La Oxitetraciclina es un derivado de la familia de los antibióticos tetraciclínicos

(doxiciclina, minociclina) extraído del Streptomyces rimosus, con acciones

bacteriostáticas-bactericidas sobre numerosos microorganismos grampositivos y
gramnegativos, Clamidia, Mycoplasma, Rickettsia, etc., Responsables de infecciones
respiratorias, genitourinarias y cutáneomucosas. Su mecanismo de acción se desarrolla
sobre los ribosomas microbianos en donde altera la síntesis de proteínas e inhibe el
desarrollo y crecimiento (efecto bacteriostático) del microorganismo, aunque pueden actuar
como bactericidas al alcanzar elevadas concentraciones en ciertos tejidos.
¿Microorganismo utilizado?
Streptomyces es el género  más extenso de actinobacterias, un grupo de bacterias gram
positivas de contenido GC (representa la cantidad de pares Guanina-Citosina en la molécula
de ADN) generalmente alto. Se encuentran predominantemente en suelos y en la
vegetación descompuesta y la mayoría produce esporas (también denominadas conidios) en
los extremos de las hifas aéreas. A demás es el género que produce el mayor número
de antibióticos, tanto bactericidas como fungicidas, y también un amplio rango de
compuestos bioactivos como inmunosupresores, es por esto que se usará como precursor en
la producción de Oxitetraciclina.
Las fuentes de carbono y nitrógeno juegan un papel importante en la biosíntesis de la
Oxitetraciclina, con el fin de hacer cada vez más económico el proceso se ha hecho
necesario buscar ingredientes que se económicamente viables y que a su vez sean
eficientes. Algunos medios de cultivo usados son:
Cepas utilizadas
 Streptomyces rimosus 12907
 Streptomyees rimosus 93060
 Streptomyees rimosus NRRL-2234
Medios de mantenimiento
 10 g/l de glucosa.
 5 g/l de peptona
 0.5 g/l MgSO4.7H2O
 1 g/l KH2PO4
 20 g/l Agar-Agar
 Agua destilada hasta alcanzar 1000 ml.
 PH inicial ajustado entre 6-6.5
Se dividieron los ingredientes en 3 tubos de ensayo se esterilizaron durante 20 minutos,
luego al alcanzar la temperatura ambiente se introdujeron las diferentes cepas, luego se
inocularon 10 días para el crecimiento y esporulación.
Medio vegetativo
  10 g/l de glucosa.
 5 g/l peptona
 0.5 g/l MgSO4.7H2O
 100 g/l KH2PO4
 Agua destilada hasta alcanzar 1000 ml.
 PH inicial ajustado a 7.

Medio fermentativo
Medio I Medio II Medio III Medio IV
Cantidad-  10 g/l  5 g/l-  10 g/l-  10 g/l -Harina
Ingrediente -Harina Harina Glucos de soya
s de soya de soya a  20g/l -licor
 10 g/l-  10 g/l-  5g/l- de maíz
Glucos Glucos Pepton fermentado,
a a a  10g/l
 5 g/l-  2.5 g/l-  20g/l- dextrina,
NaCl Glicero Melaza  5g/l NaCl,
 1 g/l- l  2g/l fosfato
CaCO3  5 g/l- monopotasico
NaCl ,
 1g/l-  2g/l CaCO3.
CaCO3

Resultados

Cepas
12907 93060 NRRL-2234
Medios de PH Oxitetraciclin PH Oxitetraciclin PH Oxitetraciclina
fermentació final a producida en final a producida en final producida en
n ug/l ug/l ug/l
I 8.5 550 8.5 300 8.5 350
II 8.0 450 8.5 250 8.5 350
III 8.0 400 8.0 200 8.0 300
IV 8.0 350 8.0 200 8.0 200

De acuerdo a los resultados obtenidos se puede inferir que el medio I tuvo la mayor
producción de antibióticos con todas las cepas de Streptomyces rimosus. A demás la cepa
12907 produjo mayor cantidad de antibiótico con cada medio utilizado.
El medio I resultó ser el adecuado para la producción del antibiótico, pero debido a que los
ingredientes utilizados no estaban disponibles para una producción a gran escala, se
eligieron otros ingredientes más económicos y disponibles para sustituir los compuestos
g
( )
iniciales. La melaza negra 30 reemplazó a la glucosa, la levadura forrajera (40% de
l
g g
l ( )
proteína total; 2 0 ) y el salvado de arroz sin desgrasar 1 0
l
sustituyó a la harina de soja,

mientras que los demás ingredientes se mantuvieron constantes. La adición de K H 2 PO 4

g
( )
0,2 aumentó la eficiencia de la fermentación medio para un alto rendimiento de
l
antibióticos, mientras que el Mg SO4no lo promovió. Se produjeron altos niveles de
antibióticos cuando el microorganismo fue cultivado en el medio que contiene melaza,
levadura forrajera y salvado de arroz y esto puede atribuirse a la presencia de
micronutrientes, así como a otros factores de crecimiento y vitaminas que siempre se
producen en el medio no sintético8.

