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MICROBIOLOGÍA CLÍNICA II
- Se define cuando la persona generalmente tiene una diarrea prolongada de hasta 2 semanas. La
diarrea puede ir acompañada de vómito, dolor abdominal y/o fiebre.
- Síntoma de infección del tracto digestivo: bacterias, virus y parásitos
- Leve (autolimitado, es decir, de resolución espontánea) hasta mortal (en pacientes pediátricos,
adultos, en personas con el sistema inmunológico deprimido)
Datos y cifras
- Segunda mayor causa de muerte < 5 años (prevenibles y tratables)
- 1700 millones de enfermedades diarreicas cada año
- 525 mil niños/año mueren
- Factor de riesgo: Malnutrición, inmunodepresión
- Mortalidad asociada a deshidratación grave e infecciones bacterianas septicémicas.
- El manejo de la diarrea es principalmente con tratamiento basado en reposición de líquidos y
electrolitos, cuando el paciente no tiene acceso a este tipo de tratamiento, éste fallece.
- Las infecciones de tipo septicémicas, principalmente se atribuyen a bacterias, por ej. Salmonella
typhi, Shigella, ECEH.
Se hizo un estudio de 381 muestras fecales de pacientes con Diarrea en un año, cultivaron los
diferentes agentes etiológicos, ya sea por cultivo en placa o cultivo celulares en caso de los virus.
Se obtuvo que el principal agente patógeno encargado de la diarrea es el Rotavirus.
Luego de este, viene el Norovirus, Salmonella y E. coli diarreogénica respectivamente.
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PAULINA OVIEDO GÜENANTE
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4. Diarrea Nosocomial:
Durante la estadía hospitalaria o 3 días posterior al alta
Mayormente no infecciosa (fármacos, alimentación, dieta líquida, procedimientos)
Infecciosas: Clostridium difficile 90% de los casos en adultos (TOX A/B, colitis pseudomembranosa.)
En lactantes y niños brotes de Escherichia coli enteropatógena, rotavirus/adenovirus.
Test inmunocromatográfico
Uno agrega una gota de muestra fecal en estos pocillos, ésta difunde y uno
puede ver la presencia de un marcador de toxigenicidad de esta cepa que se
llama GDH o bien la presencia de toxina A y toxina B.
TTO Antibiótico: Metronidazol
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Generalmente cuando uno tiene un cuadro viral, no presenta diarrea con sangre, son cuadros
totalmente autolimitados.
La forma que tenemos de diagnosticar un norovirus o un rotavirus es a través de los test
inmunocromatográficos.
Cuando el paciente tiene cuadros de inmunosupresión, también es común que sufra cuadros de
diarrea por Clostridium. (es de vigilancia intrahospitalaria, porque produce brotes)
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ETIOLOGÍA EPIDEMIOLOGÍA
VIRUS: ROTAVIRUS Causa más frecuente de GEA severa en niños <5 años.
Responsable de 20-40% de las hospitalizaciones por GEA en este
grupo (10-12)
NOROVIRUS Causa más frecuente de brotes de GEA, puede afectar todas las
edades. Se asocia a 10-20% de las GEA que requieren
hospitalización en niños <5 años (10, 13)
BACTERIAS: SHIGELLA SPP. Causa más frecuente de disentería en niños <5 años de países
en desarrollo (14).
SALMONELLA SPP. Zoonosis (se encuentra en aves de corral). Causa frecuente de
brotes de GEA asociada a alimentos. La variante S. enteritidis es
la más frecuente (16). Alta frecuencia de resistencia a
antibióticos
E. COLI DIARREOGÉNICA En conjunto representan 15-30% de las GEA que requieren
hospitalización. Actualmente se reconocen 6 patotipos: ECET,
ECEP, ECEH (O157), ECEA, ECEI, ECAD. La frecuencia de cada uno
varía de acuerdo a la región (17,18)
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Intoxicación alimentaria:
Staphylococcus aureus productor de enterotoxina
Bacillus cereus (4 Toxinas; toxina cereulida). Se puede encontrar en el arroz.
