MATERIALES NO INCLUIDOS EN EL KIT

- Pipetas graduables.
- Puntas de pipeta.
ES
PRECAUCIONES
SIMPLE / STICK CHAGAS
Test inmunocromatográfico en un solo paso para la 1. Utilizar todos los reactivos únicamente in vitro.
detección de anticuerpos específicos contra 2. Las muestras de suero pueden contener agentes
Trypanosoma cruzi infecciosos y deberán ser tratadas y desechadas como
materiales biológicos potencialmente peligrosos.
3. No intercambiar los componentes de kits con distinto
FINALIDAD PREVISTA
numero de lote.
El Simple Chagas/Stick Chagas es un test 4. No usar los componentes del kit después de las fechas
inmunocromatográfico diseñado para detección en suero de de caducidad.
anticuerpos específicos contra Trypanosoma cruzi. Este 5. En caso de rotura del envase, el producto puede ser
protozoo es el agente causal de la enfermedad o mal de utilizado si ninguno de los componentes ha sido dañado.
Chagas. 6. El producto usado debe desecharse conforme a la
legislación vigente.
7. No usar el test si aparece alguna línea de color en la
FUNDAMENTO zona de resultados antes de empezar a usarlo.
El Simple Chagas/Stick Chagas es una prueba
inmunocromatográfica capaz de detectar anticuerpos ALMACENAMIENTO
específicos contra diversos antígenos inmunorrelevantes de El Simple Chagas/Stick Chagas debe ser almacenado a 8-
Trypanosoma cruzi. Está basada en la captura inmunológica 25ºC. Su fecha de caducidad está impresa en la envoltura.
de micropartículas coloreadas y recubiertas de una proteína
multiantigénica durante su paso a través de una membrana
sobre la que se han inmovilizado la misma proteína MUESTRAS
multiantigénica. El test ha sido diseñado para su uso con muestras de
En el caso de que la muestra contenga anticuerpos suero. La dilución del suero en el tampón de dilución
dirigidos contra T. cruzi, éstos reaccionarán con las provisto se puede llevar a cabo en los pocillos de una
partículas coloidales ROJAS que están conjugadas a la microplaca. Las muestras de suero deben ser
proteína multiantigénica. A continuación, los complejos de preferiblemente frescas, o bien guardarse en el congelador
partículas coloidales-anticuerpos migrarán por y homogeneizarse cuidadosamente después de
cromatografía hacia la zona de reacción. En esta zona se ha descongelarlas. Si las muestras se guardan en el
depositado, en una primera línea, la proteína multiantigénica refrigerador, se recomienda añadir azida u otro preservante
representativa de T. cruzi; que capturará los complejos de y procesarlas con rapidez para evitar una caída en el título
partículas rojas-anticuerpos produciéndose una banda de anticuerpos.
transversal de color ROJO.
En cualquier caso (muestra negativa o positiva), se PROCEDIMIENTO DE SIMPLE CHAGAS
verificará el desarrollo de una línea transversal de color 1. Sacar el cassette del envoltorio y colocarlo en una
AZUL que indica que la cromatografía se ha desarrollado superficie plana.
correctamente y en condiciones que aseguran la reacción 2. Si las muestras de suero se han conservado congeladas,
antígeno –anticuerpo. descongelarlas y homogeneizarlas.
3. En un tubo de ensayo preparar una dilución 1/15 del
MATERIALES INCLUIDOS EN EL KIT suero mediante la adición de 35 microlitros de suero a 500
• Dispositivos de Reacción microlitros de tampón.
El número de dispositivos de reacción del kit se encuentra 4. Mezclar bien.
5. Aplicar con cuidado 150 microlitros del suero diluido en
indicado en la etiqueta externa del kit tras el símbolo la ventana circular señalada con una flecha (ventana de
• Tampón de dilución adición de la muestra) del Simple Chagas
El volumen de tampón diluyente suministrado es 6. Observar los resultados, sin más manipulación, a los 10
proporcional al número de tests incluidos y está indicado minutos.
en la etiqueta del vial que lo contiene.
Ejemplo de volumen de tampón suministrado: PROCEDIMIENTO STICK CHAGAS
1. Si las muestras de suero se han conservado congeladas,
STICK CHAGAS Kit 50 SIMPLE Kit de 50 descongelarlas y homogeneizarlas.
tests CHAGAS tests 2. En un tubo de ensayo preparar una dilución 1/15 del
Tampón de 30 ml Tampón de 30 ml suero mediante la adición de 35 microlitros de suero a 500
dilución dilución ul de tampón.
3. Mezclar bien.
4. Introducir el Stick Chagas en la dilución anterior
manteniéndolo vertical y en una posición estable. La
muestra no debe superar la zona marcada con flechas.
5. Observar los resultados a los 10 minutos.