 Cinética de crecimiento para la producción de oxytetracycline por medio de

streptomyces rimosus DSMZ.
A mediados de 1940 se descubrió un nuevo antibiótico denominado Oxytetracycline de
formula molecular( C22H24N2O9 ).este antibiótico se pudo aislar de cultivos del
microorganismo streptomyces rimosus , este nuevo antibiótico cuenta con un amplio
espectro de acción por lo cual su uso no solo fue en la industria de fármacos para humanos
si no que se llevó a otras muchas áreas como en la producción de fármacos para uso
animal ,debido a su alta eficiencia este ha sido el pilar para el desarrollo de nuevos
antibióticos sintéticos que surgen de hacerle modificaciones a la molécula original de
oxytetracycline , como objetivo de este proyecto se busca diseñar un proceso a nivel
académico para la producción de este antibiótico , como punto de partida usamos el
conocimiento del diseño de procesos bioquímicos lo cual nos da que el punto de partida del
diseño es necesario conocer el comportamiento de crecimiento del microorganismo y como
factores como concentraciones de sustratos afectan este crecimiento , además se analiza
como la taza de oxígeno disuelto y factores de aumento de pH favorecen las condiciones
del medio ,para garantizar un crecimiento optimo del microorganismo y logar niveles
adecuados de producción de este antibiótico.
Artículos encontrados en la literatura como [1], son un excelente punto de partida para
tener un enfoque claro sobre los parámetros que afectaran el proceso y cual es la mejor
estrategia para el diseño del reactor BATCH . la producción de oxytetracycline se ve
afectada por la composición del medio de cultivo y las condiciones de cultivo , estudios que
se han hecho previamente han demostrado que la fuente de carbono que mejor rendimiento
muestra para la producción de OTC(oxytetracyline) es hacer uso de la glucosa (Singh et
al.2012) . ya teniendo la fuente de carbono que va a consumir el microorganismo ahora es
necesario estimar la concentración necesaria para el medio de cultivo para evitar el
fenómeno de represión catabólica de carbono lo cual si no se controla va a generar que el
microorganismo su metabolismo cambie y empiece a consumir otras fuentes de carbono
que estén en el medio .para estimar la concentración de glucosa optima para el cultivo ,los
autores del articulo [1] generaron un cultivo del microorganismo en un Erlenmeyer al cual
le fueron cambiando la concentración de glucosa ( 10 a 30 g/L) . A este cultivo también se
le determinó la cantidad máxima producida de OTC y la cantidad de CDW( peso de células
secas), los gráficos para la variación de glucosa en el cultivo se muestran a continuación :

Figura 1. Variación de los niveles de glucosa consumida, OTC producido y crecimiento

de biomasa.

Bueno ya con la grafica número uno se puede entender cómo se comporta el

microorganismo mediante la variación de sustrato limitante , se puede notar como aumenta
la cantidad de biomasa a medida que se suministra una concentración alta de glucosa
alrededor de 30g/L , pero por otra mano la producción de OTC es baja en comparación a
los niveles obtenidos de OTC al variar niveles de concentración de glucosa mas bajos , en
el caso de suministrar una concentración de glucosa de 15g/l se evidencia cuando han
pasado alrededor de 50 h toda la glucosa ha sido consumida y a este nivel de concentración
se tiene el valor máximo de producción de OTC que es de 450 mg/l aproximadamente pero
se evidencia que el crecimiento de biomasa llega a un nivel máximo de crecimiento de 4g/l
de CDW y luego esta decrece aquí se evidencia que al no haber ya presencia de fuente de
carbono el microorganismo pasa de una fase de crecimiento exponencial a una fase de
muerte , también hay que notar que la producción de OTC comienza aumentar
notablemente a partir de haber transcurrido un tiempo igual a 40 h , una explicación que
nos permita entender porque a mayor concentración de glucosa no se obtuvo una mayor
producción de OTC esto se puede explicar a que se generó un factor de CCR , es decir el
microorganismo cambio su metabolismo de glucosa como fuente de carbono a consumir
otra fuente de carbono en el medio. Con la siguiente tabla mostrada a continuación se
muestran parámetros cinéticos de crecimiento para la producción de OTC:
Tabla número 1 tomada de [1].

