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Bibliografía de consulta:
Cromatografia sobre papel y capa fina. Electroféresis. (I. Smith y J. Feinberg)
Quimica Analítica Cualitativa. (Burriel)
Vínculos Web en Internet
¿Qué es la cromatografia?
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clasificación. Los principales mecanismos que intervienen en la separación
cromatografica son:
Adsorción: Gases o líquidos contenidos en la fase móvil son retenidos por una
adsorción selectiva en la superficie del sólido que constituye la fase estacionaria.
En la interfase sólido-fase móvil hay un aumento de concentración respecto a la
inicial. Este mecanismo controla la cromatografia gas-sólido y líquido-sólido.
Reparto: Los componentes de la fase móvil son retenidos por la fase estacionaria
liquida en función de su solubilidad en ella. Si las dos son liquidas se tiene un
proceso de extracción en continuo.
Intercambio Ionico: La fase estacionaria constituida por un sólido intercambiando
iones con iones contenidos en la fase móvil, liquida. El intercambio de iones
sólido-solución esta regulado por la afinidad quimica de los iones con ambas fases
y por sus respectivas concentraciones.
Tamaño Molecular: Especies neutras de alto peso molecular pueden ser
separadas en virtud de su tamaño donde la fase estacionaria es un gel hidrofilico
altamente poroso que retiene las moléculas de menor tamaño al de los poros. Las
moléculas de mayor tamaño son retardadas en su paso por pequeñas fuerzas de
adsorción de la superfie externa del gel que luego son excluidas de la fase
estacionaria.
Migración Eléctrica: Los componentes iónicos de una muestra son separados por
su diferente velocidad y sentido con que se desplazan en un campo eléctrico. La
fase estacionaria puede ser un papel saturado por un electrolito. La aplicación de
un campo provoca un movimiento diferencial de los iones dependiendo de su
carga y de su movilidad ionica.
CROMATOGRAFIA EN PAPEL
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En ambos casos el disolvente avanza a lo largo del papel pasando por encima de
la mancha, al avanzar disuelve y arrastra las sustancias de la mancha, cada una
de ellas se mueve, por lo general a distinta velocidad que las otras.
Se deja actuar el disolvente un tiempo determinado, se seca el papel y se
observan las sustancias separadas si tienen color, o en caso de no tener color se
procede al revelado por una reacción quimica apropiada.
Esta técnica se conoce como cromatografìa monodimencional y el papel resultante
recibe el nombre de cromatograma monodimencional.
Fuerzas propulsoras:
Cuando se realiza un cromatograma en papel, las fuerzas propulsoras más
importantes son: el flujo de disolvente y la solubilidad de cada sustancia en le
disolvente.
Flujo del disolvente:
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Si la sustancia cromatografiada fuera completa e instantáneamente soluble
en el disolvente que avanza, por ejemplo agua y azúcar, y no actuaran fuerzas de
retardo la sustancia ascenderá desde el origen hasta donde llega el diluyente. En
cambio si la sustancia fuera completamente insoluble en el disolvente en
movimiento no se movería del origen.
La corriente del disolvente es la misma para todas las sustancias de la mancha,
así pues, si el disolvente fuese capaz de disolver instantánea y completamente
todas las sustancias, estas avanzarían juntas hasta el final de la trayectoria del
disolvente y terminaríamos donde empezamos con todas las sustancias juntas.
Solubilidad:
Una fuerza diferencial es, en efecto, la solubilidad. Pocas son las sustancias
que ofrecen la misma solubilidad en cualquier disolvente. La particular solubilidad
de una sustancia en la corriente del disolvente es una fuerza propulsora que
tiende a desplazarla, manteniendola en movimiento a lo largo del papel.
Fuerzas retardantes:
Hay también dos fuerzas retardantes principales: la adsorción y el reparto.
Adsorción:
La celulosa de la que esta hecho el papel de filtro, posee propiedades
adsorbentes. Las sustancias depositadas en el papel, en cromatografía, pueden
ser más o menos adsorbidas en el papel.
La adsorción es otra de las fuerzas diferenciales, esto significa que unas
sustancias son adsorbidas más que otras y, por consiguiente, la liberación de las
sustancias de las manchas variará de una sustancia a otra. Esto contribuye de
nuevo a la separación. Mientras que se va realizando el cromatograma, las
sustancias mas fuertemente adsorvidas se van quedando atrás, mientras que las
adsorvidas con menos fuerza avanzan hacia el frente.
Reparto:
La cormatografia se basa, en una medida considerable, en la presencia de dos
fases liquidas individualizadas. Una de ellas es la corriente del disolvente
circulando por el papel de filtro. La otra es la fase acuosa contenida en el mismo
papel de filtro. Una hoja de papel de filtro aparentemente seca contiene entre un 6
y 12% de agua firmemente adherida a la celulosa. Aquí es donde entra en función
el reparto.
