SEMANA 7 Transcripción Síntesis de ARN

RNA polimerasas: generan un ARN monocatenario de secuencia idéntica a una de las cadenas de
ADN, pero con Uracilo y no timina

• ARM que se genera de forma inicial es TRANSCRITO PRIMARIO

• No se necesita primer/cebador para iniciar síntesis de cadenas de ARN
• Capaces de reconocer el gen apropiado para transcribir la cadena apropiada de ADN e
identifican el punto de partida de la transcripción.
• Control de la frecuencia de la transcripción
• Transcrito primario: Cadena de ARN que se genera.
• Cadena de ADN: hebra molde que dirige la síntesis de ARN por apareamiento de bases
complementarias.
• Molde de ADN se copia en 3´a 5´
• ARN se sintetiza en 5´a 3´

Promotores: Secuencias de ADN

• De acción cis ya que se localizan en la misma molécula del ADN y cerca del gen que regulan
• De acción trans Las proteínas que se unen a esta secuencia de DNA y facilitan o previenen la
unión de la RNA polimerasa
• determinan el lugar de unión de la ARN polimerasa y Frecuencia con lo que inicia la
transcripción
• Región de secuencias reguladoras
• Contigua a la región transcrita
• Tiene secuencias mas pequeñas llamadas cajas
• Controla unión de la ARN polimerasa al ADN e identifica el punto de inicio de la transcripción
• Frecuencia de la transcripción: Secuencias reguladoras dentro del promotor
o Elementos promotores proximales
• La región promotora–proximal contiene sitios de unión de factores
de transcripción que pueden acelerar la tasa a la que se une la RNA
polimerasa al promotor.
o Potenciadores (elementos promotores-distales) ubicados casi a miles de
nucleótidos del punto de inicio.
▪ Estabilizan la unión de la RNA polimerasa al promotor

Secuencias reguladoras: Elementos promotores proximales Y potenciadores (intensificadores)

• Afectan la frecuencia de la transcripción.

Bacterias

• Solo una ARN polimerasa que genera los transcritos primarios precursores para los tres
tipos de ARN: ARNm, ARNt y ARNr
• Al no tener núcleo Los ribosomas se unen al ARNm mientras se transcribe
• Síntesis de proteínas se realiza al mismo tiempo que la transcripción.

Eucariotas

• Transcripción en el núcleo realizada por 3 RNA polimerasas

 • Transcritos primarios se modifican y se recortan para producir ARN maduros
• Pre-RNAm: precursores de ARN
• 5´UTR: Casquete de guanosina
• 3´UTR: Cola poli(a)

Exones: Secuencias codificantes

• Se conectan para formar el ARNm maduro

Intrones: Secuencias no codificantes.

• Separan a los exones.

• Se remueven en el proceso de splicing

Gen: segmento de ADN que funciona como unidad para generar un producto de ARN o en
transcripción y traducción para generar una cadena de polipéptidos.

• Molde para la síntesis de un ARN

• Consiste en una región transcrita y regiones que regulan la transcripción del gen. (regiones
promotoras y potenciadoras)

Región promotora: Reguladora del producto codificado

Secuencias regulatorias

La región transcrita de un gen contiene el molde para la síntesis de un RNA, que comienza en el
punto de inicio.

Anemia grave: Recuento disminuido de eritrocitos caso clínico con hemoglobina en 7 g/dl (12 a 16 g
dl)

• talasemia β + de tipo intermedio

• Talasemia
• Trastorno genético más común
• 7% Portadores

Mycobacterium tuberculosis: Bacilos acidorresistentes

• Tuberculosis pulmonar

α amanitina: Amanita phalloides

• Inhibidor de las RNA polimerasa 2 eucariotas

o Enfermedades gastrointestinales
o Desequilibrio electrolítico, fiebre
o Deficiencia hepática y renal
o 10% a 20 % de individuos mueren al paso de 10 días
lupus eritematoso sistémico: fatiga, tos, dolor en las articulaciones, dolor pecho pleurítico, erupción
en mejillas y tabique nasal

• LES
• Leucopenia: recuento de leucocitos por debajo de lo normal
• reducción leve de hemoglobina

Síndromes de talasemia: mutaciones que disminuyen o eliminan la síntesis de las cadenas α o β en

el tetrámero de la hemoglobina A del adulto.

