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CONCEPTOS
BENEFICIOS:
RIESGOS:
ANTECEDENTES
INICIOS DE LA BIOTECNOLOGIA
BIOTECNOLOGIA MODERNA
Más tarde, la moderna industria biotecnológica se planteó como objetivo el uso de enzimas
(no producen reacciones secundarias y no se suelen multiplicar). Las enzimas son los principios
activos de los microorganismos y en realidad los responsables de las bioreacciones.
LA ULTIMA GENERACION
La biotecnología empieza a considerarse una ciencia moderna en los años setenta por los
avances en biología molecular y genética.
HISTORIA
BIOTECNOLOGIA EN COLORES:
TIPOS DE BIOTECNOLOGIA
DEFINICIONES
“Aplicación de las herramientas y métodos biotecnológicos a la resolución de los problemas
ambientales” (OCDE,2002)”
Aplicación de los procesos biológicos modernos para la protección y recuperación de la calidad del
medioambiente. - (Scragg,1999)
Clasificados desde la mayor amenaza hasta la menor amenaza, todos estos deben estar en
equilibrio
Bacterias:
Ojo: Representan el 50% de materia viva que vive en el planeta, se reproducen por fisión binaria,
algunos tienen vida libre y otra vida intracelular ligada, está conformado por un cromosoma único
circular, su pared celular es plasma, algunas bacterias poseen una capa exterior de carbohidratos
llamada “capsula”.
Son los organismos más pequeños que contienen toda la maquinaria requerida para su
crecimiento y autorreplicación a expensas del material alimenticio.
o Tamaño: El tamaño de las bacterias oscila entre las 0.5 y 3 µm, pudiendo llegar en algunos
tipos a 10 µm. Las bacterias de interés médico tienen un tamaño entre 0.4 y 2 µm.
o Morfología:
Microscópica: La forma de las bacterias al microscopio está determinada por la
rigidez de su pared celular. La morfología bacteriana debe ser observada con el
microscopio óptico o el microscopio electrónico. Las bacterias pueden observarse
sin tinción (examen en fresco). Las coloraciones que se usan para teñir los
preparados de bacterias, se pueden dividir en: simples, diferenciales y especiales.
Macroscópica: La mayoría de las bacterias se multiplican rápidamente y son
visibles como colonias cuando se las siembra en medios de cultivo sólidos
adecuados. Una colonia está constituida por los descendientes de una o unas
pocas células. Las características de la colonia también dependen de la movilidad
de la bacteria.
o Estructura bacteriana: Las diferentes estructuras bacterianas que observamos las
podemos dividir, según sean constantes en las células o no, en estructuras permanentes o
variables.
Dentro de las primeras se destaca: la pared celular, la membrana celular, los ribosomas y
el material genético. Las estructuras variables son: los flagelos, las fimbrias o pilis, la
cápsula y los esporos.
o Morfología interna: El hongo se encuentra formado por una red de filamentos (hifas), que
su vez forman una masa entretejida y algodonosa conocida como micelio. Las hifas
pueden ser tabicadas y no tabicadas
o Morfología externa: El cuerpo fructífero del hongo tiene 3 partes: sombrero, himenio o
henio y pie o talo.
o Formas de vida: Están relacionadas al tipo de nutrición que estos tienen.
Saprobios: absorben los nutrientes de la materia orgánica no viviente.
responsables de enfermedades en plantas
Parásitos: absorben los nutrientes de sus huéspedes.
Simbióticos: forman relaciones simbióticas con los animales, algas y
cianobacterias.
o Reproducción: Reproducción sexual: se da a través del núcleo de cada hifa. Reproducción
asexual: no presenta células sexuales ni la unión de núcleos. Dispersión de esporas: en
cualquiera de los casos de reproducción se forman esporas
o Clasificación: Su clasificación está basada en los métodos de reproducción. Ascomycota,
Basidiomycota, Chytriomycota, Zygomycota
Son organismos eucariotas, unicelulares. Las levaduras son hongos que forman sobre los medios
de cultivo colonias pastosas. Las dimensiones pueden oscilar de 1 a 9 µm de ancho y 2 a más de 20
µm de longitud según la especie, nutrición, edad y otros factores. Actualmente se han descrito
1500 especies.
o Genoma viral:
Ejemplos:
Productos alimenticios:
En la década de 1980, gracias a las técnicas de DNA recombinante, los científicos clonaron
la renina y la expresaron en células bacterianas y hongos como es el caso del
Aspergillusniger. La renina recombinante (actualmente llamada quimosina) procedente de
los microbios es muy utilizada por los fabricantes de queso por ser un sustituto barato que
sirve para evitar extraer la renina de los terneros.