Listeria spp.
EVITAR COMPLICACIONES
ESTABLECER PRONÓSTICO
VIGILANCIA EPIDEMIOLÓGICA
¿POR QUÉ?
CONTROL DE BROTES
TRATAMIENTO
- Evitar complicaciones por ejemplo en el caso de diarreas por Shigella o por Salmonella typhi (fiebre
tifoidea)
- En Shigella si o si es necesario tratamiento antimicrobiano. Los demás, si no es Salmonella typhi no
es necesario dar terapia antimicrobiana
- Establecer pronóstico, diferenciar que puede ser un cuadro autolimitado, de algo que puede pasar
a ser algo más grave.
- Vigilancia epidemiológica, sobre todo en los brotes.
- Optimizar tratamiento.
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COPROCULTIVO
‘’ Estudios han mostrado que es inapropiado realizar coprocultivos (CP) en pacientes con más de
tres días de hospitalización, dado que la causa de diarrea no es atribuible a los patógenos
entéricos que habitualmente se buscan en este examen’’.
Leucocitos Fecales
- Los pacientes con cuadros de diarrea asociada a bacterias principalmente desarrollan pus en las
heces, y se pueden ver como leucocitos. Lo que se hace, es hacer un frotis a la muestra y dejar que
se seque, posteriormente se le agrega azul de metileno y se visualiza al microscopio. Su presencia
es altamente indicativa de diarrea por bacterias.
- Mejoraría rendimiento.
- Sensibilidad 40%, especificidad 70%
- Se mezcla una pequeña cantidad de heces más dos gotas de azul de metileno y se espera 1 minuto.
- Se examina al microscopio con objetivo de 40x.
- Reporte: Cualitativo (NSO, escasos, regulares, abundantes).
Muestra
- Recolectar durante el episodio agudo porque aumenta concentración bacteriana (>2 muestras
mejoran el rendimiento)
- Mucus, pus, sangre de elección para la siembra
- Conservación:
o Recién emitida: hasta 1 hora sin medio de transporte
o > 1 hora: requiere medio de transporte (Cary-Blair), T° ambiente hasta por 1 o 2 semanas.
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Criterios de rechazo
- Mal rotulado.
- Tórula con ausencia de deposición macroscópica.
- Deposición consistente está de más un copro, salvo estudios de portación.
- Más de 1h a temperatura ambiente sin medio de transporte.
- Hospitalizados más de 3 días (*)
- Muestra contaminada con orina u otros.
- Recipiente desbordado.
Medios de cultivo
1. Utilizar medios selectivos diferenciales para BGN.
2. Seleccionar el medio que cada laboratorio tenga disponible (porque son caros).
3. Agar Mac Conkey, SS, XLD, Hektoen, Mac Conkey sorbitol (ECEH O157), TCBS (Vibrio)
4. El rendimiento del cultivo aumenta con el número de medios a utilizar (1 medio 38% vs 3
medios 61%)
5. Otros medios complementarios: Caldo selenito (para recuperar una bacteria exigente), AS
(Aeromonas spp, no en TCBS), medio selectivo para Campylobacter.
Incubación
a. Patógenos entéricos habituales (Salmonella, Shigella, Vibrio, Yersinia) en aerobiosis durante
18-24 horas a 35°C
b. Yersinia exige 48 horas, el segundo día a temperatura ambiente. La Yersinia es
metabólicamente más activa a temperatura ambiente que a 37°C.
c. Campylobacter requiere microaerofilia a 42°C durante 48 horas.
