CONOCIMIENTO Y USO DEL MICROSCOPIO

S. Gaona

Código 1: PBIO1_040920
Informe de laboratorio Impreso en Medellín
Biología www.tdea.edu.co

No. 01, pp. 1-10, 04 de sept, 2020

CONOCIMIENTO Y USO DEL MICROSCOPIO

KNOWLEDGE AND USE OF THE MICROSCOPE
S. Gaona
Institución Universitaria Tecnológico de Antioquia, Facultad de Ingeniería, Tecnología Agroambiental.
Calle 78B No. 72ª-220 Medellín, Colombia.
E-mail:

(Entregado: septiembre 04, 2020)

Resumen – El microscopio es un instrumento que permite observar organismos fuera del alcance del ojo
humano; esto se logra a través del uso de las partes ópticas y mecánicas de dicho objeto las cuales están
descritas en el presente informe. El objetivo de esta práctica es reconocer la importancia del microscopio
y su correcto uso en todas las áreas que se puedan aplicar a largo plazo. Para lograr lo anterior, se realizó
el montaje de placas húmedas y en seco con materiales como hilos, polen, trozos de cabello y la fijación
de algunos organismos para las muestras en seco con diferentes tipos de colorantes para su respectivo
reconocimiento. Siguiendo exhaustivamente el procedimiento que se encuentra en el manual, se realizó
con éxito la práctica, cumpliendo todos los objetivos planteados en la guía.
Palabras claves: Microscopio, partes mecánicas y ópticas, organismos, placas húmedas, placas
permanentes.

Abstract – The microscope is an instrument that allows the observation of organisms out of the reach of
the human eye; this is achieved through the use of the optical and mechanical parts of such an object
which are described in this report. The objective of this practice is to recognize the importance of the
microscope and its correct use in all areas that can be applied in a long term. In order to achieve this, wet
and dry plates mounting with materials such as threads, pollen, hair pieces and the fixation of some
organisms for dry samples with different types of colorants for their respective recognition were made.
Following exhaustively the procedure that is in the manual, the practice was carried out successfully,
fulfilling all the objectives raised in the guide.
Keywords: Microscope, mechanical and optical parts, organisms, wet plates, dry plates.

INTRODUCCIÓN número de lentes, etc. El más usado es el

Debido a las limitaciones del ojo humano, ha microscopio óptico, posee dos lentes
surgido la necesidad de la creación de objetos convergentes, el objetivo y el ocular; el objetivo
que faciliten la observación de los organismos forma una imagen real aumentada e invertida y
que no se pueden visualizar a simple vista, entre se observa por el ocular, el cual actúa como una
ellos está el microscopio. Este es un instrumento lupa. [CITATION Tec20 \l 2058 ].
óptico empleado para obtener imágenes
aumentadas y detalladas de objetos u A continuación, se realizará una breve
organismos por medio de una combinación de descripción de los componentes mecánicos y
lentes [ CITATION Car \l 2058 ]. ópticos del microscopio:

Actualmente, existe gran variedad de

microscopios; varían según sus sistemas de luz,

Informe de laboratorio de Biología. No. 1, pp. 10-#, 04 de septiembre de 2020

 CONOCIMIENTO Y USO DEL MICROSCOPIO
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Tabla 1. Componentes del microscopio
Componentes mecánicos
Formado por un pie pesado que sostiene
Soporte un brazo inclinado del cual salen tanto la
platina como el tubo del microscopio
Pieza sobre la que se colocan las
preparaciones que se desean observar.
Puede ser fija o móvil. Actualmente,
Platina
todos los modelos poseen un carro móvil
graduado, posibilitando el movimiento y
la localización precisa de la muestra.
Lleva en la parte inferior los objetivos y
Tubo
en la superior los oculares cambiables.
Pieza que lleva varios objetivos
Revólver intercambiables y permite adaptar éstos
al tubo del microscopio
Manejan el enfoque bien sea por el
Mandos de movimiento vertical de la platina o del
enfoque tubo. Se usa el mando micrométrico para
mayor precisión..
Componentes ópticos
Son un sistema de lentes que aumentan el
Objetivos
tamaño de la imagen y la proyectan en
dirección de los lentes. Tienen aumento
por 4X, 10X, 40X y 100X (inmersión).
Formados por dos lentes que se
Oculares encuentran separadas por un diafragma.
Su aumento es de 10X.
De este factor depende obtener buenos
resultados, se puede obtener a través de
un espejo situado debajo de la platina,
Fuente de luz
que recoge tanto la luz natural como la
luz eléctrica, o a través de lámparas
incorporadas al pie del microscopio
sistema de lentes situadas debajo de la
Condensador platina y que permite concentrar la luz en
la muestra que se observa.
Se encarga de regular la entrada de luz al
Diafragma condensador, situado debajo de la platina
y del condensador.
Fuente: [ CITATION Arr01 \l 2058 ]
Se debe tener en cuenta ciertos cuidados y
consideraciones al momento de usar estos
equipos. Lo primero que se debe realizar es la
comprobación del estado del microscopio, de
encontrarlo en mal estado se debe reportar
inmediatamente para tomar las medidas
requeridas. Siempre se debe ubicar el
instrumento a 15 cm del borde para evitar caídas
y cuando se deba movilizar, asegurarse que sea
tomado con ambas manos.
Informe de laboratorio de Biología. No. 1, pp. 10-#, 04 de septiembre de 2020
Por otro lado, cuando se requiera limpiar los
lentes, se debe asegurar que sea con los
materiales destinados para ese fin, ya que si se
emplea cualquier tipo puede rayar los lentes.
Además, cuando se requiera usar el lente de
100X, debe ser con el aceite de inmersión. No
solo los lentes deben permanecer limpios,
también la platina, cuando llegue a mancharse de
aceite se debe limpiar con un paño humedecido
con xilol.
De igual manera, al momento de mover los
tornillos macrométrico, micrométrico, la platina,
el revolver o el condensador se debe tener
cuidado y no forzarlos ya que podrían causar
algún daño en su funcionamiento. Finalmente,
cuando termine la actividad que se esté
realizando, se debe retirar el portaobjetos de la
platina, poner el objetivo de 4X, colocar en punto
0 la perilla reguladora de voltaje, apagar el
interruptor y cubrir el microscopio con su bolsa
protectora.
MATERIALES Y MÉTODOS
Materiales
 Microscopio compuesto
 Portaobjetos
 Cubreobjetos
 Papel milimetrado con letras impresas
 Tijeras
 Placas permanentes
 Hilos de diferentes colores
 Flores
 Trozos de cabello
 Tela suave para limpieza del microscopio
Toma de muestra
- Preparación de una muestra en agua (placa
húmeda): Se lava un portaobjeto con jabón y agua
y se seca. Luego se coloca una gota de agua en el
centro de la lámina y se pone sobre él un pequeño
hilo de color. inmediatamente, se pone el
cubreobjeto. Para evitar la formación de burbujas
se usa la punta de un lápiz, formando un ángulo de
45 grados respecto a la lámina, dejándola caer con
suavidad en el agua. Se debe tener especial
cuidado de que no quede agua por fuera del
