UNIVERSIDAD DEL ATLÁNTICO

METODOLOGÍA DE LA INVESTIGACIÓN

ANTEPROYECTO DE INVESTIGACIÓN

TEMA:
ALCALOIDE MARINO (LAMELLARIN D), METODO ALTERNATIVO PARA EL
TRATAMIENTO DE LAS CELULAS CANCEROSAS REFERENTES DEL CÁNCER
MAMARIO

INTEGRANTES:
JESÚS DAVID BOLAÑO JÍMENEZ
MELANY CONTRERAS SALGADO
MARÍA CLAUDIA MARTÍNEZ ROMERO
Tabla de contenido.
ALCALOIDE MARINO (LAMELLARIN D), METODO
ALTERNATIVO PARA EL TRATAMIENTO DE LAS CELULAS
CANCEROSAS REFERENTES DEL CÁNCER MAMARIO
1. PLANTEAMINETO DEL PROBLEMA.
Se calcula que cada año se presentan en el mundo más de 11 millones de casos
nuevos de cáncer, de los cuales cerca del 80% se presentan en países en vía de
desarrollo. Para estos países el control del cáncer y otras enfermedades crónicas
impone retos particulares, pues generalmente este grupo de patologías coexisten con
necesidades básicas insatisfechas y con una carga alta por enfermedades
transmisibles en una franja importante de la población [1]. El cáncer encabeza la lista
como un problema de suma importancia de salud pública a nivel mundial, es un
término genético que, así como ocasiona gran temor, también genera un amplio grupo
de enfermedades que pueden afectar cualquier parte del organismo; en Latinoamérica
ocupa el tercer lugar en cuanto a decesos [2]. En Colombia, el cáncer representa un
problema de salud pública creciente, de acuerdo con estimados alrededor de 138.000
colombianos tienen diagnosticado dicha enfermedad, que anualmente cobra la vida
de  33.100 personas. De estas 16.300 son hombres afectados especialmente por
cáncer de estómago, pulmón, próstata, colon-recto y leucemias.  En Las 16.800
mujeres que lo padecen se presenta principalmente en el cuello del útero, estómago,
mama, pulmón y colon y recto [3]. Un tipo de cáncer que se ha vuelto común y afecta a
la gran mayoría de mujeres es el cáncer de mama, el cual es una enfermedad
heterogénea en la que intervienen factores genéticos y ambientales. Las células
madre del cáncer de mama son el jugador principal en la agresividad de diferentes
tumores y, además, estas células son el principal desafío en el tratamiento del cáncer.
Además, el principal obstáculo para lograr un tratamiento efectivo es la resistencia a
las terapias [4]. En los últimos análisis de la Subdirección de Enfermedades No
Transmisibles (ENT) del Ministerio de Salud y Protección Social da cuenta de un
aumento del cáncer de mama en el país. En Colombia, esta enfermedad se perfila
como un problema de salud pública debido a que por su causa anualmente fallecen
2.649 mujeres. [5] Las bajas tasas de supervivencia observadas en los países poco
desarrollados pueden explicarse principalmente por la falta de programas de detección
precoz, que hace que un alto porcentaje de mujeres acudan al médico con la
enfermedad ya muy avanzada, pero también por la falta de servicios adecuados de
diagnóstico y tratamiento. Los medicamentos que se usan para tratar el cáncer de
seno se consideran terapias sistémicas porque pueden alcanzar las células
cancerosas en casi cualquier parte del cuerpo. Pueden ser administradas por vía oral
o directamente en el torrente sanguíneo. Dependiendo del tipo de cáncer de seno,
pueden utilizarse diferentes tipos de tratamiento con medicamentos, incluyendo:
Quimioterapia, Terapia hormonal, Terapia dirigida para el cáncer de seno e
Inmunoterapia. Uno de los medicamentos utilizado como tratamiento en las mujeres
con cáncer de mama es el carboplatino, el cual es un metal pesado que inhibe la
síntesis de ARN, ADN y proteínas en las células. Todos estos compuestos son vitales
para evitar que las células se dividan y crezcan. Al evitar que se dividan, el
medicamento puede detener el crecimiento del cáncer. Sin embargo, el carboplatino
puede reducir el número de glóbulos blancos en la sangre, lo cual hará más propenso
a contraer una infección, también puede causar anemia, trombocitopenia, náuseas y
problemas renales. Estos efectos secundarios son la razón de que actualmente se
estén investigando nuevos medicamentos para estos tratamientos, buscando así
mayor efectividad y selectividad en cuanto a destruir las células
cancerosas sin afectar a las células sanas.

