UNIVERSIDAD NACIONAL JORGE BASADRE GROHMANN

FACULTAD DE CIENCIAS

ESCUELA PROFESIONAL DE BIOLOGIA-MICROBIOLOGIA

CALDOS FECALES (FK Y SF) PARA ENTEROCOCOS

CURSO:

MICROBIOLOGIA DE ALIMENTOS

PRESENTADO POR:

Fabricio Frisancho Cornejo 2014-118021

TACNA-PERU

2019
 I. PRINCIPIO
Determinar la capacidad de un organismo de crecer en un medio inhibidor y
fermentar un carbohidrato produciendo un cambio de color relacionado con el
pH.

II. OBJETIVO
A. El caldo FK para diferenciar todas las especies de Streptococcus
pertenecientes al grupo D, de otras especies de Streptococcus que no
pertenezcan al grupo mencionado.
1 Especies de Streptococcus del grupo D (enterococos y no
enterococos) (+).
2 Otras especies de Streptococcus, que no son del grupo D (-).
B. El caldo SF para diferenciar los enterococos del grupo D (estreptococos)
de los no enterococos del grupo D y otras especies de Streptococcus
que no son del grupo D.
1. Especies de Streptococcus enterococicos del grupo D (+).
2. Especies de Streptococcus no enterococicos del grupo D (-).
3. Otras especies de Streptococcus, que no son del grupo D (-).

III. BASES BIOQUIMICAS

Todas las bacterias aeróbicas obtienen su energía de la respiración, proceso
responsable de la oxidación de diversos sustratos. El oxígeno molecular oxida
un sustrato con la intervención del sistema de transporte de electrones. Cuando
existen condiciones aeróbicas, el oxígeno es el aceptor de hidrogeno final,
produciendo con el agua o peróxido de hidrogeno, según la especies
bacteriana y su sistema enzimático.

Por lo general el sistema citocromo solo se encuentra presente en organismos

aeróbicos, lo que les hace capaces de utilizar oxigeno como un aceptor de
hidrogeno final para reducir el oxígeno molecular en peróxido de hidrogeno, el
ultimo enlace de la cadena de la respiración aeróbica.

Castor y chance demostraron por medio de métodos fotoquímicos que existen

cuatro pigmentos bacterianos que se sabe que actúan como enzimas
respiratorias citrocromooxidasas terminales: Citocromo alfa uno, citocromo alfa
dos y citocromo alfa 3, y un pigmento que se une al monóxido de carbono (CO-
ligadura) denominado citocromo 0. Los diversos citocromos son pigmentos
respiratorios que contienen compuestos de ferroporfirina.

Los caldos fecales, FK y SF, contienen un inhibidor, la azida sódica. La azida

química, en altas concentraciones, inhibe la enzima citocromooxidasa en la
cadena de transporte de electrones, donde el transporte se une a la síntesis del
ATP (oxidaciones biológicas).

Sin embargo, no hay inhibición celular cuando el sistema de transporte de

electrones no se une a la fosforilacion.

La inhibición azidica se produce cuando el citocromo alfa 3 de la cadena

respiratoria se combina en su forma férrica (Fe +++) con la azida, enlazando el
metal del grupo prostético e impidiendo la reacción del metal con el oxígeno
molecular. Harrow y Mazur afirman que la combinación con la azida puede
hacerse a través de la porción prostética hem del citocromo alfa 3, o el cobre
que se encuentra en alfa 3, o ambos a la vez. Este enlace del oxígeno
molecular inhibe la enzima citocromooxidasa dando como resultado la perdida
de la transmisión de electrones a través de la cadena oxidativa del sistema
respiratorio al oxígeno. La distribución de los diversos citocromos varía con
cada especie bacteriana; algunos microorganismos poseen solo una oxidasa
mientras que otros pueden producir dos o tres.

