BIO-AMB Guía No. 4 Enzimas Estudio Cinético de La Catalasa PDF

UNIVERSIDAD MILITAR NUEVA GRANADA
ENZIMAS: ESTUDIO CINÉTICO DE LA CATALASA
Identificación:
GL-AA-F-1
Guías de Prácticas de Número de
Revisión No.:
Páginas:
Laboratorio 2
16
Fecha Emisión:
2018/01/31
Laboratorio de:
BIOQUÍMICA
Titulo de la Práctica de Laboratorio:

Elaborado por: Revisado por: Aprobado por:
María Claudia Sandoval Dr. Laura Cerón Rincón, M.Sc. Comité Asesor de
Sc. Departamento de Química
Docentes Departamento de Directora Departamento de

Química Química
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contra de los derechos de autor
Control de Cambios
Fecha de
Descripción del Cambio Justificación del Cambio Elaboración /
Actualización
Modificación del Se agregó fuentes para la
procedimiento: adición de extracción de la enzima y
Julio de 2019
muestras vegetales permitir la comparación de
muestras,
Se revisó la guía y se
Adecuación de la guía e incluyó la rúbrica de
julio de 2019
inclusión de rubrica evaluación para
el informe.
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1. FACULTAD O UNIDAD ACADÉMICA: Facultad de Ciencias Básicas y

Aplicadas
2. PROGRAMA: Biología Aplicada e Ingeniería Ambiental
3. ASIGNATURA: Bioquímica
4. SEMESTRE: Tercero y Cuarto
5. OBJETIVOS:
• Evaluar la actividad de la catalasa en presencia de reguladores no

específicos.
• Determinar el efecto del pH sobre la velocidad de reacción.
• Identificar el efecto de la temperatura sobre la velocidad de la reacción.
• Determinar el efecto de la concentración de sustrato y enzima sobre la
velocidad de reacción.
• Determinar el efecto del tiempo sobre la velocidad de reacción.
MARCO TEORICO
Las enzimas son proteínas que tienen la función de catalizar reacciones químicas. Su
naturaleza proteica las hace susceptibles de cambios en su estructura en diferentes
condiciones lo cuales generan cambios en su actividad.
La actividad enzimática está sujeta a diversas variables entre las que se encuentran
temperatura, pH, concentración del sustrato, concentración de enzima y la presencia de
inhibidores. Como cada enzima tiene unas condiciones óptimas diferentes, es necesario
estudiar las condiciones en las que la enzima tiene la actividad más alta, especialmente de
temperatura y pH, por medio del empleo de buffers y termostato.
El curso de una reacción enzimática puede medirse de dos formas:
a) Medición del sustrato que se transforma

b) Medición del producto formado
El método escogido va a depender de la enzima particular, encontrando un método

cuantitativo apropiado.
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El mecanismo que permite que las enzimas incrementen la velocidad de la reacción es la

reducción de la energía libre de activación requerida para transformar un sustrato al
producto correspondiente, sin afectar la constante de equilibrio.
V1
A+B ⇌ C + D
V2
[C][D]
Keq =
[A][B]
v1 = Velocidad de la reacción para formar los productos

v2 = Velocidad de la reacción para formar los reactivos
Keq = Constante de equilibrio
[ ] = Concentración molar.
A continuación, se presenta un resumen de las características que distinguen a una enzima:
1. Es una proteína.
2. Resulta muy específica para el sustrato.
3. Incrementa la velocidad de la reacción.
4. No modifica la constante de equilibrio (Keq).
5. Se modifica de manera temporal, pero esta modificación no persiste al final de la
reacción, ni forma parte de los productos.
6. Requiere condiciones óptimas para la catálisis.
La actividad de una enzima se evalúa de acuerdo con la velocidad de la reacción. La

cinética enzimática estudia la velocidad de la reacción enzimática, los factores que la
modifican y el mecanismo de la reacción. Los factores fisicoquímicos que modifican la
actividad de la enzima son los siguientes:
1. Concentración del sustrato.

