH O
H H
HOCH2
Agarosa
O OH H
OH O
O OH
H H OH
O H n
H
CH2 O
OH
O O OH
H
H H
n
TROCADOR CATIÔNICO
O
CH2 CH2 S O-
CH2 COO-
O
Carboximetil (CM) Sulfoetil (SE)
O O
CH2 CH2 CH2 S O- O P O-
O O-
CH3
CH2
CH2 CH2 N+ CH2 CHOH CH3
CH2
Dietil 2-hidroxipropil aminoetil (QAE)
CH3
TROCA-IÔNICA
- -
+ - + -
+ - -
+ + -
- +
- - + - - -
+
- +
- - -
- -- -
+
+ - +
- - - +
+ +
- + - -
+ - + - -
- - + - - - -
+ - + - - -
+ - + - -
+ -
+ - + -
+ -
-
Proteínas Maiores [SAL]
ligadas Baixas [SAL] Desprendem-se
ao trocador Desprendem-se as proteínas mais
iônico as proteínas menos eletronegativas
eletronegativas
Bomba peristáltica
Generador
de gradiente
Cromatografia Columna
Resina de
intercambio
de troca- iônica iónico
Colector de
fracciones
AFINIDADE
Baseia-se na AFINIDADE pelo suporte acoplado à resina
1 2 3
Cromatografia
de afinidade
SDS-PAGE
ELETROFORESE
EM GEL DE
POLIACRILAMIDA
COM SDS
ELETROFORESE EM GEL DE POLIACRILAMIDA COM SDS
SDS-PAGE
+
Coloração com Coomassie Blue
Coloração por prata