Microbios fermentadores
Proteínas terapéuticas
La gran mayoría de los antibióticos se aíslan de las bacterias, y la mayor parte de estas
sustancias inhiben el crecimiento de otras bacterias.
ENZIMAS
Son proteínas
Función: Biocatalizadores
Moléculas encargadas de acelerar las velocidades de las reacciones químicas en medio
acuoso
Actividad de la enzima se denomina “Actividad Catalítica”, que depende del plegamiento a
las estructuras tridimensionales (sitios activos), el sustrato tiene cierta afinidad para
formar los productos.
Algunos para su actividad solo necesitan tener su estructura aminosidica y otros necesitan
de cofactores (hierro, manganeso, zinc o moléculas inorgánica); enzimas mediante enlace
covalente forman el grupo prosetico, si se junta con un enlace débil se llama coenzima.
CLASIFICACIÓN
ACTIVIDAD
ENZIMATICA
o Las reacciones sean catalizadas o no, dependen para su desarrollo de las leyes termodinámicas
o Parámetro termodinámico Energía libre de Gibbs, (ΔG).: Permite deducir si una reacción se
desarrolla o no de forma espontánea, esta energía mide la capacidad que tiene un sistema
para desarrollar un trabajo.
o En una reacción química la conversión de sustrato en producto requiere una situación
energética intermedia que se denomina estado de transición.
o La diferencia entre el nivel de energía basal y la correspondiente al estado de transición se
denomina energía de activación. (a más energía de activación va ser menor la velocidad de
reacción.)
o Un detalle importante a la hora de analizar la actividad enzimática, es que, en las reacciones
catalizadas enzimáticamente, se incrementa la velocidad de la reacción; pero lo que no se
modifica es el equilibrio de la misma, que sigue las leyes termodinámicas independientemente
de la presencia o ausencia del catalizador.
o Para que se realice la transformación de una molécula, que denominamos sustrato (S), en otra
que denominamos producto (P), el cambio de energía libre de Gibbs ha de ser negativo, lo que
implica que la energía libre del producto ha de ser menor que la del sustrato.
o Disminución de la entropía
o Facilitación del medio ambiente de la reacción (el centro activo posee diferentes grupos
funcionales lo cual puede modificar el M.A. del sustrato)
o Introducción de tensión o distorsión sobre el sustrato (la complementariedad entre el sustrato
y el centro activo va a modificar la aparición de enlaces entre ambos)
o Existencia de grupos catalíticos específicos (van a colaborar en la formación de enlaces que
unen el centro activo y sustrato.
CINÉTICA ENZIMÁTICA
Modelo:
o La enzima puede existir en dos formas, en forma libre (E) o combinada como ES (enzima-
sustrato).
o Cuando la [S] es baja la mayoría de la enzima estará libre y se verá favorecida la formación de
ES, cuando se va incrementando la [S] la velocidad aumenta linealmente.
o La [E] libre será la diferencia entre la [E] total o inicial y la [ES] o enzima combinado con el
sustrato, y la velocidad máxima se alcanzará cuando toda la enzima se encuentre en forma de
ES, llegándose a la saturación de la enzima por su sustrato.
o Al disponer de una concentración de sustrato saturante,
la reacción alcanza rápidamente un estado estacionario
en el que la [ES] se mantiene prácticamente constante y
la velocidad medida durante este estado es la velocidad
analizada por el modelo de Michaelis-Menten que
también se denomina modelo del estado estacionario.
o La ecuación de Michaelis-Menten puede transformarse algebraicamente.
o Su representación gráfica será una línea recta.
o Otra linearización de la ecuación de Michaelis es la obtenida por el método de Eadie-Hofstee,
donde en el eje de abscisas se representa v y en el de ordenadas v/S.
o La constante “Km” suele relacionarse la afinidad de la enzima por el sustrato.
Inhibición reversible (unidos por enlaces no Inhibición irreversible (unidos por fuertes
covalentes) enlaces covalentes)
inhibidores competitivos (compiten con el Son los que se unen a la enzima mediante
sustrato por ocupar el centro activo), enlaces covalentes. (se unen en el centro
aumentan la constante de Km pero no activo en cualquier otro lugar causando
suele modificar la velocidad máxima. inactivación permanente)
no competitivos (se unen a la enzima en Ejemplo: Fármacos (bloquea las enzimas
puntos distintos al centro activo, su unión para impedir la actividad de síntesis de la
va incapacitar a la enzima para que se pared bacteriana)
desarrolle su capacidad catalítica)
acompetitivos o incompetitivos (no tienen
ninguna afinidad por la molécula o enzima
sino que se va unir a la enzima cuando
forme el complejo ES.