2. pH.
3. Temperatura.
4. Tiempo de reacción.
Catalasa
En esta práctica se utilizará la enzima catalasa como modelo para analizar algunos
aspectos de la regulación no específica de la enzima (pH, temperatura, tiempo de reacción,
concentración del sustrato, concentración de enzima y presencia de un inhibidor).
La catalasa es una hemoproteína que contiene cuatro grupos hemo. Además, posee
actividad de peroxidasa, utiliza una molécula de peróxido de hidrógeno (H2O2) como
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sustrato donador de electrones y otra molécula de H2O2 como oxidante o aceptor de

electrones.
2H2 O2 ⇌ 2H2 O + O2
La catalasa se encuentra en todas las células vegetales y animales, incluyendo la sangre,

la médula ósea, las mucosas, el riñón y el hígado. Su función es la destrucción del H2O2
formado por la acción de las oxidasas. Los microcuerpos, o peroxisomas, se encuentran en
cuantiosos tejidos, incluido el hígado. En ellos abundan las oxidasas y la catalasa, lo que
sugiere que tal vez haya una ventaja biológica en el agrupamiento de las enzimas que
producen H2O2 con la enzima que lo destruye. Además de las enzimas peroxisómicas, se
debe considerar que los sistemas mitocondriales y microsómicos de transporte de
electrones, además de la xantina oxidasa, son fuentes de H2O2.
VELOCIDAD DE REACCIÓN
El uso de una enzima cataliza la reacción, es decir que el catalizador, en este caso la
enzima, disminuye la energía de activación de la reacción, resultando en una mayor
velocidad de reacción. Esto se debe a que se genera una nueva ruta de reacción dando
lugar a un estado de transición más favorable energéticamente,
Para la reacción:
S⟶P
Tenemos que la velocidad será:
V=k[S]
En donde k es la constante de velocidad de la reacción y [S] es la concentración del

sustrato. Esta ecuación indica que la velocidad de reacción es proporcional a la
concentración del sustrato y al valor de la constante. Cuando la reacción es catalizada por
una enzima, la reacción sería:
k1 k2
E+S ⇌ES⇌E+P
k-1
Para esta reacción, la velocidad será:
V0 =k2 [ES]
En donde V0 es la velocidad inicial y se determina midiendo la cantidad de producto formado

en la fase inicial, antes de llegar a la zona plateau. k2 es la constante de velocidad de
reacción, [ES] es la concentración del complejo enzima-sustrato.
A partir de esta ecuación, y después de un tratamiento matemático, obtenemos que:
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[S]
V0 =Vmax
[S]+Km
En donde Vmax es la velocidad máxima y Km es la constante de Michaelis Menten. Esta
constante equivale a la concentración de sustrato a la cual la velocidad de reacción es la
mitad de la velocidad máxima.
Al graficar la V0 vs. [S] se obtiene una curva en donde se observa que a medida que
aumenta la [S] llega un punto de saturación en donde la velocidad de reacción tiende a
ser constante.
Vmax
V0
Vmax/2
Km
[S]
Para linealizar los resultados obtenidos, se realiza una gráfica de los inversos, por medio
de la linealización de Lineweaver-Burk
1 Km 1 1
= × +
V0 Vmax [S] Vmax
FUNDAMENTO DE LA MEDICIÓN DE LA ACTIVIDAD CATALASA
En cada experimento, la concentración de H2O2 se determina mediante titulación con

estándar de KMnO4. La titulación de una muestra control por cada experimento sirve como
medida de la concentración de peróxido al comienzo del experimento. La titulación de la
muestra es una medida del peróxido remanente al final del experimento. La diferencia entre
las dos titulaciones representa la cantidad de peróxido descompuesto. En este experimento,
se considera que las moles de peróxido descompuesto por unidad de tiempo son la medida
de la actividad de la catalasa y de la velocidad de reacción.
Reacciones
2H2O2 ⇌ 2H2O+O2
5H2 O2 + 2KMnO4 + 3H2 SO4 ⟹ 8H2 O + 5O2 + 2MnSO4 +K2 SO4
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6. MATERIALES, REACTIVOS, INSTRUMENTOS, SOFTWARE, HARDWARE O

EQUIPOS DEL LABORATORIO:
DESCRIPCIÓN (Material, reactivo,

CANTIDAD UNIDAD DE MEDIDA
instrumento, software, hardware, equipo)
Ácido sulfúrico (H2SO4) a 1 M, que contiene
250 mL
1 mg/mL de sulfato de manganeso (MnSO4)
Permanganato de potasio (KMnO4) a 0,01 M 500 mL
Soluciones de sustrato: H2O2 a 0.24 %
10 mL
preparada con buffer citrato 50 mM a pH 3
10 mL
10 mL
10 mL
250 mL
10 mL
Buretas 3 unidades
Pipetas graduadas de 5,00 mL 3 unidades
Pipeteador 1 unidad
Vaso de precipitados (100, 250 mL) 4 unidades
Erlermeyer 8 Unidades
Licuadora 1 Unidad
Sonicador 1 unidad
7. MATERIALES, REACTIVOS, INSTRUMENTOS, SOFTWARE, HARDWARE O