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cubreobjeto, de ser así, se seca con papel
absorbente. De igual manera, se seca el
portaobjeto si ha quedado mojado por debajo, ya
que la humedad puede pegarlo a la platina,
impidiendo el desplazamiento cuando se mueva
el carro.
Metodología
1. Observación de la muestra
Es necesario tener en cuenta la siguiente
información para obtener éxito en las
observaciones al microscopio.
 Colocación de la muestra: Poner sobre la
platina la placa con el hilo como se explicó
anteriormente, luego, fijarla con ayuda de las
pinzas que posee el microscopio. Se centra la
muestra en el orificio de la platina con los
tornillos del carro.
 Iluminación del campo visual: se coloca el
objetivo de 4X en posición, mientras que se
abre el diafragma lentamente hasta obtener una
luz adecuada para visualizar la imagen. Al
mismo tiempo se sube la platina hasta el tope
con la perilla macrométrica y mientras se
observa por los oculares se debe percatar de
obtener una iluminación homogénea del campo
visual haciendo uso de la perilla reguladora del
voltaje.
 Obtención de la imagen: con la visión
enfocada en los oculares, con la perilla
macrométrica se aleja la platina hasta que
aparezca la imagen. Al mismo tiempo se mira
si es necesario mejorar la iluminación, por
medio de las perillas reguladoras del voltaje y
del condensador de abertura. Posteriormente,
mover los oculares para ajustar la visión a su
distancia interpupilar. Después se describe lo
observado por medio de esquemas
especificando el aumento con la cual se
trabajó. Además, cuando sea posible, indicar
con flechas, dirigidas hacia la derecha y
perpendiculares a las márgenes superiores e
inferior, los nombres de las estructuras que
pueda distinguir.
 Uso de objetivos de mayor aumento (10X y
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40X): Inicialmente, se enfoca con el objetivo de
aumento menor (4X), para poder pasar a los de
mayor aumento. También se debe ajustar la
iluminación, abriendo lentamente el diafragma
y si se requiere mayor iluminación usar la
perilla reguladora de voltaje. Poner el objetivo
de 10X en posición, girando lentamente el
revólver mediante la rosca estriada ubicada en
su parte superior. Mirar por los oculares y
ajustar la nitidez con la perilla micrométrica.
Hacer un esquema de lo observado y repetir el
procedimiento con objetivo de 40X. Comparar
estas imágenes entre sí en cuanto a sus tamaños.
Se repite el procedimiento con el mismo
procedimiento anterior, pero esta vez utilizando
cualquiera de las siguientes estructuras: trozos
de un centímetro de cabello, granos de polen de
flores, entre otras. [ CITATION Tec20 \l 2058 ]
2. Características de la imagen
Hacer una preparación en fresco de una letra
asimétrica. Se pone en la platina del
microscopio en posición normal de lectura y
enfocar con el objetivo de 4X. Esquematizar lo
observado y discutir la forma cómo se ve la
imagen en relación con la posición de la letra en
el portaobjeto. Enfocar esa misma letra con el
objetivo de 10X y dibujarla. Comparar las dos
observaciones hechas.
Emplear la misma preparación anterior en 10X,
desplazar el carro hacia la derecha, sin dejar de
mirar por los oculares. Desplazarlo, luego,
hacia la izquierda y fijar la atención de nuevo
en la dirección en la cual se mueve la imagen.
Discutir sus observaciones. Ahora, con la ayuda
del otro tornillo, mover el carro hacia adelante y
hacia atrás; al hacer cada uno de estos
movimientos, discutir sus observaciones,
nuevamente.
3. Observación de placas permanentes con el
objetivo 100X o de inmersión
Se repite el procedimiento con una placa
permanente, pero al hacer el cambio de objetivo
no se debe cambiar la iluminación en forma
inmediata, hasta que primero se observe con la
iluminación inicial:
a) Colocar el objetivo de menor aumento en
posición de empleo y bajar la platina
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completamente. objetivo sobre la preparación para evitar

