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Ministère De La Santé
Institut Supérieur Des Professions Infirmières وزارة الصحــــــــــــة
Et Techniques De Sante المعهد العالي للمهن التمريضية وتقنيات الصحة
Oujda وجـــــــــــــــدة
Rapport de stage
23 Septembre − 11 Décembre
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SOMMAIRE
Liste des abréviations ................................................................................................................. 7
INTRODUCTION ...................................................................................................................... 8
2. Matériel .......................................................................................................................... 9
2. Matériels ....................................................................................................................... 17
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Service de Biochimie ....................................................................................................... 19
2. Matériels : .................................................................................................................... 21
Biochimie De Routine..................................................................................................... 23
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2. Matériels : .................................................................................................................... 29
.......................................................................................................................................... 32
Le D Faible Du ................................................................................................................ 35
L’épreuve De L’hémolysine........................................................................................... 36
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Circuit PSL non conforme : .......................................................................................... 39
CONCLUSION ........................................................................................................................ 40
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Liste des abréviations
• CHU : Centre Hospitalier Universitaire MEDVI
• CRTSO : Centre Régional de Transfusion Sanguine Oujda
• CHR : Centre Hospitalier Régional AL-FARABI
• CNSSO : Polyclinique
• TDC : Test De Coombs Direct
• TDI : Test De Coombs Indirect
• RAI : Recherche D’agglutinines Irréguliers
• NFS : Numération De La Formule Sanguine
• VGM : Volume Globulaire Moyenne
• HTE : Hématocrite
• Hb : Hémoglobine
• TCMH : Teneur Corpusculaire En Hémoglobine
• CCMH : Concentration Corpusculaire En Hémoglobine
• VS : Vitesse De Sédimentation
• EDTA : Ethylène Diamine Tétra Acétique
• Rh : Rhésus
• TCA/TCK : Taux de céphaline activé
• TP : Taux De Prothrombine
• INR : International Normalized Ratio
• TPHA : Treponema Pallidum Hémagglutination Assay
• VDRL: Venereal Disease Research Laboratory
• MGG: May Grunwald Giemsa
• ELISA : Enzyme Linked Immune-Sorbant Assay
• FR: Facteur Rhumatoide
• VIH: Virus d’immunodeficience Humain
• HCV: Virus d’Hépatite C
• HBs : Antigène de surface de l’Hépatite B
• PSA : Prostate Surface Antigen
• PSL : Produit Sanguin Labile CGR : Concentré de Globules Rouges
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INTRODUCTION
Présentation du stage
Dès 23 Septembre 2019 au 11 Décembre 2019 (environ 3 mois), nous avons effectué un stage
au sein de CHR-ALFARABI, CHU-MEDVI, CRTSO et CNSSO. Au cours de ce stage, nous
avons pu s’intéresser aux différentes techniques d’analyses médicales en
immunohématologie, sérologie et biochimie.
Missions et objectifs
Accueil et enregistrement :
Examens
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I. Centre Hospitalier Régional AL-FARABI :
L’Hôpital Al Farabi est un centre hospitalier, géré de manière autonome, offrant des soins
et services médicaux à une population estimée à deux millions d’habitants environ, couvrant
la préfecture d’Oujda-Angade et toute la région de l’oriental.
Le laboratoire régional d’Al Farabi reçoit les échantillons des patients hospitaliers au
niveau du CHR Al Farabi durant toute la semaine, ainsi que les échantillons des patients
externes du lundi au vendredi.
2. Matériel
Accueil et Prélèvement
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5. COTON HYDROPHILE 6. PANSEMENET ADHESIF
Service de Biochimie
C’est un automate de biochimie, il effectue plusieurs analyses durant un temps bien réduit, le
principe de ce dernier est plus simple se base sur le principe de spectrophotomètre, il est
composé de quatre compartiments :
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• Compartiments des réactifs : une partie consacrée pour les différents réactifs utilisés
dans les analyses, elle est réfrigérée pour garder les réactifs dans la température
optimale des réactions biochimiques.
• Compartiment du rotor : c’est là où le dosage se fait, il est composé de 120 cuvettes
pour l’incubation de différentes réactions pour être traverser par un faisceau lumineux
pour mesurer l’absorbance qui est proportionnelle à la concentration de l’élément
dosé.
