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inmunología
Introducción
Las pruebas serológicas son las que estudian los anticuerpos
en el suero.
Dentro de los procedimientos inmunológicos, los más útiles y
prácticos son los que se basan en la especificidad de la unión
Ag-An o sea los métodos inmunoquímicos.
Recordemos que los Ag-An interactúan por
complementariedad espacial y que ambos se asocian por
puentes de hidrógeno, interacciones hidrofóbicas, fuerzas
electrostáticas y fuerzas de van der walls todas estas uniones
son no covalentes.
Las uniones Ag-An son reversibles.
Introducción (2)
La especificidad de esa unión y el hecho de que
pueda ser visualizable por los fenómenos de
precipitación, aglutinación y otros mecanismos
indirectos hacen que estos métodos se empleen
ampliamente.
Además de estos métodos basados en la unión
Ag- An existen otros basados en la respuesta
inmunitaria.
Introducción (3)
Criterios que determinan cuál es la mejor prueba
diagnóstica:
a) Costo
b) Sensibilidad: Habilidad de una prueba para detectar
todos los verdaderos positivos.
c) Especificidad: Habilidad de una prueba para detectar
solo a los verdaderos positivos.
Tanto la especificidad como la sensibilidad van de la mano
y cuando se afecta una también lo hace la otra.
Cuando aumenta una la otra disminuye y viceversa.
Introducción (4)
d) Rapidez.
e) Disponibilidad.
Principales métodos inmunoquimicos:
1. Técnicas de precipitación.
2. Técnicas de aglutinación.
3. Técnicas de inmunofluorescencia.
4. Técnicas de RIA.
5. Técnicas de enzimoinmunoanálisis.
6. Técnicas nefelométricas.
7. Cromatografía de afinidad.
8. Inmunoprecipitación e inmunoblotting
Técnicas de precipitación
En estas técnicas se requiere que tanto el Ag
como el An estén en un medio fluído en el que
sea posible la precipitación del complejo antígeno
anticuerpo.
Son fáciles de realizar y en general son
cuantitativas.
Requieren de grandes cantidades de Ag y An para
medir el precipitado formado por lo que no son
muy usadas.
Técnicas de precipitación (2)
Entre ellas tenemos;
a) Inmunoprecipitación simple.
b) Doble precipitación u Ouchterlony.
c) Inmunoelectroforesis.
d) Inmunodifusión radial simple o de Manzini.
Inmunoelectroforesis
Usos:
a) Discrasias de células plasmáticas.
b) Hipo e hipergammaglobulinemia
c) Trastornos autoinmunes.
d) Enfermedades neurológicas que cursan con
aumento de proteínas en el LCR.
Inmunodifusión radial simple o de Manzini
Usos:
a) Identificación y cuantificación de las Igs.
b) Identificación de factores del complemento.
c) Identificación y cuantificación de transferrina, proteína c
reactiva y alfa feto proteína.
Es un método rápido y práctico pero no tiene una elevada
sensibilidad.
Es una técnica cuantitativa.
Ella permite cuantificar Ag porque la concentración de Ag
es proporcional a el área del círculo de precipitación.
Técnicas de aglutinación
Son semicuantitativas y más difíciles de realizar que las de precipitación
pero más sensibles.
En ellas el Ag se encuentra formando parte o unido a células , bacterias
o partículas y la reacción Ag-An se puede detectar por el aglutinado
celular o bacteriano formado.
Generalmente las partículas que se usan son partículas de látex.
Usos:
a) Tipificar glóbulos rojos.
b) Identificar bacterias.
Clasificación:
c) Directa
d) Indirecta.
Técnicas de aglutinación (2)
Usos de la hemaglutinación directa:
a) Tipificación de GR y Rh.
Usos de la hemaglutinación indirecta:
b) Medida de la gonadotropina coriónica en el
embarazo .
c) Detección del ag de la hepatitis B.
d) Detección del factor 8 de la coagulación para
el diagnóstico de hemofilia.
Técnica de aglutinación (3)
Pruebas de aplicación clínica que emplean reacciones de
aglutinación.
1. Prueba de Coombs o de antiglobulina se usa en el
diagnóstico de anemias hemolíticas.
2. Prueba de floculación de bentonita, se usa para detectar An
contra trichinella y contra DNA.
3. Prueba de fijación del látex se usa para la detección del
factor reumatoideo.
4. Prueba de Roose – Waaler también para detectar factor
reumatoideo es menos sensible y más específica que la
anterior.
Técnicas de inmunofluorescencia
La IF es la propiedad de ciertas moléculas que al ser
irradiadas con energía electromagnética adecuada
emiten radiación de longitud de onda característica
permitiendo su identificación y cuantificación.
La molécula que fluoresce se fija al anticuerpo y se
incuba el tejido o célula con el An marcado y es
detectada usando luz UV
Los fluorocromos utilizados son; fluoresceína,
rodamina, texas red, Cy3, Cy5.
Técnicas de inmunofluorescencia (2)
Estas técnicas se usan cuando los anticuerpos no pueden
ser puestos en evidencia por las técnicas de
precipitación, aglutinación o fijación del complemento.
Se usan en el estudio de las subpoblaciones linfocitarias.
Esta técnica es más sensible que la fijación del
complemento y menos que la hemaglutinación.
Ella puede ser:
a) Directa
b) Indirecta
Técnicas de inmunofluorescencia (3)
Desventaja de la IFD;
Es necesario marcar cada An necesario para la
sustancia a investigar.
Usos de la IFD:
a) Identificación de Ag virales ( virus respiratoris,
herpes virus, etc).
b) Identificación de otros microorganismos
( Bordetella pertussis, legionella, estreptococos
pyogenes, Clamidia trachomatis, giardia lamblia).
Técnicas de inmunofluorescencia (4)
Desventajas de la IFI:
Es un procedimiento más largo que la directa y existe
por lo tanto mayor riesgo de error.
Usos de la IFI:
a) Mayor sensibilidad que la directa.
b) Posibilidad de usar An secundario para detectar An
primarios.
c) Poder cambiar la especificidad del An secundario
para detectar la clase de An presente en la muestra.
Técnicas de inmunofluorescencia (5)
• Usos clínicos de estas técnicas;
1. Identificación de LB y T en sangre.
2. Detección de anticuerpo antinucleares.
3. Detección de Ig en tejidos.
4. Deptección de componentes del complemento en tejidos.
5. Detección de An específicos fijados a tejidos.
6. Identificación rápida de microorganismos en tejidos o
cultivos.
7. Identificación de Ag especifícos de tumores en tejidos
neoplásicos.
Técnicas de inmunofluorescencia (6)
Citometría de flujo;
Es una técnica de inmunofluorescencia, a través de ella se hace
el análisis de una suspensión de células vivas marcadas con un
fluorocromo y se mide la cantidad de fluorescencia emitida por
las células.
La suspensión celular se hace circular en forma de gotas
microscópicas y se pasan por un campo de detección atravesado
por un potente rayo láser el cual activa la fluorescencia.
Mediante sensores específicos se analizan y cuantifican las
poblaciones en estudio.
No es útil para evaluar funcionalidad de LT.
Técnicas de inmunofluorescencia (7)