BIOLOGÍA MOLECULAR:
DEFINICIÓN
Rama de la biología molecular que estudia los mecanismos que regulan la disponibilidad y la
actividad de las proteínas en las células a partir de la información genética contenida en ácidos
nucleicos. Dos macromoléculas son su objeto de estudio: el ADN y ARN. Cada célula tiene entre 10
– 10000 clases de moléculas diferentes. Existen 4 tipos de macromoléculas: proteínas, ácidos
nucleicos, polisacáridos y lípidos
HISTORIA
o Principios siglo XIX: Teoría del origen de las especies – charles Darwin
o 1866: Teoría de Herencia Mendeliana – padre de la genética
o 1869: Meicher aísla por primera vez el ADN, la sustancia encontrada la llamo “nucleina”
o 1940: Una fracción ácida purificada es capaz de transformar neumococo.
o 1944: Avery demuestra que, durante la trasformación bacteriana en el ADN, y no las
proteínas, el que contiene la información genética
o 1953: A partir de los estudios con rayos X efectuados por Franklin y Williams, Watson y Crick
proponen que la estructura del ADN se asemeja a la de una doble espiral.
o 1957: Komberg, descubre el ADN polimerasa (enzima que sintetiza el ADN)
o 1961 Mamur y Doty desarrollan la técnica de hibridación del ADN.
o 1962: Arber descubre las nucleasas de restricción (enzimas que separan en fragmentos al
ADN).
o 1966: Nirenberg, Ohoa y Khorana descubren el código genético.
o 1967: Geller descubre el ADN ligasa 8que une fragmentos de ADN).
o 1972-73: Boyer. Cohen y Berg desarrollan las técnicas de clonación del ADN.
o 1975-77: Sanger y Barrel y Gilbert desarrollan métodos de secuenciación rápida del ADN.
o 1981-82: Palmiter y Brinster desarrollan ratones transgénicos.
ÁCIDOS NUCLEICOS:
CARÁCTERÍSTICAS
TERMINOLOGÍA
ADN: ESTRUCTURA
o Cada molécula de ADN está formada por dos polímeros lineales de nucleótidos.
o Cada nucleótido consta de una base nitrogenada y un azúcar.
o Los nucleótidos están unidos entre sí por enlaces covalentes fosfodiéster que unen el
carbono en posición 5´ de una desoxirribosa con el carbono 3´ de la desoxirribosa siguiente.
o Las dos cadenas constituyen cada molécula de ADN se enrollan entre sí forman una doble
hélice.
o Ello es posible porque entre las bases de cada polímero se forman parejas de bases
complementarias.
o Cada pareja a través de puentes de H, de la adenina de un polímero con la tiamina del otro y
de la guanina de un polímero con la citosina del otro
ADN: REPLICACIÓN
o Es el proceso por el cual se copia cada cadena del DNA para dar origen a una nueva cadena
de DNA complementaria. Esto ocurre en cada división celular (mitosis) y asegura que la
información genética sea transmitida a ambas células hijas.
o La síntesis de DNA involucra la acción altamente coordinada de muchas proteínas que se
encuentran en un complejo denominado replisoma. Durante la replicación cada cadena de
DNA sirve como molde para la formación de una nueva cadena. Esto se conoce como
replicación semiconservativa.
o También existe replicación durante la recombinación y la reparación del DNA dañado.
GEN
GENOMA
ARN
o Es una macromolécula que tiene una cadena simple, el azúcar presente es la ribosa y posee
el uracilo en vez de timina.
o Suele ser mucho más rígido que el ADN debido a que cuenta con moléculas de agua
o Se diferencia del ADN por su base nitrogenada Uracilo (U),
o Además, su estructura es de hélice simple a diferencia de la doble hélice del ADN.
o El ARN se diferencia del ADN por sus funciones. Existen 3 tipos: el ARN mensajero (ARNm), el
ARN de transferencia (ARNt) y el ARN ribosómico (ARNr).
o Guarda, transporta y transmitir información entregada por el ADN.
o Sintetiza proteínas importantes.
ARN: TRANSCRIPCIÓN
La RNA polimerasa (enzima clave para llevar este proceso), dentro del núcleo se encarga de
desenrollar la hélice de DNA y luego va a copiar una cadena de RNA, solo se transcribe en los
segmentos de un cromosoma que contengan genes.
o Para que las RNA polimerasas inicien la transcripción se requiere de factores de transcripción
que señalan el gen que deben transcribir.
o Esto ocurre porque a poca distancia del gen hay unas secuencias de ADN, llamadas región
promotora, a las que se unen los factores de transcripción
o Los factores de transcripción son sintetizados por genes físicamente alejados del lugar donde
ejercen su acción y se llama acción “trans”. Los elementos que conforman una región
promotora actúan de forma “cis”, puesto que su función se limita al gen que está situado a
continuación. Los reguladores en “cis” de la transcripción de un gen son: Secuencias
promotoras, Secuencia amplificadoras, Secuencia silenciadoras.