1

RESULTADOS
NEGATIVO: Aparece una sola línea transversal de color
AZUL (control) en la parte superior de la tira
POSITIVO: Aparecen dos bandas transversales, una
línea ROJA inferior (positivo Chagas) y una AZUL
superior (control)
INVÁLIDO: No aparece ninguna banda transversal.
También deben considerarse inválidos los tests que en
los que no aparece la línea control AZUL con
independencia de que lo haga la línea roja. Un resultado
inválido significa que la tira está estropeada (usualmente
por la humedad), o que el manejo de la misma ha sido
inadecuado.
3. Es importante controlar el tiempo de reacción. Si el
tiempo de reacción es menor al indicado, las muestras que
tienen una concentración de anticuerpo bastante superior
al límite de sensibilidad se pueden observar claramente
pero las que están en el límite no aparecerán.
4. El test es cualitativo y no debe hacerse ninguna
interpretación cuantitativa en relación directa a la
intensidad de la línea positiva.
5. Se ha observado reacción entrecruzada con algunos
sueros africanos de pacientes afectos de paludismo. El test
no ha mostrado, sin embargo, reacción entrecruzada con
sueros de pacientes afectos de leishmaniasis visceral o
enfermedad del sueño.
SENSIBILIDAD Y ESPECIFICIDAD

Evaluación nº1
En un estudio con 279 sueros procedentes de posibles
pacientes afectos de Chagas Stick Chagas mostró una
concordancia de sensibilidad con la técnica ELISA (ELISA
Chagatest de Wiener lab., Ortho T. cruzi ELISA Test System
de Ortho y Bioelisa CHAGAS de Biokit) del 94,5 %.
La concordancia de especificidad en este estudio fue del
89 %.

ELISAs
Positivo Negativo Total
Stick Chagas Positivo 208 5 213
Negativo 12 40 52
negativo positivo inválido Total 220 45 265
Porcentaje de concordancia: 93,6 %
Concordancia de Sensibilidad estimada: 94,5 %
Concordancia de Especificidad estimada: 88,9 %

Evaluación nº2
En un estudio con 329 muestras de sueros procendentes de
bancos de sangre y de población con sospecha clínica
epidemiológica, realizado en el Instituto de Salud Carlos III
de Madrid, el Stick Chagas mostró una sensibilidad superior
al 99 % y una especificidad del 91,9%.

ELISA + IFI
Positivos Negativos
(34) (295)
Positivos 34 24
CONTROL DE CALIDAD Negativos 0 271
Stick Chagas
Si no aparece ninguna línea AZUL, el test es inválido, ya Sensibilidad> 99 %
sea porque se realizó incorrectamente o porque los Especificidad: 91,9 %
reactivos se han deteriorado.
Evaluación nº3
LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO En un estudio con 265 muestras de sueros, realizado en el
1. Dada la existencia de un periodo ventana post-infección Instituto Evandro Chagas de Brasil, de los cuales 145
en el que la concentración de anticuerpos es insuficiente sueros eran positivos, 65 negativos y 55 con sospecha de
para su detección, un resultado negativo no puede excluir leishmaniosis visceral, el Stick Chagas mostró una
la posibilidad de infección muy reciente por T. cruzi. sensibilidad del 99,3 %, y una especificidad del 97%.
2. El diagnóstico final no se debe basar sólo en el resultado
de un test. Se deberá fundamentar en la correlación de los
resultados del test con otros datos adecuados y con la
sintomatología clínica

