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CAT Nº 02300

Somente para
Uso in Vitro
HDL COLESTEROL
PRECIPITANTE
PRINCÍPIO CÁLCULOS
As lipoproteínas de alta densidade (HDL), são separadas seletivamente HDL Colesterol mg/dL = D x f f = 45,7
por precipitação das de baixa e muito baixa densidade (LDL e VLDL) P
usando-se o Sulfato de Dextran em presença de íons Mg++ HDL Colesterol mg/dL x 0.026 = HDL Colesterol mmol/L
O sobrenadante é separado por centrifugação e as HDL nele contido 45,7 = 200 mg/dL x VFE x VRE x Vp, onde:
são quantificadas pelo seu teor de colesterol, utilizando-se o kit VA VRP VE
Colesterol método Enzimático da LABORLAB. VFE = volume final do extrato = 0,55 mL
VA = volume da amostra processada = 0,5 mL
MÉTODO VRE = volume de reação com amostra = 2,1 mL
O método preconizado pela Lipid Research Clinic (Atlanta USA) VRP = volume de reação com padrão = 2,02 mL
emprega a precipitação com heparina/Mn++. Este método tem um VP = volume de padrão na reação = 0, 02 mL
inconveniente pois não pode ser adaptado para uso em laboratórios de
pequeno porte. A utilização do Sulfato de Dextran/Mg++ emprega um VE = volume de extrato na reação = 0,1 mL
único reativo estável à temperatura ambiente, e é mais sensível. OBS. Em aparelhos que permitem utilizar menores volumes de
reagentes, por exemplo 1 mL usar 50 µL de sobrenadante e 10 µL de
COMPOSIÇÃO DO KIT padrão. Neste caso o fator será o mesmo.
Reativo Dextran CAT Nº 02301
Solução de Sulfato de Dextran (PM = 500.000), 0.032 mmol/L VALORES DE REFERÊNCIA
Volume = 5 mL Segundo a Lipid Research Clinic (Bethesda-USA)
Reativo Magnésio CAT Nº 02302 Idade HDL Colesterol mg/dL HDL Colesterol mg/dL
Solução de Cloreto de Magnésio, 1,5 mmol/L H M
Volume = 5 mL 0-19 30 - 65 30 - 70
20-29 35 - 70 35 - 75
Frasco vazio para a preparação do reativo Precipitante CAT Nº 02303 30-39 30 - 65 35 - 80
Volume = 15 mL 40-49 30 - 65 40 - 95
50-59 30 - 65 35 - 85
PREPARAÇÃO DO REATIVO PRECIPITANTE
Misturar PARTES IGUAIS DOS REATIVOS e colocar a mistura no Valores de HDL Colesterol em pessoas normais com idades entre 34 e
frasco vazio anotando no rótulo a data de preparação. 66 anos (X ± DP)
Não existe a necessidade de preparar todo o reativo de uma só vez. O H (n=63) 52 ±13mg/dL
reativo assim preparado é estável por 6 meses à temperatura ambiente M (n=68) 65 ± 16mg/dL
ou 1 ano refrigerado.
Fator de risco segundo Castelli
MATERIAL NÃO FORNECIDO (NECESSÁRIO) risco normal = 1,00
Água deionizada
Espectrofotômetro ou Colorímetro. Observou-se que o risco para um homem com 25 mg/dL de HDL
Micropipetas e pipetas capazes de medir os volumes indicados na Colesterol é o dobro que para outro com 45 mg/dL e o quádruplo para
técnica. outro com 65 mg/dL. Para mulheres 40 mg/dL de HDL Colesterol tem
Tubos de ensaio. risco dobrado sobre 55mg/dL e quadruplicado sobre 70 mg/dL.
Relógio ou cronômetro.
Kit de Colesterol método Enzimático (CAT Nº 01400) ÍNDICE DE RISCO DE ECC ( * )
HDL Colesterol
VIDA ÚTIL E ARMAZENAMENTO mg/dL H M
O kit é estável em temperatura ambiente até a data de vencimento
impressa na caixa. 75 ou mais síndrome de longevidade
70 - 0,52
PRECAUÇÕES 65 0,45 0,64
O kit não contém derivados de sangue humano, porém, considerar
qualquer amostra de paciente como potencialmente infectante. Evitar o 60 0,55 0,80
contato direto com as amostras. 55 0,67 1,00
Não pipetar reagentes ou amostras com a boca . 50 0,82 1,25
Descartar as sobras das reações de acordo com as Boas Práticas de
Laboratório em local próprio para materiais potencialmente infectantes. 45 1,00 1,55
40 1,25 1,94
35 1,50 -
AMOSTRA 30 1,75 -
Soro ou plasma coletado somente com heparina.
Manter as amostras refrigeradas e processá-las dentro de 24 horas. 25 ou menos 2,00 -

RELAÇÃO ENTRE COLESTEROL TOTAL E HDL COLESTEROL


Col. total/HDL Col. Risco
TÉCNICA H 3,43 0,5 do normal
Em um tubo de ensaio colocar 500 µL (250 µL) de amostra e agregar 4,97 NORMAL
50 µL (25 µL) de Reativo Precipitante. Homogeneizar agitando, sem 9,55 2 x normal
inverter o tubo, por 20 segundos. Deixar no refrigerador por 30 a 40 24,00 3 x normal
minutos ou em banho de água (4 a 10ºC) por 15 minutos. NÃO M 3,27 0,5 do normal
CONGELAR 4,44 NORMAL
Centrifugar por 15 minutos à 3000 rpm. Usar o sobrenadante límpido 7,05 2 x normal
como amostra 11,04 3 x normal
Em 3 tubos de ensaio, marcados B. P e D, colocar: (*) ECC = Enfermidades cardíacas coronárias
B P D
Sobrenadante - - 100 µL
Padrão - 20µL - APRESENTAÇÃO
Rvo trabalho Colesterol 2 mL 2 mL 2 mL Kit suficiente para o preparo de 10 mL de Reativo Precipitante (Permite
Misturar e incubar por 15 minutos à 37ºC. Após, retirar do banho e processar 200 a 400 amostras)
esfriar. Ler à 505 nm em espectrofotômetro ou em colorímetro com
filtro verde (490-530 nm), zerando a aparelho com tubo B (blank) Vide BIBLIOGRAFIA
bula Colesterol método Enzimático A cor da reação e estável por 2 1 - Castelli, WP.; Levitas, I.M - Current Prescribing 6/77:39 (1977)
horas. 2 - Gordon, T., Castelli, W P.; Hjortland, M C: Kannel W B, Dawber
T R. - The American Journal of Medicine 62:707 (1977)

REG. M. S . Nº10246810008 REV.02


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