Service de l’Hématologie
L’automate « Sysmex »
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3. Notre stage :
Service de Biochimie
Le service Biochimie est totalement automatisé, le tableau suivant représente les tests
effectués et leurs intérêts cliniques :
Processus d’analyse :
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Service d’hématologie
L’hémogramme est un des examens biologiques les plus courants, prescrit dans le cadre d’un
Bilan sanguin. Il permet d’évaluer l’état de santé général du patient.
Il peut être demandé si le patient souffre de symptômes liés à une maladie du sang
(hématomes, fatigue, douleurs osseuses, pâleur…) ou en cas de suspicion d’anémie.
Principe :
D’autres automates utilisent la cytométrie en flux qui permet de mesurer sur une suspension
de cellules les caractéristiques individuelles de chaque cellule telles que la taille, la forme et la
complexité et n’importe quel composant ou fonction qui puisse être détecté par un composé
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fluorescent. Les cellules en suspension passent une à une devant un ou plusieurs faisceau(x)
laser et des détecteurs photosensibles captent des signaux émis par chaque cellule tels que :
➢ La lumière diffusée aux petits angles (Forward Scatter, FSC) qui renseigne sur
la taille des particules
➢ La lumière diffusée à 90 degrés (Side Scatter – SSC) qui renseigne sur la
forme, la structure interne et la granularité des particules.
L’hématocrite : Hte
Est le volume occupé par les globules rouges circulants dans le sang, exprimé en pourcentage,
par rapport au volume total du sang.
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L’hémoglobine : Hb
Est une métalloprotéine contenant du fer, qui fixe O2 pour assurer son transport aux différents
tissues de l’organisme.
Le volume globulaire moyen, est un paramètre sanguin rendant compte de la taille des
globules rouges. Il se calcule après la réalisation d'un hémogramme à partir de l'hématocrite et
du nombre d'hématies, selon la formule :
𝐻é𝑚𝑎𝑡𝑜𝑐𝑟𝑖𝑡𝑒
𝑉𝐺𝑀 = × 10
𝑁𝑜𝑚𝑏𝑟𝑒 𝑑𝑒 𝐺𝑅
𝐻𝑏
𝑇𝐶𝑀𝐻 = × 10
𝑁𝑜𝑚𝑏𝑟𝑒 𝑑𝑒 𝐺𝑅
𝐻𝑏
𝐶𝐶𝑀𝐻 = × 100
𝐻é𝑚𝑎𝑡𝑜𝑐𝑟𝑖𝑡𝑒
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Vitesse de Sédimentation
Le prélèvement se fait dans un tube noir contenant le citrate de sodium comme anticoagulant.
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II. Centre Hospitalier Universitaire MED-VI
L’établissement, d’une capacité de 653 lits, est bâti sur 10 hectares et comporte entre
autres un hôpital des spécialités, un hôpital mère-enfant, un centre des brûlés, un service de
médecine légale, un laboratoire central, des services d’urgence, des blocs pédagogiques et un
internat. Les structures comportent des services de médecine (cardiologie, dermatologie,
endocrinologie, etc.) mais aussi de chirurgie (thoracique, urologie, ophtalmologie, cardio-
vasculaire…). Les services pour mère-enfant incluent la gynécologie-obstétrique, la pédiatrie,
la réanimation pour mères, nouveau-nés et prématurés…
Il coopère avec le CRTSO pour faire une 2éme détermination sanguine pour les patients
nécessitants une transfusion ou une chirurgie.
Le laboratoire reçoit les échantillons à partir d’un système pneumatique ce qui réduit le
temps nécessaire au transport d’échantillon et augmente le pourcentage de conformité durant
la phase pré-analytique.
2. Matériels
Service de Biochimie
Automate de biochimie capable de réaliser les différentes analyses .il est composé de deux
compartiments :
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• Compartiment de sérologie et immunologie i200 : il est réservé pour le dosage des
analyses sérologiques et immunologiques, où il y a deux centres de réactifs R1 et R2
et les réactions se font dans des cupules réactionnelles jetables.