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1. Selección de colonias lactosa negativa (Mac Conkey, SS, XLD, otro): Salmonella spp, Shigella spp o
Yersinia spp
2. Realización de batería bioquímica corta (TSI, LIA, MIO*)
TSI (gas, h2s) LIA (gas, h2s) MIO Gas y h2S negativo: fundamental para
K/A -,- K/A -,- Movilidad - diferencia de E. coli inactiva
Indol: 100% negativo en S. sonnei, demás
especies variable
Ornitina: 98% positivo para S. sonnei, demás
Aglutinar para Shigella especies negativas excepto Shigella boydii
- Si yo selecciono colonias lactosa negativo, ya sea del Mac conkey, SS, XLD u otro medio donde yo
pueda ver fermentación de lactosa, y hago una batería bioquímica corta.
- En el caso del TSI, LIA, MIO, citrato y urea negativo (Shigella).
- La E. coli inactiva, puede presentar una batería similar a la de Shigella, pero esta produce muy poco
gas o muy poco H2S, este también da un SS negativo (lactosa -).
- El Indol en el caso de S. sonnei, es 100% negativo, pero para las otras especies de Shigella (4) es
variable.
- Para confirmar que es una Shigella, debemos hacer serología.
Shigella spp.
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Salmonella spp.
- Salmonella está compuesto por tres especies, Salmonella entérica (sangre caliente), Salmonella
bongori (reptiles, sangre fría) y Salmonella subterránea. (2005)
- La especie principal, S. entérica, está compuesta por seis subespecies:
1. Salmonella entérica subesp. enterica (subesp. I)
2. Salmonella entérica subesp. arizonae (subesp. IIIa)
3. Salmonella entérica subesp. diarizonae (subesp. IIIb)
4. Salmonella entérica subesp. houtenae (subesp. VI)
5. Salmonella entérica subesp. indica (subesp. VI)
6. Salmonella entérica subesp. salamae (subesp. II)
- Más de 2500 serotipos (Antígeno O, flagelar H1, H2 y envoltura Vi) (Kauffman-White)
- 99% de las enfermedades provocadas en humanos corresponden a la subespecie entérica.
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(Kauffmann-White)
Salmonella spp.
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El instituto de salud pública (ISP), es el Laboratorio Nacional y de referencia para Salmonella spp., y
le corresponde según el Reglamento sobre Notificación de Enfermedades Transmisibles de
Declaración Obligatoria (D.S 158/2004), confirmar los aislamientos sospechosos de Salmonella
spp. Realizados por los laboratorios clínicos públicos y privados del país.
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Yersinia spp.
- ¿Cómo en un agar SS me puede dar lactosa negativo y un TSI
A/A? Yersinia enterocolítica
- No fermenta la lactosa, pero sí fermenta la sacarosa.
- Es la única bacteria así de rara, que a las 24 horas puede dar
un LIA A/A , K/A (48 h incubación)
- El LIA tiene glucosa pero poca, “se supone” que un LIA no
podría dar A/A porque cuando la bacteria fermentaba la
glucosa generaba ácido en el medio, pero ese ácido se
contrarrestaba con el metabolismo de las bacterias que
utilizaban las peptonas como nutrientes, y esto hace que se alcalinice el medio y por eso se ve K/A.
Como Yersinia tiene un metabolismo más lento no consume inmediatamente las peptonas por lo
tanto no se liberan compuestos aminados y no alcaliniza el medio. A 48 horas se ve K/A.
- La movilidad es a 37°C más inactiva que a 25°C a temperatura ambiente. Variable al igual que indol
y ornitina
- Urea muy positivo (siempre)
- Ante esto debe usar antisueros específicos para Yersinia. La principal es Y. enterocolítica.
UREA (+)
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Vibrio spp.
- Cuando hay brotes, se ocupa agua peptonada alcalina, de lo contrario no se usa. Esto aumenta el
rendimiento para obtener Vibrio (a veces funciona)
- La oxidasa no la podemos hacer desde el TCBS, ya que tiene altas concentraciones de algún
carbohidrato, y puede dar algún falso positivo. Por eso se debe hacer desde el agar sangre.