La azida sódica ejerce un efecto bacteriostático sobre los organismos

gramnegativos, aunque permite el crecimiento de bacterias Gram positivas. Los
enterococos (especies de Streptococcus del grupo D) son bacterias Gram
positivas, que carecen de un sistema citocromo y del ciclo del ácido
tricarboxilico; de allí que sean capaces de crecer en presencia de la azida
sódica inhibidora. La degradación del hidrato de carbono se produce a través
del ciclo de la hexosa difosfato, dando una reacción acida en el medio SF o FK
con azida sódica e hidratos de carbono.

IV. MEDIOS EMPLEADOS

A. Dos opciones.
1. Caldo de Streptoccous faecalis, pH: 6,9 (caldo SF)
 (a) Ingredientes.
1 Triptona……….20 g
2 Dextrosa (glucosa)………..5 g
3 Fosfato dipotasico (K2HPO4)….4 g
4 Fosfato monopotasico (KH2PO4)…1.5 g
5 Azida sódica (NaNa)…………0.5 g
6 Cloruro de sodio (ClNa)………5 g
7 Purpura de bromocresol……0.032 g
8 Agua destilada……………..1000 ml
(b) Indicador del PH: Purpura de bromocresol
1 Acido: color amarillo, pH: 5,2.
2 Alcalino: color purpura, pH: 6,8.
3 Medio no inoculado: pH, 6,9; color purpura.
(c) Existen productos comerciales
1 DIFCO
2 BBL
(d) Método de preparación
1 Pesar con precisión las cantidades, como se indica
en el prospecto.
2 Rehidratar con agua destilada o desmineralizada.
3 Calentar suavemente hasta disolución
4 Distribuir aproximadamente 4 a 5 ml por tubo.
(e) Método de esterilización.
1 Autoclave
2 121°C, 15 libras, 15 min.
(f) Enfriar antes de su empleo y refrigerar para su conservación
(4-10°C)
(g) Inoculación: crecimiento de un cultivo puro de 18 a 24 horas.
(h) Incubación.
1 Mínimo absoluto: 35° C. 24 a 48 horas.
2 Recomendada: 45° C, 24 a 48 horas.

El medio SF SE PREPARA DE ACUERDO CON LA FORMULA DE Hajna y

Perry. Todos los organismos coliformes y gramnegativos son inhibidos por la
azida que se encuentra en el caldo SF, pero las especies de Streptococcus del
grupo D son detectadas por la presencia de crecimiento junto con la
fermentación de la glucosa, lo que da un pH ácido y un cambio de color.

Según Hajna y Perry, el caldo SF es selectivo para el crecimiento de

Streptococcus del grupo D únicamente, cuando es incubado a 45,5° C; otras
especies de Streptococcus son inhibidas. Facklan y Moody hallaron que con la
incubación a 35° C algunas cepas del grupo D crecían en el caldo SF, lo que
no se hubiera producido a 45,5 °C como lo sugieren Hajna y Perry. Sin
embargo, la incubación a 45°C no es factible en un laboratorio común, ya que
la mayoría de las incubadoras tienen una temperatura entre 35° y 37° C. Por lo
tanto, la presencia de una reacción acida y un cambio de color en el caldo SF
es prueba presuntiva, para la identificación de las especies de Streptococcus
del grupo D. La prueba SF no es por si sola suficiente para determinar
presuntivamente la presencia de todos los estreptococos del grupo D y junto
con ella se deberán efectuar otras (crecimiento en ClNa al 6,5%, crecimiento en
bilis 40%, crecimiento en caldo FK, crecimiento a 10 y 45°C, y la producción de
ácido a partir de esculina).

Algunas especies del grupo D se desarrollan en caldo SF, mientras que todas
las especies de Streptococcus del grupo D muestran crecimiento en caldo KF.