2
Evaluación nº4
En un estudio con 1143 muestras de sueros, realizado en el SUSTANCIAS INTERFERENTES
Instituto Evandro Chagas de Brasil, el Stick Chagas mostró Con un lote de Stick Chagas se analizan una serie de
una sensibilidad del 98,8 %, y una especificidad del 96,2% sustancias interferentes que podrían llegar a encontrarse
en sangre. Las sustancias interferentes se adicionan, en la
HA+ IFI cantidad final indicada en la tabla anexa, al tampón de
dilución y se realiza una curva de sensibilidad. Se analizan
Positivos Negativos dos sueros control negativos.
(89) (1054)
Positivos 88 40 Sustancia Concentración Diluyente Concentración
Negativos 1 1014 inicial en tampón
Stick Chagas
Sensibilidad> 98,8 % Aspirina 50 mg/ml Etanol 2,5 mg/ml
Especificidad: 96,2 % Cafeína 10 mg/ml Agua 0,5 mg/ml
Ibuprofeno 8 mg/ml Agua 0,4 mg/ml
OTRAS PRUEBAS DE ESPECIFICIDAD Etanol 500 mg/ml Agua 50 mg/ml
• En un estudio con 100 sueros de pacientes afectos de Ácido fólico 0,4 mg/ml Agua 0,02 mg/ml
diversas patologías el Stick Chagas mostró una
Ácido 20 mg/ml Agua 1 mg/ml
especificidad del 91 %. nicotínico
• En un estudio con 49 sueros de donantes sanos, el Stick
Chagas mostró una especificidad superior al 99 %. Hemoglobina 15 mg/ml Agua 0,75 mg/ml
hCG 250000 mUI/ml Agua 500 mUI/ml
REPETIBILIDAD
EDTA 20 mg/ml Agua 1 mg/ml
PRECISIÓN INTRAENSAYO
Con 1 lote de Stick Chagas se analizaron 10 curvas de Citrato 0,2 M Agua 0,01 M
sensibilidad (diluciones seriadas de un suero control Sódico
positivo). El análisis lo realizó una persona y en el mismo Heparina 500 mg/ml Agua 50 mg/ml
día y los resultados de sensibilidad obtenidos en todos los
casos fueron semejantes, demostrando la alta preción
intraensayo del Stick Chagas Ninguna de las sustancias probadas afecta al buen
funcionamiento del test.
REPRODUCIBILIDAD
PRECISIÓN INTERDÍA
Con 1 lote de Stick Chagas se realizó una curva de
sensibilidad a lo largo de 10 días consecutivos. El análisis
lo realizó una misma persona y los resultados obtenidos
fueron semejantes todos los días, demostrando la alta
precisión interdía del Stick Chagas

PRECISION INTERLABORATORIO
Con 1 lote de Stick Chagas se analizaron 3 curvas de
sensibilidad. El análisis lo realizaron tres personas y en el
mismo día. Los resultados obtenidos en los tres casos
fueron semejantes, demostrando la alta preción
intraensayo del Stick Chagas

PRECISION INTERLOTE
Se realizaron 3 curvas de sensibilidad con 3 lotes de Stick
Chagas. El análisis lo realizó una misma persona y los
resultados obtenidos en los tres casos fueron semejantes,
demostrando la alta precisión interlote del Stick Chagas.

EFECTO HOOK
El efecto Hook es el efecto que se produce cuando, en
presencia de elevadas concentraciones del analito a
detectar, se produce una disminución de la señal obtenida,
llegándose incluso a negativizar muestras positivas. De esta
forma podría suceder que a una muestra de elevada
concentración se le asigne una cuantificación mucho menor
de la real o incluso llegue a dar valor negativo.
Se han probado numerosos sueros con el Stick Chagas sin
que se haya observado una disminución de la intensidad de
la banda positiva en los casos de mayor contenido en
inmunoglobulinas anti-Tripanosoma cruzi. No hay, por lo
tanto, efecto Hook.