2. JUSTIFICACIÓN
Una de las nuevas moléculas en investigación es la lamellarina D, un alcaloide marino
hexacíclico inicialmente aislado de un molusco prosobranquio del género lamellarina,
muestra actividades citotóxicas potentes contra las líneas celulares tumorales
multirresistentes y sus correspondientes líneas celulares parentales. El efecto
antineoplásico de LAM-D parece ser, al menos en parte, el resultado de la activación
de la apoptosis. Curiosamente, LAM-D mantiene la citotoxicidad hacia líneas celulares
altamente resistentes a los fármacos antitumorales clásicos [6]. Por lo tanto, LAM-D
causa la muerte celular por apoptosis en líneas celulares de cáncer multirresistentes,
así como en células mutadas. Se ha demostrado que LAM-D interfiere con la actividad
de la topoisomerasa I, estabilizando los complejos covalentes topoisomerasa I- ADN
para promover la formación de roturas de una sola hebra de ADN y en paralelo
permeabiliza directamente las membranas mitocondriales de las células cancerosas
de una manera dependiente de la transición de permeabilidad de la membrana
mitocondrial (MPT); teniendo en cuenta que las mitocondrias desempeñan un papel
crucial en el proceso apoptótico inducido por agentes quimioterápicos [7]. Es probable
que LAM-D induzca apoptosis por un efecto directo sobre las mitocondrias por las
siguientes razones: (1) LAM-D induce una despolarización mitocondrial temprana
independiente de caspasas que está bien correlacionada con la apoptosis nuclear;(2)
LAM-D requiere mitocondrias para inducir apoptosis nuclear en un sistema libre de
células. Estas cualidades hacen de lamellarina D un método alternativo para
contratacar las células cancerígenas del cáncer mamario sin afectar las células sanas
[8].
3. OBJETIVO GENERAL.
 Certificar de manera contundente la relación Estructura-Actividad que confiere
actividad citotóxica, antitumoral y anti proliferativa al alcaloide marino (LAM-D)
convirtiéndolo así en un método alterno para el tratamiento de distintos tipos de
cáncer, en especial el cáncer mamario.

3.1. OBJETIVOS ESPECIFICOS.

 Consolidar el papel fundamental de la correlación entre la citotoxicidad y la
inhibición de la topoisomerasa I.
 Identificar la topoisomerasa I como diana molecular para el alcaloide marino
LAM-D.
 Confirmar con ensayos la actividad de LAM-D frente a células cancerosas
sobre la que se fundamenta este documento.

4. PALABRAS CLAVE.
Cáncer, Lamellarina D, Topoisomerasa I, ADN, Antitumoral, Anti proliferativa.
 5. MARCO TEÓRICO
Las lamellarinas son alcaloides marinos que contienen 14-fenil- 6H fusionado - [1]
benzopirano [4 ', 3': 4,5] pirrolo [2,1- a] isoquinolina o sistemas de anillos de 3,4-
diarilpirrol-2-carboxilato no condensados. Hasta la fecha, se han aislado más de 50
lamellarinas de una variedad de organismos marinos, como moluscos, tunicados y
esponjas. Muchos de ellos, especialmente lamellarinas tipo I fusionadas, exhiben una
actividad biológica impresionante, como citotoxicidad potente, inhibición de
topoisomerasa I, inhibición de proteínas quinasas y actividad anti-VIH-1. Debido a su
actividad biológica útil y a la disponibilidad limitada de fuentes naturales, se han
desarrollado varios métodos sintéticos.
5.1 Origen de las lamellarinas.
Los invertebrados marinos representan una fuente impresionante de productos
naturales bioactivos prometedores, presumiblemente biosintetizados para la
adquisición de alimentos o la defensa personal contra la depredación. Entre estos se
encuentran más de 60 alcaloides poliaromáticos que contienen pirrol en la familia de
las lamelarinas aisladas de moluscos, ascidias y esponjas que habitan los océanos
Índico y Pacífico. Su geometría molecular única y sus actividades pluripotentes hacen
que estos compuestos sean particularmente atractivos para su posterior desarrollo en
fármacos candidatos, especialmente para combatir los cánceres resistentes a
múltiples fármacos. Basado en estudios documentados desde su primer
descubrimiento en 1985 hasta 2017, esta revisión integral abarca la química de estos
productos naturales, así como la química orgánica sintética, biológica, estudios
mecanicistas, optimización de estructuras mediante evaluaciones de relación
estructura-actividad (SAR) y desarrollo preclínico de esta desafiante clase de
compuestos en agentes anticancerígenos.
La mayoría de las lamellarinas aisladas poseen un sistema de anillo fusionado 14-
fenil-6H- [1] benzopirano [40,30: 4,5] pirrolo [2,1-a] isoquinolin-6-ona como un andamio
común y se denominan tipo I lamellarinas (Fig. 1). Los anillos A, E y F aromáticos de
las laminillas tipo I están densamente sustituidos por grupos hidroxi y metoxi. El enlace
5,6 en el anillo D puede ser saturado (tipo Ia) o insaturado (tipo Ib). Algunas
lamellarinas poseen una estructura mucho más simple de 3,4-diarilpirrol-2-carboxilato
no fusionado y se denominan lamellarinas de tipo II. Algunas de las laminillas fundidas
se han aislado como ésteres de sulfato solubles en agua. Se cree que los orígenes
biogenéticos de las lamellarinas son aminoácidos aromáticos como la tirosina y la 3,4-
dihidroxifenilalanina (DOPA).