Los síndromes individuales se nombran de acuerdo con la cadena cuya síntesis está afectada y con la
gravedad de la deficiencia.

• talasemia β 0: La cadena no está presente

• talasemia β +: el símbolo + se refiere a una reducción parcial de la síntesis de la cadena β
• 170 mutaciones
• Mutación relacionada con la transcripción del RNAm de la globina β o de su procesamiento o
traducción.

globina β: gen HBB Hemoglobina Subunidad Beta

• mutación que produce la talasemia β + es una mutación puntual (AATAAA → AACAAA)

• cambia la secuencia en el RNA heterogéneo nuclear (RNAhn) en el sitio de señal de
poliadenilación de AAUAAA a AACAAA
• Los individuos homocigotos Se produce 1/10 parte de la cantidad normal de RNAm de la
globina b
• Mutaciones dentro de la caja TATA EN LA REGION –28 O –31 (A → G o A → C) del gen de la
globina b estas mutaciones reducen la precisión del punto de inicio de la transcripción
• solo 20% a 25% de la cantidad normal de globina β se sintetiza
• Otra mutación corriente arriba de la región promotora (–87 C → G y –88 C → T)

1. Se expone la muestra (células sanguíneas lisadas para liberar hemoglobina de los eritrocitos) a
un agente oxidante que convierte el hierro ferroso de la hemoglobina en su estado férrico.
2. Se determina la cantidad de hierro férrico, (con cianuro o un derivado de azida)

3. Se genera un producto teñido

Se realiza una espectrofotometría para calcular la concentración de este compuesto

Acción de la ARN polimerasa

Forman uniones Ester entre los nucleótidos y forman pares de bases con los nucleotidos
complementarios del ADN MOLDE

• Acción en ausencia de cebadores

• carecen de la actividad de exonucleasa 3′ a 5′ que se encuentra en las DNA polimerasa,
verificación de error rudimentario a través de un mecanismo diferente
• Una cadena de DNA sirve como molde para la síntesis de RNA y se copia en la dirección 3′ a
5′. La síntesis de la nueva molécula de RNA ocurre en la dirección 5′ a 3′.
• Precursores
• trifosfato de adenosina (ATP)
• trifosfato de guanosina (GTP)
• trifosfato de citidina (CTP)
 • trifosfato de uridina (UTP)
• unión éster entre el fosfato α en el hidroxilo 5′ de la ribosa del nucleótido precursor y el
hidroxilo 3′ de la ribosa en el extremo de la cadena de RNA creciente
• liberación de pirofosfato (de los fosfatos β y γ) proveen la energía para esta reacción de
polimerización
• fragmentación del pirofosfato por una pirofosfatasa también ayuda a conducir la reacción de
polimerización hacia delante al eliminar un producto.
• Control de frecuencia de la transcripción

TASA DE ERROR DE LA DNA POLIMERASA

1 en 100 000 bases

• Sensible a las señales de necesidad del producto del gen y frecuencia de transcripcion

Tuberculosis: antibiótico de la familia de la rifampicina (rifampina): inhibe la RNA polimerasa

bacteriana y puede inhibir la síntesis de ARN mitocondrial eucariótico.

• Se une a las RNA polimerasa de las bacterias

Tipos de ARN polimerasa

RNA polimerasa de e. coli: 4 subunidades (α2, β, β′ y ω) forman el núcleo de la enzima

Factor σ sigma: Proteína

• Se une al núcleo de la enzima y dirige la unión de la RNA polimerasa a las regiones

promotoras especificas del molde de ADN
• Se disocia poco después del proceso de transcripción
• E. coli tiene varios factores S que reconocen las regiones promotoras de los distintos grupos
de genes
•
Factor sigma más importante es σ 70 peso molecular de 70 000 Da