3
 3. Do not exchange components from kits with different lot
numbers.
EN
4. Do not use kit components after the expiration dates.
5. If the package is broken, the product can still be used as
long as none of the components have been damaged.
One-step immunochromatographic test for detecting 6. The used product should be discarded as indicated by
antibodies specific for Trypanosoma cruzi current legislation.
7. Do not use the test if a colored line appears in the result
area before you start to use it.
INTENDED USE
Simple Chagas / Stick Chagas is an STORAGE
immunochromatographic test designed to detect antibodies
specific for Trypanosoma cruzi in serum. This protozoan is Store at 8-25ºC. The expiration date is stamped on the
the causal agent for Trypanosomiasis or Chagas disease. pouch.

PRINCIPLE SAMPLES
The test has been designed for use with sera samples.
Simple Chagas / Stick Chagas is an
Dilution of the serum in the diluent buffer may be done in a
immunochromatographic test capable of detecting
microplate wells. Samples of serum to be used should be fresh
antibodies specific for various immunologically-relevant
or should be kept in the freezer. In this case, the sample must
Trypanosoma cruzi antigens. The test is based on the
be completely unfrozen, taken to room temperature and
immunological capture of microparticles that are colored and homogenized before analysis. If the samples are going to be
covered with a multi-antigen protein as they pass through a kept in the refrigerator it is advisable to add azide or other kind
membrane on which the same multi-antigen protein has of preservative substance in order to avoid a decrease in the
been immobilized. antibodies tittle.
If the sample contains antibodies against T. cruzi, they react
with the RED colloid particles that are conjugated to the
multi-antigen protein. The colloid particle-antibody SIMPLE CHAGAS PROCEDURE
complexes then migrate through chromatography to the 1. Take the reaction device, at room temperature, out of its
reaction area. In this area, the multi-antigen protein pouch and place it on a table.
representing T. cruzi has been deposited on a first line; the 2. If serum samples have been kept in the freezer, let them
protein captures the red particle-antibody complexes, reach the room temperature and homogenize them.
producing a RED band.
Whether the sample is negative or positive, the appearance 3. Prepare a 1/15 dilution of the serum in the diluent buffer
of a BLUE band verifies that chromatography has occurred by means of the addition of 35 µl of serum into + 500 µl of
correctly and under conditions that ensure the antigen- diluent buffer.
antibody reaction. 4. Mix well
5. Carefully place 150 ul of the diluted serum in the round
window marked with an arrow (window for adding sample) of
KIT CONTENTS the Simple Chagas.
• Reaction devices 6. Check the result at 10 minutes.
The number of reaction devices in the kit is indicated on
the outer kit label after the symbol . STICK CHAGAS PROCEDURE
• Dilution buffer 1. If serum samples have been kept in the freezer, let them
The volume of the diluting buffer provided is proportional reach the room temperature and homogenize them.
to the number of tests included and is indicated on the 2. Prepare a 1/15 dilution of the serum in the diluent buffer
label of the vial in which it is contained. by means of the addition of 35 µl of serum into + 500 µl of
Example of buffer volume provided:
diluent buffer.
3. Mix well
STICK 50 tests SIMPLE 50 tests 4. Place the Stick Chagas into the previous dilution, in a
CHAGAS kit CHAGAS kit vertical and stable position. When the strip is submerged in
Buffer volume 30 ml Buffer volume 30 ml the sample, it must not go over the blue area marked with
arrows.
5. Check the result at 10 minutes

MATERIAL NOT INCLUDED RESULTS

• Graduated pipette
• Pipette tips NEGATIVE: A single BLUE band (control) appears in the
upper part of the strip.
PRECAUTIONS
POSITIVE: Two bands appear: a lower RED one (positive
1. Use all the reagents only in vitro.
for Chagas) and an upper BLUE one (control).
2. Patient sera samples may contain infectious agents and
should be treated and discarded as potentially dangerous INVALID: No bands appear. Tests in which no BLUE control
biological materials. band appears should also be considered invalid, whether
there is a red line or not. An invalid result means that the