14 15 21 20
F 16 22
13 A 19
17
12 11 1 2 18
10 B O 4 3
9 C
E N4 3 5
N 2 CO Me
8 D O
5 R
7 6
Tipo Ia (5,6-saturado) Tipo Ib (5,6-insaturado) Tipo II

FIGURA 1.

Algunas lamellarinas exhiben una potente actividad citotóxica contra una serie de
líneas celulares de cáncer, incluidos los fenotipos resistentes a múltiples fármacos
(MDR). Además, las lamellarinas sulfatadas exhiben actividad anti-VIH-1 a
concentraciones no citotóxicas. Estos importantes descubrimientos han promovido
extensos estudios sintéticos. Steglich, Ishibashi – Iwao y Banwell – Flynn lograron de
forma independiente las primeras síntesis totales de laminillas fundidas en 1997.
Desde entonces, se han desarrollado aproximadamente 30 tipos diferentes de síntesis.
Algunos de ellos son prácticamente útiles, ya que proporcionan una variedad de
laminillas naturales y no naturales.
5.2 Topoisomerasa e inhibidores de la topoisomerasa I.
Durante los procesos celulares de la replicación, transcripción y reparación, así como
de recombinación y reparto de cromosomas, aparecen tensiones en el DNA que deben
ser resueltas. En la molécula de ADN de eucariotas aumenta el nivel de tensión en
una región, cuando en otra se están separando las dos hebras, esta tensión se
manifestará como un superenrollamiento. Las topoisomerasas de ADN son las
enzimas encargadas de regularlo mediante un proceso en el que se dan la ruptura de
la hebra, paso de otra hebra intacta a través de la rotura y ligación. Se trata de una
familia de enzimas situadas en el núcleo celular, muy conservado e indispensable para
los organismos. Estas las podemos dividir en dos grandes grupos basándonos en sus
propiedades y mecanismos de acción. Así, encontramos por un lado las
topoisomerasas de tipo I, estas rompen una hebra de la molécula y permiten el paso
de la otra hebra intacta a través de la rotura. Por otro lado, las topoisomerasas de tipo
II rompen las dos cadenas de la molécula de DNA y permiten el paso de otra doble
cadena de DNA intacto a través de la rotura.

Figura 1. Mecanismo de acción de la topoisomerasa I.

