Beruflich Dokumente
Kultur Dokumente
Resumen
130
1 Introducción
Un gran número de productos proteicos de aplicación industrial y terapéutica como
enzimas, hormonas, anticuerpos monoclonales, citocinas e interferones, son obte-
nidos actualmente mediante procesos biotecnológicos modernos. Los esquemas de
puri…cación de estos productos generalmente requieren una o más operaciones cro-
matográ…cas debido a las especi…caciones de pureza con que se requieren [1-4].
La cromatografía de a…nidad es un método económico que es utilizado en la
puri…cación de proteínas. En este tipo de cromatografía, la matriz de a…nidad se
prepara mediante la inmovilización de un ligando conocido que interactúa especí…-
camente con la proteína de interés [5,6].
El escalamiento y optimización de las operaciones cromatográ…cas de a…nidad
para la recuperación de componentes bioquímicos es muy importante [7-9]. Una
herramienta de la ingeniería que puede ayudar a alcanzar con éxito estas tareas de
la ingeniería de bioprocesos, es el desarrollo de modelos matemáticos y programas
de computadora para describir el comportamiento de esta operación [7-10].
Un requisito importante para el uso de esta metodología es la comprensión de los
mecanismos fundamentales en que se basan las separaciones, que permita desarrollar
modelos realistas basados en principios físicos y químicos básicos. Las ecuaciones
obtenidas a través de este enfoque, generalmente involucran ecuaciones diferenciales
parciales no lineales que no tienen solución analítica.
Se han realizado varios esfuerzos para modelar y simular operaciones de adsor-
ción por a…nidad en tanques agitados, sin embargo los resultados han sido limitados
[1,11]. Arve y Liapis [12] y Horstmann y Chase [13] consideraron que la adsorción
de un soluto sobre la super…cie del adsorbente desde el seno del líquido, involucra
tres pasos que contribuyen a la resistencia a la transferencia de masa: difusión en la
película, difusión en el poro y cinética de reacción. Arve y Liapis resolvieron el mod-
elo por el método de colocación ortogonal para discretizar las derivadas espaciales y
un integrador Runge-Kutta de tercer orden para obtener la solución. Horstmann y
Chase utilizaron diferencias …nitas usando una aproximación de segundo orden para
las derivadas espaciales. La solución ajustó bien a los datos experimentales en casi
todo el rango experimental. Sin embargo, como los autores mencionan, el método
es impráctico para resolver sistemas más complejos. Se requiere el uso de métodos
numéricos avanzados para resolver estos modelos.
El método numérico de líneas (NUMOL) ha contribuido al desarrollo de algorít-
mos robustos para la solución de problemas de valor inicial de ecuaciones diferen-
ciales ordinarias, aún cuando sean rígidas (sti¤) [14,15]. Este método está siendo
utilizado ampliamente en la solución de problemas tales como: ‡ujos turbulentos con
131
transferencia de calor, dispersión de ondas electromagnéticas, transferencia de calor
de radiación en regiones cerradas[16-18 ]. En el método NUMOL la solución de este
tipo de ecuaciones se lleva a cabo en dos pasos: el problema de valor de frontera se
resuelve mediante técnicas de discretización y el problema de valor inicial resultante
se maneja mediante un integrador apropiado [19].
En este trabajo se considera un modelo de transporte de tres resistencias con-
secutivas para simular la adsorción por a…nidad de proteínas en un sistema tipo
tanque agitado. Las resistencias involucradas son: resistencia externa de la película,
difusión interna en la partícula y velocidad de reacción …nita. La solución del mod-
elo fue obtenida utilizando el método numérico de líneas (NUMOL). La solución
numérica fue comparada con la solución analítica de un modelo simpli…cado que
agrupa las resistencias a la transferencia de masa en una sola [11,20], y con datos
experimentales obtenidos de la literatura de la adsorción de inmunoglobulina G a
proteína A inmovilizada a una matriz de sefarosa [13].
132
2.2 Modelo matemático
El proceso de adsorción por a…nidad en un tanque agitado puede ser descrito medi-
ante un balance de soluto en la partícula, un balance de soluto en el seno del líquido,
una expresión cinética de la adsorción en la super…cie y las condiciones iniciales y
de frontera del sistema.