b) Colocar la preparación sobre la platina romperla. [ CITATION Tec20 \l 2058 ]
sujetándola con las pinzas metálicas.
c) Comenzar la observación con el objetivo de Técnicas analíticas
4X (el cual ya debe estar en posición) o Unidades más utilizadas en mediciones
colocar el de 10 aumentos (10X) si la microscópicas: La mayoría de organismos y
preparación es de bacterias. estructuras que se estudian con el microscopio
d) Para realizar el enfoque, se debe acercar al son muy pequeños. Las medidas más
máximo la lente del objetivo a la preparación, comúnmente usadas en microscopía son el
empleando la perilla macrométrica. Esto debe angstrom (Å), la milimicra (mμ) o nanómetro
hacerse mirando directamente y no a través del (nm), el micrómetro (μm) y el milímetro (mm).
ocular, ya que se corre el riesgo de incrustar el
objetivo en la preparación pudiéndose dañar Las relaciones entre ellas son las siguientes:
alguno de ellos o ambos. 1 Milímetro [mm] = 1000 Micrómetro [μm]
e) Mirando a través de los oculares, vaya 1 Micrómetro [μm] = 1000 Nanómetro [nm]
separando lentamente el objetivo de la 1 Nanómetro [nm] = 1000 Picómetro [pm]
preparación con la macrométrica y, cuando se 1 Nanómetro [nm] = 10 Ångström [Å]Si hay que
observe algo nítida la muestra, girar la calcular algún resultado con una ecuación esta se
micrométrica hasta obtener un enfoque fino. relaciona así: por ejemplo,
f) Pasar al siguiente objetivo girando el El número de muestras fue determinado por la
correlación o ecuación1, descrita por Keith (1996).
revólver y dirigiendo siempre la mirada a la
preparación para prevenir el roce de la lente
con la muestra. No cambiar nunca de objetivo
agarrándolo por el tubo del mismo ni hacerlo
mientras se está observando a través del ocular.
La imagen debería estar ya casi enfocada y
suele ser suficiente con mover un poco la
perilla micrométrica para lograr el enfoque
fino. Si al cambiar de objetivo se perdió por
completo la imagen, es preferible volver a
enfocar con el objetivo anterior y repetir la
operación.
g) Con el objetivo de 40X se enfoca a muy
poca distancia de la preparación y por ello es
fácil que ocurran dos tipos de percances:
incrustarlo en la preparación si se descuidan
las precauciones anteriores y mancharlo con
aceite de inmersión si se observa una
preparación que ya se enfocó con el objetivo
de inmersión.
h) Para utilizar el objetivo 100X, se deberá
tener ya identificado un campo de interés.
Primero, colocar el revólver en posición
intermedia entre los objetivos de 40X y 100X
para poner una gota de aceite de inmersión
sobre la preparación, luego, girar el revólver
para enfocar con el objetivo 100X y ajustar con
la perilla micrométrica. Siempre hay que tener
cuidado de no ejercer mucha presión con el
Informe de laboratorio de Biología. No. 1, pp. 10-#, 04 de septiembre de 2020
RESULTADOS
A continuación, se muestran los resultados obtenidos en las observaciones después de aplicar todos los pasos
descritos anteriormente.