EQUIPOS DEL ESTUDIANTE:
DESCRIPCIÓN (Material,
UNIDAD DE
reactivo, instrumento, software, CANTIDAD
MEDIDA
hardware, equipo)
Bata de poliéster blanca. 1 unidad
Gafas de seguridad. 1 par
Guantes de nitrilo 2 pares
Bayetilla 1 unidad
Toallas de papel Scott 10 unidades
Marcador tipo Sharpie 1 unidad
Cinta de enmascarar 1 rollo
Cuaderno de laboratorio 1 Unidad
Material vegetal 100 g
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8. PRECAUCIONES CON LOS MATERIALES, REACTIVOS, INSTRUMENTOS

Y EQUIPOS A UTILIZAR:
• Antes de entrar al laboratorio lea la guía del trabajo en el laboratorio y elabore el

respectivo preinforme, tenga en cuenta todas las indicaciones
• Deben seguirse las instrucciones para cada una de las reacciones, teniendo en cuenta
las condiciones que se mencionan en el procedimiento.
• Al momento de realizar la titulación asegúrese que la bureta este correctamente llena y
que el nivel de enrase se encuentre en 0,0 mL, de no ser así enrace a un volumen
conocido y regístrelo en su cuaderno de laboratorio para así poder precisar el volumen
de agente titulante usado. No olvide registrar la concentración del titulante.
• Recuerde revisar todas las precauciones de los reactivos empleados en la práctica
• Al realizar las medidas con micropipeta tenga en cuenta que el líquido no debe ascender
hasta el vástago de la misma y de ser así, debe hacérselo saber a la laboratorista.
• Cuando realice medidas con las pipetas, el líquido no debe ascender hasta el pipeteador
9. PROCEDIMIENTO, MÉTODO O ACTIVIDADES:
El estudiante debe traer de casa material fresco de papa, pitaya, y 100 gramos
de quinoa
9.1. Preparación de la solución de catalasa
La catalasa se extrae a partir de algún material vegetal, y para esta práctica se extraerá a
partir de la papa. Para ello, debe pesar aproximadamente 50 g de papa recién pelada.
Córtela en pedazos y mézclela en la licuadora con una pequeña porción de agua destilada,
sin superar el volumen del matraz aforado que se empleará (100,0 mL). Tenga un baño de
hielo preparado, y apenas se licúe hasta obtener una mezcla homogénea, filtre con tela de
cortina y transfiera el filtrado al matraz aforado, que debe mantenerse en hielo. Este extracto
debe prepararse fresco en cada sesión de laboratorio, teniendo en cuenta que siempre
debe extraerse del mismo tipo de papa. Los 4 grupos de laboratorio prepararán un extracto
de cada material vegetal el día de la práctica y se repartirá en los 4 grupos de laboratorio.
Para el caso de la Pitaya, debe retirar el epicarpio y pesar 60 g de pulpa de la fruta. Luego
debe añadirla a la licuadora con un poco de agua destilada (la menor cantidad posible).
Debe encender la licuadora en pulsos, hasta que las semillas se separen y luego filtre con
tela de cortina, recoja el filtrado y llévelo a volumen como en el caso anterior.
La quinoa requiere de un tratamiento distinto a las anteriores muestras, el material debe ser
humedecido con agua destilada y triturado en mortero. Pese 15 g de quinoa seca, y
colóquela en el mortero. Añada un poco de agua, deje que la quinoa se hidrate y macere
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suavemente. Filtre en tela de cortina y recolecte el filtrado. Repita el procedmiento con el

residuo de la filtración y reuna el filtrado con el de la primera filtración, tansfiera a un balón
aforado de 100,0 mL y llevar a volumen con agua destilada.
9.2. Efecto del pH sobre la velocidad de reacción
Teniendo su extracto de catalasa en hielo, debe alistar los matraces como se muestra en
la tabla No. 1 para realizar la reacción enzimática y posteriormente la titulación. Si no tiene
suficientes matraces, debe irlos lavando a medida que los usa, DESPUÉS DE LA
TITULACIÓN.
Matraz Sustrato H2O2 (5,0 mL) Extracto de catalasa