C’est un automate permet la réalisation des analyses d’immunologie, les résultats données
sont plus précis.
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Service d’hématologie
L’automate « Sysmex »
3. Notre stage :
Service de Biochimie
Durant la période de notre stage au niveau du CHU Oujda, nous avons pu contrôler
l’automate ARCHITECT, la calibrer en plusieurs occasions, ainsi que passer plusieurs
échantillons.
La plupart des analyses sont de type biochimie de routine sauf quelques cas où il y a des tests
spécifiques comme la CA-125 ou PSA par exemple.
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Service d’hématologie
Lorsqu’il y a une anomalie sur l’hémogramme, le personnel du laboratoire réalise des frottis
pour une étude morphologique qui permet de détecter l’origine de l’anomalie (ex.
Thrombopénie par amas de plaquettes)
Patient présentant une Leucémie Aiguë le plus probable Lymphoïde, avec une anémie
macrocytaire normochrome.
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III. Polyclinique CNSS Oujda :
Le polyclinique CNSS Oujda, crée en 1983, parmi 13 autres polycliniques au Maroc, est un
organisme multidisciplinaire offrant un plateau technique permettant de couvrir une large
activité médico-chirurgicale aussi bien dans le cadre de l’hospitalisation que pour des
consultations et explorations en ambulatoire.
2. Matériels :
Service de Biochimie
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Principe repose sur la chimie sèche : réactif lyophilisé
Service d’hématologie
Service de Sérologie
L’automate « SIEMENS »
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Automate utilisée souvent pour des tests de sérologie.
3. Notre stage :
Service de Biochimie
Biochimie De Routine
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Les tubes utilisés au cours d’une analyse biochimique :
Basé spécifiquement sur la spectroscopie d’absorption moléculaire SAM qui dose différentes
molécules dans une solution (sérum…), par mesure d’absorption d’un rayonnement lumineux
monochromatique (UV-visible) par ces molécules.
Le substrat réagit avec le réactif pour former un complexe coloré, ce complexe a une
longueur d’onde déterminée (correspond à celle de la couleur complémentaire).
Il faut noter que certaines réactions nécessitent une incubation à 37°C pour être réaliser.
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Donc en mesurant la densité optique sur solution du complexe coloré, il est possible de
déterminer facilement la concentration de substrat d’après la loi de Beer Lambert 𝐴 = 𝜉. 𝐿. 𝐶
La réaction chimique est réalisée à l’aide d’une enzyme biologique, le produit peut être
dosé soit directement (Cinétique enzymatique), soit transformé par un second réactif en un
complexe coloré qui absorbera à une longueur d’onde déterminée.
Cependant la plupart des dosages effectués au niveau d’un laboratoire de biochimie sont
automatisés.
Tests Spéciaux
Catégorie Tests
Marqueurs Cardiaques Troponine, CK-MB, LDH-1…
Protéines Spécifiques Ferritine, Transferrine, Haptoglobine, CRP…
Hormonologie Beta HCG, T3, T4, TSH, FSH, LH, Cortisol…
Toxico/Pharmacologie Éthanolémie, Paracétamol…
Marqueurs de cancers CA19-9 : Protéine observée sur la plupart des cellules
tumoraux cancéreuses de l’ovaire ; CA 125 : marqueur tumoral pour
certains types de cancer du pancréas ; PSA : marqueur du
cancer de la prostate…
Service d’hématologie
Durant nos premiers jours au niveau de ce service nous avons effectués des NFS et VS, ainsi
que plusieurs tests d’hémostase à l’aide de l’automate « Sysmex CA50 »
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Taux de prothrombine :
Ce test explore la voie extrinsèque (VII) et la voie commune. Valeur normale : TP ≥ 70%
𝑇𝐶𝐴 𝑃𝑎𝑡𝑖𝑒𝑛𝑡
Ce test explore la voie endogène et la voie commune. Valeur normale : 𝑇𝐶𝐴 𝑇𝑒𝑚𝑜𝑖𝑛 ≤ 1.2
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Service d’Immuno-Sérologie
Cet examen de laboratoire détecte des anticorps dirigés contre des antigènes non
tréponèmiques appelés cardiolipines, ce qui en fait donc un test non spécifique, contrairement
au TPHA.