Tabla 2. Resultados observación fragmentos de hilos

Observación de los fragmentos de hilos
objetivo Imagen

4X

10X

40X

Fuente: [ CITATION Uni16 \l 2058 ]

Tabla 3. Resultados observación cabello

Observación de los cabello
objetivo Imagen

4X
 10X

40X

Fuente: [ CITATION Roj12 \l 2058 ]

Tabla 4. Resultados observación de polen de flores

Observación de polen de flores
objetivo Imagen

4X

10X

40X

Fuente: [ CITATION Uni16 \l 2058 ]

 Tabla 5. Resultados observación de letra asimétrica
Observación de polen de flores
objetivo Imagen

4X

10X

40X

Fuente: [ CITATION Uni16 \l 2058 ]

 Tabla 6. Resultados observación objetivo 100X
Observación con el objetivo 100X
Muestra
permanent Imagen
e

Azul de
metileno

Tinción
para
cápsula

Fuente: [ CITATION Esc18 \l 2058 ]

ANALISIS DE RESULTADOS
Fragmentos de hilo: En la observación de
fragmentos de hilos se puede apreciar con el
objetivo de 4X las tres hebras con claridad de
color naranja, púrpura y blanca, sin embargo, por
el reflejo de la luz el color blanco se ve oscuro.
Cuando se hace el cambio a 10X solo se pueden
observar 2 colores, naranja y púrpura, sin
embargo, esta vez se pueden ver las microfibras
que los componen. Con el aumento en 40X solo
se puede observar la hebra de color morado y sus
microfibras se ven con mayor claridad y mayor
separación entre ellas.
Cabello humano: La visibilidad del cabello en el
microscopio no varía mucho cuando se hace el
cambio de objetivo de 4X a 10X. Con los dos
lentes se alcanza a observar el bulbo del cabello,
sin embargo, con 10X tiene una mejor definición
y mayor detalle. En 40X si se puede ver la
estructura interna del bulbo del cabello.
Polen de flores: Con el lente de 4X se observa un
pequeño cuerpo de forma indefinida color
amarillo. Cuando se hace el cambio a 10X se
observa una forma más definida, ovalada con una
protuberancia en la parte inferior. En 40X se ven
de manera clara las células del organismo y unos
pequeños poros que tienen la semilla.
Letra asimétrica: En la tabla 5 están las imágenes
de la observación de la letra impresa. Al realizar
la observación de la letra “e” con el objetivo de
4X se puede ver la letra completa, sin embargo,
esta se observa al revés y la tinta un poco corrida.
Esto se debe a convergencia de los lentes. en 10X
se visibiliza con precisión el contorno de la letra
y su textura es más visible. Finalmente, con el
objetivo de 40X se observa con claridad las fibras
de celulosa del papel y algunas fibras de color.
Placas permanentes:
Azul de metileno: La coloración con azul de
metileno tiñe a todas las bacterias por igual. Se
utiliza el colorante para teñir las estructuras
presentes en el citoplasma de la bacteria, ya que
la principal dificultad es la falta de contraste
entre la célula y el medio que la rodea. Gracias a
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esta coloración se pudo observar perfectamente
los microorganismos presentes en la muestra, los
cuales tienen una forma ovalada y están teñidos
por un azul claro.
Tinción para cápsula: Esta se logra con el
colorante Nigrosina y se inocula el organismo
que se quiere observar con ayuda de un asa
bacteriológica estéril. Cuando se seca y se ubica
el portaobjetos en el objetivo de 100X se puede
observar las bacterias de color blanco y su medio
toma un tono grisáceo. Esto sucede ya que es un
colorante aniónico incapaz de penetrar la pared
de las bacterias.
DISCUSIÓN FINAL
- ¿Cuál es la función que tiene el aceite de
inmersión cuando se observa con el
objetivo de 100X?
Puesto que el índice de refracción del aire es
menor que el del vidrio, la luz se desvía cuando
pasa por el portaobjeto al aire, haciendo que los
rayos de luz se refracten y se pierdan para el
lente. Para evitar la pérdida de luz por dicha
refracción se usa el aceite de inmersión; se pone
una gota entre la lámina y el objetivo de 100X.
Esta sustancia tiene un índice de refracción
similar al vidrio, ayuda a disminuir la desviación
de la luz permitiendo que un porcentaje mayor de
haces de luz procedentes de la muestra pasen