1 pH 3,0 0,5 mL
2 pH 3,0 -
3 pH 4,0 0,5 mL
4 pH 4,0 -
5 pH 5,0 0,5 mL
6 pH 5,0 -
7 pH 6,0 0,5 mL
8 pH 6,0 -
9 pH 7,0 0,5 mL
10 pH 7,0 -
11 pH 8,0 0,5 mL
12 pH 8,0 -
Tabla 1 Efecto del pH en la velocidad de reacción de la enzima catalasa, extraída de papa.
Debe incubar la reacción enzimática a temperatura ambiente durante exactamente 2

minutos. Pasados los 2 minutos, añadir 5,0 mL de H2SO4 1M para detener la reacción.
Cuando tenga listo el primer matraz puede empezar con la titulación. Debe obtener 12
valores de titulación, es decir 12 valores de volumen de KMnO4 gastado para cada uno de
los matraces.
9.3. Efecto de la temperatura sobre la velocidad de reacción
TITULACIÓN.
Extracto de
Matraz Sustrato H2O2 (pH 7,0) Temperatura
catalasa
1 5,0 mL 15ºC 0,5 mL
Pagina 9 de 16
Extracto de
Matraz Sustrato H2O2 (pH 7,0) Temperatura
catalasa
2 5,0 mL 15ºC -
3 5,0 mL 25ºC 0,5 mL
4 5,0 mL 25ºC -
5 5,0 mL 37ºC 0,5 mL
6 5,0 mL 37ºC -
7 5,0 mL 60ºC 0,5 mL
8 5,0 mL 60ºC -
9 5,0 mL 92ºC 0,5 mL
10 5,0 mL 92ºC -
Tabla 2 Efecto de la temperatura en la velocidad de reacción de la enzima catalasa, extraída de papa.

los matraces.
9.4. Efecto del tiempo sobre la velocidad de reacción
TITULACIÓN.
Extracto de
Matraz Sustrato H2O2 (pH 7,0) Tiempo
catalasa
1 5,0 mL 0 -
2 5,0 mL 1 min 0,5 mL
3 5,0 mL 3 min 0,5 mL
4 5,0 mL 5 min 0,5 mL
5 5,0 mL 7 min 0,5 mL
6 5,0 mL 10 min 0,5 mL
7 5,0 mL 15 min 0,5 mL
Tabla 3 Efecto del tiempo en la velocidad de reacción de la enzima catalasa, extraída de papa.

Pagina 10 de 16
los matraces.
9.5. Efecto de la concentración de sustrato sobre la velocidad de reacción
TITULACIÓN.
Sustrato H2O2 Extracto de

Matraz Agua (mL)
(pH 7,0) catalasa
1 - 10,0 0,5 mL
2 - 10,0 -
3 1,25 8,75 0,5 mL
4 1,25 8,75 -
5 2,5 7,5 0,5 mL
6 2,5 7,5 -
7 5,0 5,0 0,5 mL
8 5,0 5,0 -
9 7,5 2,5 0,5 mL
10 7,5 2,5 -
11 10,0 - 0,5 mL
12 10,0 - -
Tabla 4 Efecto de la concentración de sustrato en la velocidad de reacción de la enzima catalasa,
extraída de papa.

los matraces.
10. RESULTADOS ESPERADOS:
En esta práctica, se titula el exceso de H2O2 remanente después de la reacción

enzimática. Para poder realizar los cálculos, debe completar tablas como la que se
muestra a continuación, teniendo en cuenta cuáles son las variables y deberá
incluirlas en su informe de laboratorio, en la parte de “Resultados”.
Pagina 11 de 16
Después de medir el volumen de KMnO4 0,01M gastado en la titulación, debe

