GENETICA BACTERIANA

PROCARIOTAS

Fáciles y rápidos de crecer

Rápida expansión clonal

PROCARIOTAS
PROCARIOTAS
 PROCARIOTAS

Genética mas simple que eucariotas

Genomas haploides compactos.
La información genética puede encontrarse en el genoma o plásmidos
No hay intrones
No hay poliadenilación de mensajeros
Muchas genes que pertenecen a una misma vía están organizados en
operones
Gran plasticidad para “mover” y/o adquirir material genético
ALGUNOS TERMINOS

Genotipo

Fenotipo

Mutante

Resistencia antibiótica

Clon

Auxótrofa
UN POCO DE HISTORIA…….
EXPERIMENTO DE LURIA-DELBRUCK

Origen de las mutaciones: previo a la adición del agente

inactivante o posterior a el (adaptativa)?
PLASMIDOS

Unidades genéticas autónomas que se encuentran presentes

en casi todas las bacterias
Escenciales en la capacidad adaptativa o evolutiva de las
bacterias
PLASMIDOS

Replicación Theta: primer de ARN (Uni o

Bidireccional)

Círculo rodante: Nick en el ADN que

funciona como primer

EN TODOS LOS CASOS LA REPLICACION SE

INICIA EN EL ORI (ORIGEN DE REPLICACION)
PLASMIDOS: replicación
PLASMIDOS

Propiedades: Rango de huésped

Número de copias
Capacidad de movilización

Rango de huésped Amplio

Acotado
PLASMIDOS

Número de copias: es el número de unidades de

plásmido por célula

Altamente regulado Regulación por ARN antisentido

Regulación por ARN antisentido

y proteína

Regulación por iterones

PLASMIDOS
Regulación por ARN antisentido

RNAII: inicia la síntesis

del ADN

RNAI: es complemenario
a RNAII

Duplex RNAI-RNAII es
degradado
PLASMIDOS
Regulación por ARN antisentido y proteína

RepA: proteína de replicación

CopB: reprime a PrebA. Ocurre

inicialmente luego de lo cual RepA
se sintetiza desde el transcripto
copB-repA

CopA: ARN antisentido que afecta

la estabilidad del transcripto
copA-repA

RNAseIII cliva el duplex copA-repA

Incompatibilidad de plásmidos

Dos plásmidos pertenecen al mismo grupo de incompatibilidad (Inc)

cuando uno interfiere con la replicación o la partición del otro

Si coexiste Diferentes grupos de incompatibilidad

Si no pueden
Mismo grupo de incompatibilidad
coexistir
Incompatibilidad de plásmidos

Diferente grupo Inc

Mismo grupo Inc

INTRODUCCION DE MATERIAL GENETICO EN
BACTERIAS

CONJUGACION

TRANSFORMACION

TRANSDUCCION
CONJUGACION

Capacidad para intercambiar material genético

(en general plásmidos) entre bacterias

SEXO

DADOR Y ACEPTOR
TRANSCONJUGANTE
CONJUGACION

Pilus: producido por

el dador
CONJUGACION

Plásmidos Movilizables: no codifican todas las

funciones

Transmisibles per ser: codifican

para todas las funciones
CONJUGACION

oriT: origen de
transferencia

Región de clivaje
del ADN

El ADN que se
transfiere es simple
cadena
CONJUGACION

Espacio extracelular

}
pilus: polímero de la
pilina que esta
codificada en un único
gen

citoplasma
CONJUGACION

Genes de transferencia: encargados del transporte de ADN

}
Helicasas
Encargadas de cortar,
Primasas desenrrollar y transportar el
Endonucleasas ADN
 CONJUGACION

Plásmidos transferibles: codifican para la sintesis del pilus y de

todas las proteínas necesarias para la transferencia

Plásmidos movilizables: no codifican para la sintesis del pilus y por

lo tanto deben usar el pilus sintetizado por otro plásmido. En
principio solo necesitan el oriT. Naturalemente no existen plásmidos
que solo contengan el oriT, los plasmidos movilizables contienen los
genes mob encargados de la transferencia y similares a los genes tra
 CONJUGACION

Plásmido F: transferible

Capaz de integrarse al
cromosoma por
recombinación homóloga
en las regiones IS
Que ocurre si un plásmido F integrado al cromosoma
intenta transferirse?