133
2.2.2 Balance de masa en el seno del líquido
El balance de masa en el seno del líquido considera la concentración de soluto en el
seno del líquido, c, y la concentración de soluto que se encuentra a la entrada del
poro en la super…cie de la partícula, cp jr=ro . Toma en cuenta además, la resistencia
a la transferencia de masa que presenta la película. La velocidad de cambio de la
concentración en el seno del líquido está dada por:
µ ¶
dc 3kf 1 ¡ "b
=¡ (c ¡ cp )jr=ro (2)
dt ro "b
donde:
c : concentración de soluto en el seno del líquido
"b = vol: l¶{quido= (vol: l¶{quido + vol: adsorbente)
ro : es el radio de la partícula
kf : es la resistencia de la película: [m=s] £ "b
134
donde Kd = k¡1 =k1 , es la constante de disociación de la interacción proteína -
ligando.
El modelo de Langmuir dado por la ec.(5), se ha adoptado con frecuencia para
explicar el proceso de adsorción de una proteína a un sitio especí…co sobre un adsor-
bente de a…nidad. En este modelo el adsorbente de a…nidad es visualizado como un
material que tiene un número de sitios no interactuantes idénticos sobre su super…cie
el cual puede aceptar solamente una simple molécula de soluto. Una vez que estos
sitios están llenos con soluto no puede ocurrir adsorción adicional. Este análisis per-
mite relacionar la cantidad de soluto ligada al adsorbente, q ¤ , con la concentración
de proteína en solución, c¤ cuando se establece el equilibrio.
para t = 0 cp = 0 ; (6)
para t = 0 q = 0; (7)
para t = 0 c = co : (8)
La condición frontera para el cambio de la concentración de soluto con el tiempo
en el centro de la partícula está dada por:
@cp
en r = 0; = 0: (9)
@r
La velocidad de transferencia de masa a través de la película externa relaciona
la concentración en el seno del líquido con la concentración del líquido en el poro en
la super…cie de la partícula, de acuerdo a la condición de frontera siguiente:
¯ ¯
@cp ¯¯ kf ¯
¯
= (c ¡ c ) (10)
@r ¯r = ro ¯
p
D"p r = ro
Las ecs.(1, 2, 4, 6, 7, 8, 9 y 2.10) constituyen el modelo completo para la adsorción
del soluto en el adsorbente en un tanque agitado.
135
2.3 Solución analítica
Para obtener una solución analítica del fenómeno de adsorción se requiere simpli…car
su descripción. En el enfoque más utilizado se supone que todas las resistencias que
limitan el proceso de transferencia de masa pueden ser agrupadas en una sola. En-
tonces las velocidades k1 y k¡1 representan además de las velocidades de adsorción
y desorción, las contribuciones de las demás resistencias y el proceso de adsorción
por a…nidad se describe simplemente por la expresión de Lagmuir:
@q
= k1 c (qm ¡ q) ¡ k¡1 q
@t
La solución analítica de este modelo es la siguiente [20]:
2 µ ½ ¾¶ 3
2a (1 ¡ "b )
(b + a) 1 ¡ exp ¡ k1 t
1 ¡ "b 6
6 µ "b
7
7
c = co ¡ ¶ ½ ¾ (11)
"b 4 b+a 2a (1 ¡ "b ) 5
¡ exp ¡ k1 t
b¡a "b
donde:
· ¸ · ¸
2 2 co "b 1 co "b Kd "b
a =b ¡ qm y b= + qm +
(1 ¡ "b ) 2 (1 ¡ "b ) (1 ¡ "b )
136
Figure 1: Discretización por el método de líneas.
