TRABAJO EVALUATIVO DE QUÍMICA ANALITICA IV -SEGUNDO CORTE

DEL SEMESTRE 2020-1

MARIA CLAUDIA MARTINEZ ROMERO

Docente. Andrea Ramos Hernández,

Universidad del Atlántico Km 7 Vía Puerto, Barranquilla, Atlántico.
Revisión del articulo científico: ‘’Evaluación del potencial antioxidante en extracto de espinaca por
voltamperometría cíclica’’

Figura n.1. Vista del artículo de estudio en internet.

Los compuestos antioxidantes presentan estructura química apropiada para reaccionar fácilmente con un radical libre
dando así a entender que este es capaz de atrasar o evitar la oxidación o daño oxidativo. Existen ciertas técnicas que se
pueden usar para determinar el poder antioxidante en los alimentos como lo son la electroforesis capilar, cromatografía
liquida de alta resolución, espectrometría de masas y la detección electroquímica.
En general los compuestos antioxidantes actúan como agentes reductores y al estar presentes en soluciones, estos
fácilmente son oxidados sobre la superficie de un electrodo.
Los antioxidantes naturales presentes en alimentos son sumamente importantes ya que ayudan a preservar la salud de los
consumidores, son indispensables para el correcto funcionamiento del metabolismo humano.
La voltametría se califica como un estudio atractivo, conveniente y sensible para la determinación de la actividad y
propiedades antioxidantes, esto así para que pueda ser de mejor forma una comparación de la actividad de algunos
oxidantes y sus compuestos en soluciones. Las ventajas de las técnicas electroquímicas representan una muy buena
alternativa para el desarrollo de sensores capaces de lograr detecciones, diagnósticos, vigilancia del medio ambiente y
control de calidad.[1]
Los autores en este articulo quisieron investigar la capacidad antioxidante de extractos de plantas (en este caso la espinaca)
utilizando la voltametría cíclica.
MATERIALES Y REACTIVOS:
Al preparar el extracto en estudio se utilizaron hojas de espinacas en estado fresco, y el alcohol fue etanol antiséptico
comercial al 96% marca JGB. La solución amortiguadora Sorensen fue preparada con NaH2 PO4 .1H2 O al 98% y Na2
HPO4 .7H2 O al 98%. Para la cuantificación de polifenoles se utilizó acido Gálico al 98%, Na2CO3 al 99% y reactivo
Folin-Ciocalteu 2N Sigma-Aldrich.
Las hojas de spinaca fueron pesadas en una balanza analítica Metler Toledo AL 204 (Máx. 210 g-min 0,01g), sensor PT
100, maceradas en un mortero de porcelana. La extracción por ultrasonido fue llevada a cabo por un equipo NEY
Ultrasonik. Los voltagramas cíclicos fueron obtenidos por utilizar un potenciostato VersaSTAT 3, este conectado a una
tarjeta A/D Cassy 524010 y una celda electroquímica modelo KO264 micro cell con un sistema de tres [3] electrodos: oro
(electrodo de trabajo), platino (neutro) y Ag/AgCl/ KCl 3M (electrodo de referencia).
El programa que fue utilizado para el análisis del comportamiento electroquímico fue el VersaStudio electrochemistry
software versión 2.2.
Para la preparación del extracto se pesaron 2g de hojas de espinacas, luego maceradas por 20 minutos; mientras eso ocurría
se le agregaron 10 mL de alcohol etílico. Se tapó la mezcla con papel Parafilm y fue llevado a ultrasonido por 40 minutos
para luego llevarlo a filtración. El extracto obtenido se dividió en tres recipientes tipo ámbar.
Dos de esas porciones se preservaron una por 7 y otra por 15 días, estas refrigeradas a 5°C en tubos de ensayo de 3mL
herméticamente cerrados y protegidos de la luz con papel aluminio.
Para la preparación de la solución Sorensen se preparó una solución de 0.2M de NaH2 PO4 .H2 O, otra 0,2M de Na2
HPO4 .7H2 O y se mezcló en una porción 23:2. Luego se diluyo esta solución con agua destilada en una porción 1:1 para
obtener una concentración de 0.1M y al final se corroboro el pH de esta solución, que fuera neutro.[2]
En el barrido por voltametría cíclica se realizó en un intervalo de -1,2 a 1,2V con una velocidad de 100mV/s. Previamente
se burbujeo Argón durante tres minutos para desplazar el oxígeno presente en cada muestra a analizar. El electrodo de
trabajo (oro) se pulio con una lija N° 1200, alumina en polvo de 0.05 micras de Buehler y Diamond polishing de Buehler,
esto previo a cada experimento.
El voltagrama inicial de 1mL de la solución amortiguadora se realizó para generar el blanco. Luego se tomó la lectura al
adicionar 20μL del extracto recién preparado (fresco) a la solución Sorensen. Esto mismo se realizó con las muestras de
7 y 15 días.
La cuantificación de polifenoles totales con reactivo de Folin-Ciocalteu se llevó a cabo por la preparación de una solución
madre de ácido gálico a una concentración de 5000 ppm y otra solución de Na2CO3 al 10%. Luego se prepararon patrones
entre 50 y 500ppm de ácido galico y se realizó la curva de calibración. A cada patrón se le adiciono 6.5mL de agua
destilada y 500µL del reactivo Folin-Ciocalteu. Se agito con vortex y se dejó reposar por 8 minutos a temperatura
ambiente. Al pasar este tiempo se le añadieron 3mL de carbonato de sodio, luego agitado con vortex y dejado por 30
minutos en baño María a temperatura de 30°C. Al finalizar esto se realizó la lectura en un espectrofotómetro a una longitud
de onda de 765nm. Todo esto se realizó para la determinación de polifenoles en las demás muestras (7 y 15 días). Estas
tres cuantificaciones se realizaron por triplicado para una mayor eficiencia en los resultados.[3]
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
El voltagrama de la solución de Sorensen (blanco en figura 2.a) no muestra reacciones redox significativas, lo que indica
que forma parte de una línea base para la evaluación de la actividad antioxidante y una solución amortiguadora segura
para la solución de las muestras a analizar. Para validar la autenticidad del método, se determinó el voltagrama ciclico de
la vitamina C (figura 2.b).
Los voltagramas cíclicos de los extractos etanólicos de espinaca (extracto 0, 7 y 15 dias equivalentes a extracto 0, 1 y 2
respectivamente) muestran potenciales característicos de soluciones con compuestos antioxidantes. El potencial de
oxidación entre -0.590V y 0.559V para la muestra fresca (0 días = extracto 0) sugiere la existencia de reacciones redox
típicas de compuestos fenólicos como antioxidantes. Los voltagramas de 7 y 15 dias (extractos 1 y 2 respectivamentes)
muestran comportamientos semejantes, en los dos casos presentan un perfil similar a la primera muestra con respecto al
potencial de oxidación.[3]