CEPA Hfr
Cepas Hfr

Movilizan el cromosoma

Si no hay
recombinación la
información
genética no se
hereda
 UTILIZACION DE CEPAS HFR EN LA DETERMINACION
DEL MAPA DEL GENOMA DE E. COLI

Conjugación de:

Hfr a+ b+ c+ d+ e+ Strs
X

F- a- b- c- d- e- Strr

Producto de conjugación
(Se corta la conjugacion a distintos tiempos
Por agitación)

Plaqueo en medio con estreptomicina

y todos los aa menos:

a b c d e
CONJUGACION

Biparental: en la misma intervienen dos cepas

Que ocurre si, ni la cepa dadora del plásmido ni el plásmido,

poseen las funciones tra?

Triparental: en la misma intervienen tres cepas

CONJUGACION TRIPARENTAL

Una cepa actúa como

“helper” o ayudante
TRANSFORMACION

Proceso por el cual el ADN libre se incorpora en una célula

receptora y lleva a cabo un cambio genético heredable
Para ello las bacterias deben ser competentes

Naturalmente transformable: bacterias naturalmente

competentes capaces de tomar ADN del ambiente (Bacillus
subtilis, Haemophilus influenza, Streptococcus pneumoniae)

En el proceso de transformación natural intervienen proteínas de

membrana que asocian ADN, autolisinas de pared celular y
nucleasas
TRANSFORMACION

Experimento de Griffith: descubrimiento de la transformación

Presencia de la cápsula para patogenicidad: R vs S

 TRANSFORMACION

Si la bacteria no es naturalmente competente se puede inducir

el estado de competencia

Competencia por cloruro de calcio o electrocompetencia por

ejemplo

Herramientas de la biología molecular

Replicativo Complementación
Transformación con
plásmidos Complementación
No replicativo (suicida) Recombinación
Mutación
Eficiencia de = número de colonias
Transformación µg ADN
TRANSFORMACION

Aunque el evento sea de

baja eficiencia la selección
es muy poderosa
(antibióticos)
 BACTERIOFAGOS

Parásitos que explotan la

Virus de bacterias
maquinaria replicativa del
(especie específicos)
huésped

Placas de lisis
BACTERIOFAGOS
Vienen en muchos colores y tamaños
BACTERIOFAGO T4
Ciclo de vida: lítico vs lisogénico

lítico lisogénico

Equilibrio que se altera por

factores ambientales

Determinado por la
competencia entre el
activador CII y la proteína Cro

Activa
CII CI (represor
de Cro)

Activa
Cro Genes
cascada lítica
Ciclo de multiplicación

Genes tempranos:
sintetizados por la ARN pol
bacteriana (ARN
polimerasa, primasas,
ligasas y helicasas)

Acumulación de genomas
del fago

Genes tardíos: proteínas

estructurales del fago

Empaquetamiento del
genoma, ensamble del fago
y lisis
Transducción
Movimiento de material genético através de un fago

Transducción generalizada: se transfiere cualquier región del

cromosoma

Transducción especializada: se transfieren las regiones cercanas al

sitio de integración en los fagos lisogénicos
Transducción generalizada

Una baja proporción de los

fagos “se llevan” información
de la bacteria

SELECCION
Transducción especializada

Profagos lisogénicos
Transducción especializada
Utilización de fagos en estudios de genética bacteriana
 Estudio sobre la función de un determinado
gen en virulencia

Cepa no motil Cepa motil

Avirulenta Virulenta

Obtenida en un Cepa utilizada

estudio sobre en estudios de
metabolismo virulencia

Resistencia a Km
Como se hace en el laboratorio?