Las ARN POLIMERASAS EUCARIOTAS SE DIVIDEN EN TRES

Poli 1: Produce la mayoría de los ARNr

Poli 2: Produce el ARNm y microRNA (RNAmi) (regulación de la expresión génica)

Poli 3: Produce RNA pequeño como RNAt y RNAr 5s

Tienen el mismo mecanismo de acción, pero reconocen diferentes promotores

Secuencia de Genes

DNA de doble cadena consiste en una cadena codificante y una cadena molde

la cadena codificante del DNA es idéntica en la secuencia de bases y en la dirección del transcrito de
RNA
Codones: RNAm se lee de 5′ a 3′ en grupos de tres bases y determinan la secuencia de aminoácidos
de la proteína.

Cadena codificante se puede usar para determinar la secuencia de aminoácidos de una proteína.

Nucleótido + 1: corresponde al primer nucleótido incorporado al RNA en el extremo 5′ del transcrito.

REGION FLANQUEADORA 5´ DEL GEN: Secuencias no transcritas a la izquierda del punto de inicio de
la transcripción.

Corriente arriba: Secuencias de nucleótidos a la izquierda del punto de inicio

Corriente abajo: Secuencias de nucleótidos a la derecha del punto de inicio.

Reconocimiento de los genes por la RNA polimerasa

Para que los genes logren expresarse se debe reconocer el punto de inicio de la transcripción y la
cadena de ADN a transcribir.

• Reconoce los genes que debe transcribir

• Genes transcritos son una pequeña fracción del ADN total
• Señales de ADN a las que se va unir la ARN polimerasa se les llama PROMOTORES
(determinan el punto de inicio y la frecuencia de la transcripción)

RNAhn: ARN heterogéneo nuclear: Primera forma de ARN producida que contiene a las secuencias
de intrones y exones
 • Se agrega un casquete de guanosina en el 5´UTR y una cola poli a en el 3´ UTR
• Intrones se sustraen en el proceso llamado splicing para producir el ARN maduro
• Abandona el núcleo y empiece la síntesis de proteínas

Caja TATA: 12.5% de los promotores eucarióticos contienen esta secuencia

Regiones promotoras de los genes para RNAm

Secuencias de consenso en las regiones promotoras

• Secuencia encontrada con frecuencia en una región particular cuando se examinan genes
• Procariotas: Secuencia de consenso rica en adenina y timina en el promotor determina el
punto de inicio de la transcripción al unir proteínas que facilitan la unión de la ARN polimerasa
o Caja TATA o pribnow: TATAAT
▪ Localizada en –10
▪ Se reconoce por factor sigma σ 70

Promotores bacterianos poseen la secuencia de consenso TTGACA en la región −35.

• Eucariotas:
o Localizada en -25
o 12,5 % genes eucariotas
o Secuencia de consenso TATA(A/T) A (la [A/T] en la quinta posición indica que tanto A
como T ocurren con la misma frecuencia)
o caja de Hogness o Hogness–Goldberg

Otras secuencias de consenso se hallan corriente arriba en la región promotora o corriente abajo
después de la señal de inicio transcripcional

Secuencias de consenso eucariotas

• BRE: elemento de reconocimiento TFIIB (una secuencia rica en GC)

• Elemento iniciador
• Elemento promotor corriente abajo: DPE
• elemento motivo diez: MTE
• DPE Y MTE se encuentran corriente abajo con respecto al sitio de inicio de la transcripción
• Elementos promotores proximales en –100 al –200 sitios donde se unen proteínas
reguladoras de genes

Un análisis de cerca de 10 000 secuencias promotoras indicó que el elemento iniciador era el
elemento más común en estos promotores (alrededor de 50%)

BRE o DPE estaban presentes en casi 15% de los promotores

CAJA TATA en 12,5 % de los promotores

BACTERIAS: genes ligados y comandados juntos por un solo promotor

Operón: puede contener muchos cistrones y produce un RNAm que contiene la información de
codificación para todas las proteínas codificadas por el operón.