Cuando una sustancia que es soluble en dos disolventes no mezclados es
expuesta al mismo tiempo a ambos, se repartirá entre ellos. La cantidad que se
encuentre en cada disolvente dependerá de la relativa solubilidad del soluto en
cada uno. El grado de reparto, una vez conseguido el equilibrio, se llama
coeficiente de reparto o razon de distribución.
Constante Rf:
El último punto alcanzado por el disolvente en su avance se denomina frente del
disolvente. Puede usarse como punto de referencia para expresar las distancias
relativas recorridas por las diferentes sustancias en un cromatograma. El símbolo
utilizado para designar esta distancia relativa es Rf y se define mediante:
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distancia recorrida por el compuesto desde el origen
Rf =
Distancia del origen al frente del disolvente
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c) Análisis por elución.- Después de fijar los componentes en la parte superior
se pasa un disolvente puro que no se adsorbe. Los componentes van avanzando
por la columna dependiendo de la fuerza con que son adsorbidos; cada uno de los
cuales es distribuido en una pequeña zona. Si la columna es suficientemente larga
y los valores de Rf difieren bastante, se puede lograr la separación de mezclas
bastante complejas. En la Fig. VIII-12 se muestra un cromatograma desarrollado
por este método. Cada componente puede ser recogido y analizado a la salida de
la columna.
Adsorbente y eluyentes
Son muchos los sólidos que se han utilizado como fase estacionaria en
cromatografía de adsorción. Los más importantes son alúmina, silicato de
aluminio, silicagel, óxido, silicato y carbonato de magnesio, óxido, carbonato y
fosfato de calcio, como inorgánicos; y carbón, almidón y azúcares como orgánicos.
Normalmente deben ser sometidos a un proceso térmico de activación superficial
antes de su utilización.
Como eluyentes se utilizan agua, alcoholes, cetonas, ésteres, cloroformo,
tetracloruro de carbono, etc. Su capacidad de elución depende de su polaridad,
del absorbente y de las especies a eluir.
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moléculas de mayor tamaño pasarán a través del mismo, con lo que, en principio,
se origina una separación de moléculas de acuerdo con su diferente tamaño.
El fenómeno puede considerarse como una filtración a través de un tamiz
molecular y por eso a esta técnica se la llama también “cromatografía con tamiz
molecular” (ctm); así mismo se la ha denominado, Penetración sobre gel,
exclusión molecular y tamizado molecular.
Electroforesis
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soporte (que deben atenuarse en lo posible), del voltaje aplicado y de la intensidad
de corriente.
CROMATOGRAFIA DE GASES
INSTRUMENTACION
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DETECTORES: son muchos tipos de detectores, estos actúan siempre por
comparación de alguna propiedad física o quimica (densidad, calor de combustión,
etc.) del gas portador solo (antes de la introducción de la muestra) y de la mezcla
de gas portados y componentes de problemas. Los detectores se diferencian
principalmente por su selectividad y sensibilidad, por destruir o no la muestra y por
ser integrales o diferenciales, los primeros miden continuamente la muestra
acumulada desde el principio del analisis y los segundos miden concentraciones
instantáneas. Se utilizan más los detectores diferenciales.
V r = tr F
APLICACIONES
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En las cromatografías clásicas, en las que la fase móvil es un líquido que fluye a
traves de un sólido por el efecto de la gravedad para alcanzar alta resolución seria
necesario emplear columnas excesivamente largas, lo que se traduciría en un
desarrollo muy lento de los cromatogramas.
Estos inconvenientes se han resuelto con la cromatografia de alta resolución, en la
que se trabaja con pequeñas columnas, muy empaquetadas y forzando el paso de
la fase móvil mediante elevadas presiones, con lo que se consiguen separaciones
muy efectivas en un plazo muy corto de tiempo.
Dependiendo de la fase estacionaria, el mecanismo de separación puede ser
reparto, adsorción, tamaño molecular (geles) e incluso cambio ionico, aunque los
métodos mas utilizados están basados en reparto y adsorción.
El esquema fundamental de un cromatografo de alta resolución esta constituido
por un deposito y un dispositivo de bombeo de la fase móvil que opera a elevada
presión (hasta 500 atm.), un sistema de inyección de la muestra, columnas
resistentes, generalmente e acero inoxidable, rellenas de fase estacionaria, un
detector y un sistema de registro gráfico. La columna y los detectores van
introducidos en termostatos.
Los detectores más utilizados en esta técnica están basados en absorciometria
UV y en medida de índices de refracción, siendo los cromatogramas obtenidos
semejantes a los de cromatografia gaseosa con detector diferencial.
APLICACIONES
1. Concentración de trazas
2. Separación de iones interferentes en analisis clásico
3. Separaciones de iones de características similares
4. Desmineralización del agua
5. Preparación de disoluciones patrón
6. Disolución de sustancias insolubles.
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CROMATOGRAFIA EN COLUMNA CERRADA
CROMATOGRAFIA EN PAPEL
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