 Figura 2. Mecanismo de acción de la topoisomerasa II.
Las topoisomerasas de tipo I se dividen en 2 subfamilias, 1A y 1B, basándose en las
diferencias de sus mecanismos de acción [] La subfamilia 1A contiene la girasa
reversa de arqueas, la topoisomerasa I y III bacterianas y la topoisomerasa IIIα y IIIβ
de eucariotas [] Dentro de la subfamilia 1B se encuentra la topoisomerasa I de
mamíferos, una proteína que se ha conservado de forma parcial desde levaduras
hasta humanos [] A diferencia de esta, la topoisomerasa II de mamíferos está
altamente conservada en todos los organismos vivos..
Numerosos estudios han demostrado que las topoisomerasas son un buen objetivo
para el estudio y el empleo de terapias, es decir, actúan como
dianas terapéuticas. Podemos diferenciar dos grandes grupos de compuestos que
inhiben a las topoisomerasas, de tipo 1 y de tipo 2.  Por un lado, se encuentran los
denominados venenos (Liu, 1989), inhibidores de tipo 1, estos actúan estabilizando el
complejo DNA-topoisomerasa I. El otro grupo actúa a nivel de la topoisomerasa II, se
subdivide en los también denominados venenos, dirigidos al complejo formado entre la
topoisomerasa y el ADN, y en los inhibidores catalíticos, los cuales inhiben la enzima
de forma independiente a la estabilización del complejo ya mencionado. 
5.2.1 Inhibidores tipo I.
Los primeros mencionados, inhibidores de tipo 1, son agentes que bloquean de forma
específica y reversible la ligación de roturas, atrapado al intermediario ADN-
Topoisomerasa y aumentando así la concentración de topoisomerasa que queda unida
a los extremos rotos del ADN.
En 1988, estudios sugirieron que la topoisomerasa de ADN de mamíferos era un
posible objetivo intracelular de la camptotecina (Hsiang y col., 1985) y hoy en día se ha
confirmado firmemente. Se trata de un alcaloide procedente del árbol Camptotheca
accuminata. Las camptotecinas son una clase de agentes antineoplásicos (sustancias
que impiden el desarrollo, crecimiento, o proliferación de células tumorales
malignas) que inhiben a la topoisomerasa I y presentan actividad en numerosos
tumores. Realizan su acción estabilizando el complejo formado por topoisomerasa I-
DNA, lo que al final lleva a las roturas de la hebra doble y a la apoptosis.
 Figura 3. Estructura
de las Camptotecinas.
El descubrimiento del producto natural camptotecina (CPT) como un inhibidor Top1
específico y el desarrollo de derivados sintéticos de CPT topotecan e irinotecan en uso
clínico representan un gran logro en el descubrimiento de fármacos antitumorales. Sin
embargo, aparte de los CPT, solo unos pocos venenos de topoisomerasa I han
alcanzado ensayos clínicos de fase I. Se han informado resultados prometedores con
glicosil indolocarbazoles; hasta la fecha, también, todavía no hay venenos de
topoisomerasa I sin CPT en ensayos clínicos avanzados. Por otro lado, los derivados
de CPT clínicamente aprobados tienen varias limitaciones importantes, como la
inestabilidad química, la resistencia a los medicamentos y los efectos secundarios.

Figura 4. Mecanismo de acción de las camptotecinas.

Como se menciona anteriormente, además de la camptotecina
como tal, posteriormente se hicieron diversos estudios donde se
investigaron nuevos venenos como drogas más efectivas, las cuales presentan
generalmente una mayor actividad antitumoral y menor toxicidad. Estos son el
irinotecan y topotecan, empleados para múltiples tipos de cáncer. Ambos análogos
semisintéticos de esta. 
El primero se emplea en el tratamiento del cáncer de colon metastásico, y ha sido
incorporado para tratar el cáncer de pulmón de células pequeñas, cánceres
ginecológicos y otras enfermedades malignas que afectan a la parte superior del tubo
digestivo, así como al glioblastoma multiforme.
El topotecan se usa en la quimioterapia contra el cáncer de ovario y en el cáncer
pulmonar de células pequeñas (SCLC).  Del mismo modo, es también empleado en
diversos tipos de cáncer en el caso de que estos se hayan extendido a otras zonas del
cuerpo o si hay un retorno de los mismos tras la radioterapia. Así cabe mencionar su
uso frente al cáncer de cuello uterino. Asimismo, aparte de estos usos frente al cáncer,
se cree que los derivados de la camptotecina pueden ser eficaces frente a
determinadas enfermedades tropicales causadas por parásitos, algo que todavía se
está estudiando.
Por lo tanto, el descubrimiento de nuevos inhibidores Top1 ha surgido recientemente
como un campo prometedor para encontrar mejores agentes antitumorales.
Actualmente, la identificación de nuevos inhibidores Top1 todavía depende en gran
medida de la optimización de la CPT natural y la detección de productos naturales. En
los últimos años, se ha informado que una serie de nuevos derivados de CPT y
productos naturales son nuevos inhibidores de Top1. Varios de ellos mostraron mayor
actividad inhibitoria de Top1, estabilidad química y actividad antitumoral, que tenía un
futuro prometedor para superar las limitaciones de la CPT. Nuevos derivados de
productos naturales con perfiles farmacológicos y farmacodinámicos mejorados, por
ejemplo, la familia de lamellarinas.