• Represores: se unen al operador e inhiben la transcripción evitando la unión de la RNA

polimerasa al DNA
• Activadores: estimulan la transcripción y facilita la unión de la RNA polimerasa al unirse en
la región -35

Cistron: Codifica una cadena de polipéptidos

• Región de ADN que codifica una sola cadena polipeptídica

Policistron: contiene la información para producir varias proteínas diferentes

Un promotor puede controlar la transcripción de un operón que tiene muchos cistrones.

TBP: Proteína de unión a TATA

• Componente de TFIID se une a la caja TATA

• TFIIA y B se unen a TBP.
• Se une la RNA polimerasa
• se unen TFIIE, F y H dividen el ATP y la transcripción del gen se inicia
• Este complejo puede transcribir a nivel basal
• El TFIID puede reconocer el elemento iniciador y elemento promotor corriente abajo (DPE)

Factores de transcripción general: se unen a la caja TATA y facilitan la unión de la RNA polimerasa 2

• 6 FACTORES BASALES DE TRANSCRIPCION

TFIIH: transcripción y reparación de ADN

• Tiene actividad Cinasa RNA polimerasa 2 se fosforila por este factor durante la transcripcion
• Actúa como una helicasa de ADN dependiente de ATP PARA DESENRROLLAR EL ADN Y
OCURRA LA TRANSCRIPCION O LA REPARACION.

Xeroderma pigmentoso: XPB Y XPD

• mutaciones dentro de dos subunidades diferentes de la helicasa de TFIIH

Coactivadores: interactúan con los factores de transcripción a través de un dominio de activación en

el factor de transcripción

TRANSCRIPCION DE GENES BACTERIANOS

Unión de ARN polimerasa a la región promotora del ADN a través de un factor s, hace que las dos
cadenas de ADN se desenrollen alrededor de 10 a 20 nucleótidos de longitud

• Factor sigma se libera cuando la cadena creciente de ARN tiene 10 nucleótidos de longitud
y termina la transcripción en una señal de terminación.
• Señal de terminación: incluye la formación de un asa en horquilla en el transcrito, que
precede a varios residuos U.
• Señal de terminación rho: Liberación del transcrito de ARN desde el molde requiere energía
 • Transcrito de bacterias no tiene intrones y por tanto no se recorta

Procariotas: RNAr se produce como un transcrito único y largo del cual se derivan los RNAr 16S, 23S
y 5S ; también se produce el RNAt

RNAsa P: Enzima de corte

• Reacción de escisión

TRANSCRIPCIÓN DE GENES EUCARIOTICOS

• La RNA polimerasa se une al complejo de factores de transcripción en la región promotora y

al DNA
• la hélice se desenrolla dentro de una región cerca del punto de comienzo de la transcripción
• separación de la cadena de DNA
• síntesis del transcrito de RNA
• transcrito se alarga y copia el molde de DNA
• RNAm eucariótico suele contener la información de codificación para una sola cadena
polipeptídica
• RNA eucariótico se transcribe en el núcleo y migra al citoplasma donde tiene lugar la
traducción.
• En el citosol se traduce en un producto de proteína
• Casquete 5´ guanosina secuencia guía
• Cola poli (a) 3´ Secuencia final
• Regiones no traducidas en el extremo 5´ y 3´
• Exones: consisten en codones nucleótidos que determinan la secuencia aminoácido del
producto final de la proteína.
• Intrones: contienen secuencias de nucleótidos que se eliminan por las reacciones de corte y
empalme para formar el RNA maduro.