Figura n.2 Voltagramas cíclicos: a. Extractos de espinaca (Solución Sørensen como blanco, Extracto (0) fresco,
Extracto (1) 7 días de preservación, Extracto (2) 15 días de preservación; b. Solución de vitamina C, 50ppm.
Todos los barridos fueron realizados en la solución Sørensen a pH 7.
También se evaluó el corrimiento de los picos de oxidación de los extractos de espinaca en comparación con los de la
vitamina C, en condiciones estándar de solución electrolítica Sorensen a pH 7 (tabla n.1)
Los extractos de espinacas no presentan un potencial de oxidación igual a la vitamina C, sus valores están dentro del rango
aceptable para ser clasificados como excelente actividad antioxidante. Se observa que a medida que pasa el tiempo de
almacenamiento de los extractos los picos del potencial de oxidación presentan un corrimiento hacia valores más
negativos, esto podría sugerir que el potencial de oxidación aumentara durante el proceso de almacenamiento.
El fenómeno que se presenta es que los compuestos oxidantes de menor potencial se oxidan y cumplen su función
preservadora del extracto a medida que pasan estos en almacenamiento, por esta razón se ven distribuciones no gaussianas,
principalmente en la parte derecha de la banda, en los voltagramas de los extractos almacenados durante 7 y 15 días en la
figura n.1a.
Ya que el pico de máxima corriente se desplazó hacia potenciales mayores, a medida que aumenta el tiempo de
almacenamiento, se decidió determinar la corriente total de la banda por potencial de oxidación para los extractos;
representada como el área bajo la curva del potencial de oxidación (figura n.3.).

Figura n.3. Tendencias polinómicas de los picos de oxidación de los extractos de espinaca; con los cuales se
determinó el área bajo la curva. a. Extracto (0); b. Extracto (1); c. Extracto (2).