Con la tabla numero 1 se pueden sacar los parámetros cinéticos del cultivo para la
concentración optima de alimentación de glucosa de 15g/L al medio de cultivo.
Tabla numero 2 parámetros cinéticos para 15 g/L de glucosa.
Concentración de glucosa (g/L) 15
μmax (1/h) (velocidad máxima de 0.027
crecimiento)
Pmax (mg/L) producción máxima de 480±7.78
OTC
Xmax(g/L) (cantidad máxima de 4± 0.11
biomasa)
 Yx/s (g/g) (rendimiento biomasa 0.13
sustrato)
Y p/x (mg/g) (rendimiento producto 119.4
biomasa)
Y p/s (mg/g) ( rendimiento producto 16.02
sustrato)

Luego del paso a escala laboratorio es determinar las condiciones en cual se llevara el
medio de cultivo y las condiciones a las cuales se debe mantener el reactor para garantizar
una producción adecuada de OTC , un parámetro importante en este tipo de cultivos es
mantener un correcto suministro de oxigeno DO ya que la streptomyces rimosus es una
bacteria aeróbica, por lo cual será necesario mantener un porcentaje optimo de oxigeno
disuelto en el medio de cultivo. Basando en los resultados a continuación en la siguiente
tabla se presenta los datos cinéticos para la producción de OTC llevados a cabo en
bioreactor BATCH :
Tabla número 3 parámetros cinéticos de crecimiento para diferente tipo de biorreactores.
Tomada de [1].

La mejor estrategia de bioreactor de acuerdo a los ensayos llevados a cabo por Elsayed.E
et al es el bioreactor en el cual se controla el suministro de glucosa y se mantiene una
estrategia de control para la taza de oxigeno disuelta en el medio de cultivo DO. La grafica
que se muestra a continuación nos permite analizar las condiciones de cinética de
crecimiento:
Figura número 2 parámetros cinéticos para bioreactor con estrategia de alimentación e
glucosa y control de DO.
Cuando se mantiene un bioreactor con estrategia de alimentación de glucosa y control de
DO se logra obtener 1412±31.82 mg/L de OTC el aumento de la producción de OTC es de
carácter exponencial y su pico máximo lo alcanza a un tiempo igual 120 h , el
comportamiento del ( pH) en la reacción es de carácter básico es necesario tener un pH
igual a 7 para el inicio de la reacción después que la reacción bioquímica inicia este
presenta un decaimiento a medida que la fase exponencial comienza a darse después de un
tiempo de 40 h el pH comienza a incrementar hasta llevar un valor máximo de 9 que
concuerda con la producción máxima de OTC , el crecimiento de la biomasa alcanza una
fase estacionaria a partir de un tiempo de 80 h esta fase estacionaria continuará hasta
cuando la cantidad de glucosa presente sea consumida al 100% lo cual sucede en un tiempo
de 120h , el porcentaje de DO inicia en un valor cercano al 100% este comienza a decrecer
a medida que la fase exponencial de crecimiento e biomasa comienza aumentar luego
cuando se va alcanzado la fase estacionaria este porcentaje de DO comienza aumentar hasta
alcanzar un valor de 80 % ,durante la fase de crecimiento exponencial es crucial mantener
la taza de oxigeno disuelto a un nivel de 60%.

Bibliografía.
 [8] Abou-Zeid, AA, Eissa, AI, El-Dewany, AI, Abd El-Hamid, MM, Fouad, M.,
Fahmi, M. y Yassein, M. (1977). La producción fermentativa de oxitetraciclina en
 subproductos industriales por Streptomyces rimosus 12907. Folia
Microbiologica , 22 (1), 47-54.
 Elsayed, E. A., Omar, H. G., & El-Enshasy, H. A. (2015). Development of fed-
batch cultivation strategy for efficient oxytetracycline production by Streptomyces
rimosus at semi-industrial scale. Brazilian Archives of Biology and
Technology, 58(5), 676-685.
 Rhodes, P. M. (1984). The production of oxytetracycline in chemostat
culture. Biotechnology and bioengineering, 26(4), 382-385.
 Abou-Zeid, A. A., Baeshin, N. A., & Baghlaf, A. O. (1993). Utilization of date
products in production of oxytetracycline by Streptomyces rimosus. Zentralblatt für
Mikrobiologie, 148(5), 333-341.