Cepa A: dadora
Cepa B: receptora

infección con
el fago centrífuga

Infección del
cultivo aceptor

Aislamiento
B
de la mutante

Plaqueo en
medio con
kanamicina
Regulación de la expresión génica

COMO Y BAJO QUE CONDICIONES LOS GENES SE

EXPRESAN O NO

Bacterias: sistemas simples que han servido de marco para el

estudio de regulación en eucariotas superiores

Regulación transcripcional A nivel del inicio de la

transcripción

Regulación post-transcripcional Estabilidad del mensajero o

regulación de la traducción
Estructura canónica de un promotor bacteriano

Sitio de union a
ribosoma o shine-
dalgarno
Factores sigma

Son factores de iniciación de la transcripción de procariotas

Le aportan la especificidad de promotor a la ARN polimerasa

Los diferentes factores sigma se activan en respuesta a

diferentes condiciones ambientales
Factores sigma

Escherichia coli σ70: housekeeping

σ54: limitación de nitrógeno

σ38: fase estacionaria

σ32: heat shock

σ28: sistema flagelar

σ24: extracitoplasmática, temperaturas extremas

σ19: transporte de hierro

Operon

Genes de una misma vía metabólica que se encuentran en un

mismo policistrón
Regulación positiva y negativa
Regulación positiva y negativa
Operón catabólico: degradación de componentes

Operón anabólico: síntesis de compuestos escenciales

Operón lactosa

Regulación negativa

Jacob y Monod (1950): estudio sobre la utilización de

lactosa por Escherichia coli

glucosa lactosa

Jerarquía de
utilización

Curva de crecimiento con

glucosa y lactosa
Operón lactosa

lacZ: β-galactosidase
lacY: permease
lacA: acetylase
lacI: represor
Represión catabólica

AMPc: AMP cíclico es

una señal de “hambre”

En presencia de glucosa
el operón está
“apagado”
Operón biosintético

Regulación negativa
Operón triptofano

Otros niveles de regulación Autoregulación del represor

Atenuación

Autoregulación negativa del represor

El represor TrpR regula negativamante la expresión de su

propio transcripto

Mayor velocidad de represión cuando aparece el

triptofano
 Atenuación

Mutantes en trpR aún regulan la transcripción

del operón en respuesta a triptofano

Nivel extra de regulación

Atenuación
Operón arabinosa

Operón de degradación de la arabinosa

Regulación positiva por un activador

Arabinosa Xilulosa-5-fosfato

Activador
AraC
Operón arabinosa

AraC funciona como un activador y un anti-activador

dependiendo si tiene arabinosa unida o no

arabinosa

AraC AraC AraC AraC

P1 P2

Anti-activador Activador
Operón arabinosa

El sistema le otorga un alto nivel de regulación. Hay

muy baja expresión basal

Posee, al igual que el operón lac, represión catabólica.

La ausencia de glucosa potencia la expresión
Operón galactosa

Operón que se reprime en ausencia de galactosa

En presencia de galactosa se desreprime el operón

Las zonas regulatorias se encuentran duplicadas

Otros operones

Operón maltosa: adquisicion de maltodextrinas y maltosa y su

utilización

Operón histidina: síntesis de histidina

Operón tol: degradación de compuestos hidrocarbonados

cíclicos
Riboswitches

Mecanismo de regulación de la expresión génica

evolutivamente ancestral

Utiliza la estructura secundaria del ARN

Mecanismo post-transcripcional
Riboswitches

Dos tipos De terminación de la transcripción

De inicio de la traducción
Existen diferentes y muy variados tipos de riboswitches
Como hace una bacteria para responder a una señal
ambiental?

{
Falta de nutrientes
Señal ambiental Cambios de temperatura
Presencia de un posible huésped

bacteria

Respuesta adaptativa
Sistemas de dos componentes

Sistemas ampliamente distribuidos en bacterias

que median la respuesta transcripcional a factores
o cambios ambientales

Componente de detección: proteína de membrana que detecta

el estímulo y fosforila al componente de respuesta

Componente de respuesta: proteína citoplamática que activa o

reprime la actividad transcripcional de los genes de respuesta
Sistemas de dos componentes