En esta se muestra (tabla n.2) que la mayor área se representa en el extracto fresco. También se muestra que a medida que
transcurre el tiempo de almacenamiento, la capacidad antioxidante total disminuye exponencialmente con una cinética de
primer orden (ecuación n.1)[3]

Ecuación n.1.
Donde la variable independiente es el tiempo del extracto, en días y la variable dependiente es el logaritmo natural del
área bajo la curva de la relación corriente-potencial de oxidación; entonces tenemos que a mayor área bajo la curva (tabla
n.2) mayor será la capacidad antioxidante del extracto.
 Tabla n.2. Área bajo la curva de los picos de oxidación de los extractos de espinaca.
Luego se tiene el otro tema, la cuantificación de los polifenoles totales. A partir de la curva de calibración del ácido gálico,
identificado por el reactivo de Folin Ciocalteu y las absorbancias de las muestras, medidas a 785nm, se estimó la
concentración de los polifenoles totales de los extractos etanólicos (Tabla n.3) en función de la cantidad de ácido gálico).

Tabla n.3. Concentraciones de polifenoles totales en los extractos de espinaca.

Acá también se corroboro la disminución exponencial de los polifenoles totales con una cinética de primer orden
(Ecuación n.2.) en la cual la variable independiente es el tiempo del extracto, en días y la variable dependiente es el
logaritmo natural de la concentración de polifenoles; medido como concentración de ácido gálico en el extracto, estos
parcialmente responsables de la actividad antioxidante durante el almacenamiento de los extractos. Al hallar la
concentración de polifenoles totales por gramo de hoja, se necesitó tener en cuenta la cantidad de solvente usado en la
preparación de estos extractos.

Ecuación n.2.
Los resultados presentes en la figura 3, tabla 3 y ecuación 2 evidencian que la concentración de polifenoles decrece
exponencialmente con una cinética de primer orden a medida que el extracto es más antiguo. Esto es coherente con los
resultados obtenidos en el análisis voltamétrico. Sin embargo, la velocidad de degradación de los polifenoles es
ligeramente mayor (ecuación n.2) que la velocidad de totalidad de antioxidantes (ecuación n.1); indicando esto que los
polifenoles tienen más tendencia a ejercer su función antioxidante que los otros antioxidantes de los extractos. Estos
resultados muestran la importancia del uso de vegetales frescos en la alimentación y la velocidad de su degradación desde
la perspectiva de su potencial antioxidante.
CONCLUSIONES
Los perfiles voltamétricos de los diferentes extractos de espinaca mostraron potenciales de oxidación entre -0,252V y -
0,149V; esto sugiere la presencia de al menos un compuesto antioxidante. Al comparar los perfiles de los extractos con el
voltagrama de vitamina C muestra que los extractos de espinaca tienen una actividad antioxidante muy parecido al patrón
de referencia.[3]
La estimación del área bajo la curva de los picos de oxidación permitió deducir que el tiempo de almacenamiento de estos
extractos provoca una disminución de la actividad antioxidante.
Con esta investigación, los autores corroboraron que la voltametría cíclica es una metodología útil para estimar en tiempo
real el estado antioxidante de extractos con relación a la presencia de compuestos que tienen poder reductos.

BIBLIOGRAFÍA
[1] “Investigación y Ciencia,” Accessed: Aug. 08, 2020. [Online]. Available: http://diabetesstop.wordpress.
[2] MANUAL DE PARASITOLOGÍA and Técnicas para Laboratorios de Atención Primaria de Salud y para el
Diagnóstico de las Enfermedades Infecciosas Desatendidas, “Buffer o Solución amortiguadora,” 2016.
http://www.bvs.hn/Honduras/Parasitologia/ManualParasitologia/flash/files/res/downloads/page_0128.pdf
(accessed Aug. 09, 2020).
[3] S. B. Pérez-Cabeza, ; Nicolás, M. Angarita, M. Cervantes, and M. A. Barón-Rodríguez, “Evaluación del potencial
antioxidante en extracto de espinaca por voltamperometría cíclica Evaluation of antioxidant potential in a spinach
extract by cyclic voltammetry Avaliação do potencial antioxidante no extrato de espinafre por voltametria cíclica,”
doi: 10.18273/revion.v30n2-2017009.