calcular el número de moles gastadas y con estas moles calcular el número de
moles de H2O2 tituladas (moles de H2O2 que no reaccionaron con la catalasa). Para
hallar el número de moles que sí reaccionaron, debe restar el valor correspondiente
a la muestra que no tiene catalasa en cada caso. Revise el ejemplo que se da a
continuación:
Velocidad
Vol KMnO4 Moles de Moles de Moles de (moles de
Extracto de
pH 0,01M KMnO4 H2O2 sin H2O2 que H2O2
catalasa
gastado gastadas reaccionar reaccionaron /minutos de
reacción)
3,0 0,5 mL 12,6 1,26,E-04 3,15,E-04
2,00,E-05 1,00,E-05
3,0 - 13,4 1,34,E-04 3,35,E-04
4,0 0,5 mL
4,0 -
5,0 0,5 mL
5,0 -
6,0 0,5 mL
6,0 -
7,0 0,5 mL
7,0 -
8,0 0,5 mL
8,0 -
Tabla 5 Resultados obtenidos del efecto del pH en la velocidad de reacción de la enzima
catalasa, extraída de papa.
Esta tabla debe realizarse para cada uno de los 4 experimentos (pH óptimo,
temperatura óptima, tiempo óptimo y concentración del sustrato), indicando siempre
las diferencias entre una muestra y otra, no simplemente enumerándolos (1, 2, 3…).
Luego de realizar estas tablas, debe realizar las siguientes gráficas correlacionando
las especies vegetales evaluadas:
5. Velocidad vs. pH
6. Velocidad vs. Temperatura
7. Velocidad vs. Tiempo
8. Velocidad vs. [H2O2]
9. 1/velocidad vs. 1/[[H2O2]
Pagina 12 de 16
La concentración de sustrato (H2O2) debe calcularse. Para calcular la velocidad

de reacción, se debe calcular las moles de H2O2 que reaccionaron y se dividen por
el tiempo de reacción en min. La concentración de sustrato, es la concentración del
H2O2 medido al inicio de la reacción (teniendo en cuenta el cambio en el volumen).
PREGUNTAS PARA EL INFORME:

• ¿Qué efecto tienen cada uno de las variables estudiadas en la reacción
enzimática?
• Explique el comportamiento de la enzima en las distintas especies
vegetales
• ¿Por qué las enzimas están sujetas a estas variables?
• ¿Qué más se debe considerar en el comportamiento de la enzima?
• ¿Cuál sería el comportamiento esperado de la enzima?
• ¿Qué se puede concluir de los resultados encontrados?
• En literatura, ¿qué tipo de regulación tiene la catalasa?
11. CRITERIO DE EVALUACIÓN A LA PRESENTE PRÁCTICA:

Presentación del informe grupal, el cual debe entregarse en el formato que se les entregó
previamente, con las características allí mencionadas.
En el cuaderno individual deben registrarse todos los resultados obtenidos, y podrán ser
revisados en la siguiente práctica.
Para la evaluación del informe de laboratorio se tendrá en cuenta la siguiente rubrica
NIVELES
Excelente Bueno Aceptable Deficiente No Presentó

4,0 a 5,0 3,0 a 4,0 2,0 a 3,0 1,0 a 2,0 0,0
Asiste Asiste Asiste Asiste

No asiste a la
puntualmente a puntualmente a puntualmente a puntualmente a
práctica
la práctica la práctica la práctica la práctica.
Presenta el No presenta el No presenta el No presenta el

No presenta el
informe en la informe en la informe en la informe en la
informe
fecha indicada fecha indicada fecha indicada fecha indicada
Presenta el Presenta el Presenta el No presenta el