4
strip has been damaged (usually due to moisture/humidity)
or that it has been handled incorrectly.
SENSITIVITY AND SPECIFICITY
Evaluation nº1
In an evaluation carried out with 279 sera from patients
possibly affected by Chagas disease, the test showed a
sensitivity concordance with ELISA technique( ELISA
Chagatest by Wiener lab., Ortho T. cruzi ELISA Test
System de Ortho and Bioelisa CHAGAS de Biokit) of 94,5
% and a specificity concordance of 89%

ELISAs
Positive Negative Total
Stick Chagas Positive 208 5 213
Negative 12 40 52
Total 220 45 265
negative positive invalid Concordance % = 93,6 %
Sensitivity concordance % = 94,5 %
Specificity concordance % = 88,9 %

Evaluation nº2
In an evaluation carried out at the Health Institute Carlos III
in Madrid, with 329 sera from blood banks and from
population with clinical suspect of being affected by the
disease the Stick Chagas showed a sensitivity concordance
upper 99%, and a specificity concordance of 91,9%

ELISA + IFI
Positive (34) Negative (295)
Positive 34 24
Negative 0 271
Stick Chagas
Sensitivity> 99 %
Specificity: 91,9 %
QUALITY CONTROL
Evaluation nº3
The test is invalid if no BLUE line appears, whether In an evaluation carried out at the Institute Evandro Chagas
because the test was not performed properly or the in Brasil, with 265 sera (145 positive sera, 65 negative sera
reagents have deteriorated. and 55 suspicious sera from visceral leishmaniosis) the
Stick Chagas showed a sensitivity concordance of the
93,3% and a specificity concordance of 97%.
PROCEDURE LIMITATIONS
1. Given that there is a post-infection window in which Evaluation nº4
antibody concentration is too low to be detected, a negative In an evaluation carried out at the Institute Evandro Chagas
result cannot exclude the possibility of a very recent infection in Brasil, with 1143 sera, the Stick Chagas showed a
by T. cruzi. sensitivity concordance of 98,8% and a specificity
2. The final diagnosis should not be based on only the result concordance of 96,2%
from one test. The diagnosis should be established by the
correlation of test results with other appropriate data and HA+ IFI
with clinical symptoms.
3. It is important to control reaction time. If reaction time is Positive (89) Negative (1054)
less than that indicated, samples containing an antibody
Positive 88 40
concentration significantly higher than the sensitivity limit can
be seen clearly, but those that are at the limit will not appear. Negative 1 1014
Stick Chagas
4. This is a qualitative test; no quantitative interpretation of Sensitivity> 98,8 %
the result should be made with respect to the intensity of the Specificity: 96,2 %
positive line.
5. Some cross reaction has been observed with some
African sera from patients suffering from paludism. However
the test has not shown cross reaction with sera from patients
suffering from visceral leishmaniasis or sleeping disease.

5
OTHER SPECIFICITY STUDIES
• In an evaluation carried out with 100 sera form patients
suffering from diverse disease the Stick Chagas showed a Substance Initial Diluent Concentration
specificity of 91% Concentration in buffer
• In an evaluation carried out with 49 sera from healthy Aspirin 50 mg/ml Ethanol 2,5 mg/ml
patients, Stick Chagas showed a specificity higher than
99%. Caffeine 10 mg/ml Water 0,5 mg/ml
Ibuprofen 8 mg/ml Water 0,4 mg/ml
Ethanol 500 mg/ml Water 50 mg/ml
REPETEABILITY
INTRA-ASSAY PRECISION Folic acid 0,4 mg/ml Water 0,02 mg/ml
With 1 lot of Stick Chagas, 10 replicas of the sensitivity Nicotinic acid 20 mg/ml Water 1 mg/ml
curve were performed (serial dilutions of a positive control
serum). The analyses were performed by the same person Haemoglobin 15 mg/ml Water 0,75 mg/ml
on the same day. The results obtained in all the replicas of hCG 250000 mUI/ml Water 500 mUI/ml
each of the concentrations were the same, which EDTA 20 mg/ml Water 1 mg/ml
demonstrates the high intra-assay precision of Stick
Chagas. Sodium 0,2 M Water 0,01 M
citrate
Heparin 500 mg/ml Water 50 mg/ml
REPRODUCIBILITY
INTER-DAY PRECISION None of the studied substances affects to the proper
With 1 lot of Stick Chagas, a sensitivity curve (serial performance of the test.
dilutions with a positive control serum) was performed for
10 consecutive days. The analyses were carried out by the
same person, obtaining similar results each day, which
demonstrates the high inter-day precision of Stick Chagas.