2. Caldo estreptocócico fecal de kenner, pH: 7,2 (caldo FK).

(a) Ingredientes
1 Peptona (proteosa 3 o polipeptona)…….10 g
2 Extracto de levadura………………………10 g
3 Cloruro de sodio (ClNa)…………………..5 g
4 Glicerofosfato de sodio……………………10 g
5 Carbonato de sodio (opcional)……………0,636 g
6 Maltosa………………………………………20 g
7 Lactosa……………………………………….1 g
8 Azida sódica (NaNa)………………………...0,4 g
9 Rojo fenol o purpura bromocresol………0,018 g
10 Agua destilada…………………………..1000 ml
(b) Indicadores del pH
 Rojo fenol
 1) Acido: color amarillo, pH: 6.
2) Alcalino: color rojo rosado, pH: 7,6
3) Medio no inoculado: pH: 7,2; color castaño
rojizo.
 Purpura de bromocresol
1) Acido: color amarillo, pH: 5,2
2) Alcalino: color purpura. pH: 6,8.
3) Medio no inoculado: pH: 7,2; Color purpura
(c) Existen productos en el comercio
1 Difco.
 Contiene purpura de bromocresol como
indicador del pH.
 No contiene carbonato de sodio.
2 BBI
 Contiene rojo de fenol como indicador del pH.
 Contiene carbonato de sodio.
(d) Método de preparación.
1 Pesar las cantidades con exactitud como se
indica en el prospecto. Los productos de
distintos laboratorios pueden variar
ligeramente.
2 Rehidratar con agua destilada o
desmineralizada.
3 Calentar suavemente hasta disolución.
4 Distribuir en tubos, aproximadamente 4 a 5 ml
por tubo.
(e) Método de esterilización
1 Autoclave
2 121°C, 15 libras, 15 min
(f) Dejar enfriar antes de su empleo y refrigerar para su
conservación (4-10°C).
(g) Inoculación: crecimiento de un cultivo puro 18 a 24 horas.
(h) Incubación: 35° C 24 a 48 horas.
El caldo estreptocócico FK se prepara de acuerdo con la fórmula de kenner y
col., quienes recomiendan que el pH del medio este entre 7,2 y 7,3 y que
contenga como ingrediente carbonato de sodio.

En oposición al caldo SF que incorpora un solo hidrato de carbono, glucosa

(dextrosa), el caldo FK emplea dos, maltosa y lactosa, para detectar la
capacidad de fermentación de un organismo.

La reacción positiva con caldo FK es prueba presuntiva de contaminación fecal

del agua.

V. RESULTADOS
FK
SF
VI. INTERPRETACIONES

A. CALDO SF
1. Positiva
a) Color castaño amarillento
1) Crecimiento (turbiedad).
2) Fermentación del hidrato de carbono.
b) Especies de Streptococcus del grupo D (enterococos).
1) S. faecalis.
2) S. faecalis var. zymogens.
3) S. faecalis var. liquefaciens.
4) S. faecium.
5) S. faecium var. casselifavus.
6) S. durans (S. faecium var. durans.).
2. Negativa
a) Especies de Streptococcus del grupo D, no enterococos.
1) No se observa crecimiento.
2) El hidrato de carbono no es fermentado.
b) Especies de Streptococcus del grupo D, no enterococos.
1) Streptococcus bovis.
2) Streptococcus equinus.
3) Streptococcus avium.
c) Especies de Streptococcus que no pertenecen al grupo D
d) Otras bacterias.

B. Caldo FK
1. Positiva: Indicador del pH rojo de fenol o purpura de bromocresol.
a) Color amarillo.
1) Crecimiento (turbiedad).
2) Hidrato de carbono fermentado.
b) Especies de Streptococcus del grupo D, enterococos.
1) S. faecalis.
 2) S. faecalis var. zymogens.
3) S. faecalis var. liquefaciens.
4) S. faecium
5) S. faecium var. casselifavus.
6) S. durans (S. faecium var. durans.)
c) Especies de Streptococcus del grupo D, no enterocos.
1) S. bovis.
2) S. equinus.
3) S. avium.

2. Negativa.
a) Indicador del pH rojo de fenol: Color castaño rojizo.
b) Indicador del pH purpura de bromocresol: color purpura.
1) Crecimiento (turbiedad) o no se observa crecimiento.
2) El hidrato de carbono no es fermentado.
c) Especies de Streptococcus que no son del grupo D.
d) Otras bacterias.