- Todos los Vibrio son oxidasa + (también Plesiomona y Aeromona)
- El TCBS es inhibitorio para Aeromonas
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- Se debe hacer una “batería corta”, pero estos TSI, LIA y MIO tienen una condición, para que se vea
la real fermentación de carbohidratos agregar NaCl al 1%, ya que la bacteria es halófila (Vibrio
parahaemolyticus necesita NaCl al 1% para crecer)
- El antibiograma para Vibrio parahaemolyticus no está indicado, no se sugiere porque este cuadro
es totalmente autolimitado de 7 días como máximo de duración.
- Otros Vibrio sí.
- Se envía al ISP y ellos confirman la cepa.
Campylobacter spp.
- Tinción de Hucker: Cristal violeta + Bicarbonato hace que la bacteria retenga de mejor forma el
colorante primario, para que se vea mejor.
- El cultivo se hace en medios selectivos para Campylobacter.
- H. del hipurato ahora viene en discos, uno emulsiona la colonia y ve si la reacción es positiva o
negativo y permite diferenciarla de jejuni y coli
- Se amplifican genes
- Se coloca la muestra, se carga en este
instrumento, se espera 80 min y se
pesquisa si la muestra tiene tantas
bacterias, virus, parásitos.
- Se dice que la detección de PCR, puede
detectar un número bajo de patógenos.
- En cambio los métodos tradicionales,
van a detectar patógenos cuando la
gravedad de la enfermedad sea alta,
porque la concentración de las heces, va
a permitir el diagnostico a través de
estas.
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Estudio de susceptibilidad
Aislados fecales de Salmonella tifoidal (S. Typhi y S. Paratyphi) y Shiguella:
- Ampicilina, fluoroquinolona (ciprofloxacino, Levofloxacino) y SXT
Aislados extraintestinales (ej. septicemia) de Salmonella (S. Typhi y S. Paratyphi):
- Agregar cefalosporina de tercera generación como ceftriaxona y cloranfenicol (cloranfenicol
solo útil en vías sistémicas)
Antibiograma de rutina para Salmonella spp. no tifoideas (ni Typhi ni Paratyphi) de origen
intestinal no está indicado a diferencia de aislados de Shigella.
Para Salmonella spp. y Shiguella spp. Cefalosporinas de 1°, 2°, cefamicinas y Aminoglucósidos pueden
parecer activos in vitro pero no son efectivos clínicamente por tanto no deben ser reportados.
Vigilancia epidemiológica
Es un error común ir a la
tabla de enterobacterias
para consultar por
antibióticos, ya que en el
CLSI, los puntos de corte
para Salmonella son aparte
y específicos, generalmente
los puntos de corte para
Salmonella son más bajos
Tratamiento empírico, con Cefotaxima el paciente andaría bien. que para las
enterobacterias, es decir,
necesitan una mayor
concentración de
antibiótico.
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Caso 1
Agar SS sin desarrollo Agar XLD con desarrollo, Agar TCBS sin desarrollo
colonias lactosa positiva.
Este resultado hace pensar que no es un enteropatógeno, ya que en el XLD buscamos colonias
lactosa negativa (incoloras). En el TCBS tampoco hubo desarrollo. ¿Qué se hace en este caso? El SS
se deja en 24 horas más de incubación a temperatura ambiente para la búsqueda de Yersinia spp.
Se informa: no hubo desarrollo de Salmonella spp, Shigella spp, Yersinia spp, Vibrio spp.
Caso 2:
Agar SS con colonias lactosa – Agar XLD con colonias lactosa – Agar TCBS sin desarrollo
y producción de H2S (rosadas) y producción de H2S
Este resultado hace pensar en una Salmonella spp. ¿Qué se hace? Una batería corta de TSI, LIA,
MIO. Si el resultado es sugerente de una Salmonella spp, se hace serología.
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