ARN: TIPOS
ARN: TRADUCCION
INGENIERÍA GENÉTICA:
La Ingeniería Genética es una rama de la genética que se concentra en el estudio del DNA y en el
uso tecnología de manipulación y transferencia del DNA de unos organismos a otros.
HISTORIA
o En 1990 se inició uno de los proyectos más gigantescos y ambicioso, el PROYECTO GENOMA
HUMANO (PGH)
o En 1988, se creó HUGO (HUMAN GENOME ORGANIZATION), un Consorcio internacional (CI)
para coordinar tareas relacionadas con el proyecto de secuensación. Participaron 20 grupos
y 6 países (U.S.A, Inglaterra, Japón, Francia, Alemania y China).
o En 1999, se publicó la secuencia completa del cromosoma 22 humano
o En 2000; se publicó la secuencia del cromosoma 21.
o En 2003, HUGO hizo pública la secuencia casi definitiva de más de 2850 pares de bases que
supone un 99.999% de las regiones eucromáticas del GH.
o Los exones ocupan el 1.1% del genoma, lo intrones el 24%. El 75 % de DNA restante
corresponde a DNA intergénico.
o El número total de genes presentes en el genoma es de 25 000 aprox.
o Alrededor del 60 % de genes tienen homología con otros genomas ya secuenciados.
o Solamente el 2% del genoma contiene genes que codifican para proteínas.
o Un gen codifica para 2 o 3 RNA distintos, por lo que el proteoma puede contener 75 000 –
100 000 proteínas.
o Compartimos un 30% de nuestros genes con levadura, alrededor de 80% con ratón y un 95%
con chimpancés.
Son enzimas bacterianas que cortan el ADN en un punto determinado, situado en unas secuencias
denominadas palindrómicas, que son iguales en ambas hebras y que presentan simetría según la
complementariedad de bases. Las enzimas de restricción cortan un segmento de ADN y lo dejan
flanqueado por extremos cohesivos, que facilitan la unión entre fragmentos de ADN cortados con
la misma enzima. Ejemplo: Enzima endonucleasa capaces de hidrolizar las moléculas de DNA en
sitios específicos.
o Las enzimas de restricción cortan el DNA rompiendo el enlace fosfodiéster (en el eje azúcar
fosfato) que une los nucleótidos adyacentes en una cadena de DNA.
o Las enzimas de restricción se encuentran sobre todo en las bacterias y se les da nombres
abreviados basados en los nombres del género y especie de las bacterias.
o A las enzimas de restricción se las conoce normalmente como cortadoras de cuatro o de seis
pares de bases porque reconocen típicamente posiciones con una secuencia de cuatro o seis
nucleótidos.
o Para ellas, el sustrato vendría ser el DNA.
INGENIERÍA GENÉTICA: VECTORES
o Son moléculas transportadoras que transfieren y replican fragmentos de ADN que llevan
insertados mediante técnicas de ADN recombinante.
o Para que sirva de vector, una molécula debe ser capaz de replicarse junto con el fragmento
de ADN que transporta. También tiene que tener secuencias de reconocimiento que
permitan la inserción del fragmento de ADN a clonar.
o Para insertar el fragmento de DNA en un vector se utiliza las enzimas de restricción.
VECTORES: CARACTERÍSTICAS
o La PCR es una técnica para hacer copias o amplificar una secuencia específica del DNA en un
corto período de tiempo.
o Aquí, se añade el DNA diana que se desea amplificar a un tubo de paredes finas y se mezcla
con desoxirribonucleótidos (dATP, dCTP, dGTP, dTTP), solución tampón (o buffer) y DNA
polimerasa. Se añade a la mezcla una pareja de primers (oligonucleótidos de 20-
30nuceotidos)
o El tubo de reacción se coloca en un instrumento llamado “termociclador”. El termociclador
toma la muestra mediante una serie de reacciones llamadas ciclo de PCR tiene 3 fases:
desnaturalización, hibridación y elongación.
o Antes se utilizaba la técnica de sanger – convencional
o Es como un mapa físico del gen que determina qué enzimas de restricción lo cortan y la
ubicación de estos sitios de corte.
o Para crear un mapa de restricción, el DNA clonado se somete a una serie de digestiones
simples con enzimas de restricción o con enzimas combinadas. Después, se utiliza la
electroforesis en gel de agarosa para separar y visualizar los fragmentos de DNA basándose
en el tamaño.