directamente al objetivo, mejorando la resolución
para obtener mayor claridad en la imagen.
[ CITATION Ofi17 \l 2058 ].
- ¿Cuál será el poder de aumento cuando se
están utilizando cada uno de los objetivos
de 4X, 10X, 40X y 100X?
El poder de aumento de los lentes se calcula
multiplicando por 10, por lo que el aumento real
de cada lente sería:
Tabla 7. Aumento real proporcionado por cada objetivo.
4X 40 veces su tamaño
10X 100 veces su tamaño
40X 400 veces su tamaño
100X 1000 veces su tamaño
[ CITATION ORT \l 2058 ]
- Realice las siguientes conversiones:
 - Con la realización de este informe nos damos
 0.025 mm en μm cuenta de la importancia del uso y buen manejo
del microscopio ya que podemos conocer sus
1× 103 μm aplicaciones en la vida diaria, de esta manera se
0,025 mm × =25 μm puede entender y conocer la vida a un nivel que
1 mm
el ojo humano no puede observar a simple vista.
 0.025 mm en Å
- Se identificaron las diferentes partes del
6
1× 10 nm 10 Å microscopio compuesto y cada función de sus
0,025 mm × × =250.000 Å piezas, de esta manera hacer un buen uso de él.
1mm 1 nm
- La resolución depende de la longitud de onda
 5 x 10-3 μm en mm
de la luz, del proceso de fijación, el cual debe ser
1 mm hecho con cuidado para que los microorganismos
5 ×10−3 μm× 3
=5 ×10−6 mm queden bien fijos en el portaobjetos y la
1 ×10 μm intensidad de color que se le agregue a la
muestra.
 5 x 10-3 μm en Å
- Finalmente, es fundamental conocer y seguir a
−3 1 ×103 nm 10 Å cabalidad los procedimientos a realizar, ya que
5 ×10 μm× × =50 Å
1 μm 1 nm estos son la base para alcanzar los objetivos
planteados en la práctica.
 1300 Å en μm
REFERENCIAS
−4
1×10 μm
1300 Å × =0,13 μm Arraiza, N., Viguria, P., Navarro, J., & Ainciburu, A.
1Å
(2001). Manual de microscopía. Historia,
 1300 Å en mm descripción y uso del microscopio óptico.
Navarra: Auxilab S.L.
Avendaño, E. (2020). Manual y prácticas de biología
1 nm 1mm
1300 Å × × =1,3 ×10−4 mm general. Medellín: Tecnológico de Antioquia.
10 Å 1× 106 nm Carrascal, E. (s.f.). Universidad de Salamanca.
Obtenido de Evolución histórica del
Microscopio:
- ¿Cuál sería la importancia de esta práctica https://campus.usal.es/~histologia/museo/mic
en su vida profesional? roscopios.htm
Escuela de Microbiología, Universidad de Antioquia.
Como tecnóloga agroambiental es de suma (23 de marzo de 2018). Preparación de
importancia conocer el uso y manejo del placas y propiedades tintoriales de los
microorganismos. Obtenido de
microscopio puesto que en algunas áreas como el
https://www.youtube.com/watch?
muestreo o monitoreo de fuentes hídricas se v=2l5GuMTNUk0
deben analizar los microorganismos que allí se Martín, M., Daza, M., & Giráldez, R. (6 de
encuentren. El análisis de material particulado Noviembre de 2015). Conocimiento, manejo
también puede realizarse con este instrumento, ya y aplicaciones del microscópico óptico de
que en el aire se encuentran gran cantidad de campo claro. Obtenido de Universidad de
partículas que el ojo humano no puede percibir. Sevilla: https://www.youtube.com/watch?
v=9o5Nbn1VYK4
Oficina de Organización y Métodos. Pontificia
Universidad Javeriana. (2017). Uso y cuidado
CONCLUSIONES del microscopio. Bogotá D.C.: Pontificia

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 Universidad Javeriana.
ORT Argentina. (s.f.). Campus ORT Argentina.
Obtenido de Microscopio óptico:
https://campus.ort.edu.ar/html/78074/microsc
opio-ptico#:~:text=El%20aumento%20total
%20del%20microscopio,en%20aceite%3B
%20total%201000x).
Rojas, N., Muñoz, G., & Cruz, A. (2012). Importancia
del microscopio en el análisis de pelos en la
Criminología y en la Criminalística. Revista
de la Escuela de Medicina Legal, 18-23.
Sistema Nacional de Educación a Distancia. (30 de
Julio de 2013). Laboratorio de Biología -
Practica 1 Microscopio. Obtenido de
Universidad Autónoma de Nuevo León:
https://www.youtube.com/watch?
v=70gEkF0kj1c
Universidad Abierta y a Distancia. (2016). Práctica
de laboratorio de Biología Sección I. Bogotá.

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