INTER-LABORATORY PRECISION
With 1 lot of Stick Chagas, 3 sensitivity curves were
analysed. The analyses were preformed by three
technicians on the same day. The results obtained in all
the cases for each of the concentrations were the same,
which demonstrates the high inter-laboratory precision of
Stick Chagas.

INTER-LOT PRECISION
With 3 lots of Stick Chagas, a sensitivity curve (serial
dilutions of a positive control serum) was performed. The
analyses were carried out by the same person, obtaining
similar results with all three lots, which demonstrates the
high inter-lot precision of Stick Chagas.

HOOK EFFECT
The Hook effect is the effect produced when, in the
presence of high concentrations of the analyte to be
detected, there is a decrease in the signal obtained, positive
samples even turning negative. A sample having a high
concentration could thus be assigned a much lower
quantification than the true figure or even yield a negative
value.
Many positive samples (sera and blood) have been tested
without observing a decrease in the intensity of the positive
band in the cases of higher content in anti-T. cruzi
immunoglobulins. There is, therefore, no Hook effect.

INTERFERENCE SUBSTANCES
With a lot of Stick Chagas, several interference substances
that are likely to be in blood are studied. The interference
substances are added to the buffer in the final amount that is
show in the chart and a sensitivity curve is performed. Two
negative control sera are studied.

6
BIBLIOGRAFÍA / REFERENCES Fecha de caducidad / Expiration date
1. “Diagnosis of Chagas disease". López-Antuñano F.J. et Número de lote / Lot number
al. Revista Latinoamericana de Microbiología (2000) 42:
121-129. Uso diagnóstico in vitro /For in vitro diagnostic use
Este producto cumple con las exigencias de la
2. "Recent issues of the biochemistry and molecular
Directiva 98/79/CE sobre los productos sanitarios
biology of Trypanosoma cruzi". Travassos L.R. and
para diagnóstico in vitro. / This product fulfills the
Camargo E.P Mem Inst Oswaldo Cruz (1999) 94 (Suppl I):
requirements of Directive 98/79/EC on in vitro
155-157.
diagnostic medical devices.
3. "Screening and confirmation in Chagas Disease serology REAG
Reactivo / Reagent
- A contribution". Oelemann WMR et al. Mem Inst Oswaldo DIL Tampón de dilución / Dilution buffer
Cruz (1999) 94 (Suppl. I): 307-308.
Número de catálogo / Catalogue number
4. "Diagnosis of Trypanosoma cruzi chronic infections in
humans: Usefulness of teh complement regulatory protein Leer instrucciones de uso / Please read pack insert
antigens and lytic antibodies in the control of cure". Mem
Inst Oswaldo Cruz (1999) 94 (Suppl. I): 301-304. Fabricado por / Manufactured by
5. "The Trypanosoma cruzi genome project: Nuclear Contenido suficiente para <n> ensayos / Contains
karyotype and gene mapping of clone CL Brener". Santos sufficient for <n> tests
M. et al. Mem Inst Oswaldo Cruz (1997) 92 (6): 821-828. Conservar a / Store at
6. "Evolution of knowledge on the etiological diagnosis of
chagasic infection". O Luquetti A. Mem Inst Oswaldo Cruz
(1999) 94 (Suppl. I): 283-284.
7. "Chagas disease: Recombinant Trypanosoma cruzi
antigens for serological diagnosis". da Silveira J.F. et al.
TRENDS in Parasitology (2001) 17 (6): 286-291. DO-090586 Rev.4– 19.03.09
8. "Evaluation of recombinant antigens for serodiagnosis of Operon, s.a. - Camino del Plano, 19 - E-50410 Cuarte
Chagas' disease in South and Central America". Umezawa de Huerva - (Zaragoza) – ESPAÑA
E. S. Journal of Clinical Microbiology (1999) 37 (5): 1554-
1560.