donde:
137
2 3
¡50 96 ¡72 32 ¡6 0 0 ¢¢¢ 0
6 ¡6 ¡20 36 ¡12 2 0 0 ¢¢¢ 0 7
6 7
6 2 ¡16 0 16 ¡2 0 0 ¢¢¢ 0 7
6 .. .. .. .. .. 7
6 7
6 . . . . . 7
6 7
A=6 0 ¢¢¢ 2 ¡16 0 16 ¡2 ¢ ¢ ¢ 0 7
6 .. .. .. .. .. 7
6 . . . . . 7
6 7
6 0 0 0 ¢¢¢ 2 ¡16 0 16 ¡2 7
6 7
4 0 0 0 ¢ ¢ ¢ ¡2 12 ¡36 20 6 5
0 0 0 ¢¢¢ 6 ¡32 72 ¡96 50
y
2 3
C(x1 )
6 C(x2 ) 7
6 7
6 C(x3 ) 7
6 .. 7
6 7
6 . 7
6 7
B = 6 C(xi ) 7
6 .. 7
6 . 7
6 7
6 C(x ) 7
6 n¡2 7
4 C(xn¡1 ) 5
C(xn )
Por otra parte, la aproximación de la derivada de segundo orden está dada por:
d2 C 1
2
= 2
[D] [E] + O(¢x)4 (13)
dx 4!¢x
donde:
138
2 3
¡ 415
3
192 ¡72 64 3
¡3 0 0 ¢¢¢ 0 100 0
6 20 ¡30 ¡8 28 ¡12 2 0 ¢¢¢ 0 0 0 7
6 7
6 ¡2 32 ¡60 32 ¡2 0 0 ¢¢¢ 0 0 0 7
6 .. .. .. .. .. 7
6 7
6 . . . . . 7
6 7
D=6 0 0 ¢ ¢ ¢ ¡2 32 ¡60 32 ¡2 ¢¢¢ 0 0 7
6 .. .. .. .. .. 7
6 . . . . . 7
6 7
6 0 0 ¢¢¢ 0 ¡2 32 ¡60 32 ¡2 0 0 7
6 7
4 0 0 ¢¢¢ 2 ¡12 28 ¡8 ¡30 20 0 0 5
64 415
0 0 ¢¢¢ 0 ¡3 3
¡72 192 ¡ 3 0 100
y
2 3
C(x1 )
6 C(x2 ) 7
6 7
6 C(x3 ) 7
6 7
6 .. 7
6 . 7
6 7
6 C(xi ) 7
6 .. 7
6
E=6 7
. 7
6 7
6 C(x n¡2 ) 7
6 7
6 C(xn¡1 ) 7
6 7
6 C(x ) 7
6 dC(x1 ) n 7
4 dx ¢x 5
dC(xn )
dx
¢x
Utilizando las expresiones de la primera y segunda derivada que incluyen los valores
de frontera, es posible expresar el modelo matemático como un sistema de ecuaciones
diferenciales ordinarias de valor inicial.
La solución computarizada del modelo utilizando NUMOL, se realiza emple-
ando las subrutinas DSS004 y DSS044 para llevar a cabo las discretizaciones de las
derivadas espaciales de primero y segundo orden, respectivamente. El problema de
valor inicial que se origina fue resuelto con un integrador RKF45 de cuarto orden
[14]. Los programas utilizados para llevar a cabo las simulaciones correspondientes
fueron escritos en lenguaje Fortran 90 y corridos en una computadora Digital XP-
1000.
Como modelo de referencia, en este trabajo se utilizó la solución analítica del
modelo simpli…cado dada por la ec.(11), misma que se manejó mediante una hoja
electrónica Excel.
139
Table 1: Datos del caso base utilizados en los estudios de simulación de adsorción
de Ig G a proteína A inmovilizada a una matriz de Sepharose, en un tanque agitado
[13]
Variable Valor
Concentración inicial de proteína en el tanque co = 0:5 mg=ml
Capacidad máxima de adsorción qms = 40 mg=ml
Constante de equilibrio Kd = 0:019 mg=ml
Constante cinética de adsorción agrupada k1 = 0:001 ml=mg ¡ s
Diámetro de la partícula dp = 90 ¹m
Coe…ciente de transferencia de masa de la película kf = 4 £ 10¡6 m=s
Difusividad intrapartícula de la proteína D = 6 £ 10¡12 m2 =s
Porosidad de la partícula "p = 0:96
Porosidad del lecho por adsorbente sedimentado " = 0:35
Capacidad máxima de adsorción por gel sólido qm = 1538:46 mg=ml
Volumen inicial de líquido en el tanque 25 ml
Suspensión de adsorbente agregada en 1:1 (v/v) 0:5 ml
Razón de volumen de líquido a volumen del sistema "b = 0:9936
140
1.0
0.8
0.6
C/Co
0.4
0.2
0.0
0 100 200 300 400 500
t (min)
4 Resultados y discusión
En esta investigación, la solución al modelo de transporte para la adsorción por
a…nidad de inmunoglobulina G a proteína A inmovilizada a una matriz de sefarosa
en un tanque agitado, fue obtenida mediante el método NUMOL. Esta solución fue
comparada con la solución analítica del modelo de parámetros agrupados y con los
datos experimentales.
141
tomado para el coe…ciente cinético de adsorción que fue k1 = 0:03 ml=mg ¡s, puesto
que en el modelo de transporte éste no es un parámetro agrupado. Este resultado
sugiere que la adsorción está controlada únicamente por las resistencias de poro y
película.
5 Conclusiones
Mediante esta investigación se logró analizar y predecir el comportamiento de pro-
cesos de adsorción de a…nidad en sistemas tipo tanque agitado para conducir las
operaciones de a…nidad en el procesamiento de proteínas de importancia industrial.