CASQUETE 0 s: Guanosina metilada

• Nitrógeno de la séptima posición

• en la unión 5′ a 5′ al RNAm

CASQUETE 1: Casquete con adición de un grupo metilo al carbono 2´ de la ribosa en el nucleótido 1

en el extremo 5´de la cadena

CASQUETE 2: Casquete 1 con adición de un grupo metilo al carbono 2´de la ribosa en el nucleótido 2
en el extremo 5´de la cadena

S–adenosilmetionina (SAM): Dona los grupo metilo al casquete de guanosina

• Se regenera por las vitaminas folato y B12

Estas vitaminas son necesarias para la formación del ARNm

TRANSCRIPCION Y CASQUETE DE GUANOSINA

 • el nucleótido inicial del transcrito, es una pirimidina con tres grupos fosfato ligados al
hidroxilo 5′ de la ribosa.
• trifosfato terminal pierde un fosfato y forma un difosfato 5′.
• El fosfato β del difosfato reacciona luego con el fosfato α del GTP, libera pirofosfato y forma
un enlace inusual de trifosfato 5′ a 5′
• Acción de S–adenosilmetionina (SAM) y formacion de casquetes reduce la tasa de
degradación
• sitio de reconocimiento para la unión del RNAm maduro a un ribosoma en el inicio de la
síntesis de la proteína.

ADICIÓN DE UNA COLA DE POLI(A)

• RNA polimerasa transcribe el codón de detenimiento para la traducción de la proteína

• Sigue una secuencia llamada señal de poliadenilación (AAUAAA)
• complejo de enzimas se une a la señal de poliadenilación y escinde el transcrito primario en
alrededor de 10 a 20 nucleótidos corriente abajo, formando así el extremo 3′.
• cola de poli(A) que puede tener > 200 nucleótidos de longitud se agrega al extremo 3
• SE AGREGA DESPUES QUE TERMINA LA TRANSCRIPCION Y El ATP sirve como precursor
• Protege el ARNm de la degradación
• las enzimas cortan el transcrito (RNA heterogéneo nuclear [RNAhn]) en un punto 10 a 20
nucleótidos más allá de la secuencia AAUAAA
• se agregan alrededor de 250 nucleótidos de adenina al extremo 3′ del RNAhn.

Eliminación de intrones

Algunos genes tienen 50 o más intrones

• intrones son sustraídos cuidadosamente del pre–RNAm transcrito y los exones se empalman
de forma conjunta, de tal manera que la proteína apropiada se produce a partir del gen.
• Las secuencias de consenso en los límites entre intrón y exón del pre–RNAm son AGGU
(AGGT en el DNA)

Los intrones comienzan con una secuencia 5′–GU y terminan con una secuencia 3′–AG

Empalmosoma: permite que los exones se empalmen de manera conjunta correctamente.

Pequeñas ribo nucleoproteínas nucleares: snRNP

• snurp U1 se une cerca de la primera unión exón/intrón

• U2 se une dentro del intrón en una región que contiene un residuo nucleótido de adenina
• (U4, U5 y U6) se une al complejo y se forma el asa
• El fosfato adherido al residuo G en el extremo 5′ del intrón forma un enlace 2′ a 5′ con el
grupo hidroxilo 2′ del residuo nucleótido de adenina
• La escisión tiene lugar en el extremo del primer exón, entre los residuos AG en el extremo 3′
del exón y los residuos GU en el extremo 5′ del intrón.
• se mantiene en el lugar por el empalmosoma.
• segunda escisión ocurre en el extremo 3′ del intrón después de la secuencia AG.
• Formación del empalmosoma
• Ricos en uracilo
 • Un proceso conocido como reacomodo de exones (exon shuffling) se ha desarrollado
probablemente a través de la evolución y ha permitido que nuevas proteínas se desarrollen
con funciones similares a las de otras proteínas.

talasemia β 0: mutaciones homocigotas en las secuencias de unión–empalme en los límites

intrón/exón

• AT reemplaza a un GT en el gen en el extremo 5′ del primero o segundo intrón

• AG en el sitio receptor extremo 3′

Cada gen produce un gran transcrito 45S produce RNAr 18S, 28S y 5.8S

• 1000 copias de este gen

Los promotores de genes de RNAr están ubicados en la región flanqueadora 5′ de los genes

anticuerpos de antígenos nucleares (ANA), los anticuerpos de DNA de doble cadena (anti–DNAdc) y
los anticuerpos de ribonucleoproteínas (estos se conocieron históricamente como proteínas de
Smith por el nombre del paciente en el que se descubrieron).

• snRNP corresponden a los antígenos de Smith.