Les causes de faux positif sont : la grossesse, des maladies auto-immunes (lupus, polyarthrite
rhumatoïde), certains médicaments, certaines infections bactériennes (lèpre…) ou virales
(mononucléose...) ou d'autres tréponématoses.
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La réaction de Waaler-Rose est une très ancienne méthode de dosage du facteur rhumatoïde.
Ce qu’il faut savoir : Il détecte le facteur rhumatoïde, et n’est pas spécifique d’une maladie
particulière : on trouve le facteur rhumatoïde plus souvent dans la polyarthrite rhumatoïde,
mais aussi dans d’autres maladies auto-immunes, et chez des personnes non malades.
Il utilise des globules rouges sensibilisés par des anticorps, qui vont s’agglutiner en
présence du facteur rhumatoïde.
Il est positif à partir d’une dilution à 1/64è, il est un peu moins sensible que la réaction au
latex.
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IV. Centre Régional de Transfusion Sanguine Oujda :
Parmi 17 centre régional de transfusion sanguine au Maroc, le CRTSO est l’un responsable de
la région d’Oriental, il a pour mission l’acquisition du sang au personnes ayant besoins tout en
respectant les règles de la sécurité transfusionnelle et l’hémovigilance, depuis la collecte
jusqu’à l’acte transfusionnelle.
Ainsi que le suivi des receveurs du sang pour but d’évaluer leurs profils immunitaires après
chaque transfusion
2. Matériels :
Service d’immunohématologie
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Service de contrôle qualité
Service de Sérologie
L’automate « SIEMENS »
3. Notre stage :
Service d’immunohématologie
Receveur :
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Tableau 4.Systéme ABO
AG AC
GROUPE A A Anti-B
GROUPE B B Anti-A
GROUPE AB A et B ---------
GROUPE O -------- Anti-A et Anti-B
Les GR sont classés en Rh+ ou en Rh neg selon la présence ou l’absence de l’Ag D. Dans le
système Rhésus, en plus de l’antigène D qui est le plus immunogène, il existe d’autres
antigènes : C, c, E, e, K
1/ Mise en évidence des Ag par des sérums tests : C’est une épreuve globulaire
appelé test de Beth-Vincent.
2/ Mise en évidence des Ac par des hématies tests : C’est une épreuve sérique
nommée le test de Simonin.
Méthode Microplaque :
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Processus de groupage Receveur
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Test De Coombs Direct
Le test de Coombs direct n'est pas spécifique, c'est à dire qu'un résultat positif affirme
la présence d’agglutinines irrégulières (anticorps dirigés contre GR, présents à l'état naturel ou
plus souvent à la suite de l'introduction d'un antigène étranger) à la surface des hématies, mais
ne donne aucune indication sur leur origine.
➢ Procédure
1) Lavage des globules rouges du patient pour se débarrasser des immunoglobulines
plasmatiques. (Au moins 3 fois)
2) Dilution des hématies : 8‰ dans le LISS
3) Prendre 50µl de la dilution et la mettre dans la carte gel
4) Centrifugation 1030tr/min pendant 10 min
5) Lecture d’agglutinations
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Recherche D’agglutinines Irrégulières
La mise en présence d'un sérum ou d'un plasma inconnu et d'érythrocytes portant des
antigènes connus permet la fixation des anticorps recherchés sur ces érythrocytes et de les
sensibiliser. Dans un second temps, l'action de l'anti globuline permettra la mise en évidence
de cette éventuelle sensibilisation. Si la réaction est positive, c'est que des anticorps ont été
fixés sur ces érythrocytes, et étaient donc présents dans le sérum ou plasma objet de la
recherche d'agglutinine irrégulière.
➢ Procédure
1) Déposer 50µl des Hématies tests H1, H2, H3 diluées à 8‰ dans le LISS dans chaque
cupule de la carte gel après lavage au moins 3 fois.