5.3 Mutaciones del ADN

La principal causa del cáncer son los cambios en el ADN de las células que se van
acumulando a lo largo de la vida, y no tanto, los que han sido heredados por los
padres. Identificar las causas de estos cambios o mutaciones es un reto muy difícil
porque hay muchos procesos que pueden dar lugar a un mismo cambio en la
secuencia del ADN. Fran Supek (en la actualidad jefe de grupo en el IRB Barcelona) y
Ben Lehner del Centro de Regulación Genómica (CRG) en Barcelona, han identificado
uno de los mecanismos importantes que causa estas mutaciones y han visto que se
trata de una serie de errores que introduce el 'corrector' del ADN, un mecanismo cuya
función es reparar los daños en nuestro genoma.
Los investigadores han identificado este proceso estudiando grupos de mutaciones en
más de un millar de genomas de tumores. Es decir, han estado buscando mutaciones
que se encontraran muy cerca, en una misma región del genoma, de manera que
fuera muy difícil que se tratara de una casualidad. El objetivo era obtener una visión
más precisa de los factores mutágenos que afectan a las células humanas y que
podrían dar lugar al cáncer []. Uno de los nuevos procesos de mutación es bastante
inusual y es el más evidente en genes que se encuentran activos. Las regiones con
genes activos están más protegidas por los mecanismos de reparación y corrección de
ADN; en otras palabras, la reparación de ADN se centra
especialmente en aquellas regiones donde es más necesario
preservar la información genética. La reparación del ADN es extremadamente
importante puesto que el cuerpo está renovando constantemente sus células, lo que
implica tener que copiar más de dos metros de ADN y, por tanto, inevitablemente se
introducen errores. Además, los agentes mutágenos en el ambiente como la luz del sol
o fumar tabaco, dañan el ADN y los mecanismos de reparación se encargan de
repararlo. La reparación del ADN normalmente es extremadamente precisa y
cuidadosa pero algunos tipos de daños sólo pueden reparar utilizando 'correctores' de
baja fidelidad. Son los errores introducidos por este tipo de correctores menos
cuidadosos los que causan muchas de las mutaciones. Entonces de esta forma se
tiene que las mutaciones del ADN se producen como consecuencia de factores
celulares exógenos (luz ultravioleta, tabaquismo) y factores celulares endógenos
(replicación) y son inevitables durante toda la vida. Si bien es probable que la mayoría
de las mutaciones sean neutrales o perjudiciales, unos subconjuntos de mutaciones
pueden proporcionar ventajas proliferativas que conducen a la expansión de la célula
que las transporta (fig.5). Este proceso de selección positiva y expansión clonal
subyace a la evolución del cáncer, pero numerosos informes han confirmado que
también es un proceso normal de envejecimiento humano [], si bien los clones
mutados pueden surgir por deriva genética aleatoria, numerosas líneas de evidencia
respaldan el hecho de que la mayoría de las expansiones clónales relacionadas con la
edad se originan por selección positiva.

Figura 5. La evolución somática como un proceso de envejecimiento humano normal y cáncer

Las mutaciones de ADN se acumulan inevitablemente a lo largo
de la vida debido a la replicación del ADN y a factores
ambientales y de estilo de vida. Las mutaciones pueden ser neutras (líneas grises),
perjudiciales (X) o pueden conferir una ventaja proliferativa y la célula se expande
clonalmente (verde, azul, amarillo). Estas expansiones clónales iniciales proporcionan
grupos de células mutadas en las que las mutaciones posteriores podrían permitir
propiedades de transformación. Sin embargo, la gran mayoría de los clones no
evolucionan a malignidad, lo que probablemente se deba a la acción de los
mecanismos supresores de tumores. En un subconjunto de individuos, a edades más
avanzadas, los mecanismos supresores de tumores son anulados por la acumulación
de mutaciones adicionales que anulan estos mecanismos y / o por su disminución de
la acción con la edad (por ejemplo, disminución de la inmunidad). Rondas adicionales
de mutación, selección, y las expansiones clónales permiten que las células
cancerosas adquieran las propiedades malignas características de esta enfermedad.
Una biopsia tomada a la mediana edad (rectángulo azul de línea discontinua) podría
transportar mutaciones asociadas al cáncer de células que se han expandido
clonalmente pero que no son malignas (a menudo denominadas mutaciones de fondo
biológico). En una biopsia tomada cuando el cáncer se ha desarrollado (rectángulo de
línea discontinua naranja), el clon derivado del tumor puede ser identificado debido a
su mayor tamaño en comparación con los clones de fondo. Abreviatura: ROS,
especies reactivas de oxígeno.
BIBLIOGRAFÍA
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