informe en el informe en el informe en el informe en el
formato de formato de formato de formato de
artículo científico artículo científico artículo científico artículo científico
indicado indicado indicado indicado
Pagina 13 de 16
El resumen El resumen
muestra de muestra de El resumen es El resumen es
forma breve, forma breve, incompleto y no incompleto y no
concisa y concisa y ilustra acerca del ilustra acerca del
concreta todo el concreta todo el contenido del contenido del
contenido del contenido del informe informe
informe informe
La introducción
La introducción La introducción explica algunos La introducción
explica algunos explica algunos antecendentes explica
antecendentes antecendentes no tan antecendentes
importantes importantes importantes poco pertinentes
relacionados con relacionados con relacionados con y de manera muy
la temática y la temática y la temática pero extensa e
explica el explica el que no ayudan a incoherente, que
objetivo de la objetivo de la explicar el no se relacionan
práctica práctica objetivo de la con la temática
práctica
Describe en
detalle la
Describe en Describe en
metodología
detalle la detalle la No describe en
empleada, pero
metodología metodología detalle la
no incluye las
empleada, empleada, metodología
cantidades
incluyendo las incluyendo las empleada, se
exactas
cantidades cantidades limita a copiar la
utilizadas en la
exactas exactas metodología de
práctica de
utilizadas en la utilizadas en la la guía de
laboratorio ni las
práctica de práctica de laboratorio
modificaciones
laboratorio laboratorio
realizadas a la
misma
Los resultados
Los resultados
Los resultados mostrados están
Los resultados mostrados están
mostrados están incompletos, y
mostrados están completos, pero
completos, así los cálculos y las
completos, así los cálculos y
como los gráficas no
como los gráficas no son
cálculos y las corresponden
cálculos y las correctos, no
gráficas. con los datos o
gráficas pero no están bien
También se están mal
se rotulan realizados y no
rotulan ejecutados y no
correctamente se rotulan
correctamente se rotulan
correctamente
correctamente
La descripción La descripción La descripción La descripción
de los de los de los de los
resultados, resultados, resultados, resultados,
Pagina 14 de 16
incluyendo tablas incluyendo tablas incluyendo tablas incluyendo tablas

y gráficas se y gráficas se y gráficas no es y gráficas no se
expresa de expresa de clara o se incluye encuentra en el
forma clara, forma clara como análisis de informe
resultados
Es capaz de
Es capaz de No Es capaz de
explicar todos los No explica todos
explicar todos los explicar todos los
fenómenos los fenómenos
fenómenos fenómenos
moleculares moleculares
moleculares moleculares
ocurridos ocurridos
ocurridos ocurridos
durante la durante la
durante la durante la
práctica, práctica ni
práctica, pero no práctica ni
evidenciando evidencia todas
evidencia todas evidencia todas
todas las las reacciones
las reacciones las reacciones
reacciones químicas
químicas químicas
químicas llevadas a cabo
llevadas a cabo llevadas a cabo
llevadas a cabo en el laboratorio.
en el laboratorio. en el laboratorio.
en el laboratorio
En el análisis de En el análisis de
resultados se resultados se En el análisis de En el análisis de
evidencia que el evidencia que el resultados no se resultados no se
estudiante estudiante evidencia que el evidencia que el
realiza una realiza una estudiante haya estudiante haya
amplia búsqueda amplia búsqueda realizado una realizado una
bibliográfica, que bibliográfica, amplia búsqueda amplia búsqueda
incluye por lo pero no incluye bibliográfica, ni bibliográfica, ni
menos tres por lo menos tres de artículos de artículos
artículos artículos científicos en científicos en
científicos en científicos en inglés inglés.
inglés. inglés.
El estudiante no
analiza sus
El estudiante El estudiante no
resultados
analiza sus analiza sus
basándose en lo
resultados resultados
aprendido en
basándose en lo basándose en lo El estudiante no
clase, ni explica
aprendido en aprendido en incluye análisis
los resultados
clase, explicando clase, ni explica de resultados en
dentro de un
los resultados los resultados su informe
contexto
dentro de un dentro de un
pertinente, se
contexto contexto
limita a describir
pertinente. pertinente.
lo ocurrido en el
laboratorio.
Pagina 15 de 16
No puede
conectar los No puede
resultados conectar los
Puede conectar obtenidos con el resultados
los resultados conocimiento obtenidos con el
No menciona el
obtenidos con el generado por conocimiento
trabajo de otros
conocimiento otros autores en generado por
autores en su
generado por experimentos otros autores en
análisis de
otros autores en similares. Se experimentos
resultados
experimentos limita a similares. Se
similares mencionar el limita a copiar el
trabajo de otros trabajo de otros
autores con sus autores
propias palabras.
No está
Está capacidad Está capacidad capacidad de
No escribe
de resumir en las de resumir en las resumir en las
ninguna
conclusiones los conclusiones los conclusiones los
conclusión
resultados resultados resultados
acerca de la
obtenidos y su obtenidos y su obtenidos y su
práctica o de los
interpretación de interpretación de interpretación, se
resultados
forma clara y forma clara y limita a
obtenidos en ella
concisa. concisa. mencionar
resultados.
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ENZIMAS: ESTUDIO CINÉTICO DE LA CATALASA

Titulo de la Práctica de Laboratorio:

Elaborado por: Revisado por: Aprobado por:

Docentes Departamento de Directora Departamento de

ENZIMAS: ESTUDIO CINÉTICO DE LA CATALASA

ENZIMAS: ESTUDIO CINÉTICO DE LA CATALASA

1. FACULTAD O UNIDAD ACADÉMICA: Facultad de Ciencias Básicas y

2. PROGRAMA: Biología Aplicada e Ingeniería Ambiental

4. SEMESTRE: Tercero y Cuarto

• Evaluar la actividad de la catalasa en presencia de reguladores no

a) Medición del sustrato que se transforma

El método escogido va a depender de la enzima particular, encontrando un método

ENZIMAS: ESTUDIO CINÉTICO DE LA CATALASA

El mecanismo que permite que las enzimas incrementen la velocidad de la reacción es la

v1 = Velocidad de la reacción para formar los productos

A continuación, se presenta un resumen de las características que distinguen a una enzima:

La actividad de una enzima se evalúa de acuerdo con la velocidad de la reacción. La

1. Concentración del sustrato.

ENZIMAS: ESTUDIO CINÉTICO DE LA CATALASA

sustrato donador de electrones y otra molécula de H2O2 como oxidante o aceptor de

La catalasa se encuentra en todas las células vegetales y animales, incluyendo la sangre,

En donde k es la constante de velocidad de la reacción y [S] es la concentración del

En donde V0 es la velocidad inicial y se determina midiendo la cantidad de producto formado

ENZIMAS: ESTUDIO CINÉTICO DE LA CATALASA

FUNDAMENTO DE LA MEDICIÓN DE LA ACTIVIDAD CATALASA

En cada experimento, la concentración de H2O2 se determina mediante titulación con

ENZIMAS: ESTUDIO CINÉTICO DE LA CATALASA

6. MATERIALES, REACTIVOS, INSTRUMENTOS, SOFTWARE, HARDWARE O

DESCRIPCIÓN (Material, reactivo,

7. MATERIALES, REACTIVOS, INSTRUMENTOS, SOFTWARE, HARDWARE O

ENZIMAS: ESTUDIO CINÉTICO DE LA CATALASA

8. PRECAUCIONES CON LOS MATERIALES, REACTIVOS, INSTRUMENTOS

• Antes de entrar al laboratorio lea la guía del trabajo en el laboratorio y elabore el

9. PROCEDIMIENTO, MÉTODO O ACTIVIDADES:

9.1. Preparación de la solución de catalasa

ENZIMAS: ESTUDIO CINÉTICO DE LA CATALASA

suavemente. Filtre en tela de cortina y recolecte el filtrado. Repita el procedmiento con el

9.2. Efecto del pH sobre la velocidad de reacción

Matraz Sustrato H2O2 (5,0 mL) Extracto de catalasa

Debe incubar la reacción enzimática a temperatura ambiente durante exactamente 2

9.3. Efecto de la temperatura sobre la velocidad de reacción

ENZIMAS: ESTUDIO CINÉTICO DE LA CATALASA

Debe incubar la reacción enzimática a temperatura ambiente durante exactamente 2

9.4. Efecto del tiempo sobre la velocidad de reacción

Debe incubar la reacción enzimática a temperatura ambiente durante exactamente 2

ENZIMAS: ESTUDIO CINÉTICO DE LA CATALASA

9.5. Efecto de la concentración de sustrato sobre la velocidad de reacción

Sustrato H2O2 Extracto de

Debe incubar la reacción enzimática a temperatura ambiente durante exactamente 2

10. RESULTADOS ESPERADOS:

En esta práctica, se titula el exceso de H2O2 remanente después de la reacción

ENZIMAS: ESTUDIO CINÉTICO DE LA CATALASA

Después de medir el volumen de KMnO4 0,01M gastado en la titulación, debe

ENZIMAS: ESTUDIO CINÉTICO DE LA CATALASA

La concentración de sustrato (H2O2) debe calcularse. Para calcular la velocidad

PREGUNTAS PARA EL INFORME:

11. CRITERIO DE EVALUACIÓN A LA PRESENTE PRÁCTICA:

Para la evaluación del informe de laboratorio se tendrá en cuenta la siguiente rubrica

Excelente Bueno Aceptable Deficiente No Presentó

Asiste Asiste Asiste Asiste

Presenta el No presenta el No presenta el No presenta el

Presenta el Presenta el Presenta el No presenta el