VII. PRECAUCIONES

A. Generales.
1. Antes de inocular un caldo SF o FK habrá que asegurarse que el
organismo es un Streptococcus. Todas las especies de Streptococcus son
catalasa negativo y son cocos Gram positivos dispuestos en cadenas, pares o
aisladamente. Las especies de Streptococcus del grupo D pueden mostrar
hemolisis alfa, beta o gamma, en agar sangre de carnero al 5%.

A menudo resulta difícil diferenciar las alfa-Streptococcus del S. pneumoniae

por su morfología de colonia o su morfología Gram. Si el organismo es catalasa
negativo, tiene cocos Gram positivos dispuestos en cadenas, pares o
aisladamente, y es insoluble en bilis y/o resistente a la optoquina, es casi
seguro que se trata de una especie de Streptococcus que no es el S.
pneumoniae

2. Kenner y col. Consideran que los estreptococos fecales incluyen a los

enterococos del grupo D (especies de Streptococcus) así como al S. bovis, S.
mitis, S. salivarius, y S. equinus; todos ellos dan una reacción positiva en el
medio FK; una reacción acida con cambio de color del indicador del pH
incorporado al medio.
Se ha utilizado indistintamente los términos “estreptococos fecales”,
enterococos” y estreptococos del grupos D, pero es evidente ahora que no son
sinónimos. Los estreptococos del grupo D incluyen especies que son
enterococos como otras que no lo son; ambos grupos poseen el antígeno de
Lancefield grupo D.

Facklam recomienda eliminar el término “fecal”, ya que el S. bovis ha

causado infecciones humanas y el termino no tiene significado. De las cuatro
especies a las que en general se denomina “estreptococos fecales” se conoce
actualmente que dos de ellas poseen el antígeno D; de allí que se las clasifique
como estreptococos del grupo D (S. bovis y S. equinus).
Según muchos autores, los enterococos del grupo D solo agrupan a
cuatro especies o biotipos: S. faecalis var. Liquefaciens, y S. durans. Los
estudios realizados por Deibel demuestran que el S. faecalis agrupa a dos
especies diferentes: S. faecalis y una nueva especies, S. faecium y el biotipo S.
faecium var. Casselifavus.

El S. bovis y el S. equinus poseen el antígeno D pero son clasificados

como especies no enterococicas.
El crecimiento en caldo SF, 6,5% ClNa, 40% bilis, acido de la esculina, y el
aislamiento a 10 y 45°C son los criterios que se emplean para identificar a los
enterococos del grupo D (crecimiento) de los estreptococos no enterococicos
(no hay crecimiento).
Puede determinarse presuntivamente la presencia del antígeno del
grupo D con la prueba de la esculina biliar; para su confirmación debe
efectuarse la tipificación serológica (Lancefield).
Una vez determinada la presencia del antígeno D, se harán una serie de
pruebas para diferenciar entre las especies de Streptococcus enterococicas y
no enterococicas.

B. CALDO FK
1. El PH del caldo FK debe estar entre 7,2 y 7,3, y no debe usarse si está
por debajo de 7. El periodo de autoclave es de 10 min; evitar el
recalentamiento, ya que ello hace descender el pH, con lo que disminuye
también la productividad del medio.
2. Facklam y Moody observaron en sus estudios que el caldo FK no era un
medio conveniente para diferenciar entre los estreptococos del grupo D, dado
que otros estreptococos del grupo D, dado que otros estreptococos alfa-
hemolíticos daban una reacción acida (positiva). Asimismo, hallaron que
muchas especies de Streptococcus podían desarrollarse en el medio FK, pero
eran incapaces de producir el ácido necesario para que se produzca un cabio
en el pH.

Kenner y col. Afirman que otras bacterias son capaces de crecimiento en

caldo FK, produciendo turbiedad, aunque se mostraron incapaces de producir
acido en proporciones suficientes como para dar un cambio de color.

El medio FK fue elaborado para detectar la contaminación fecal del agua

y no como medio específico para la identificación presuntiva de las especies de
Streptococcus del grupo D. Junto con la prueba FK debe realizarse otros tests.