El proceso de adsorción por a…nidad fue descrito mediante un modelo de trans-
porte que considera tres resistencias controlantes en el mecanismo de transferencia
de masa. Este modelo fue utilizado para describir y predecir el comportamiento de
la adsorción por a…nidad de inmunoglobulina G a proteína A inmovilizada en una
matriz de sefarosa, mediante la simulación del proceso de adsorción en programas de
computadora. El modelo matemático fue resuelto utilizando el método numérico de
líneas. La solución obtenida fue comparada con la solución analítica encontrada con
el modelo de resistencias agrupadas y con datos experimentales tomados de la liter-
atura para este sistema. La dinámica del sistema fue descrita más adecuadamente
mediante el modelo de transporte considerando sólo dos resistencias limitantes. Los
resultados obtenidos sugieren que el enfoque desarrollado puede ser utilizado como
marco para obtener una descripción general realista para casi todos los sistemas
de interés práctico, cuando se utilizan parámetros precisos y una solución numérica
apropiada para el modelo.
142
Referencias
1. Arnold, F.H.; Blanch, H.W. and Wilke, C.R.(1985). I. Predicting the performance
of a¢nity adsorbers. II. The characterization of a¢nity columns by pulse tech-
niques.Chem. Eng. J. 30 B9-B36.
4. Liapis, A.I. (1990). Modelling a¢nity chromatography. Sep. Purif. Meth. 19,
133-210.
7. Kempe, H.; Axelsson, A.; Nilsson, B. and Zacchi, G. (1999). Simulation of chro-
matographic processes applied to separation of proteins. J. Chromatogr. A. 846,
1-12
8. Fahrner, R.L.; Iyer, H.V. and Blank, G.S. (1999). The optimal ‡ow rate and col-
umn length for maximum production rate of protein A a¢nity chromatography.
Bioprocess Eng. 21, 287-292
9. Tejeda, A.; Noriega, J.A.; Ortega, J. and Guzmán, R. (1998). Modelling regenera-
tion e¤ects on dye-ligand a¢nity chromatography. Biotechnol. Prog. 14, 493-495.
10. Liapis, A.I. and Unger, K.K. (1994). The chemistry and emgineering of a¢nity
chromatography, in Highly Selective Separations in Biotechnology. (Ed. Steet, G.).
Chapman and Hall. Glasgow, N.Z. pp. 121-162.
11. Chase, H.A. (1984). Predictions of the performance of preparative a¢nity chro-
matography. J. Chromatogr. 297, 179-202.
12. Arve, B.H. and Liapis, A.I. (1987). Modelling and analysis of bioespeci…c adsorption
in a …nite bath. AIChE J. 33, 179-193.
143
13. Horstmann, B.J. and Chase, H.A. (1989). Modelling the a¢nity adsorption of im-
munoglobulin G to protein A inmobilised to agarosa matrices. Chem. Eng. Res.
Des. 67, 243-254.
14. Silebi, C.A. and Schiesser, W.E. (1992). Dynamic modeling of transport process
systems. Academic Press Inc. San Diego, Ca. p. 518.
15. Schiesser W.E. and Silebi, C.A. (1997). Computational Transport Phenomena: Nu-
merical methods for the solution of transport problems. Cambridge University Press.
Cambridge, U.K. p. 457.
16. Campo, A. (2001). Numerical study of turbulent ‡ow with heat removal from a plate
using the …nite volume-based method of lines. International Journal of numerical
methods for heat and ‡uid ‡ow. 11, 5/6, 511-523.
17. Ma, J.G.; Chia, T.K.; Tan, T.W.; See, K.Y. (2000). Electromagnetic wave scattering
from 2-D cylinder by using the method of lines. Microwave and optical technology
letters. 24, 4, 275-277.
18. Selcuk, N; Kirbas, G. (2000). The method of lines solution of the discrete ordinates
method for radiative heat transfer in enclosures. Numerical heat transfer. Part B,
fundamentals. 37, 3, 379-392
19. Costa, C. and Rodrigues, A. (1986). Numerical methods for the solution of adsorp-
tion models, in Adsorption: Science and Technology. (Ed. Rodrigues, A.). Kluwer
Academic Publishers. The Netherlands. pp. 257-265.
20. Skidmore, G.L.; Horstmann, B.J. and Chase, H.A. (1990). Modelling single compo-
nent protein adsorption to the cation exchanger Sepharose FF. J. Chromatogr. 498,
113-128.
144