2) Ajouter 25µl du sérum du patient
3) Incuber pendant 15min à 37°C
4) Centrifugation 1030tr/min pendant 10min
5) Lecture d’agglutinations
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Test De Compatibilité Direct Au Laboratoire
Le Cross Matching consiste à tester le sérum ou plasma du malade avec un échantillon des
érythrocytes du CGR que l'on envisage de transfuser. Si la réaction est positive, c'est qu'il
existe un anticorps vis à vis des globules du donneur, et que la transfusion envisagée est
incompatible, sans que l'on sache quel système de groupe sanguin est en cause. Une autre
unité de sang devra donc être choisie, et, bien sûr, testée
Donneur :
Pour les poches des Donneurs Rh neg, elles vont être testées par le D faible Du.
Le D Faible Du
Les hématies D faible ne sont pas agglutinées par les réactifs anti-D en test de routine, par
contre elles sont mieux détectées par le test indirect du Coombs.
➢ Procédure
1) Lavage des hématies à Rh neg au moins 3x et mis en suspension à 5% à l’eau
physiologique (NaCl 9‰)
2) Mettre 50µL d’hématies dans un tube à essais avec l’addition d’une goutte de l’anti-D
3) Incubation à 37°C pendant 45min.
4) Lavage 3x par l’eau physiologique
5) Addition d’une goutte de l’AGH (réactif de Coombs)
6) Centrifugation 1000tr/min pendant 1min et Lecture (agglutination= Rh +).
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L’épreuve De L’hémolysine
Les Ac anti-A et anti-B sont des Ac naturels réguliers de nature IgM, agglutinants et ayant un
optimum thermique à 4°C. Il existe cependant une situation à risque d’accident hémolytique
lorsque on transfuse du sang provenant d’un Donneur présentant une IgG anti-A et/ou anti-B
(optimum thermique à 37°C). Ce type d’hémolysine rare se retrouve surtout chez les sujets de
groupe O « le O dangereux » et apparait par commutation à partir d’une IgM anti-A ou anti-B.
➢ Procédure
1) Dans 2 tubes à essais, un contenant HA et l’autre HB ajouter 100µL du sérum du
Donneur dans chaque tube.
2) Incubation à 37°C pendant 1h30min
3) Observation d’hémolyse (réaction positive si le sang est hémolysé)
Détection des anomalies au cours du processus des analyses effectuées au sein du centre en
plus du contrôle de la conformité du matériel et réactifs, pour au cas où il y a une anomalie
une enquête sera lancer pour déterminer sa source et prendre les initiations nécessaires pour
l’éviter éventuellement.
Service de Sérologie
Ce service doté de l’automate « SIEMENS » qui passe environ 120 échantillons durant une
heure.
Le service est semi-automatisé, le personnel ne réalise que la distribution des réactifs dans les
microplaques et la maintenance de l’automate.
Le seul test effectué manuellement est le TPHA, les autres tests VIH, HBs et HCV sont
réalisés par l’automate.
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Treponema Pallidum Hémagglutination Assay
➢ Principe :
Des érythrocytes aviaires sont sensibilisés avec des composants antigéniques de T. Pallidum.
En présence d’Ac spécifiques anti-Treponema Pallidum, les érythrocytes sensibilisés (cellules
tests) s’agglutinent et présentent un aspect caractéristique (présence d’un voile) dans le fond
des puits de la plaque de micro-titration. En absence d’Ac spécifiques, ils sédiments et
forment un anneau trop serré ou un bouton compact dans le fond des puits.
Les éventuelles réactions non spécifiques sont détectées par l’utilisation des cellules de
contrôle, qui sont des érythrocytes aviaires non sensibilisés.
Les tests VIH, HBs et HCV sont réalisés par l’automate qui utilise la méthode ELISA
Sandwich.
La technique ELISA (Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay) est une technique immuno-
enzymatique de détection qui permet de visualiser une réaction antigène-anticorps grâce à
une réaction colorée produite par l'action sur un substrat d'une enzyme préalablement fixée à
l'anticorps.
Avantages de la technique :
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Inconvénients de la technique :
Service de Distribution
PSL livré
Controle dans le
Disponibilité des registre des Controle date de
PSL poches à péremption
probleme
Traçabilité de la distribution
Registre fiche de
Registre demande Registre de sortie
livraison et
du sang de sang
traçabilité
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Circuit PSL non conforme :
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CONCLUSION
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